Αφηρημένο

Πρόσφατες εργασίες με μοντέλα ποντικών του καρκίνου του προστάτη (ΚΓΠ) έχει δείξει ότι η αδρανοποίηση του TGFβ σηματοδότησης στο επιθήλιο του προστάτη μπορεί να συνεργαστεί με τη διαγραφή του

PTEN

ογκοκατασταλτικό να οδηγούν σε τοπικό επίπεδο επιθετικό καρκίνο και μεταστατική νόσο. Εδώ, δείχνουμε ότι αδρανοποιεί την οδό ΤΟΡβ διαγράφοντας το γονίδιο που κωδικοποιεί τον υποδοχέα ΤΟΡβ τύπου II (

Tgfbr2

) σε συνδυασμό με μία διαγραφή του

Αρο

ογκοκατασταλτικό γονίδιο συγκεκριμένα στο επιθήλιο του προστάτη ποντικού , έχει ως αποτέλεσμα την ταχεία έναρξη των χωροκατακτητικών καπάκι. Μικρο-μεταστάσεις παρατηρήθηκαν στους λεμφαδένες και τους πνεύμονες ενός ποσοστού των διπλών ποντικούς μετάλλαξης, ενώ δεν παρατηρήθηκαν μεταστάσεις σε

Αρο

ενιαίο μεταλλαγμένα ποντίκια. Ειδικού προστατικού

Αρο? Tgfbr2

μεταλλάξεις είχαν χαμηλότερη συχνότητα της μετάστασης και επέζησε σημαντικά μεγαλύτερο από ό, τι

PTEN? Tgfbr2

διπλές μεταλλάξεις. Ωστόσο, όλα τα

Αρο? Tgfbr2

μεταλλάξεις αναπτύξει διηθητικό καρκίνο κατά 30 εβδομάδες της ηλικίας, ενώ ο διηθητικός καρκίνος σπάνια παρατηρήθηκε σε

Αρο

μόνο μεταλλαγμένα ζώα, ακόμα και κατά ένα έτος της ηλικίας τους. Περαιτέρω σύγκριση των

PTEN

και

Αρο

μοντέλα του Cap αποκάλυψε επιπλέον διαφορές, συμπεριλαμβανομένων αδενοχοληδωτό καρκίνωμα στο

Αρο? Tgfbr2

μεταλλάξεις που δεν είχε δει στο

PTEN

μοντέλο, και η έλλειψη ισχυρή επαγωγή του μονοπατιού TGFβ σε

Αρο

null προστάτη. Εκτός από την πρόκληση υψηλής ποιότητας προστάτη ενδο-επιθηλιακή νεοπλασία (HGPIN), διαγραφή είτε

PTEN

ή

Αρο

που προκαλείται από τη γήρανση στις πληγείσες αγωγούς του προστάτη, και αυτό αυτοσυγκράτηση είχε ξεπεραστεί από την απώλεια της Tgfbr2 . Εν ολίγοις, το έργο αυτό αποδεικνύει ότι TGFβ σηματοδότηση περιορίζει την εξέλιξη του ανώτατου ορίου που προκαλείται από διαφορετικές μεταλλάξεις καταστολέα όγκου, γεγονός που υποδηλώνει ότι TGFβ σηματοδότηση ασκεί μια γενική επίδραση καταστολής όγκων στον προστάτη

Παράθεση:. Bjerke GA, Pietrzak Κ, Melhuish TA , Frierson Jr. HF, πασχαλινό BM, Wotton D (2014) του καρκίνου του προστάτη Induced από την απώλεια της Αρο περιορίζεται από TGFβ σηματοδότηση. PLoS ONE 9 (3): e92800. doi: 10.1371 /journal.pone.0092800

Επιμέλεια: Kin Mang Lau, Η κινεζική Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 13η Δεκεμβρίου 2013? Αποδεκτές: 25, Φεβρουαρίου, 2014? Δημοσιεύθηκε: 20 του Μάρτη του 2014

Copyright: © 2014 Bjerke et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από ένα πρόγραμμα του έργου επιχορήγηση από το Εθνικό Ίδρυμα Καρκίνου (2P01CA104106 στο Β πασχαλινό και Δ Wotton), και από ένα πιλοτικό επιχορήγηση από το Κέντρο Καρκίνου UVA (που χρηματοδοτείται από το CA44579 CCSG P30, το James και Rebecca CraigFoundation, και UVA ταμείο Ογκολογίας γυναικών) για να Δ Wotton. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του προστάτη (ΚΓΠ) είναι μία από τις κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο στους άνδρες, με το NCI πρόβλεψη περισσότερες από 230.000 περιπτώσεις και 29.000 θάνατοι στις ΗΠΑ το 2013 (www.cancer.gov/cancertopics/types/προστάτης). Αρκετές οδοί σηματοδότησης διακόπτονται συχνά σε ανθρώπινα καπάκι, είτε με γενετικές μεταβολές ή αλλαγές στην έκφραση των βασικών συνιστωσών της οδού [1]. Μετάλλαξη ή διαγραφή του

ΡΤΕΝ

ογκοκατασταλτικό γονίδιο βρίσκεται σε περισσότερο από το 30% των πρωτογενών ανθρώπινων καρκίνων του προστάτη και περισσότερο από το 60% των CaP μεταστάσεων [2] – [5]. Απώλεια

ΡΤΕΝ

δραστηριότητα των λιπιδίων φωσφατάσης ενεργοποιεί την ΡΙ3-κινάσης μονοπατιού σηματοδότησης [6], [7], συμπεριλαμβανομένης της ενεργοποίησης του κατάντη Akt /κινάση ΡΚΒ, η οποία είναι η ίδια ένα ογκογονίδιο [8] – [10]. ενεργοποίηση Akt προωθεί την κυτταρική επιβίωση με αναστολή της απόπτωσης, και επίσης ρυθμίζει τον πολλαπλασιασμό και το μέγεθος των κυττάρων [11], [12].

Ο αυξητικός παράγοντας εξαλλαγής (TGF) συνδέτες β συγκεντρώσει ένα σύμπλεγμα σηματοδότησης του Ι και τύπου II υποδοχείς τύπου, στην οποία οι φωσφορυλιώνει υποδοχέα τύπου II και ενεργοποιεί τον τύπο Ι [13] – [15]. Το ενεργοποιημένο υποδοχέα τύπου Ι, στη συνέχεια φωσφορυλιώνει πρωτεΐνες-υποδοχείς Smad (R-Smad), που είναι οι βασικοί παράγοντες μεταγραφής που μεσολαβούν TGFβ οικογένεια σηματοδότησης. Smad2 και Smad3 είναι τα κύρια R-Smads που ανταποκρίνονται στις TGFβ σηματοδότησης. Η φωσφορυλιωμένη R-Smads δεσμεύουν Smad4 και συσσωρεύονται στον πυρήνα όπου ρυθμίζουν την γονιδιακή έκφραση [16]. Σε πολλούς τύπους κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων των επιθηλιακών κυττάρων, ΤΟΡβ σηματοδότηση μέσω Smad2 /3 προκαλεί μια διακοπή G1 του κυτταρικού κύκλου που αποτρέπει την ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό και παίζει ένα κατασταλτικό όγκου ρόλο [17], [18]. Το μονοπάτι σηματοδότησης ΤΟΡβ συχνά διαταράσσεται από μετάλλαξη ή απώλεια της έκφρασης των συστατικών μονοπατιού στο ανθρώπινο CaP [19] – [21]. Μειωμένη έκφραση του τύπου Ι ΤΟΡβ και τύπου II υποδοχείς (που κωδικοποιείται από το

TGFBR1

και

TGFBR2

γονίδια) συνδέεται με αυξημένη Gleason στείλει και μειωμένη επιβίωση και μειωμένη έκφραση Smad4 βρίσκεται επίσης σε προηγμένη ανθρώπινη CaP [19], [22] – [24].

Το

APC

(

αδενωματώδη πολυποδίαση Coli

) γονίδιο κωδικοποιεί ένα ογκοκατασταλτικό που αδρανοποιείται σε ένα μεγάλο ποσοστό των ανθρώπινων καρκίνων του παχέος [25]. Η απώλεια της λειτουργίας APC ενεργοποιεί καθοδικά συστατικά του κανονικού μονοπατιού σηματοδότησης WNT [26], [27]. APC λειτουργεί ως ικρίωμα που στοχεύει β-κατενίνης για φωσφορυλίωση και μετέπειτα αποικοδόμηση του πρωτεασώματος. Με την παρουσία του WNT προσδέματα, ή μια μετάλλαξη στο γονίδιο APC, β-κατενίνης δεν είναι πλέον υποβαθμισμένη και μπορούν να συσσωρεύονται τόσο στο κυτοσόλιο και τον πυρήνα, όπου ενεργοποιεί την έκφραση του γονιδίου-στόχου κατά κύριο λόγο μέσω της αλληλεπίδρασης με την μεταγραφή δεσμευτικός TCF /LEF DNA παράγοντες [28]. Αν και η

APC

γονίδιο κωδικοποιεί μια σημαντική ογκοκατασταλτικό γονίδιο για τον ορθοκολικό καρκίνο, και

έχουν APC

μεταλλάξεις έχουν βρεθεί σε μερικές άλλες μορφές καρκίνου, αδρανοποίηση μεταλλάξεις στο

APC

γονίδιο είναι σπάνιο στην ανθρώπινη CaP [29]. Ωστόσο, στην πλειονότητα των περιπτώσεων των προηγμένων ανθρώπινης CaP β-κατενίνης βρίσκεται στον πυρήνα, υποδεικνύοντας ότι αυτή η οδός συχνά απορυθμισμένης. Οι άλλοι μηχανισμοί για την ενεργοποίηση αυτού του μονοπατιού έχουν εντοπιστεί στο ανθρώπινο καπάκι, συμπεριλαμβανομένων μεθυλίωση του

APC

γονίδιο [30], [31]. Ενεργοποίηση μεταλλάξεις στο ίδιο το β-κατενίνης (που κωδικοποιείται από

CTNNB1

), που εμποδίζουν την φωσφορυλίωση και η στόχευση προς την πρωτεασώματος, έχουν επίσης ταυτοποιηθεί [32]. Ενώ de-ρύθμιση αυτής της οδού φαίνεται να είναι αρκετά συχνές στην ανθρώπινη καπάκι, η σημασία της πυρηνικής β-κατενίνης στην έναρξη της ανθρώπινης ΚΓΠ και εξέλιξης σε καρκίνο ανθεκτικά ευνουχισμό του προστάτη (CRPC) μένει να διευκρινιστεί.

Πρόσφατες εργασίες με γενετικά μοντέλα ποντικών έχει αρχίσει να ρίξει φως σχετικά με τις συνδυαστικές επιπτώσεις των μεταλλάξεων ογκοκατασταλτικών στην εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη. Προστάτη ειδικό διαγραφές του

Tgfbr2

και

Smad4

γονίδια έχουν και οι δύο δοκιμάστηκαν σε ποντίκια. Ούτε η μετάλλαξη μόνη της είναι αρκετή για να κινήσει την ογκογένεση, αλλά όταν συνδυάζεται με ένα

ΡΤΕΝ

διαγραφή, απενεργοποίηση των TGFβ μονοπατιού καταλήγει σε πολύ ταχεία πρόοδος σε τοπικά επεμβατικές και μεταστατικής νόσου [33], [34]. μοντέλα ποντίκι στο οποίο ένα σταθεροποιημένο διαγονίδιο β-κατενίνης εκφράστηκε στον προστάτη οδήγησε σε υψηλής ποιότητας προστάτη ενδο-επιθηλιακά νεοπλασία (HGPIN) [35], [36]. Η διαγραφή του

Αρο

γονίδιο συγκεκριμένα στο επιθήλιο του προστάτη ποντικού οδηγεί επίσης σε HGPIN με υψηλή διεισδυτικότητα, αλλά αυτό εξελίσσεται σπάνια σε διηθητικό καρκίνο και μεταστάσεις δεν βρέθηκαν [37]. Εδώ μπορούμε να δείξουμε ότι η διαγραφή τόσο του

Tgfbr2

και

Αρο

γονιδίων στον προστάτη ποντικού αποτελέσματα επιθήλιο σε ταχεία εξέλιξη σε διηθητικό καρκίνο, με μεταστάσεις στους λεμφαδένες και τους πνεύμονες, σε ορισμένες περιπτώσεις. Επιπλέον, δείχνουμε ότι η διαγραφή του είτε

Αρο

ή

PTEN

μόνη της προκαλεί γήρανση σε αγωγούς του προστάτη με HGPIN και ότι η πρόσθετη απώλεια του

Tgfbr2

γονίδιο υπερνικά αυτό γήρανση σημείο ελέγχου. Συνοπτικά, το έργο αυτό υποδηλώνει ότι TGFβ σηματοδότησης όρια εξέλιξη από HGPIN σε διηθητικό καρκίνο του προστάτη, ανεξάρτητα από τη μετάλλαξη του όγκου έναρξη της έρευνας. Έτσι TGFβ σηματοδότηση διαδραματίζει βασικό ρόλο κατασταλτικό όγκου στο επιθήλιο του προστάτη

Αποτελέσματα και Συζήτηση

Lethal καρκίνου του προστάτη σε

Αρο

r /r?. Tgfbr2

r /r

μεταλλάκτες

ομόζυγη εξάλειψη του γονιδίου

Αρο

στον προστάτη ποντικού αποτελέσματα επιθήλιο σε HGPIN με πλακώδες διαφοροποίηση σε όλες τις προστάτη λοβούς, αν και σπάνια εξελίσσεται σε τοπικά διηθητικό καρκίνο και μεταστάσεις δεν έχουν εντοπιστεί [37]. TGFβ σηματοδότηση περιορίζει την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη ξεκίνησε από την απώλεια της καταστολής του όγκου ΡΤΕΝ [33], [34]. Για να ελέγξετε αν TGFβ σηματοδότησης παίζει παρόμοιο ρόλο στον προστάτη, όταν έχει χαθεί Αρο, χρησιμοποιήσαμε τα μοντέλα του ποντικιού για να συνδυάσει μεταλλάξεις στο

Tgfbr2

και

Αρο

γονίδια. Υπό όρους, ΙοχΡ-πλαισιώνεται αλληλόμορφα τόσο η

Αρο

και

Tgfbr2

γονίδια σε συνδυασμό με το

PbCre4

διαγονιδίου, το οποίο εκφράζεται μόνο σε επιθήλιο προστάτη [38]. Οι ανασυνδυάζονται αλληλόμορφα, που παράγεται από προστάτη επιθήλιο-ειδική έκφραση της PbCre4, αναφέρονται στο εξής ως

Αρο

r /r

και

Tgfbr2

r /r

. Ως πρώτη δοκιμή του κατά πόσον συνδυάζοντας το

Αρο

και

Tgfbr2

μεταλλάξεις προωθεί την εξέλιξη του καρκίνου του προστάτη, ακολουθήσαμε μια ομάδα του

Αρο

r /r

και

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια σε ένα έτος της ηλικίας τους. Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου Φυσικά, κανένα από τα

Αρο

r /r

ποντίκια έδειξαν σημάδια δυσφορίας, ενώ όλα τα διπλά μεταλλάγματα εμφανίζεται ένα φορτίο όγκου που απαιτείται ευθανασία πριν από τις 30 εβδομάδες της ηλικίας (Εικόνα 1Α) . Για λόγους σύγκρισης, αναλύσαμε επίσης μια σειρά από

PTEN

r /r

και

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια κατά την ίδια περίοδο. Όλα εκτός από ένα από τα

PTEN

μόνο μεταλλάξεις επέζησε σε ένα έτος, ενώ κανένα από τα διπλά μεταλλάγματα επιβίωσαν μετά από 16 εβδομάδες, σε συμφωνία με προηγούμενες αναλύσεις μας (Εικόνα 1Α και [33]). Στα 18 εβδομάδες της ηλικίας, οι προστάτες των

Αρο

μόνο μεταλλάξεις null ήταν σχεδόν δυσδιάκριτες από το αγρίου τύπου, ενώ, προστάτη της διεύρυνσης ήταν εμφανές στο

PTEN

μηδενικά (Εικόνα 1Β). Από 52 εβδομάδες, το

Αρο

null όγκους του προστάτη ήταν εμφανής, αλλά ήταν ακόμα πολύ μικρότερες από εκείνες στο

Αρο? Διπλή μηδενική Tgfbr2

ποντίκια σε ηλικία των 16 εβδομάδων (Εικόνα 1Β). Έτσι, η διαγραφή του

Tgfbr2

γονίδιο στο παρασκήνιο της απώλειας είτε

PTEN

ή

Αρο

είχε μια πολύ σημαντική επίδραση στην ανάπτυξη του όγκου, και μείωσε το διάμεσο χρόνο επιβίωσης για 82 ημέρες και 148 ημέρες αντίστοιχα (Σχήμα 1Α και C). Υπήρξε επίσης μια σημαντική διαφορά επιβίωσης μεταξύ των δύο διπλά μεταλλαγμένο συνδυασμούς που είναι πιθανό να οφείλεται στις συγκεκριμένες οδούς που επηρεάζονται από την απώλεια του ΡΤΕΝ και APC.

(Α) καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier παρουσιάζονται για κάθε γονότυπο όπως υποδεικνύεται . Ο αριθμός των ζώων για κάθε εμφανίζεται παραπάνω. Οι τιμές p (log-rank test) εμφανίζονται για

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

έναντι

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

, για

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

έναντι

Αρο

r /r

, και για το

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

έναντι

PTEN

r /r

. (Β) Ακαθάριστο ανατομία των όγκων του προστάτη εμφανίζεται για κάθε μία στους παρακάτω ηλικίες: άγριου τύπου (18 εβδομάδες),

PTEN

r /r

(18 εβδομάδες),

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

(13 εβδομάδες),

Αρο

r /r

(18 και 52 εβδομάδων), και

Αρο

r /r ? Tgfbr2

r /r

(15 εβδομάδες). (Γ) Τα δεδομένα επιβίωσης για κάθε ένα από τα διπλά μηδενικών σημάτων παρουσιάζεται, μαζί με μια περίληψη των μεταστάσεων στα οσφυϊκά λεμφαδένες (LN) και των πνευμόνων. Το ποσοστό των ποντικών με μεταστάσεις είναι σημαντικά διαφορετική, συγκρίνοντας το

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

και

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

ομάδες σε C (p & lt? 0,01).

η

Βρήκαμε προηγουμένως ότι ένα σχετικά υψηλό ποσοστό (~ 66%) του

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια ανέπτυξαν μεταστάσεις στους λεμφαδένες οσφυϊκή ή πνεύμονα [33]. Στην παρούσα μελέτη, μικρο-μεταστάσεις βρέθηκαν στην οσφυϊκή λεμφαδένες του 18% του

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια, και στους πνεύμονες του 12% του

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια. Έτσι, μεταστάσεις στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια ήταν σημαντικά λιγότερο συχνά (p & lt? 0,01) από ό, τι στο

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

μεταλλάξεις που εξετάζονται εδώ, και σε προηγούμενες αναλύσεις μας (Σχήμα 1C). Εμείς ποτέ δεν παρατηρήθηκε μεταστάσεις στο

Αρο

r /r

μόνο μεταλλαγμένα ποντίκια, ακόμα και κατά ένα έτος της ηλικίας τους, και μόνο ένα από τα δεκατέσσερα

Αρο

r /r

ποντίκια που αναλύθηκαν στο είτε 36 ή 52 εβδομάδων έδειξε σημάδια τοπικά διηθητικού καρκίνου. Αυτά τα δεδομένα δείχνουν σαφώς ότι ο συνδυασμός των μεταλλάξεων στο

Αρο

και

Tgfbr2

γονίδια μπορεί να επιταχύνει την εξέλιξη του όγκου σε επεμβατικές και μεταστατική νόσο πάνω από αυτή που παρατηρείται με την απώλεια του

Αρο

μόνη της .

η αδρανοποίηση της TGFβ σηματοδότησης, είτε με τη διαγραφή του

Tgfbr2

ή

Smad4

, επιταχύνει την εξέλιξη του

PTEN

null καπάκι, και

Tgfbr2

διαγραφή έχει αποδειχθεί επίσης να συνεργάζεται με ένα ουσιαστικά δραστική Akt διαγονιδίου να οδηγεί διηθητικό καρκίνο [33], [34]. Η έκφραση ενός διαγονιδίου κυρίαρχων αρνητικών υποδοχέων ΤΟΡβ τύπου II στον προστάτη ήταν σε θέση να αυξήσει τη σοβαρότητα των όγκων ξεκίνησε από ειδικό προστατικό έκφραση του αντιγόνου Τ και οδήγησε σε αυξημένη metasases [39]. Σε κάθε περίπτωση, η εξέλιξη σε επεμβατικές και μεταστατική νόσο επιταχύνεται από την απώλεια του ΤΟΡβ σηματοδότηση, ακόμη και όταν η αρχική μετάλλαξη καθαυτή δεν αποτέλεσμα της σε μεταστάσεις, όπως φαίνεται εδώ με το

Αρο

μεταλλάκτες. Συνοπτικά, τα αποτελέσματα αυτών των μοντέλων ποντικών πώμα μαζί με τα δεδομένα που παρουσιάζονται εδώ δείχνουν ότι TGFβ σηματοδότησης παίζει σημαντικό ρόλο κατασταλτικό όγκου σε Cap

αδενοχοληδωτό καρκίνωμα στο

Αρο

r /r.? Tgfbr2

r /r

μεταλλαγμένο προστάτη

με δεδομένες τις διαφορές στην επιβίωση και στην ακαθάριστη εμφάνιση των όγκων από το

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

και

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια πραγματοποιήσαμε μια πιο λεπτομερή σύγκριση των όγκων αυτών, καθώς και του προστάτη από τα ενιαία null μεταλλάξεις. Όπως έχει ήδη αναφερθεί, η ιστολογική ανάλυση δεν αποκάλυψε διαφορές μεταξύ του άγριου τύπου και

Tgfbr2

null προστάτη (Σχήμα 2 και [33]). Σύγκριση του

PTEN

και

Αρο

μόνο μεταλλάξεις αποκάλυψε HGPIN σε προστάτες των δύο γονότυπων, με πλακώδη διαφοροποίηση στο

Αρο

null που δεν είχε δει στο

PTEN

null. Εισαγωγή ενός

Tgfbr2

μετάλλαξη οδήγησε σε εξέλιξη σε φτωχά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα (PDA) σε όλες τις

PTEN? Tgfbr2

διπλές μεταλλάξεις. Όταν συνδυάζεται με το

Αρο

μετάλλαξη, διαγραφή του

Tgfbr2

γονιδίου στον προστάτη οδήγησε σε εξέλιξη σε διηθητικό καρκίνο, αν και η πλειοψηφία των

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

όγκους διατήρησε το πλακώδες φαινότυπο φαίνεται στο

Αρο

μόνο μηδενικά (Σχήμα 2). Σημειώστε την εξέχουσα εστίες της κερατίνης στο

Αρο

null HGPIN (βέλος, Σχήμα 2) και αδενοχοληδωτό διαφοροποίηση αναφέρεται στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

όγκου δείχνεται στο Σχήμα 2 (βέλη). Εκτός από την ιστολογική εμφάνιση, αυξημένη έκφραση του κεράτινες 1 και 10 έχει χρησιμοποιηθεί ως δείκτης του πλακώδους διαφοροποίησης στο

Αρο

null προστάτη [40]. Εμείς, ως εκ τούτου, χρωματισμένο τμήματα του αγρίου τύπου και μεταλλαγμένων προστάτη για κερατίνη 10. Όπως φαίνεται στο σχήμα 3, η ισχυρή χρώση για Krt10 παρατηρήθηκε σε κύτταρα βασίζεται η εξέχουσα εστίες της κερατίνης παρούσα σε

Αρο

r /r

HGPIN, με λίγη ή καθόλου χρώση εμφανής σε άγριου τύπου,

Tgfbr2

μηδενική ή

PTEN

null προστάτες. Στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

όγκων μεγάλες περιοχές της Krt10 θετικά κύτταρα ήταν παρόντα σε όλο τον όγκο, ενώ στο

PTEN? Tgfbr2

διπλά μεταλλαγμένα μόνο σπάνια διάσπαρτα θετικά κύτταρα Krt10 παρατηρήθηκαν (Εικόνα 3)

Η &?. οι Ε τομές που δείχνεται για τις έξι υποδεικνύονται γονότυπους, που λαμβάνονται από ποντικούς στις ακόλουθες ηλικίες. Βέλος δείχνει καταθέσεις κερατίνη στο

Αρο

r /r

, και αιχμές βελών δείχνουν μια έκταση αδενοχοληδωτό διαφοροποίηση στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

προστάτη. Άγριου τύπου: 21 εβδομάδες,

PTEN

r /r

: 22 εβδομάδες,

Αρο

r /r

: 36 εβδομάδες,

Tgfbr2

r /r

: 70 εβδομάδες,

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

: 11 εβδομάδες, και

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

: 17 εβδομάδες. Οι εικόνες που λαμβάνονται σε 10 Χ και 40 Χ μεγέθυνση φαίνονται.

Η

προστάτες των υποδεικνυόμενων γονότυπων αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία για κερατίνη 10, ως δείκτης του πλακώδους διαφοροποίησης. Ηλικίες είναι όπως στο Σχήμα 2.

Η

Για να συγκρίνουν καλύτερα τις συχνότητες των φαινοτύπων που περιγράφονται παραπάνω θα καταρτίζονται δεδομένα σχετικά με τις κυρίαρχες φαινοτύπων σε κάθε γονότυπο και σκόραρε με τυφλό τρόπο βασίζεται σε καθιερωμένες φαινοτύπων του προστάτη του ποντικιού [41 ] – [43]. Σε

Αρο

r /r

ποντίκια πιο προστάτη αναλύθηκαν σε 8-24 εβδομάδες της ηλικίας είχε HGPIN με πλακώδη διαφοροποίηση (αδενοχοληδωτό HGPIN? ASQ-HGPIN) και από 36-52 εβδομάδες όλοι είχαν αυτό το φαινότυπο (Σχήμα 4Α). Μόνο ένα από τα

Αρο

μηδενικά ανεπτυγμένες περιφέρειες της τοπικής μικρο-διηθητικού καρκίνου (στις 36 εβδομάδες), και αυτό ήταν σημαντικά λιγότερο συχνή (p & lt? 0,02) από την συχνότητα εμφάνισης διηθητικού καρκίνου στο

PTEN

r /r

ποντίκια στην 36-52 εβδομάδων εύρος ηλικίας (Σχήμα 4Α). Σύγκριση του

Tgfbr2

ένωση μεταλλάξεις αποκάλυψε ότι όλα

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια είχαν PDA χωρίς πλακώδη διαφοροποίηση, ενώ όλα, αλλά ένα από τα

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια υποβάλλονται σε ευθανασία για φορτίο όγκου είχε εκτεταμένες αδενοχοληδωτό καρκίνωμα (Εικόνα 4Β). Μπορούμε επίσης σε σύγκριση φαινοτύπων σε ποντίκια με ενδιάμεσο γονότυπους, στο οποίο ένα ή άλλη μετάλλαξη ήταν ετερόζυγη (μερικά από τα

ΡΤΕΝ

+ /r? Tgfbr2

r /r

και

ΡΤΕΝ

r /r? Tgfbr2

+ /r

ποντίκια που περιλαμβάνονται στην παρούσα περίληψη φαινότυπο αναλύθηκαν για επιβίωση στο διαιτητή [33]). Για την ανάλυση αυτή, οι ποντικοί αναλύθηκαν όταν το φορτίο του όγκου έγινε υπερβολική, ή όταν οι ποντικοί έφθασαν τουλάχιστον ενός έτους. Αυτό έδειξε ότι η συχνότητα του διηθητικού καρκίνου ήταν σημαντικά υψηλότερη σε

PTEN

r /r? Tgfbr2

+ /r

από ό, τι στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

+ /r

ποντίκια (p & lt? 0,05), και στο

PTEN

+ /r? Tgfbr2

r /r

από ό, τι στο

Αρο

+ /r? Tgfbr2

r /r

προστάτη (p & lt? 0.001), υποστηρίζοντας την ιδέα ότι η απώλεια του

PTEN

αποτελέσματα σε ένα πιο επιθετικό φαινότυπο από την απώλεια του

Αρο

(Εικόνα 4Β).

(Α) Οι φαινότυποι των

Αρο

r /r

και

PTEN

r /r

Τα ποντίκια φαίνεται, ομαδοποιούνται από δύο ηλικιακές ομάδες: 8 για 24 εβδομάδες και 36 σε 52 εβδομάδες. Όλα τα ζώα που αναλύθηκαν είχαν κάποιο φαινότυπο όγκου του προστάτη, η οποία έχει χαρακτηριστεί ως Εστιακό PIN, HGPIN, ή HGPIN με αδενοχοληδωτό διαφοροποίηση (ASQ-HGPIN). Τα ζώα με μικρο-διηθητικό καρκίνο και ASQ-HGPIN ή ένα μίγμα HGPIN και PDA ομαδοποιούνται ξεχωριστά. Οι αριθμοί των ζώων που αναλύθηκαν ανωτέρω απεικονιζόμενο κάθε στήλη, και η κατανομή των φαινοτύπων παρουσιάζεται ως ποσοστό. Το ποσοστό των ζώων με οποιαδήποτε σημάδια επιθετικού καρκίνου στο 36-52 εβδομάδων είναι σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δύο γονότυπων (ρ & lt? 0,02). (Β) Ο αριθμός των ποντικών με κάθε φαινότυπο παρουσιάζονται για τα ζώα με διαφορετικούς συνδυασμούς μεταλλάξεων σε δύο

Αρο

και

Tgfbr2

(παραπάνω), ή και στα δύο

ΡΤΕΝ

και

Tgfbr2

(κάτω). Για κάθε γονότυπο οι αριθμοί των ζώων με κάθε φαινότυπο απεικονίζεται. Κανονικό – δεν φαινότυπο όγκου εμφανής. HGPIN και adenosqamous HGPIN – εκτεταμένη HGPIN χωρίς απόδειξη της εισβολής. PDA και adenosqamous καρκίνωμα – εκτεταμένη τοπικά διηθητικό καρκίνο. Όλα τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία σε περισσότερο από ένα έτος της ηλικίας τους, εκτός και αν έπρεπε να θυσιαστεί για το φορτίο του όγκου σε νεαρότερη ηλικία. Σημαντικά περισσότερα ζώα με διηθητικό καρκίνο παρατηρήθηκαν στο

PTEN

r /r? Tgfbr2

+ /r

και

PTEN

+ /r? Tgfbr2

r /r

ομάδες σε σχέση με το

Αρο

r /r? Tgfbr2

+ /r

και

Αρο

+ /r? Tgfbr2

r /r

ομάδες (14/14 έναντι 2/4? p & lt? 0,05 και 15/17 vs 0/6? p & lt? 0.001). Ένα από τα

Αρο

r /r? Tgfbr2

+ /r

ποντίκια (σκόραρε όπως PDA) είχε μόνο μικρές επεμβατικές εστίες. Όλοι οι άλλοι είχαν εκτεταμένη τοπική εισβολή και αν σκόραρε όπως PDA ή ASQ-καρκινώματος.

Η

Εν ολίγοις, αυτή η ανάλυση δείχνει ότι οι φαινότυποι παρατηρούνται είναι πολύ συγκεκριμένες για κάθε μοντέλο καρκίνου του προστάτη, και ότι μέσα σε κάθε μοντέλο υπάρχει μικρή διακύμανση στον τύπο του όγκου. Για δοκιμαστεί όλοι οι συνδυασμοί το

PTEN

μετάλλαξη έχει ως αποτέλεσμα μια πιο επιθετική, διηθητικό καρκίνο από ό, τι

Αρο

διαγραφή. Είναι ενδιαφέρον ότι, κανένα από τα

Αρο

ετεροζυγώτες ανέπτυξαν όγκους, ακόμη και με την παρουσία ενός ομόζυγη διαγραφή του

Tgfbr2

, ενώ η πλειοψηφία των

ΡΤΕΝ

ετεροζυγώτες αναπτυχθεί PDA αν ήταν null για

Tgfbr2

. Αυτό είναι σύμφωνο με αδρανοποίηση του υπόλοιπου

ΡΤΕΝ

αλληλόμορφο, η οποία έχει προταθεί ότι είναι μια σημαντική διαδρομή μέσω της οποίας

ΡΤΕΝ

ετερόζυγο προστάτες ποντίκι αναπτύξει ένα φαινότυπο [44]. TGFβ σηματοδότηση φαίνεται να περιορίζουν την εξέλιξη της HGPIN τόσο πτωχά διαφοροποιημένο αδενοκαρκίνωμα και να αδενοχοληδωτό καρκίνωμα, με τη διαφορά στο φαινότυπο εξαρτάται από τον όγκο έναρξη μετάλλαξη. Ενώ η πυρηνική συσσώρευση του β-κατενίνης βρίσκεται σε ένα υψηλό ποσοστό των ανθρώπινων καπάκι, δεν υπάρχει ομοφωνία σχετικά με το πώς η οδός /β-κατενίνης APC θα μπορούσε να διαταραχθεί σε ανθρώπινο καπάκι. Η πλακώδη διαφοροποίηση που προκαλείται από την απώλεια του

Αρο

είναι σχετικά σπάνιο στην ανθρώπινη καπάκι, αν και είναι πιο συχνή μετά τη θεραπεία στέρησης ανδρογόνων [45]. Η παρουσία των αδενοχοληδωτό καρκίνωμα στο

Αρο? Tgfbr2

διπλό μηδενικά υποδηλώνει ότι η απώλεια της TGFβ σηματοδότησης δεν εμποδίζει την πλακώδη διαφοροποίηση που προκαλείται από την απώλεια του

Αρο

. Παρομοίως, ο συνδυασμός ενός

ΡΤΕΝ

μετάλλαξη με ένα σταθεροποιημένο διαγονίδιο β-κατενίνης στα αποτελέσματα του προστάτη σε όγκους με πλακώδους διαφοροποίησης, γεγονός που υποδηλώνει ότι αυτό μπορεί να είναι το κυρίαρχο φαινότυπο της πρόωρης ενεργοποίησης του β-κατενίνης [40]. Ίσως η αύξηση της πυρηνικής β-κατενίνης δει σε προχωρημένο ανθρώπινο ΚΓΠ είναι μια μεταγενέστερη φαινότυπο, ή εμφανίζεται σε χαμηλότερο επίπεδο από ό, τι φαίνεται με διαγονιδιακά χειραγώγηση σε ποντίκια, και, συνεπώς, δεν μπορούν να οδηγήσουν πλακώδη διαφοροποίηση.

Αυξημένη στρώμα και διηθητικού καρκίνου με

Tgfbr2

διαγραφή

Η εξέταση των τμημάτων βάφονται με H & amp? Ε αποκάλυψε ενδείξεις τοπικά διηθητικό καρκίνο, με αυξημένη στρώμα τόσο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

και

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

προστάτες. Για να απεικονίσει την επέκταση του στρώματος, που χρωματίζονται τμήματα με τριχρωματική μέθοδος του Masson. Στην άγριου τύπου και

Tgfbr2

null προστάτες, η δομή αγωγός ήταν παρόμοια, και υπήρχε ελάχιστη ινώδης ιστός μεταξύ του προστάτη αγωγών. Σε περιοχές της HGPIN στο

PTEN

r /r

ζώα υπήρχαν εστιακές περιοχές αυξημένης ίνωσης και το

Αρο

null σημαντική ίνωση παρατηρήθηκε μεταξύ των αγωγών με HGPIN (Σχήμα 5). Σε περιοχές του διηθητικού καρκίνου τόσο στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

και

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

προστάτες, αυξημένη ίνωση ήταν παρούσα, και αυτό ήταν ιδιαίτερα εμφανές στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια (Σχήμα 5)

.. Οι κηλιδώνονται με τριχρωμία τμήματα του προστάτη του Masson δείχνεται, από τα ποντίκια στα ακόλουθα ηλικίες. Άγριου τύπου: 25 εβδομάδες,

PTEN

r /r

: 18 εβδομάδες,

Αρο

r /r

: 36 εβδομάδες,

Tgfbr2

r /r

: 18 εβδομάδες,

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

: 12 εβδομάδες, και

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

:. 17 εβδομάδες

η

στη συνέχεια εξετάσαμε την κατανομή της δομής του αγωγού σε κάθε ένα από τα δύο μοντέλα καρκίνου του προστάτη. Η ανοσοχρώση για το κολλαγόνο IV, ως δείκτης για την ακεραιότητα της βασικής μεμβράνης, αποδείχθηκε ότι η βασική μεμβράνη ήταν άθικτο τόσο άγριου τύπου και

Tgfbr2

null προστάτες. Στην

Αρο

και

ΡΤΕΝ

μεταλλάγματα (στις 36 και 21 εβδομάδες ηλικίας αντιστοίχως), δεν υπήρξε διάσπαση της βασικής μεμβράνης ελάχιστη γύρω αγωγούς με HGPIN (Σχήμα 6). Οι ηλικίες αυτών των ποντικών είναι πολύ πέραν των μέσους χρόνους επιβίωσης των 21 και 12 εβδομάδων για κάθε ένα από τα διπλά μεταλλάγματα. Σε αντίθεση, η εξέταση του διπλού μεταλλάκτη ζώα που υποβλήθηκαν σε ευθανασία εξαιτίας του φορτίου του όγκου έδειξε πλήρη ανάλυση της βασικής μεμβράνης σε περιοχές του διηθητικού καρκίνου (Σχήμα 6). Για να εξεταστεί η επεμβατική φαινότυπο, εμείς χρωματισμένες τομές για Foxa1, ως επιθηλιακά δείκτη, και για Sma να εντοπίσει τα στρωματικά κύτταρα. Τόσο στην άγριου τύπου και

Tgfbr2

null, προστάτη αγωγοί πλήρως περικλείεται από Sma θετικά κύτταρα του στρώματος. Αν και υπάρχουν σαφείς ενδείξεις HGPIN στο

Αρο

και

PTEN

null προστάτες, στις περισσότερες περιπτώσεις, οι αγωγοί είχαν εξακολουθεί να περιβάλλεται από Sma-θετικό στρώμα σε ηλικίες σημαντικά μεγαλύτερη από ό, τι οι μέσοι χρόνοι επιβίωσης οι διπλοί μεταλλάκτες (Σχήμα 7). Σε αντίθεση, στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

και

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

ζώα, η διαχωρισμός μεταξύ στρώματος και αγωγών έχει σαφώς κατανεμημένες, ως δομή αγωγός δεν είναι πλέον εμφανής κατά τη μετάβαση σε διηθητικό καρκίνο (Σχήμα 7). Στο σύνολό τους, αυτές οι αναλύσεις δείχνουν ότι ενώ υπάρχουν ορισμένες διαφορές στο ιστολογικό τύπο καρκίνου που ξεκίνησε από την απώλεια του ΡΤΕΝ ή της APC, το επιπλέον αδρανοποίηση της οδού TGFβ προκαλεί ταχεία εξέλιξη σε τοπικό επίπεδο διηθητικό καρκίνο.

έμμεσος ανοσοφθορισμός είναι δείχνεται για β-κατενίνης (πράσινο) και το κολλαγόνο IV (κόκκινο) σε τομές του προστάτη από ποντικούς των υποδεικνυόμενων γονότυπους. Άγριου τύπου: 21 εβδομάδες,

Tgfbr2

r /r

: 44 εβδομάδες,

PTEN

r /r

: 21 εβδομάδες,

PTEN

r /r ? Tgfbr2

r /r

: 11 εβδομάδες,

Αρο

r /r

: 36 εβδομάδες, και

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

:. 24 εβδομάδες

η

FoxA1 (κόκκινο) και Sma (πράσινο) χρώση δείχνονται με έμμεσο ανοσοφθορισμό επί τομών του προστάτη από ποντικούς των υποδεικνυόμενων γονότυπους. Ηλικίες των ποντικών είναι όπως στο Σχήμα 6.

Η

Για να ελέγξετε για την απόδειξη των επιθηλιακών σε μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT) εξετάσαμε την έκφραση της E-cadherin και βιμεντίνης. TGFβ σηματοδότηση είναι ένα πολύ γνωστό οδηγός του ΕΜΤ και αυξημένη TGFβ σηματοδότηση συχνά καταλήγει σε αυξημένη έκφραση βιμεντίνη και μια μείωση στην έκφραση Ε-καδερίνης, η οποία μπορεί να συμβάλλει στην κατανομή των επιθηλιακών κυττάρων και διασταυρώσεων επεμβατικής φαινότυπο [46]. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 8, Ε-καδερίνης είναι γερά εκφράζεται και παρόντες στην κυτταρική περιφέρεια στην πλειοψηφία των επιθηλιακών κυττάρων στο

Αρο

και

ΡΤΕΝ

μονά μεταλλάγματα. έκφραση Ε-καδερίνης εξακολουθεί να εμφανίζεται σε μεγάλο βαθμό την κανονική του

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

ποντίκια, παρά τη σαφή κατανομή της δομής του αγωγού. Ορισμένα στοιχεία της E-cadherin μετεγκατάσταση από την κυτταρική μεμβράνη παρατηρήθηκε στο

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

του προστάτη, μαζί με μια μείωση του συνολικού σήματος σε σχέση με το

Αρο

r /r

. Ωστόσο, ακόμη και στις δύο διπλά μεταλλαγμένο προστάτες, επιθηλιακών κυττάρων διασταυρώσεις φαίνεται να είναι σε μεγάλο βαθμό άθικτο με σαφή χρώση Ε-καδερίνης (Εικόνα 8). χρώση βιμεντίνης απεκάλυψε μικρή αλλαγή στις στα επιθηλιακά κύτταρα σε οποιαδήποτε από τις μεταλλάξεις, αν και υπήρξε κάποια αυξημένη έκφραση βιμεντίνη στο στρώμα του

Αρο

και

ΡΤΕΝ

ενιαία άκυρη και

Αρο? Tgfbr2

διπλή μηδενική προστάτη (Σχήμα 8). Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι αν και οι όγκοι σε

PTEN? Tgfbr2

και

Αρο? Tgfbr2

διπλό μηδενικά είναι επεμβατική και μπορεί να κάνει μετάσταση, αυτό δεν συνοδεύεται από ένα μεγάλο φαινότυπο κλίμακας EMT. Δεδομένου του ρόλου των TGFβ σηματοδότησης στην οδήγηση EMT, θα μπορούσε να αναμένεται ότι τα διπλά όγκοι null δεν θα έχουν κάτω-ρυθμιζόμενη E-cadherin και up-ρύθμιση βιμεντίνη, καθώς έχουν χάσει ένα βασικό στοιχείο του μονοπατιού μεταγωγής σήματος TGFβ. Τα αποτελέσματα, ωστόσο, αφήνουν ανοιχτό το ζήτημα του πώς αυτοί οι όγκοι γίνει μεταστατική. Μια πιθανότητα είναι ότι σπάνια επιθηλιακά κύτταρα εντός του όγκου έχουν υποστεί EMT, πιθανώς οδηγείται από ένα σήμα, εκτός από ΤΟΡβ. Μια άλλη ενδιαφέρουσα πιθανότητα είναι ότι οι διπλής ανενεργούς επιθηλιακά κύτταρα υποβάλλονται σε κάποια μορφή συλλογικής εισβολή, στην οποία μικρές ομάδες των επιθηλιακών κυττάρων γίνονται επεμβατικές και κινητικό, διατηρώντας κύτταρο διασταυρώσεις τους. Αυτό το είδος της εισβολής έχει προσελκύσει περισσότερο ενδιαφέρον ως πιθανός οδηγός της μετάστασης [47], [48], και τώρα θα είναι ενδιαφέρον να εξετάσουμε πώς οι όγκοι που εξετάζονται εδώ να γίνει επεμβατική και μεταστατικό.

προστάτες της οι υποδεικνύεται γονότυπους, επιλέγονται ώστε να είναι αντιπροσωπευτικά από τα πιο κοινά φαινότυπο του καθενός, αναλύθηκαν με έμμεσο ανοσοφθορισμό για Ε-καδερίνης (κόκκινο) και βιμεντίνης (πράσινο). Ηλικίες έχουν ως εξής, άγριου τύπου: 21 εβδομάδες,

PTEN

r /r

: 45 εβδομάδες,

Αρο

r /r

: 52 εβδομάδες,

Tgfbr2

r /r

: 70 εβδομάδες,

PTEN

r /r? Tgfbr2

r /r

: 12 εβδομάδες, και

Αρο

r /r? Tgfbr2

r /r

:. 23 εβδομάδες

Η

Αρο

διαγραφή δεν ενεργοποιεί TGFβ σηματοδότησης στην

προστάτη

Η διαγραφή του

PTEN

στο ποντίκι προστάτη εκκινεί ογκογένεσης και επάγει την δραστηριότητα της πορείας ΤΟΡβ [33], [34]. Παρομοίως, η έκφραση μιας συστατικώς δραστικής

ΑΚΤ1

διαγονιδίου σε επιθήλιο προστάτη αυξάνει TGFβ σηματοδότηση [33], υποδηλώνοντας ότι η ενεργοποίηση Akt, η οποία λαμβάνει χώρα στα κατάντη της απώλειας ΡΤΕΝ, είναι επαρκής για να ενεργοποιήσει αυτή την οδό. Δεδομένου ότι η διαγραφή του

Tgfbr2

γονίδιο που επιτρέπεται για εξέλιξη από HGPIN σε διηθητικό καρκίνο στο

Αρο

null προστάτη, εξετάσαμε αν η οδός TGFβ προκλήθηκε σε αυτό το μοντέλο. Διαγραφή του είτε

Αρο

ή

PTEN

οδήγησε σε μικρή μεταβολή στα συνολικά επίπεδα β-κατενίνης, ενώ φωσφο-Akt επίπεδα ήταν αυξημένα ειδικά στο

PTEN

null προστάτη (Σχήμα 9 ). Για να ελέγξετε αν η οδός TGFβ επηρεάστηκε από

Αρο

διαγραφή, αναλύσαμε πρώτα επίπεδα του υποδοχέα ΤΟΡβ τύπου ΙΙ και το ενδοκυττάριο μεσολαβητή, Smad4. Ενώ και οι δύο ήταν σημαντικά αυξημένες στο

ΡΤΕΝ

null, δεν υπήρξε σημαντική αύξηση των επιπέδων είτε Smad4 ή Tgfbr2 σε

Αρο

μεταλλαγμένο προστάτες σε σύγκριση με εκείνες από ποντικούς άγριου τύπου (Σχήμα 9). Ως ένδειξη της ενεργοποίησης της οδού, μπορούμε επόμενη αναλύθηκαν τα επίπεδα της Smad2 φωσφορυλιώνονται στο καρβοξυλ-τερματικό σερίνες που αποτελούν υπόστρωμα για το Ι ΤΟΡβ υποδοχείς τύπου. Φωσφο-Smad2 αυξήθηκε σημαντικά στο

PTEN

null αλλά όχι στο

Αρο

null προστάτη, υποδεικνύοντας ότι η ενεργοποίηση της οδού λαμβάνει χώρα με την απώλεια του PTEN, αλλά όχι με την απώλεια της APC. Η επαγωγή του ΤΟΡβ σηματοδότησης από

ΡΤΕΝ

διαγραφή θα μπορούσε να κινείται από μεταγωγή σήματος γεγονότα κατάντη της ενεργοποίησης Akt, ή θα μπορούσε να είναι μια συνέπεια του τύπου της διαφοροποίησης σε αυτό το μοντέλο – φτωχή αδενική διαφοροποίηση στο

ΡΤΕΝ

null αντί για το πλακώδη διαφοροποίηση που παρατηρείται με

Αρο

διαγραφή. Ωστόσο, τα καθαρά συνεταιριστική δράση του

Αρο

και

Tgfbr2

διαγραφή δείχνουν ότι ακόμη και το χαμηλό επίπεδο των βασικών TGFβ σηματοδότησης παρόντες στο

Αρο

όγκους μεταλλαγμένου είναι σημαντικό για τον καρκίνο συγκράτησης εξέλιξης σε τοπικά επεμβατικές και μεταστατική νόσο.

Δυτική κηλίδες εμφανίζονται από λύματα από τις κοιλιακοί προστάτες των 3 άγριου τύπου, 3

Αρο

r /r

και 3

PTEN

r /r

ποντίκια όπως υποδεικνύεται.