Αφηρημένο

Ιστορικό

Τα επίπεδα των κυκλοφορούντων αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) έχουν χρησιμοποιηθεί ευρέως ως βιοδείκτη για αγγειογενετική δραστηριότητα στον καρκίνο. Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιήθηκαν μη τυποποιημένο μετρήσεις στο πλάσμα και τον ορό, χωρίς διόρθωση για τεχνητή απελευθέρωση VEGF από τα αιμοπετάλια ενεργοποιούνται

ex vivo

. Υποθέτουμε ότι «αλήθεια» που κυκλοφορεί (γ) τα επίπεδα του VEGF, στις περισσότερες ασθενείς με καρκίνο είναι χαμηλά και δεν σχετίζονται με το φορτίο του καρκίνου ή της αγγειογένεσης των όγκων.

Μεθοδολογία

προσδιορίζονται επίπεδα VEGF στο PECT, ένα μέσο που περιέχει αναστολείς της ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων, σε κιτρικό πλάσμα, και σε απομονωμένα αιμοπετάλια σε 16 υγιή άτομα, 18 ασθενείς με μεταστατικό καρκίνο του μη νεφρική (μη RCC) και 12 ασθενείς με νεφροκυτταρικό καρκίνωμα (RCC). Σε ασθενείς μη-RCC, τα κυκλοφορούντα επίπεδα VEGF στο πλάσμα ήταν χαμηλό και παρόμοιο με τα επίπεδα του VEGF σε ελέγχους εάν η ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων ελαχιστοποιήθηκε κατά τη διάρκεια της διαδικασίας συγκομιδής με μέσο επίπτωση. Σε κιτρικό πλάσμα, τα επίπεδα VEGF ήταν αυξημένα σε ασθενείς μη-RCC, αλλά αυτό θα μπορούσε να εξηγηθεί από ένα συνδυασμό αυξημένης ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων κατά τη συγκομιδή του αίματος, καθώς και από δύο φορές αύξηση στην περιεκτικότητα VEGF μεμονωμένων αιμοπεταλίων (έλεγχοι: 3,4 IU /10

6, μη-RCC: 6.2 IU /10

6 αιμοπετάλια, p = 0,001). Σε αντίθεση, τα επίπεδα cVEGF σε ασθενείς RCC ήταν αυξημένα (πλάσμα PECT: 64 pg /ml έναντι 21 pg /ml, RCC έναντι μη-RCC, ρ & lt? 0,0001), και δεν σχετίζεται με τη συγκέντρωση των αιμοπεταλίων VEGF

Συμπεράσματα

τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι οι «αλήθεια» ελεύθερα επίπεδα cVEGF δεν είναι αυξημένα, στην πλειονότητα των ασθενών με καρκίνο. Έχουν αναφερθεί στο παρελθόν αυξημένα επίπεδα VEGF στο πλάσμα σε καρκίνο φαίνεται να οφείλονται σε τεχνητή απελευθέρωση από ενεργοποιημένα αιμοπετάλια, τα οποία με τον καρκίνο έχουν αυξημένη περιεκτικότητα σε VEGF, στη διάρκεια της διαδικασίας συγκομιδής αίμα. Μόνο σε ασθενείς με RCC, η οποία χαρακτηρίζεται από υπερβολική παραγωγή VEGF οφείλεται σε μια συγκεκριμένη γενετική ανωμαλία, ήταν τα επίπεδα cVEGF αυξημένα. Η παρατήρηση αυτή μπορεί να σχετίζεται με περιορισμένη και επιλεκτική επιτυχία της αντι-VEGF παράγοντες, όπως η μπεβασιζουμάμπη και sorafenib, ως μονοθεραπεία σε RCC σε σύγκριση με άλλες μορφές καρκίνου

Παράθεση:. Niers TMH, Richel DJ, Meijers JCM, Schlingemann RO (2011) αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα στην κυκλοφορία σε ασθενείς με καρκίνο δεν μπορεί να είναι σχετικές βιοδεικτών. PLoS ONE 6 (5): e19873. doi: 10.1371 /journal.pone.0019873

Επιμέλεια: Terence Lee, Πανεπιστήμιο του Χονγκ Κονγκ, Χονγκ Κονγκ

Ελήφθη: 15 του Απρ, 2010? Αποδεκτές: 19η Απριλίου 2011? Δημοσιεύθηκε: 26 του Μάη του 2011

Copyright: © 2011 Niers et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Αγγειακά ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF) είναι ο κύριος. ρυθμιστής της αγγειογένεσης σε όγκους [1] – [3]. Κυκλοφορεί από τα καρκινικά κύτταρα, υποξικά κύτταρα και ενεργοποιημένα αιμοπετάλια και λευκοκύτταρα [4] – [8]. Τα κύτταρα-στόχοι του VEGF είναι κυρίως αγγειακών ενδοθηλιακών κυττάρων στα οποία έχει ισχυρές μιτογονικά αποτελέσματα μέσω υποδοχέων υψηλής συγγένειας Flt-1 και KDR /[9] Flk-1, [10]. Καθώς ο VEGF είναι μια διαλυτή διαχεόμενο πεπτίδιο που εκκρίνεται από τους όγκους, τα επίπεδα της στην κυκλοφορία προτάθηκαν να αντανακλούν την αγγειογενετική δραστικότητα των κακοηθειών. Ως εκ τούτου, κατά τα τελευταία χρόνια, τα κυκλοφορούντα επίπεδα του VEGF και άλλων αγγειογενετικών παραγόντων έχουν μελετηθεί ευρέως ως υποκατάστατοι δείκτες της αγγειογενετική δραστηριότητα και την πρόγνωση σε ασθενείς με καρκίνο, για ανταπόκριση στη θεραπεία παρακολούθηση και για την ανίχνευση της πρώιμης υποτροπής [11].

Για το σκοπό αυτό, χρησιμοποιήθηκαν τα επίπεδα VEGF προσδιορίστηκε σε ορό ή πλάσμα. Ωστόσο, ο ορός περιέχει υψηλά επίπεδα του VEGF οφείλεται στην απελευθέρωση από τα ενεργοποιημένα αιμοπετάλια κατά τη διάρκεια της πήξης [5] – [7]. Ως εκ τούτου, τα επίπεδα VEGF στον ορό, οι οποίες σχετίζονται στενά με την αιμοπεταλίων μετράνε [12], δεν αντικατοπτρίζουν την πραγματική κυκλοφορούσα συγκέντρωση του VEGF in vivo. Σε κιτρικό ή πλάσματος EDTA, όπου λιγότερο ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων και την επακόλουθη απελευθέρωση VEGF αναμένεται ό, τι σε ορό, τα επίπεδα VEGF βρέθηκαν να είναι ακόμη υψηλότερη σε ασθενείς με καρκίνο από ό, τι στους ελέγχους και αυτό ερμηνεύεται ως αντανάκλαση των υψηλότερων επιπέδων του VEGF στην κυκλοφορία και υψηλότερη αγγειογενετική δραστηριότητα [13] – [15]. Αλλά επίσης από τους συγγραφείς αυτούς τεχνητή απελευθέρωση του VEGF από τα αιμοπετάλια, ή αλλαγμένη συμπεριφορά των αιμοπεταλίων σε ασθενείς με καρκίνο, δεν αποκλείονται ως πηγή των αυξημένων επιπέδων VEGF στα δείγματα πλάσματος.

Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνήσει η πιθανότητα ότι η τεχνητή απελευθέρωση VEGF από τα αιμοπετάλια είναι η κύρια πηγή του VEGF σε δείγματα πλάσματος, και ότι τα κυκλοφορούντα επίπεδα του VEGF σε ασθενείς με καρκίνο είναι χαμηλά και ακόμη και που δεν σχετίζονται με το φορτίο του καρκίνου ή αγγειογενετική δραστηριότητα. Για το σκοπό αυτό, προσδιορίσαμε τα επίπεδα του VEGF στο πλάσμα με ή χωρίς αναστολή της ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων, και να ποσοτικοποιηθεί απελευθέρωση VEGF από τα αιμοπετάλια in vitro, σε άτομα ελέγχου χωρίς καρκίνο, οι ασθενείς με ασθενείς με μεταστατικό καρκίνωμα μη-νεφρικών κυττάρων και οι ασθενείς με μεταστατικό νεφροκυτταρικό καρκίνωμα.

Υλικά και Μέθοδοι

Οι ασθενείς και εθελοντές

Έχουμε λάβει φλεβικό αίμα από 16 υγιείς εθελοντές (Controls) και από 30 ασθενείς με καρκίνο, που χωρίζονται σε δύο ομάδες ασθενών: 18 ασθενείς με μεταστατικό μη-RCC (μη-RCC) και 12 ασθενείς με μεταστατικό RCC (RCC). RCC χαρακτηρίστηκε από υψηλή παραγωγή του VEGF από ενδο-ογκικές από μεταλλάξεις στο ογκοκατασταλτικό γονίδιο νοη Hippel-Lindau με επακόλουθη απεριόριστη δραστηριότητα της υποξίας επαγώγιμου παράγοντα 1α (HIF1α) προκαλώντας υψηλά VEGF μεταγραφής [16] – [20].

Ερευνήσαμε τα επίπεδα VEGF στο κιτρικό πλάσμα, PECT πλάσμα και αιμοπετάλια. Τα χαρακτηριστικά του εθελοντές και ασθενείς έχουν ως εξής: υγιείς μάρτυρες (έλεγχοι) διάμεση ηλικία, 53 [48-60]? ασθενείς με καρκίνο (Μη RCC-ομάδα)? διάμεση ηλικία, 62 [57-72]? με καρκίνο του παγκρέατος (7), cholangio (3), Papilli του Vater (2), του οισοφάγου (1), του παχέος εντέρου και του ορθού (2), μελάνωμα (1), ωοθήκη (1), του μαστού (1). RCC (RCC-ομάδα) διάμεση ηλικία, 60 [56-65]? με τους ακόλουθους προγνωστικούς ομάδες: 5 κακή κινδύνου, 5 ενδιάμεσου κινδύνου και 2 ευνοϊκές κίνδυνο, σύμφωνα με Motzer [21]. Όλοι οι ασθενείς με καρκίνο είχαν μεταστατική νόσο. Για να διακρίνουν μεταξύ στην ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων vivo και in vitro τεχνητή ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων κατά τη διάρκεια της συγκομιδής του πλάσματος, β-TG και PF4 μετρήθηκαν σε όλα τα δείγματα. Τα δείγματα αίματος που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη προήλθαν από ασθενείς RCC περιλαμβάνονται στη 43-9006 μελέτη BAYER (που εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ιατρικής Δεοντολογίας (metC 05-262), Ακαδημαϊκού Ιατρικού Κέντρου του Πανεπιστημίου του Άμστερνταμ), οι ασθενείς μη-RCC που δεν περιλαμβάνονται σε ειδική μελέτη, και τους εθελοντές. Από όλοι οι εθελοντές και οι ασθενείς ξεχωριστή γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε για τη συγκομιδή του δείγματος αίματος και την αγγειογένεση βιοδεικτών προσδιορισμούς.

προετοιμασίες Plasma

Για σύγκριση με το πρότυπο κιτρικό συλλογή πλάσματος, χρησιμοποιήσαμε μια μέθοδο για να (μέγιστο) αποφευχθεί ex νίνο ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων τεχνητά από τη συλλογή του αίματος χωρίς αιμοστατικό επίδεσμο, και τη συγκομιδή σε ένα μέσο που περιέχει ένα μίγμα από τα αντιπηκτικά στην οποία η προσταγλανδίνη Ε

1 και θεοφυλλίνη προστέθηκε (μέσο PECT). Επιπλέον, χρησιμοποιήσαμε ένα σημαντικό εργαλείο για τη διάκριση μεταξύ της ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων vivo και in vitro τεχνητή ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων, δηλ μετρήσεις β-θρομβοσφαιρίνη (β-TG) και του παράγοντα αιμοπεταλίων 4 επίπεδα (PF4). Συγκέντρωση στην PECT πλάσμα και ταυτόχρονη χρήση των δεικτών της ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων θα πρέπει να παρέχει μια ακριβή εκτίμηση των κυκλοφορούντων επιπέδων του VEGF in vivo.

Από κάθε ασθενή ή εθελοντικά φλεβικό αίμα λήφθηκε με microperfuser (διαμέτρου 1 χιλιοστού, Microflex , Vycon, Ecouen, Γαλλία) και διαιρείται σε διαφορετικά σωληνάρια. σωληνάρια συλλογής αίματος (πολυπροπυλένιο) Πλαστική πληρώθηκαν με 400 μι ενός διαλύματος που περιέχει: προσταγλανδίνης Ε

1 (94 ηΜ), Na

2CO

3 (0.63 mM), EDTA (90 mM) και theophylin ( 10 mM) (PECT-μέσο). Δείγματα αίματος (4 ml) συλλέχθηκαν σε αυτούς τους σωλήνες PECT σε ένα ανοικτό σύστημα, σταγόνα-σταγόνα, χωρίς τη χρήση αιμοστατικής ταινίας για (μέγιστο) την αποφυγή της ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων ex vivo. Αίμα συλλέγεται σε σωλήνες PECT τοποθετήθηκε αμέσως σε πάγο (σε αντίθεση με τα κιτρικά και EDTA δείγματα αίματος τα οποία διατηρήθηκαν σε θερμοκρασία δωματίου). Αιμοπετάλια πλάσμα απεμπλουτισμένο PECT παρασκευάστηκε με περιδίνηση για 60 λεπτά στους 1700 g στους 4 ° C εντός 1 ώρας μετά τη συλλογή.

Το αίμα επίσης συλλέχθηκαν σε σωλήνες που γεμίζουν με κιτρικό και σε σωλήνες γεμίζουν με EDTA χρησιμοποιώντας ένα τουρνικέ ( Becton Dickinson Vacutainers Systems, Breda, Ολλανδία). Το κιτρικό δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν μέσα σε 30 λεπτά για 15 λεπτά στα 1000 g για να ληφθεί πλάσμα. EDTA αίματος που με τον ίδιο τρόπο χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί συνολικός αριθμός των αιμοπεταλίων. Για τη μέτρηση της VEGF, PF4 και β-TG εντός των αιμοπεταλίων, χρησιμοποιήθηκε EDTA αίματος στην οποία τα αιμοπετάλια καταστράφηκαν από ένα συνδυασμό Triton (2% Triton Χ-100), επεξεργασία με υπερήχους κατά την διάρκεια 15 δευτερόλεπτα σε πάγο (microtip, Branson, πλάτος 50% ) και φυγοκέντρηση επί 5 λεπτά σε 14.000 rpm σε ένα μικρο-φυγόκεντρο. Αιμοπετάλια πλάσμα απεμπλουτισμένο PECT χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί VEGF, PF4 και τα επίπεδα β-TG. Κιτρικό πλάσμα που χρησιμοποιείται για τη μέτρηση των επιπέδων του VEGF και PF4.

Μετρήσεις των δεικτών ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων και VEGF

συγκεντρώσεις PF4 και β-TG εντός αιμοπετάλια είναι παρόμοια και κατά την ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων που τίθενται σε παρόμοιες ποσότητες [22], [23]. Επειδή PF4 κάθαρση από το πλάσμα είναι πολύ ταχύτερη από β-TG κάθαρση (t ½ για PF4 είναι αρκετά λεπτά και για β-TG & gt? 100 λεπτά) [22], [23] μια κανονική ή μόνο ελαφρώς αυξημένα PF4 επίπεδο και υψηλή β-TG επίπεδο προτείνουν στην ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων vivo, ενώ ένα υψηλό επίπεδο β-TG σε συνδυασμό με ένα υψηλό επίπεδο PF4 υποδηλώνει in vitro (ex-vivo) ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων. Ως εκ τούτου, Όλα τα δείγματα ελέγχθηκαν για VEGF, β-TG και PF4 χρήση εμπορικά διαθέσιμων σάντουιτς ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασίες (ELISA) από την Roche (Asserachrom β-TG και Asserachrom PF4? Roche, Mannheim, Germany) και R &? D Systems (Quantikine VEGF ? R & amp?. D Systems, Abingdon, UK)

Ανάκτηση του VEGF

Για να αποκλείσει το ενδεχόμενο ότι PECT ή κιτρικό μέσο επηρεάζει την μέτρηση των επιπέδων του VEGF με ELISA, γνωστές συγκεντρώσεις ανασυνδυασμένου ανθρώπινου VEGF (πρότυπο που παρέχεται στο κιτ δοκιμασίας) προστέθηκαν σε ορό, πλάσμα PECT και τα δείγματα κιτρικού πλάσματος για να παράγει συγκεντρώσεις VEGF 250, 62,5, 31,2, 7,8 και 3,9 pg /ml. Τα δείγματα αραιώθηκαν με ρυθμιστικό δοκιμασίας και η συγκέντρωση του VEGF προσδιορίστηκε με ELISA.

Στατιστική ανάλυση

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με το πρόγραμμα υπολογιστή SPSS έκδοση 12.0 (SPSS, Gorinchem, The Netherlands) και με λογισμικό GraphPad Prism (GraphPad Prism, San Diego, CA, USA). VEGF, PF4 και β-TG επίπεδα σε υγιείς εθελοντές και ασθενείς με καρκίνο συγκρίθηκαν χρησιμοποιώντας το U-test Mann-Whitney (μη ζευγαρωμένα, μη κανονικά κατανεμημένες ομάδες). Οι τιμές παρουσιάζονται ως διάμεση τιμή και διατεταρτημοριακό εύρος [T25-T75].

Αποτελέσματα

επίπεδα VEGF στο πλάσμα και αιμοπετάλια

Στις τρεις ομάδες ασθενών, τα επίπεδα VEGF στο κιτρικό πλάσμα ( Σχήμα 1Α) ήταν σημαντικά υψηλότερα από ό, τι σε PECT πλάσματος (Σχήμα 1Β). επίπεδα VEGF σε κιτρικό πλάσμα ήταν σημαντικά υψηλότερα στις δύο ομάδες των ασθενών με καρκίνο σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες, αλλά σε PECT πλάσμα αυτό ήταν μόνο η περίπτωση για ασθενείς με RCC. Το περιεχόμενο VEGF των απομονωμένων αιμοπεταλίων, μια γνωστή δεξαμενή για VEGF, ήταν δύο φορές υψηλότερη σε αμφότερες τις ομάδες ασθενή με καρκίνο σε σχέση με τους ελέγχους (Πίνακας 1 και Σχήμα 1 C).

Α) VEGF-μετρούμενα επίπεδα σε κιτρικό πλάσμα του καρκίνου ασθενείς σε σύγκριση με υγιή άτομα. Β) VEGF-μετρούμενα επίπεδα σε PECT πλάσμα των ασθενών με καρκίνο σε σύγκριση με υγιή άτομα. επίπεδα C) VEGF μετρήθηκε σε αιμοπετάλια ασθενών με καρκίνο έναντι υγιών ατόμων. Μπάρες αντιπροσωπεύουν τις διαμέσους.

Η

Σε ασθενείς RCC, τα επίπεδα VEGF στο PECT πλάσμα ήταν σημαντικά υψηλότερες από ό, τι σε μη RCC ασθενείς, ενώ η περιεκτικότητα σε VEGF αιμοπεταλίων δεν διέφερε μεταξύ των ομάδων αυτών. Τα επίπεδα του VEGF σε κιτρικό πλάσμα, PECT πλάσμα και τα αιμοπετάλια στην ομάδα ασθενών φαίνονται στον Πίνακα 1 και στο Σχήμα 1. Αυτές οι μετρήσεις δεν επηρεάζονται από τον τύπο του μέσου που χρησιμοποιείται, καθώς η ανάκτηση του VEGF ήταν 100-107% σε PECT πλάσμα, 73 % -107% σε κιτρικό πλάσμα και 78-100% σε ορό.

In vitro

ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων

Λόγω της χαμηλής μισή ζωή του στη ζωή, PF4-επίπεδα δείγματα αίματος είναι ένα μέτρο της εκ ενεργοποίησης των αιμοπεταλίων τεχνητή ζωή. Στη μελέτη μας, τόσο σε υγιείς μάρτυρες και ασθενείς με καρκίνο συγκεντρώσεις PF4 ήταν 50-100 φορές υψηλότερα σε πρότυπο κιτρικό πλάσμα (που συλλέγονται με τουρνικέ) από ό, τι σε PECT πλάσμα (συλλέγονται χωρίς τουρνικέ) (Πίνακας 2). Αυτό αποδεικνύει ότι ο βαθμός ενεργοποίησης τεχνητών ex-vivo αιμοπεταλίων εξαρτάται από την μέθοδο της συγκομιδής υψηλά, και ότι η τεχνητή ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων σε PECT του πλάσματος είναι χαμηλή και σε δείγματα πλάσματος κιτρικό είναι υψηλή.

Η

Όπως αιμοπεταλίων ενεργοποίηση σχετίζεται με την απελευθέρωση VEGF, PECT επίπεδα VEGF στο πλάσμα αντανακλά πιθανώς τα κυκλοφορούντα επίπεδα του VEGF, ενώ τα αυξημένα επίπεδα του VEGF σε κιτρικό πλάσμα ως επί το πλείστον προκαλούνται από την ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων ex vivo. Η δυνατότητα αυτή υποστηρίζεται σθεναρά από τη σημαντική συσχέτιση που παρατηρήσαμε μεταξύ των επιπέδων PF4 και VEGF σε μεμονωμένα δείγματα κιτρικό πλάσματος (Σχήμα 2).

VEGF και PF4 μετράται σε κιτρικό πλάσμα συσχετίζονται σημαντικά (r = 0.457, p = 0,008 ).

Η

σε PECT πλάσμα, βρήκαμε δύο φορές υψηλότερες τιμές PF4 σε ασθενείς με καρκίνο σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες. Αυτό δείχνει ότι τα αιμοπετάλια από ασθενείς με καρκίνο είναι πιο επιρρεπή σε ενεργοποιηθεί. Ωστόσο, μια αυξημένη συγκέντρωση PF4 σε επιμέρους αιμοπετάλια ασθενών με καρκίνο μπορεί να συνέβαλαν στην αυξημένη συγκέντρωση PF4 σε PECT πλάσμα (Εικόνα 3).

Α) β-TG και PF4 μετράται σε PECT πλάσμα των ασθενών με καρκίνο σε σύγκριση με τους ελέγχους. Β) β-TG και PF4 μετράται σε αιμοπετάλια των ασθενών με καρκίνο σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Μπάρες αντιπροσωπεύουν τις διαμέσους.

Η

Ένα υψηλό επίπεδο β-TG σε συνδυασμό με ένα χαμηλό επίπεδο PF4 σε PECT πλάσμα είναι μια ένδειξη του στην ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων vivo. Ήμασταν σε θέση να αποδείξει μια τέτοια in vivo ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων στους ασθενείς μας με τον καρκίνο, όπως β-TG στο πλάσμα PECT δεν δείχνουν αύξηση ανεξάρτητη από την αύξηση του PF4.

Συζήτηση

Η μελέτη μας καταδεικνύει ότι «αληθινή» κυκλοφορούντα επίπεδα του VEGF, όπως προσδιορίζεται από μετρήσεις σε PECT πλάσμα, είναι χαμηλά στην πλειονότητα των ασθενών με μεταστατικό καρκίνο και ότι δεν διαφέρουν σημαντικά από τα κυκλοφορούντα επίπεδα VEGF σε ελέγχους. Τα αυξημένα επίπεδα του VEGF στα δείγματα κιτρικού πλάσματος συσχετίζονται με PF4, δείκτης της ex νίνο ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων, υποδεικνύοντας ότι η απελευθέρωση του VEGF από τα αιμοπετάλια κατά τη διάρκεια της διαδικασίας συγκομιδής είναι υπεύθυνη για τα επίπεδα VEGF σε αυτά τα δείγματα. Επιπλέον, παρατηρήσαμε ότι η ατομική αιμοπεταλίων σε ασθενείς με καρκίνο έχουν μια δύο φορές υψηλότερη περιεκτικότητα του VEGF σε σύγκριση με υγιείς μάρτυρες. Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι τα επίπεδα του VEGF σε δείγματα αίματος εξαρτώνται από τη μέθοδο του περιεχομένου συλλογής και VEGF αιμοπεταλίων πολύ, και αμφισβητούν τη σκοπιμότητα της «κυκλοφορεί» VEGF ως βιοδείκτη. Τα αποτελέσματά μας δεν αποκλείουν ότι τεχνητά αυξημένα επίπεδα VEGF σε δείγματα κιτρικού πλάσματος, ως ένα συνδυασμένο μέτρο της activatibility των αιμοπεταλίων και του περιεχομένου VEGF αιμοπεταλίων, δεν θα μπορούσε να είναι μια ουσιαστική υποκατάστατος δείκτης ορισμένες πτυχές της βιολογίας των όγκων.

Μια έντονη αύξηση στα επίπεδα VEGF στο πλάσμα έχει παρατηρηθεί σε διάφορους τύπους των διαφόρων μεθόδων συλλογής και ο προσδιορισμός του καρκίνου χρησιμοποιώντας την [11]. Ένας αριθμός μελετών ανέφερε μια συσχέτιση μεταξύ του αριθμού αιμοπεταλίων και VEGF στον ορό [24], [25], και τα υψηλότερα επίπεδα VEGF στον ορό ανά αιμοπεταλίων σε ασθενείς με καρκίνο [26], [27]. Αυτό είναι σύμφωνο με τα ευρήματά μας και τη γνωστή λειτουργία των αιμοπεταλίων ως μια σημαντική δεξαμενή για τον VEGF. Προερχόμενος από Αιμοπετάλια VEGF μπορεί να έχει ένα σημαντικό παθολογικό ρόλο στον καρκίνο λόγω της επαγόμενης θρομβίνη ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων και την επακόλουθη τοπική απελευθέρωση VEGF, επάγουν αγγειακή διαπερατότητα, την ενεργοποίηση των ενδοθηλιακών κυττάρων και την αγγειογένεση, την προώθηση πήξεως και της διάδοσης του καρκίνου [4], [28] – [30 ].

στην παρούσα μελέτη, αξιολογήσαμε δύο διαφορετικές μεθόδους συλλογής πλάσματος για τη μέτρηση VEGF σε υγιείς ελέγχους και τους ασθενείς με καρκίνο. Ο αντίκτυπος της χρήσης ενός αιμοστατικής ταινίας και συλλογής μέσης (κιτρικό έναντι PECT) στα επίπεδα VEGF καταδείχθηκε σε υγιείς ελέγχους και τους ασθενείς με καρκίνο. Δεν παρατηρήθηκαν σημαντικές διαφορές ανιχνεύθηκαν στα επίπεδα PECT VEGF μεταξύ υγιών μαρτύρων και των ασθενών μη-RCC καρκίνου.

Σε ασθενείς RCC, τα επίπεδα PECT VEGF ήταν σημαντικά υψηλότερη σε σύγκριση με τους μάρτυρες, υποδηλώνοντας ότι σε αυτούς τους ασθενείς του VEGF πραγματικά αυξημένος κυκλοφορία. RCC χαρακτηρίζεται από υψηλή παραγωγή του VEGF από ενδο-ογκικές με ομόζυγη μεταλλάξεις στο νοη Hippel-Lindau ογκοκατασταλτικό γονίδιο με επακόλουθη απεριόριστη δραστηριότητα της 1α υποξία διεγέρσιμο παράγοντα (HIF1α) προκαλώντας υψηλά VEGF μεταγραφής [20] – [26]. Σε πολλούς από αυτούς τους ασθενείς, τα άλλα κύτταρα στο σώμα είναι ετερόζυγο για τη μετάλλαξη VHL. Αυτές οι γενετικές πτυχές μπορεί να εξηγήσει γιατί οι ασθενείς RCC έχουν διαφορετικά επίπεδα κυκλοφορούντων VEGF από τους ασθενείς μη-RCC μελετηθεί.

Τα ευρήματά μας συνάδουν με την επιλεκτική επιτυχία του αντι-VEGF προσεγγίσεις στη θεραπεία της RCC σύγκριση με άλλους τύπους του καρκίνου [31]. Πράγματι, bevacizumab (Avastin? Genentech, South San Francisco, CA) ένα αντίσωμα που δεσμεύεται με όλες τις ισομορφές του ανθρώπινου cVEGF [32] παρήγαγε μια σημαντική παράταση του χρόνου για την εξέλιξη της νόσου σε σύγκριση με το εικονικό φάρμακο σε ασθενείς με RCC [33]. Αυτό σε αντίθεση με τους περισσότερους άλλους τύπους όγκων, όπου bevacizumab είτε δεν είναι αποτελεσματικά ή μόνο είχε σημαντικά αντικαρκινική αποτελεσματικότητα όταν χρησιμοποιούνται σε συνδυασμό με χημειοθεραπεία και όχι ως μονοθεραπεία (που ενεργεί περισσότερο σαν χημειοθεραπεία ενισχυτή) [34]. Η απλή εξήγηση για την κλινικά σχετική δραστικότητα της bevacizumab ως μονοθεραπεία σε RCC μπορεί να είναι οι συγκεκριμένοι ρόλοι των ελαττωματικών σηματοδότησης υποξικής και υπερέκφραση του VEGF στην παθογένεση αυτών των όγκων.

παρατηρήσαμε ότι in vitro ενεργοποίηση αιμοπεταλίων κατά τη διάρκεια της συλλογής διαδικασία συμβάλλει σε υψηλότερα επίπεδα κιτρικού VEGF στο πλάσμα. Αυτό αποδεικνύεται από την υψηλή απελευθέρωση του PF4 από τα αιμοπετάλια σε σύγκριση με κιτρικό PECT πλάσματος, και τη σημαντική θετική συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων PF4 και VEGF σε μεμονωμένα δείγματα κιτρικού πλάσματος. Οι δύο φορές υψηλότερα επίπεδα του PF4 σε PECT πλάσμα σε ασθενείς με καρκίνο σε σύγκριση με μάρτυρες δείχνουν ότι επίσης με τη βέλτιστη μέθοδο συλλογής κάποια ενεργοποίηση αιμοπεταλίων εξακολουθεί να εμφανίζεται, αλλά το πιο σημαντικό αυτό δείχνει ότι τα αιμοπετάλια σε ασθενείς με καρκίνο γίνονται πιο εύκολα ενεργοποιείται από αιμοπετάλια από υγιείς ελέγχους .

σύμφωνα με άλλες μελέτες που έδειξαν ότι αιμοπεταλίων περιεχόμενο VEGF είναι υψηλότερη σε ασθενείς με καρκίνο [26], [27], [35]. Υπό το φως των ευρημάτων μας στην PECT πλάσμα, αυτό υποδηλώνει ότι ex vivo απελευθέρωση του VEGF από τα αιμοπετάλια μεταβάλλεται σε ασθενείς με καρκίνο, τόσο λόγω της αύξησης των αιμοπεταλίων περιεχόμενο VEGF, καθώς και σε μια υψηλότερη activatibility αιμοπεταλίων σε ασθενείς με καρκίνο. Υψηλότερη περιεκτικότητα VEGF αιμοπεταλίων μπορεί να προέρχονται από την αύξηση της φόρτωσης στο μυελό των οστών ή να προκύψει από μια συνάρτηση VEGF παγίδευσης των αιμοπεταλίων [6], [35], [36]. Μια τέτοια λειτουργία σάρωσης θα χρησιμεύσει για να απομακρυνθεί η περίσσεια του VEGF, που παράγεται τοπικά σε ιστούς όγκων, από την κυκλοφορία. Είναι αξιοσημείωτο το γεγονός ότι και στις δύο ομάδες ασθενών μας η αύξηση της περιεκτικότητας του VEGF αιμοπεταλίων ήταν περίπου δύο φορές σε σύγκριση με τους μάρτυρες, παρά τα πολύ υψηλότερα επίπεδα VEGF στο PECT πλάσμα από ασθενείς RCC. Ως εκ τούτου, εάν τα αιμοπετάλια έχουν πραγματικά μια λειτουργία σάρωσης για τον VEGF, σε RCC αυτή η λειτουργία σάρωσης φαίνεται να αποτυγχάνουν λόγω της υπερβολικά υψηλής παραγωγής VEGF, οδηγώντας σε κυκλοφορούν VEGF. Επιπλέον, σε αντίθεση με κυκλοφορούν ελεύθερα VEGF, VEGF περιεχόμενο εντός των αιμοπεταλίων μπορεί να είναι μια ουσιαστική ενδιαφέρουσες δυνατότητες βιοδείκτη για VEGF ή /και της δραστηριότητας της αγγειογένεσης σε ασθενείς με καρκίνο, η οποία χρειάζεται περαιτέρω μελέτες.

Εν κατακλείδι, τα επίπεδα ελεύθερης VEGF είναι χαμηλή ή απούσα στην κυκλοφορία στους περισσότερους ασθενείς με καρκίνο, με την εξαίρεση του RCC, ενός τύπου καρκίνου με την υπερβολική παραγωγή VEGF οφείλεται σε ειδικό γενετικό ελάττωμα. επίπεδα Citrate VEGF δεν αντικατοπτρίζουν την πραγματική κυκλοφορούντα επίπεδα VEGF αλλά είναι το αποτέλεσμα των ex νίνο ενεργοποίηση των αιμοπεταλίων και την επακόλουθη απελευθέρωση του VEGF από τα αιμοπετάλια τα οποία έχουν αυξημένη περιεκτικότητα σε VEGF σε ασθενείς με καρκίνο. Τα αυξημένα επίπεδα κιτρικού VEGF σε ασθενείς με καρκίνο, που έχουν ευρέως χρησιμοποιηθεί ως βιολογικός δείκτης της αγγειογένεσης των όγκων, που προκαλούνται από αντικείμενα και να μεταβληθεί η συμπεριφορά των αιμοπεταλίων που σχετίζεται με τη συστηματική νόσο.

Ευχαριστίες

Είμαστε υπόχρεοι στην κ ΜΑ Weijne και η κ WF Kopatz για τη βοήθεια και τη συνεργασία? Ο καθηγητής Dr. H.R. Buller για την κριτική ανάγνωση αυτού του χειρογράφου πριν από την υποβολή της, και για τους ασθενείς και τους εθελοντές που περιλαμβάνονται στη μελέτη για την εμπιστοσύνη και την υποστήριξή τους.