Αφηρημένο

Παρά το γεγονός ότι οι καρκίνοι είναι ευρέως θεωρείται ότι συντηρείται από βλαστικά κύτταρα, την ύπαρξη των βλαστικών κυττάρων σε ασθενείς με νεφρική κελί καρκίνωμα (RCC), έχει σπάνια αναφερθεί, εν μέρει λόγω της έλλειψης των μοναδικών επιφανειακών δεικτών. Εμείς εδώ προσδιορίζονται κύτταρα του καρκίνου των βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με την πλευρά του πληθυσμού (SP) φαινοτύπου σε πέντε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές RCC. Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής έδειξε ότι 769P, ένα ανθρώπινο κύτταρο σαφής RCC κυτταρική γραμμή, περιείχε τη μεγαλύτερη ποσότητα κυττάρων SP σε σύγκριση με τις άλλες τέσσερις κυτταρικές γραμμές. Αυτά τα κύτταρα 769P SP κατείχε χαρακτηριστικά του πολλαπλασιασμού, αυτο-ανανέωσης και της διαφοροποίησης, καθώς και ισχυρή αντίσταση στη χημειοθεραπεία και την ακτινοθεραπεία που πιθανώς σχετίζονται με το μεταφορέα ABCB1.

In vivo

πειράματα με σειριακή μεταμόσχευση του όγκου σε ποντικούς έδειξε επίσης ότι τα κύτταρα 769P SP που σχηματίζεται όγκους σε NOD /SCID ποντίκια. Στο σύνολό τους, αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι τα κύτταρα 769P SP έχουν τις ιδιότητες των καρκινικών βλαστικών κυττάρων, τα οποία μπορεί να παίζουν σημαντικό ρόλο στην ογκογένεση και τη θεραπεία-αντίσταση του RCC

Παράθεση:. Huang Β, Huang YJ, Γιάο ZJ, Τσεν Χ, Guo SJ, ο Μάο XP, et al. Κύτταρα (2013) Cancer Βλαστικών Κυττάρων-Όπως Side Πληθυσμός σε Clear κυττάρων νεφροκυτταρικό καρκίνωμα 769P κυτταρική γραμμή. PLoS ONE 8 (7): e68293. doi: 10.1371 /journal.pone.0068293

Επιμέλεια: Neil A. Bhowmick, Cedars Sinai Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 1 Μαρ 2013? Αποδεκτές: 28 Μαΐου του 2013? Δημοσιεύθηκε: 11 Ιουλίου 2013

Copyright: © 2013 Huang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το Εθνικό Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών (Νο 81272809, Αρ 80202011, Αρ 81202013, Αρ 30872584)? Ίδρυμα Guangdong Φυσικών Επιστημών (Αρ 8251008901000018, Νο S2012040007557)? Sun Yat-sen Πρόγραμμα Καινοτόμων Ταλέντα Καλλιέργεια για Εξαιρετική Παιδαγωγοί (Νο 80000 έως 3.126.205)? Επιστήμη και Τεχνολογία Σχεδιασμού Έργου της επαρχίας Guangdong, Κίνα (Αρ 2011B050400021, Νο 2012B090600021, Νο 445323198311050317)? και Guangdong Βασικά Εργαστήριο της Ουρολογίας, το πρώτο συνδεδεμένες νοσοκομείο της Guangzhou Πανεπιστήμιο Ιατρικής (Νο 2010A060801016). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

καρκίνο του νεφρού είναι ένα σημαντικό πρόβλημα υγείας, με αποτέλεσμα πάνω από 15.000 θανάτους στη Βόρεια Αμερική κάθε χρόνο. Καρκίνο νεφρού με μετάσταση ή σε προχωρημένο στάδιο σε ενήλικες είναι ανθεκτικά στα συμβατικά χημειοθεραπευτικά φάρμακα [1]. Διευκρίνιση της γένεσης του καρκίνου αυτού θα βοηθήσει στην έγκαιρη διάγνωση και θεραπεία, βελτιώνοντας έτσι την πρόγνωση.

Οι συμπαγείς όγκοι αποτελούνται από διάφορους τύπους κυττάρων με διαφορετικά ικανότητα πολλαπλασιασμού. Μόνο ένας μικρός πληθυσμός αυτών των κυττάρων μπορούν να σχηματίσουν όγκους σε ποντίκια με ανοσοανεπάρκεια [2]. Αυτή η παρατήρηση έχει οδηγήσει στην έννοια του καρκίνου του βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ), τα λεγόμενα ογκογενή κύτταρα ή στέλεχος που μοιάζει με τα καρκινικά κύτταρα [3], [4], [5], [6], οι οποίες έχουν σκεφτεί ικανό πολλαπλασιαζόμενα, αυτο-ανανέωση, και διαφοροποιούνται σε πολλαπλές γενεές, παίζοντας έτσι σημαντικό ρόλο τόσο στην ανάπτυξη και τη θεραπεία των όγκων [2], [3]. Αν και έχουν ΚΕΠ έχουν απομονωθεί από διάφορους τύπους ανθρώπινων όγκων, που περιλαμβάνουν καρκίνους αιματολογική [7], τον καρκίνο των ωοθηκών [8], του καρκίνου του προστάτη [9], του καρκίνου του μαστού [10], και οι όγκοι του εγκεφάλου [11], η έλλειψη CSC-ειδική δείκτες αντιγόνο κυτταρικής επιφάνειας έχει οριοθετείται περαιτέρω έρευνα για το θέμα αυτό [12]. Πλευρά του πληθυσμού (SP) είναι ένας όρος που κυτταρομετρία ροής (FCM) να καθορίσει συστάδες κυττάρων με ισχυρή ικανότητα να εκρέει βαφής DNA Hoechst 33342 μέσω του ABC μεταφορέων. κύτταρα Side πληθυσμός εξαφανίζεται μετά από επεξεργασία με είτε αναστολείς των διαύλων ασβεστίου ή αναστολείς του ABC μεταφορέων, όπως η βεραπαμίλη και η ραπαμυκίνη [13] δραστηριότητα .Αυτό οδηγεί στην «πλευρά» (χαμηλή φθορισμός) φαινότυπο του πληθυσμού και πιστεύεται ότι είναι ένα θεμελιώδες αυτο -προστατευτικές λειτουργία και επομένως μια καθολική σήμα κατατεθέν των βλαστικών κυττάρων [14], [15]. Από τότε που για πρώτη φορά από Goodell et al. το 1996 [16], τα κύτταρα SP έχουν ευρέως αναφερθεί να εμπλουτιστεί σε διάφορους καρκινικούς ιστούς, όπως ο καρκίνος του μαστού [17], του όγκου του γαστρεντερικού συστήματος [18], και του καρκίνου μικρών κυττάρων του πνεύμονα [19] και από κυτταρικές σειρές όπως ρινοφαρυγγικό καρκίνωμα [20], ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα [21], και καρκίνου της ουροδόχου κύστης κυτταρικές γραμμές [22]. κύτταρα SP, με βλαστική ικανότητα δυνατότητες, μπορούν να σχηματίσουν ξενομοσχεύματος όγκων σε ζώα και είναι ανθεκτικά στη χημειοθεραπεία και την ακτινοθεραπεία, συμβάλλοντας στην υποτροπή του όγκου [23].

RCC, η τρίτη πιο κοινή μορφή καρκίνου του ουροποιητικού συστήματος, αντιπροσωπεύει περίπου το 3% όλων των ανθρώπινων κακοηθειών. Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης ταξινομούνται ως σαφείς κυττάρων, θηλώδες, χρωμόφοβο, συλλογή αγωγού, και αταξινόμητη RCC, με σαφείς RCC κυττάρων (CCRCC) ως το πιο διαδεδομένο είδος. Αυτό αντιπροσωπεύει το 82% των Συντονιστικά Κέντρα Διάσωσης. Η θεραπεία του μεταστατικού CCRCC εξακολουθεί να είναι μια μεγάλη πρόκληση για τους κλινικούς ιατρούς και προκαλεί περίπου το 35% του RCC που σχετίζονται με τη θνησιμότητα [24]. Οι περιπτώσεις RCC αυξάνεται σταθερά για δεκαετίες [25]. Επιπλέον, οι περισσότεροι ασθενείς έχουν ήδη είτε μεταστατική νόσο κατά την αρχική διάγνωση ή απομακρυσμένες μεταστάσεις μετά την πρωτογενή εκτομή του όγκου [26]. Η πρόγνωση της RCC είναι κακή εν μέρει λόγω της αντίστασης του μεταστατικού RCC σε πιο τρέχουσες θεραπείες, όπως η χημειοθεραπεία και η ακτινοθεραπεία. Στοχευμένη θεραπεία κατά του ΚΕΠ μπορεί να φέρει νέα ελπίδα για τη βελτίωση της πρόγνωσης των ασθενών με RCC.

Παρά το γεγονός ότι σημαντική πρόοδος έχει σημειωθεί στον τομέα της έρευνας SP, ο ρόλος των κυττάρων SP σε RCC μένει να καθοριστεί πλήρως [27], [28

], [29], [30]. Addla et al. [29] ανέφεραν ότι τόσο φυσιολογικών και κακοήθων νεφρικών επιθηλιακών κυττάρων περιείχε μια αναλογία των κυττάρων τα οποία ήταν SP εμπλουτίσουν με κάποιες ιδιότητες των βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν. Πιο πρόσφατα, Nishizawa et al. [30] έχουν διαπιστώσει ότι τα κύτταρα SP προέρχονται από κύτταρα RCC έδειξε μεγαλύτερη ικανότητα όγκου κίνηση από τα κύτταρα NSP. Ως εκ τούτου, υποθέσαμε ότι τα κύτταρα SP είναι ένα εμπλουτισμένο κλάσμα των βλαστικών κυττάρων του καρκίνου.

Η παρούσα μελέτη πραγματοποιήθηκε για τον εντοπισμό των κυττάρων SP από τις καθιερωμένες ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές RCC και να προσδιορίσει τα χαρακτηριστικά και τους ρόλους τους στην ογκογένεση και τη θεραπεία της RCC. Εδώ, θα απομονωθούν κύτταρα SP από 769P κύτταρα, μια ανθρώπινη CCRCC κυτταρική γραμμή, με χρώση Hoechst και κυτταρομετρία ροής. vivo πειράματα μας in vitro και in απέδειξαν ότι τα κύτταρα SP κατείχε τις γνωστές χαρακτηριστικά CSC πολλαπλασιασμού, αυτο-ανανέωση και τη διαφοροποίηση, όπως επίσης και ισχυρή αντίσταση στη χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία που πιθανώς σχετίζονται με το μεταφορέα ABCB1. Τα ευρήματα αυτά μπορούν να παρέχουν νέες ιδέες για μελλοντική έρευνα CSC και κλινική αντικαρκινική θεραπεία.

Υλικά και Μέθοδοι

Cell Culture

Πέντε ανθρώπινες κυτταρικές γραμμές RCC 769P, 786-O , OS-RC-2, SN12C, και SKRC39 χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη. Οι κυτταρικές σειρές 769P και 786-Ο ελήφθησαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA)? OS-RC-2, SN12C και SKRC39 ευγενικά προικισμένος από τον Δρ Zhuowei Liu (Τμήμα Ουρολογίας, η Sun Yat-sen University Cancer Center), που απέκτησαν αυτές τις κυτταρικές σειρές από το Type Culture Collection της Κινεζικής Ακαδημίας Επιστημών (Σαγκάη, Κίνα) [31], [32], [33]. 769P, 786-O, OS-RC-2 κύτταρα, και SKRC39 καλλιεργήθηκαν σε RPMI-1640 (Gibco, Carlsbad, California, USA), ενώ τα κύτταρα SN12C καλλιεργήθηκαν σε μέσο Eagle τροποποιημένο Dulbeccos (DMEM, Gibco) στους 37 ° C σε ένα 5%

2 ατμόσφαιρα CO. Και οι δύο μέσα περιείχαν 10% ορό εμβρύου μόσχου (FCS, Gibco), 1% (ν /ν) πενικιλλίνη, και 100 μg /mL στρεπτομυκίνη.

Side ανάλυση πληθυσμού και ταξινόμηση κυττάρων

Side πληθυσμός ανάλυση και ταξινόμηση κυττάρων διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως από Goodell et al. [16] με τροποποίηση. Εν συντομία, τα κύτταρα θρυψινοποιήθηκαν, διακόπτεται στη 1 × 10

6 κύτταρα /mL σε προθερμασμένο RPMI-1640 που περιέχει 2% FBS και 10 mmol /L HEPES (Gibco), στη συνέχεια επωάστηκαν με 5 μg /mL Hoechst 33342 (Sigma , St. Louis, ΜΟ, USA) είτε μόνο του ή σε συνδυασμό με 50 μmol /L βεραπαμίλη (Sigma), ενός αναστολέα μεταφορέα ABC, στο σκοτάδι για 90 λεπτά σε λουτρό ύδατος 37 ° C με διαλείπουσα ανάμιξη. Στο τέλος της χρώσης, τα κύτταρα περιδινήθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε κρύο HBSS (Gibco) που περιέχει 2% FBS και 10 mmol /L HEPES. ανάλυση FCM και διαλογή κυττάρων στη συνέχεια πραγματοποιείται απευθείας στο ΕΠΗ ALTRA Cytosorter Flow (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA). Hoechst 33342 ήταν ενθουσιασμένος με 100 mW UV λέιζερ και ανιχνεύθηκε με 450 φίλτρο BP για το μπλε φθορισμού και 675 φίλτρο BP για κόκκινο φθορισμό. Μια 610-

nm διχροϊκό καθρέφτη σύντομο

–

περνούν

(DMSP) φίλτρο χρησιμοποιήθηκε για να διαχωριστούν τα μήκη κύματος εκπομπής. Ένα πολυγωνικό ζωντανή πύλη στην FS-HO μπλε οικόπεδο δημιουργήθηκε για να αποκλείσει τα συντρίμμια και τα νεκρά κύτταρα. κύτταρα SP και κύτταρα μη-SP (NSP) έχουν ταξινομηθεί για τις ακόλουθες δοκιμασίες.

Clone Σχηματισμός και τη Μακροχρόνια Διαφοροποίηση Αναλύσεις

Στο πλαίσιο της λειτουργίας διαλογής autoclone, κάθε 500 769P κύτταρα του SP ή NSP φαινότυπο ταξινομήθηκαν απευθείας σε ένα δίσκο καλλιέργειας 6 cm, και καλλιεργήθηκαν με RPMI-1640 πλήρες μέσο καλλιέργειας για 10 ημέρες. Μετά περισσότεροι κλώνοι κυττάρων είχε επεκταθεί σε περισσότερα από 50 κύτταρα, πλύθηκαν δύο φορές με PBS, σταθεροποιήθηκαν σε 75% μεθανόλη για 15 λεπτά, και χρωματίστηκαν με κρυσταλλικό ιώδες επί 15 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Μετά την επώαση, τα πιάτα ξεπλύθηκαν και ο αριθμός των κλώνων που περιείχαν περισσότερο από 50 κύτταρα μετρήθηκε κάτω από μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης. Η απόδοση σχηματισμού κλώνος ήταν ο λόγος του αριθμού των κλώνων με τον αριθμό των σπαρμένων κυττάρων. δοκιμασίες σχηματισμός κλώνος επαναλήφθηκαν εις τριπλούν.

Η δοκιμασία μακροχρόνιας διαφοροποίησης διεξήχθη 10 ημέρες μετά την διαλογή των κυττάρων, σύμφωνα με το πρωτόκολλο της ανάλυσης πλευρά του πληθυσμού, για να προσδιοριστεί η ικανότητα διαφοροποίησης των SP και NSP κύτταρα.

Ανίχνευση mRNA έκφραση του ABC Μέλη της οικογένειας στο Κατάταξη σύμφωνα 769P SP κύτταρα με RT-PCR

το συνολικό RNA εξήχθη από SP και κύτταρα NSP ξεχωριστά χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤπζοΙ (Invitrogen, San Diego, CA). Η έκφραση του ABCB1, ABCC1 και ABCG2 ανιχνεύθηκε με τη χρήση της PrimeScript

TMRT-PCR Kit (Takara, Otsu, Japan) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι εκκινητές (Πίνακας 1) σχεδιάστηκαν και συντέθηκαν από την Invitrogen. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερική αναφορά. Οι συνθήκες της PCR ήταν μετουσίωση στους 94 ° C για 4 λεπτά που ακολουθείται από 40 κύκλους ανόπτησης σε 94 ° C για 45 s, 58 ° C για 30 s, και 72 ° C για 45 s, με επιμήκυνση στους 72 ° C για 8 λεπτά . Τα προϊόντα της PCR αναλύθηκαν με ηλεκτροφόρηση σε 1.5% αγαρόζη για την έκφραση του mRNA των μελών της οικογένειας ABC.

Η

Η ανίχνευση πρωτεΐνης Έκφραση του ABC Μέλη της οικογένειας στο Κατάταξη σύμφωνα 769P SP κύτταρα με κηλίδωση Western

Σύνολο πρωτεΐνες εκχυλίστηκαν από SP και τα κύτταρα NSP χωριστά και μετουσιώνονται σε ρυθμιστικό διάλυμα δείγματος δωδεκυλοθειικού νατρίου (SDS), στη συνέχεια εξίσου φορτώθηκε 8% γέλη πολυακρυλαμιδίου. Μετά την ηλεκτροφόρηση, οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν πάνω σε μεμβράνη διφθοριούχου πολυβινυλιδενίου. Οι κηλίδες επωάστηκαν με υποδεικνυόμενη πρωτογενή αντισώματα όλη τη νύχτα στους 4 ° C, μετά επωάζονται με horseradish δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση, και τελικά ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας ενισχυμένη χημειοφωταύγεια Western blotting αντιδραστήρια ανίχνευσης (GE Healthcare, UK). Η ABCG2 ποντίκι (σε ​​1:1,000 αραίωση), ABCB1 (1:1,000), και ABCC1 (1:5,000) μονοκλωνικά αντισώματα από Abcam Inc. (Cambridge, UK), καθώς και αντι-GAPDH (1:2,000) από Σάντα Κρουζ βιοτεχνολογία (Santa Cruz, CA, USA) χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί σε σχέση με τα επίπεδα της πρωτεΐνης.

ακτινοβολία και Φαρμάκων ευαισθησία Αναλύσεις

για να προσδιοριστεί η ευαισθησία των κυττάρων στην ακτινοβολία, πρόσφατα ταξινομημένα SP και τα κύτταρα NSP ήταν εμβολιάστηκαν σε πλάκες 6 φρεατίων (500 κύτταρα /φρεάτιο), και εκτέθηκαν σε 5 Gy Χ-ray (500 cGy /min, με χρήση 12 cm πεδίο ακτινοβόλησης × 6 cm) με ή χωρίς 30-λεπτών προ-επώαση με βεραπαμίλη (50 μmol /L) η ημέρα μετά τη διαλογή. Όταν οι περισσότεροι κυτταρικοί κλώνοι είχαν περισσότερο από 50 κύτταρα, βάφτηκαν με κρυσταλλικό ιώδες για τον προσδιορισμό του αριθμού των κυττάρων επιβίωσης.

Για να προσδιοριστεί η ευαισθησία των κυττάρων σε φάρμακα, SP και NSP κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 96-φρεατίων (500 κύτταρα /φρεάτιο) και καλλιεργήθηκαν με μιτοξαντρόνη (ΜΤΧ, μια τοποϊσομεράσης II αναστολέα αντινεοπλασματικός παράγοντας, Sigma), 5-φθοριοουρακίλη (5-FU, Sigma), ή sunitinib (ένας αναστολέας τυροσινικής κινάσης, Sutent, Pfizer, New York, USA ) την επόμενη ημέρα σε μια κλίση συγκέντρωσης, με ή χωρίς 30-λεπτών προ-επώαση με 50 μmol /mL verapamil ως χημειοευαισθητοποιητή να μιτοξαντρόνη. Μη επεξεργασμένα κύτταρα χρησιμοποιήθηκαν ως μάρτυρες. Τέσσερις παράλληλες εκβαθύνσεις που καθορίζονται για κάθε ομάδα. Μετά από 3 ημέρες, η απορρόφηση εκάστου φρεατίου σε μήκος κύματος 570 nm (

A

570) μετρήθηκε. ποσοστό επιβίωσης των κυττάρων υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο: ποσοστό επιβίωσης = (μέση τιμή

Μια

570 από τα φρεάτια δοκιμών /σημαίνει

Μια

570 από τα φρεάτια ελέγχου) × 100% . ρυθμός αναστολής υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο:. ποσοστό αναστολής = 100% – ποσοστό επιβίωσης

ξενομοσχεύματος όγκου Σχηματισμός Δοκιμασία

Τα πειράματα σε ζώα έγιναν αυστηρά σύμφωνα με τον Οδηγό για τη Φροντίδα και Χρήση του Εργαστηρίου Τα ζώα της Sun Yat-sen University. Το πρωτόκολλο εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας των πειραμάτων σε ζώα από την Πρώτη Ενταγμένο Νοσοκομείο του Sun Yat-sen University. Ένα σύνολο 54 5- έως 7 εβδομάδων μη παχύσαρκους διαβητικό (NOD) /σοβαρή συνδυασμένη ανοσοανεπάρκεια (SCID) θηλυκά ποντίκια ελήφθησαν από το Πειραματικό Κέντρο Ζώων του Sun Yat-sen University. Τα ποντίκια χωρίστηκαν σε 6 ομάδες, με 9 ποντίκια σε κάθε ομάδα. Ενδείκνυται ποσότητα προσφάτως ταξινομημένο SP και τα κύτταρα NSP αιωρήθηκαν σε 200 μL PBS, χωριστά, και εμβολιάστηκαν υποδορίως στην μασχαλιαία βόθρου του NOD /SCID ποντίκια αμέσως μετά τη διαλογή. Οι ποντικοί παρακολουθούνται δύο φορές την εβδομάδα για το σχηματισμό ψηλαφητών όγκων. Στις 6 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό, οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε ευθανασία για την εκτίμηση του σχηματισμού όγκου. Οι όγκοι μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα παχυμέτρου, ζυγίστηκαν, και φωτογραφήθηκαν. Ένα τμήμα του κάθε υποδόριου όγκου συλλέχθηκε, σταθεροποιήθηκαν σε 10% φορμαλδεΰδη, και ενσωματωμένα σε παραφίνη για παθολογικές αξιολόγηση μετά Η &? Χρώση Ε. Το άλλο τμήμα του κάθε όγκου διαχωρίστηκαν σε εναιώρημα μεμονωμένων κυττάρων, το οποίο παρασκευάστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [34] με μικρές τροποποιήσεις. Εν συντομία, ιστός του όγκου με το χέρι διαχωρίστηκαν σε & lt? Θραύσματα 0,5 mm και όλα τα ορατά συσσωματώματα απομακρύνονται, τότε σε πέψη με 1 mg /mL κολλαγενάση τύπου II (Sigma) και 1,2 mg /mL Dispase (Sigma) για 45 έως 90 λεπτά στους 37 ° ΝΤΟ. Περιστασιακά, 0,2 μg /mL θρυψίνης (Invitrogen) χρησιμοποιήθηκε για 10 λεπτά για να εξασφαλιστεί διαστάσεως σε μονά κύτταρα. Τα κύτταρα διηθούνται μέσω διαδοχικών σουρωτήρια κυττάρων 70 μm για την απομάκρυνση υπόλοιπες συστάδες. Συνολικές κύτταρα αιωρήθηκαν σε PBS συμπληρωμένο με 1% FCS. Τουλάχιστον 100.000 συγκομίζονται κύτταρα βάφτηκαν για ανάλυση SP. Είκοσι 5- έως 6-εβδομάδων SDIC θηλυκά ποντίκια διαιρέθηκαν εξίσου σε 4 ομάδες για δοκιμασία σειριακή μεταμόσχευση. Κάθε 5000 κύτταρα διαχωρίζονται από έναν όγκο ξενομοσχεύματος, το οποίο διαμορφώθηκε με 2000 SP κύτταρα, 20000 SP κύτταρα, 20.000 κύτταρα NSP, ή 200.000 κύτταρα NSP, επαναεμβολιάστηκαν σε ένα ποντίκι NOD /SCID. εκτίμηση σχηματισμού όγκων και παθολογική εξέταση διεξήχθησαν 6 εβδομάδες αργότερα.

Στατιστική Ανάλυση

Τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση (SD) από τουλάχιστον τρία ανεξάρτητα πειράματα. Microsoft Office Excel 2007 και SPSS13.0 λογισμικά χρησιμοποιήθηκαν για την επεξεργασία των δεδομένων. Η στατιστική σημαντικότητα προσδιορίστηκε με

t

test του Student. Ένα

P

αξία & lt? 0,05 θεωρήθηκε σημαντική

Αποτελέσματα

Ύπαρξη SP κύτταρα σε RCC Γραμμές κυττάρων

Πέντε κυτταρικές γραμμές RCC αναλύθηκαν για. φαινοτύπων SP τους. Η πύλη R2 δείχνει ότι το ποσοστό των κυττάρων SP, με αμυδρό Hoechst 33342 φθορισμού, μειώθηκε από 4,82% μεταξύ των κυττάρων 769P χωρίς θεραπεία βεραπαμίλη έως 0,02% μεταξύ των κυττάρων 769P με βεραπαμίλη προ-επώασης (Εικ. 1Α). Επανεξέταση των διαλεγμένων κυττάρων επέδειξε μία καθαρότητα 96.61% για τα κύτταρα SP και 99.89% για τα κύτταρα NSP (Εικ. 1Β). Για τις άλλες τέσσερις κυτταρικές γραμμές RCC, οι αναλογίες των κυττάρων SP σε 786-O και τα κύτταρα OS-RC-2 ήταν 0,1% και 0,2%, τα οποία ήταν πολύ χαμηλή για τα ακόλουθα πειράματα? καθόλου κύτταρα SP ανιχνεύθηκαν μεταξύ SN12C και κυττάρων SKRC39 (Εικ. S1). Ως εκ τούτου, SP και NSP κύτταρα ταξινομήθηκαν από κύτταρα 769P για τα επόμενα πειράματα.

Α, SP διαλογή χρησιμοποιώντας Hoechst 33342. Μία πολυγωνική ζωντανή πύλη δημιουργήθηκε για να αποκλείσει θραύσματα και νεκρά κύτταρα. Τουλάχιστον 50.000 κύτταρα αποκτήθηκαν για την ανάλυση του φαινοτύπου SP κάθε δείγματος. Το ποσοστό των κυττάρων SP μειώθηκε όταν τα κύτταρα 769P είχαν προ-επωάστηκαν με βεραπαμίλη να μπλοκάρει το μεταφορέα ΑΤΡ. Β, η καθαρότητα του πρόσφατα ταξινομημένο 769P SP και μη-SP (NSP) κύτταρα ήταν 96,61% και 99,89% (1 – 0,11%).

Η

Clone δημιουργία και τη διαφοροποίηση των Κατάταξη σύμφωνα 769P SP και NSP κύτταρα

Μετά από 7 ημέρες καλλιέργειας, οι περισσότεροι κλώνοι περιείχαν περισσότερο από 50 κύτταρα. Μετρήσαμε τον αριθμό των κλώνων και διαπίστωσε ότι η μέση απόδοση σχηματισμό κλώνο κυττάρων SP ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη των κυττάρων NSP [(56,4 ± 1,3)% έναντι (22,7 ± 1,5)%,

P

& lt? 0.001? Σύκο. 2Α).

Α, δοκιμασίες σχηματισμού κλώνου αποκαλύπτουν ότι η αποτελεσματικότητα σχηματισμός κλώνος προσφάτως διαλεγμένων κυττάρων SP ήταν υψηλότερη από εκείνη των κυττάρων NSP. **

P

& lt? 0,01. Β, σε 10 ημέρες μετά από τη διαλογή, η αναλογία των κυττάρων SP (που υποδεικνύεται από την πύλη R2) μεταξύ των διαλεγμένων κυττάρων SP και ταξινομημένα κύτταρα NSP μετρήθηκαν. Η αναλογία των κυττάρων SP μεταξύ ταξινομημένα κύτταρα SP είναι μόνο 19,51%, υποδηλώνοντας ότι οι περισσότερες ταξινομημένα κύτταρα SP διαφοροποιήθηκαν σε κύτταρα NSP. Το ποσοστό των κυττάρων SP μεταξύ διαλεγμένα κύτταρα NSP είναι μόνο 2,39%, γεγονός που υποδηλώνει ότι διαλεγμένα κύτταρα NSP δεν μπορούν να διαφοροποιηθούν σε κύτταρα SP.

Η

Μετά από 10 ημέρες καλλιέργειας, τα περισσότερα ταξινομημένα κύτταρα 769P SP διαφοροποιούνται σε κύτταρα NSP, ενώ μόνο ένα μικρό ποσοστό των κυττάρων SP ανιχνεύθηκαν μεταξύ ταξινομημένα κύτταρα 769P NSP (Εικ. 2Β), γεγονός που υποδηλώνει την ικανότητα των κυττάρων SP να αυτο-ανανέωση και διαφοροποιούνται σε κύτταρα NSP.

η έκφραση του ABC Μέλη της οικογένειας σε ταξινομημένη 769P SP και NSP κύτταρα

Η έκφραση της ABCB1, ABCG2 και ABCC1 ανιχνεύθηκε με RT-PCR και κηλίδωση Western. Και τα δύο πειράματα έδειξαν ότι ABCB1 εκφράστηκε σε υψηλό επίπεδο σε ταξινομημένη κύτταρα SP αλλά σε πολύ χαμηλά επίπεδα σε ταξινομημένη κύτταρα NSP, ενώ ABCC1 και ABCG2 ήταν μη ανιχνεύσιμα είτε ταξινομημένα SP ή κύτταρα NSP (Εικ. 3).

Α, ανάστροφης μεταγραφής αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης. Β, κηλίδωση Western. Διαδρομή 1, ταξινομημένα κύτταρα NSP? λωρίδα 2, ταξινομημένα κύτταρα SP. GAPDH χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος. Και τα δύο πειράματα δείχνουν ότι η έκφραση ABCB1 είναι ισχυρότερη από ό, τι SP στα κύτταρα NSP και ότι ABCG2 και ABCC1 δεν εκφράζονται σε SP και NSP κύτταρα.

Η

Ευαισθησία Κατάταξη σύμφωνα 769P SP και NSP κυττάρων στην ακτινοβολία και τα ναρκωτικά

Μετρήσαμε την ευαισθησία των κυττάρων ταξινομημένο 769P SP και NSP σε ακτινοβολία με τη δοκιμασία σχηματισμού κλώνο. Η αποτελεσματικότητα σχηματισμού κλώνο κυττάρων SP ήταν σημαντικά υψηλότερη από εκείνη των κυττάρων NSP είτε πριν είτε μετά την ακτινοβολία (

P

& lt? 0,05? Εικ. 4Α). Πιο αναλυτικά, η απόδοση σχηματισμού κλώνο κυττάρων SP δεν άλλαξε εντυπωσιακά μετά την ακτινοβολία (

P

& gt? 0.05), ενώ εκείνη των κυττάρων NSP μειώθηκε δραματικά (

P

& lt? 0,05), γεγονός που υποδηλώνει ότι τα κύτταρα SP ήταν πιο ανθεκτικά σε βλάβες ακτίνων Χ από τα κύτταρα NSP.

Α, η αποδοτικότητα σχηματισμού κλώνου διαλεγμένων κυττάρων 769P SP είναι σημαντικά υψηλότερη από εκείνη των κυττάρων NSP είτε πριν είτε μετά από 5 Gy Χ-ray ακτινοβολία. Η αποτελεσματικότητα σχηματισμού κλώνο κυττάρων SP είναι σημαντικά υψηλότερη από εκείνη των κυττάρων μετά την ακτινοβολία NSP (

P

& lt? 0,01)? η απόδοση σχηματισμού κλώνος του μη-ακτινοβολημένα κύτταρα NSP είναι σημαντικά υψηλότερο από εκείνο των ακτινοβολημένων κυττάρων NSP (

P

& lt? 0,05). Β, πρόσφατα ταξινομημένα κύτταρα 769P SP είναι πιο ανθεκτικά σε μιτοξαντρόνη από κύτταρα NSP (

P

& lt? 0.01), ενώ η αντίσταση αυτή αντιστρέφεται με βεραπαμίλη προεπεξεργασία. κύτταρα C, SP είναι επίσης πιο ανθεκτικά στην 5-φθοριοουρακίλη από κύτταρα NSP (

P

& lt? 0,05). Η αντίσταση θα μπορούσε επίσης να αντιστραφεί με βεραπαμίλη προεπεξεργασία. D, η ευαισθησία των κυττάρων SP με sunitinib είναι παρόμοια με εκείνη των κυττάρων NSP (

P

& gt? 0,05)

Η

Μετρήσαμε επίσης την ευαισθησία των κυττάρων ταξινομημένο 769P SP και NSP. με MTX, 5-FU και sunitinib. κύτταρα SP έδειξαν ισχυρή αντίσταση στην ΜΤΧ, ενώ τα κύτταρα NSP ήταν ευαίσθητα σε ΜΤΧ (

P

& lt? 0.001). Verapamil, ένας αναστολέας μεταφορέα ABC, ενίσχυσε την ανασταλτική επίδραση του μείγματος σε κύτταρα SP, με ένα ποσοστό αναστολής πολλαπλασιασμού παρόμοια με εκείνη των κυττάρων NSP κάτω από τις ίδιες συνθήκες (

P

& gt? 0,05)? Ωστόσο, βεραπαμίλη απέτυχε να ενισχύσει την επίδραση του μείγματος σε κύτταρα NSP (

P

& gt? 0,05) (Εικόνα 4Β).. Βρήκαμε επίσης ότι κύτταρα SP ήταν πολύ πιο ανθεκτικά σε 5-FU από κύτταρα NSP (

P

& lt? 0,05? Εικ. 4C), αλλά ευαισθησίες τους για να sunitinib ήταν παρόμοια (

P

& gt ? 0,05?. Σχ. 4D)

όγκου Σχηματισμός Κατάταξη σύμφωνα 769P SP και NSP κύτταρα σε ποντίκια NOD /SCID

Κατάταξη σύμφωνα 769P SP και NSP κύτταρα εμβολιάστηκαν σε NOD ποντίκια /SCID να τηρούν τους ικανότητα να σχηματίζουν όγκους. Ένα ποντίκι που εμβολιάστηκε με 20.000 κύτταρα NSP και 1 με 200.000 κύτταρα NSP πέθανε μετά τον εμβολιασμό. Στις 6 εβδομάδες μετά τον ενοφθαλμισμό των κυττάρων, 2 ποντίκια ανέπτυξαν όγκους με μόνο 200 SP κύτταρα, ενώ η χαμηλότερη ποσότητα των κυττάρων NSP να σχηματίζουν όγκους ήταν 20,000 κύτταρα (Σχήμα 5Α?. Πίνακας 2). Παθολογική εξέταση επιβεβαίωσε ότι οι όγκοι που σχηματίζονται με SP και τα κύτταρα NSP έδειξε τα ίδια χαρακτηριστικά με τυπικά κύτταρα RCC σαν μη ταξινομημένα 769P κύτταρα (Εικ. 5Β).

Α και Β, τα σημεία της ένεσης του NOD /SCID ποντίκια σε 6 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό με πρόσφατα ταξινομημένα SP ή κύτταρα NSP. Οι όγκοι που παρατηρήθηκαν σε όλους τους ποντικούς που εμβολιάστηκαν με 2000 SP κύτταρα, αλλά όχι σε ποντίκια που εμβολιάστηκαν με 2000 κύτταρα NSP. Γ και Δ, Παθολογική εξέταση δείχνει τυπικό καρκίνωμα νεφρικών κυττάρων σε ποντίκια που εμβολιάσθηκαν με είτε 2.000 SP κύτταρα ή 200.000 κύτταρα NSP.

Η

Για να επιβεβαιώσετε την αξιωματική ρόλο των κυττάρων SP στο σχηματισμό όγκων, ενός όγκου που σχηματίζονται με 200 κύτταρα SP και ένας όγκος που σχηματίζεται με 20.000 κύτταρα NSP διαχωρίστηκαν σε κυτταρικό εναιώρημα, αντίστοιχα, και χρωματίστηκαν με Hoechst 33342. ανάλυση FCM έδειξε ότι η αναλογία των κυττάρων SP ήταν υψηλότερη σε SP-κυττάρων που σχηματίζεται όγκου παρά σε NSP κύτταρο-σχηματισμένο καρκινικών . (Εικ. 6), γεγονός που υποδηλώνει την in vivo αυτο-ανανέωση και NSP-διαφοροποίηση των κυττάρων SP

Α, κύτταρα διαχωρίστηκαν από τον όγκο που σχηματίζεται με 200 κύτταρα 769P SP? Β, κύτταρα διαχωρίστηκαν από τον όγκο που σχηματίζεται με 20.000 κύτταρα 769P NSP. Το ποσοστό των κυττάρων SP ήταν υψηλότερη σε SP κυττάρων που σχηματίζεται όγκου από ό, τι στο κελί-σχηματίζονται όγκου NSP (1,5% έναντι 0,2%).

Η

Για να προσδιοριστεί περαιτέρω η ικανότητα σχηματισμού όγκων της δεύτερης γενιάς SP κύτταρα, θα εμβολιάζεται 5000 SP κύτταρα (από 2 όγκους σχηματίζονται με 20.000 και 2.000 κύτταρα SP, αντίστοιχα) ή 5,000 κύτταρα NSP (από 2 όγκους σχηματίζονται με 200.000 και 20.000 κύτταρα NSP, αντίστοιχα) σε NOD ποντίκια /SCID. Όλοι οι ποντικοί ανέπτυξαν όγκους 6 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό. Οι δεύτερης γενιάς NSP όγκους ήταν σημαντικά μικρότερο και ελαφρύτερο από τους όγκους SP δεύτερης γενιάς (

P

& lt? 0,01? Σχ. 7Α και Β). Όλες οι όγκοι δεύτερης γενιάς ήταν ιστολογικά πανομοιότυπα με πρωτογενείς όγκους ξενομοσχεύματος (Σχ. 7C). Αυτά τα αποτελέσματα έδειξαν ότι τα κύτταρα SP ήταν ικανά να παράγουν όγκους σειριακά.

Α, NOD ποντικοί /SCID εμβολιάστηκαν με 5000 κύτταρα SP δεύτερης γενιάς από έναν όγκο που σχηματίζεται με 2000 SP κύτταρα ή με 5.000 δεύτερης γενιάς κύτταρα NSP από έναν όγκο διαμορφώνεται με 200.000 κύτταρα NSP. Οι όγκοι αφαιρέθηκαν από τους ποντικούς 6 εβδομάδες μετά τον εμβολιασμό. Β, οι όγκοι SP δεύτερης γενιάς είναι σημαντικά βαρύτερο από το δεύτερης γενιάς NSP όγκους (**

P

& lt? 0,01). C, Παθολογική εξέταση δείχνει ότι τόσο η δεύτερη γενιά SP όγκου και η δεύτερη γενιά NSP όγκου είναι ιστολογικά πανομοιότυπο με πρωτογενείς όγκους ξενομοσχεύματος.

Η

Συζήτηση

Τα τελευταία χρόνια, έρευνες σχετικά με ΚΕΠ σε συμπαγείς όγκους έχουν δείξει σημαντικά ευρήματα. Σε αυτή τη μελέτη, απομονώσαμε κύτταρα SP από ανθρώπινο διαυγοκυτταρικό RCC κυτταρικές γραμμές για να προσδιοριστεί βιολογικές ιδιότητες αυτού του κυτταρικού πληθυσμού.

Βρήκαμε ότι 4.8% των κυττάρων RCC 769P ήταν κύτταρα SP, η οποία έδειξε την ικανότητα της αυτο- την ανανέωση και διαφοροποίηση πολλών καταγωγή. Παρατηρήθηκε μία αποδοτικότητα σχηματισμός κλώνο κυττάρων SP υψηλότερη από εκείνη των κυττάρων NSP. Επιπλέον, τα κύτταρα SP έδειξε ικανότητα σχηματισμού όγκου τουλάχιστον 100 φορές μεγαλύτερη από εκείνη των κυττάρων NSP. Οι όγκοι που σχηματίζονται σε NOD ποντίκια /SCID που εμβολιάστηκαν με μόνο 200 προσφάτως ταξινομημένα κύτταρα SP, ενώ τουλάχιστον 20.000 κύτταρα NSP όφειλαν να σχηματίζουν όγκους σε ποντίκια. Αυτά τα αποτελέσματα παρέχουν άμεση απόδειξη για την υψηλή ογκογονικότητα των κυττάρων SP.

Αυτο-ανανέωση και δυνατότητες διαφοροποίησης multi-γενεαλογία είναι το σήμα κατατεθέν των βλαστικών κυττάρων. Serial μεταμόσχευση κυττάρων σε ζωικά μοντέλα, αν και ατελής, μπορεί να βοηθήσει για να αξιολογηθεί η σταθερότητα των κυττάρων SP σε βιολογικά συμπεριφορές. Μας ανάλυση SP εκ νέου διαλογής μετά σειριακή μεταμόσχευση κυττάρων SP σε ποντικούς έδειξαν ότι τα κύτταρα SP δεύτερης γενιάς που προέρχονται από όγκους SP κύτταρο ξενομοσχεύματος διατήρησε την ικανότητα της αυτο-ανανέωσης και της διαφοροποίησης πολυ-γράμμωσης. Επιπλέον, τα κύτταρα από αμφότερα SP και NSP όγκων ξενομοσχεύματος διατήρησε την ικανότητα να σχηματίζουν όγκους σε ποντίκια, αλλά οι όγκοι SP δεύτερης γενιάς ήταν σημαντικά βαρύτερα από δεύτερης γενιάς NSP όγκων, γεγονός που υποδηλώνει ότι τα κύτταρα 769P SP είναι περισσότερο ογκογονικά κύτταρα από NSP.

βλαστικών κυττάρων του καρκίνου θεωρείται ότι μπορεί να υποστούν ασύμμετρη αυτο-ανανέωση των κυττάρων διαίρεση, διαίρεση σε ένα βλαστικό κύτταρο και ένα προγονικών κυττάρων, η οποία θα μπορούσε να δημιουργήσει μια ποικιλία από πιο διαφοροποιημένα λειτουργικά κύτταρα που αποτελούνται από το σύνολο της κοινωνίας όγκου [35]. Στη μελέτη μας, η καθαρότητα των διαλεγμένων κυττάρων 769P SP ήταν 96,61% και εκείνη των διαλεγμένων κυττάρων NSP ήταν 99,89%. Είναι πιθανό ότι λίγα κύτταρα SP μπορεί να έχει συνδεδεμένο σε κύτταρα NSP και ως εκ τούτου έχουν συλλεχθεί μαζί. Μετά από 10 ημέρες καλλιέργειας, τα ταξινομημένα κύτταρα SP εξελιχθεί σε μια κοινότητα που περιέχει 19,51% των κυττάρων SP και περίπου το 80% των κυττάρων NSP, ενώ τα ταξινομημένα κύτταρα NSP εξελιχθεί σε μια κοινότητα που περιέχει μόνο 2,39% των κυττάρων SP που μπορεί να προκύψουν από λίγες επιβουλής στο SP κυττάρων κατά τη διάρκεια της διαλογής. κύτταρα NSP μπορούν να σχηματίσουν μερικές μικρότερες αποικίες και επίσης αναγεννηθεί όγκων αν και οι όγκοι ήταν μικρότερα. Λαμβάνονται τα ευρήματα από τη μακροπρόθεσμη διαφοροποίηση και τον αύξοντα πειράματα μεταμόσχευσης μαζί, υποδηλώνουν έντονα ότι τα κύτταρα SP υφίστανται ασύμμετρα διαίρεση και είναι ικανά διαφοροποίησης σε κύτταρα NSP και σχηματίζουν το μεγαλύτερο μέρος του όγκου. Οι ικανότητες των κυττάρων NSP να σχηματίσουν αποικίες και οι όγκοι, τα οποία ήταν πολύ ασθενέστερη από ό, τι τις ικανότητες των κυττάρων SP, μπορεί να εξηγηθεί από το μικρό ποσοστό της επιβουλής στο SP κύτταρα μεταξύ διαλεγμένα κύτταρα NSP.

Ο φαινότυπος SP είναι καθορίζεται από τις καταστάσεις των ABC μεταφορέων ABCB1, ABCC1-5 και ABCG2 [36]. Έτσι, τα κύτταρα SP ταξινομούνται μέσω μέτρησης της ταχείας εκροής των λιπόφιλων φθορίζουσες χρωστικές από ABC μεταφορείς [16]. Οι περισσότερες προηγούμενες μελέτες έχουν επικεντρωθεί στην λειτουργία του ABCG2, ενώ η αναγκαιότητα της λειτουργίας της αντλίας του ABCB1 σε επέκταση των βλαστικών κυττάρων ήταν υπό συζήτηση [37]. Στη μελέτη μας, η έκφραση του ABCB1 ήταν υψηλή σε κύτταρα SP αλλά χαμηλή σε κύτταρα NSP όπως ανιχνεύεται τόσο από RT-PCR και κηλίδωση Western. Είναι ενδιαφέρον, ούτε ABCC1 ούτε ABCG2 εκφράστηκε σε SP και NSP κύτταρα, γεγονός που υποδηλώνει ότι μόνο ABCB1 συμβάλλει στη λειτουργία του φαινοτύπου SP σε κύτταρα 769P.

Σύμφωνα με τη θεωρία CSC, ΚΕΠ σε στερεούς όγκους είναι ανθεκτικά στη χημειοθεραπεία και ακτινοθεραπεία, και κάτοικος ΚΕΠ που επιβίωσαν της θεραπείας μπορεί να μεταρρυθμίσει όγκων [38]. Διενεργήσαμε δοκιμασίες χημειοευαισθησία και ραδιοευαισθησία να συγκριθεί η ευαισθησία των κυττάρων SP και NSP στις συμβατικές θεραπείες. Βρήκαμε ότι τα κύτταρα SP ήταν πιο ανθεκτικά στην ακτινοβολία από τα κύτταρα NSP. Επιπλέον, τα κύτταρα SP ήταν πιο ανθεκτικά στην MIX και 5-FU από τα κύτταρα NSP, υποδεικνύοντας ότι τα κύτταρα SP είναι ευρέως ανθεκτικά στα συμβατικά χημειοθεραπευτικά φάρμακα. Ωστόσο, αυτή η αντοχή φαρμάκου θα μπορούσε να αναστραφεί δια προκατεργασίας με βεραπαμίλη, έναν αναστολέα μεταφορέα ABC, γεγονός που υποδηλώνει ότι το ABC μεταφορείς μπορεί να είναι υπεύθυνη για αντοχή φαρμάκου [36], [37], [39].

Εν κατακλείδι, μας μελέτη απέδειξε ότι το SP κύτταρα που απομονώνονται από την κυτταρική γραμμή RCC 769P διαθέτουν βλαστικά χαρακτηριστικά των κυττάρων τόσο μέσω

in vitro

και

in vivo πειράματα

. Αυτά τα κύτταρα SP χαρακτηρίζονται από δυναμικό ισχυρό πολλαπλασιασμό, αυτο-ανανέωση, τη διαφοροποίηση, την αντίσταση στη χημειοθεραπεία και την ακτινοβολία, και

in vivo

ικανότητα σχηματισμού όγκου. ABCB1 έχει βρεθεί να συμβάλει στην λειτουργία των κυττάρων SP. Ας ελπίσουμε ότι, η ανάπτυξη μιας θεραπείας στόχευση αυτού του πληθυσμού κυττάρων θα βοηθήσει να βελτιώσει την πρόγνωση του RCC.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Εικόνα S1.

SP διαλογή κυττάρων οδηγεί σε ανθρώπινο νεφρικό κυτταρικές σειρές καρκινικών κυττάρων 786-O, OS-RC-2, SN12C, και SKRC39 χρησιμοποιώντας Hoechst 33342. Μόνο λίγα κύτταρα SP ανιχνεύθηκαν μεταξύ 786-Ο και τα κύτταρα OS-RC-2 , και το ποσοστό των κυττάρων SP μειώθηκαν όταν τα κύτταρα προ-επωάστηκαν με βεραπαμίλη για περίπου 30 λεπτά. Δεν κύτταρα SP ανιχνεύθηκαν μεταξύ SN12C και SKRC39 κύτταρα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0068293.s001

(ΔΕΘ)