Οι

Abstract

Ιστορικό

διηθούν όγκο CD8 + Τ κύτταρα συσχετίζεται με την παρατεταμένη χωρίς εξέλιξη και η συνολική επιβίωση σε επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC). Ένα σημαντικό ποσοστό των ασθενών ΕΓΚ mount αυτοαντίσωμα αποκρίσεις σε διάφορα αντιγόνα του όγκου, ωστόσο η σχέση μεταξύ αυτοαντισωμάτων και ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ δεν έχει διερευνηθεί σε EOC ή οποιοδήποτε άλλο ανθρώπινο καρκίνο. Υποθέσαμε ότι αυτοαντισωμάτων και Τ κυτταρικές αποκρίσεις μπορεί να συσχετιστεί με EOC και κατευθύνεται προς τα ίδια αντιγόνα.

Μεθοδολογία και ΚΥΡΙΟΤΕΡΑ ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ

Έχουμε λάβει συμφωνημένα ορού και ιστών όγκων από 35 ασθενείς με υψηλής ποιότητας ορώδης καρκίνος των ωοθηκών. Δείγματα ορού εκτιμήθηκε με ELISA για αυτοαντισώματα προς το κοινό αντιγόνο του όγκου NY-ESO-1. Ιστός όγκου εξετάστηκε με ανοσοϊστοχημεία για έκφραση του ΝΥ-ΕδΟ-1, διάφορους δείκτες Τ κυττάρων (CD3, CD4, CD8, CD25, FoxP3, ΤΙΑ-1 και Granzyme Β) και άλλων ανοσολογικών δεικτών (CD20, MHC κατηγορίας Ι και MHC κατηγορίας II). Λεμφοκυτταρική διηθήσεις ποικίλλει ευρέως μεταξύ των όγκων και περιλαμβάνονται κύτταρα θετικά για CD3, CD8, TIA-1, CD25, FoxP3 και CD4. Είκοσι έξι τοις εκατό (9/35) των ασθενών κατέδειξε αυτοαντισωμάτων IgG ορού προς NY-ESO-1, τα οποία συσχετίζεται θετικά με την έκφραση του αντιγόνου ΝΥ-ΕδΟ-1 από κύτταρα όγκου (r = 0.57, p = 0,0004). Αυτοαντισώματα προς NY-ESO-1 σχετίζεται με αυξημένη FoxP3 καρκινικά κύτταρα που διηθούν CD8 +, CD4 + και +. Σε ένα άτομο HLA-A2 + ασθενή με αυτοαντισώματα έναντι NY-ESO-1, CD8 + Τ κύτταρα που απομονώθηκαν από συμπαγή όγκο και ασκίτη ήταν αντιδραστικά προς NY-ESO-1 με ΙΡΝ-γ ELISPOT και MHC τάξης Ι πενταμερές χρώση.

Συμπέρασμα και Σημασία

Έχουμε αποδείξει ότι αυτοαντισώματα όγκου-ειδικά και ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ συσχετίζεται στον καρκίνο του ανθρώπου και μπορεί να στρέφεται κατά το ίδιο αντιγόνο-στόχο. Αυτό σημαίνει ότι τα αυτοαντισώματα μπορεί να συνεργάζεται με ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ να επηρεάσουν κλινικές εκβάσεις σε ΕΓΚ. Επιπλέον, ορολογικές μέθοδοι διαλογής μπορεί να αποδειχθεί χρήσιμη για τον εντοπισμό κλινικά σχετική κυττάρων Τ αντιγόνα για την ανοσοθεραπεία

Παράθεση:. Milne K, Barnes RO, Girardin Α, MAWER MA, Nesslinger NJ, Ng A, et al. (2008) που διηθούν όγκο Τ κύτταρα συσχετίζεται με ΝΥ-ΕδΟ-1-ειδικών αυτοαντισωμάτων στον καρκίνο των ωοθηκών. PLoS ONE 3 (10): e3409. doi: 10.1371 /journal.pone.0003409

Επιμέλεια: Aric Gregson, Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια στο Λος Άντζελες, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 6, Ιουνίου, 2008? Αποδεκτές: 17 του Σεπτεμβρίου 2008? Δημοσιεύθηκε: 15 του Οκτώβρη του 2008

Copyright: © 2008 Milne et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Βρετανική Κολούμπια Ίδρυμα του καρκίνου, των Καναρίων Ίδρυμα, Υπουργείο άμυνας των ΗΠΑ (OC000018). Κανένας από τους χορηγούς είχε οποιοδήποτε ρόλο στο σχεδιασμό και τη διεξαγωγή της μελέτης, στη συλλογή, ανάλυση και ερμηνεία των δεδομένων, ή για την προετοιμασία, την αναθεώρηση ή την έγκριση του χειρογράφου

Ανταγωνιστικά συμφέροντα.: οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

επιθηλιακό καρκίνο των ωοθηκών (EOC) είναι ένα προκλητικό ασθένεια που επηρεάζει περισσότερους από 190.000 γυναίκες σε όλο τον κόσμο κάθε χρόνο (Διεθνής Οργανισμός Ερευνών για τον καρκίνο) . Το υψηλό ποσοστό θνησιμότητας οφείλεται στο γεγονός ότι οι περισσότεροι ασθενείς έχουν διαγνωστεί με την ασθένεια, συχνά με εκτεταμένες ασκίτη. Τυπική θεραπεία περιλαμβάνει χειρουργική επέμβαση κυτταρομειωτικής ακολουθείται από taxane- και με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία [1]. Πάνω από το 80% των ασθενών είναι ιδιαίτερα ανταποκρίνεται στην πρώτη γραμμή θεραπείας, αλλά υποτροπής 60-70% εμπειρία της νόσου μέσα σε 2-5 χρόνια και τελικά υποκύψει στην ασθένεια τους [2], [3].

Παρά τα ατυχή στατιστικά στοιχεία, 20-30% των ασθενών επιβιώνουν ΕΓΚ πέντε ή περισσότερα έτη μετά τη διάγνωση. Ευνοϊκές προγνωστικοί παράγοντες περιλαμβάνουν πρώιμο στάδιο, μη-ορώδες ιστολογία, χαμηλής ποιότητας, καλή κατάσταση απόδοσης, καθώς και τη βέλτιστη χειρουργική debulking [4], [5]. Επιπλέον, αρκετές πρόσφατες μελέτες έχουν δείξει ένα συσχετισμό μεταξύ διηθούν όγκο CD3 + CD8 + Τ κύτταρα και ευνοϊκά αποτελέσματα [6], [7]. Zhang

et. al.

πρώτα ανέφεραν ότι ασθενείς με CD3 + Τ κυττάρων διηθήματα στο επιθήλιο του όγκου είχε αυξηθεί χωρίς εξέλιξη και η συνολική επιβίωση [8]. Αυτό έχει επιβεβαιωθεί από δύο άλλες μελέτες [9], [10], και δύο ομάδες έχουν επεκτείνει αυτό το εύρημα με το υποσύνολο κυττάρων Τ CD8 + ειδικότερα [11], [12]. Επιπλέον, η παρουσία των CD3 + CD56 + Τ κυττάρων σε ασκίτες έχει συνδεθεί με την ευαισθησία λευκοχρύσου [13]. Αυτά τα ευρήματα είναι σε συμφωνία με προηγούμενες μελέτες που δείχνουν μια θετική συσχέτιση μεταξύ της επιβίωσης και της έκφρασης της ιντερφερόνης-γ (IFN-γ) [14], [15], ο υποδοχέας της ΙΡΝ-γ [16], η IL-18 [17], και MHC τάξης Ι [18], [19], τα οποία είναι χαρακτηριστικά των αποκρίσεων CD8 + Τ κυττάρων. Αντίθετα, η παρουσία του διηθούν όγκο CD25 + FoxP3 + Τ κύτταρα σε ΕΓΚ συσχετίζεται με κατώτερη επιβίωση [11], [20] – [22]. Έτσι, φαίνεται ότι η ισορροπία των CD8 + Τ κύτταρα τελεστές προς CD25 + FoxP3 + ρυθμιστικά Τ κύτταρα είναι ένας σημαντικός καθοριστικός παράγοντας της κλινικά αποτελέσματα σε EOC.

Εκτός από ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ, πολλοί EOC ασθενείς mount αυτοαντισωμάτων ορού αποκρίσεις σε ποικιλία αντιγόνων όγκου, συμπεριλαμβανομένων των NY-ESO-1, HOXA7, Ερ-ΟΑΜ, HSP-90, MUC-1 και p53 [23] – [25]. Στο διαβήτη Τύπου Ι και άλλες αυτοάνοσες καταστάσεις, η ανάπτυξη των αποκρίσεων αυτοαντισωμάτων προμηνύει διείσδυση ιστού και την καταστροφή από αυτοδραστικών Τ κυττάρων [26]. Ως εκ τούτου υποθέσαμε ότι οι ασθενείς ΕΓΚ μπορεί να δείξει μια παρόμοια σχέση μεταξύ του όγκου ειδικές αποκρίσεις αυτοαντισώματος και λεμφοκύτταρα που διηθούν όγκο. Αυτή η υπόθεση εξετάστηκε σε μία ομάδα από 35 προχωρημένο στάδιο, υψηλής ποιότητας ορώδες περιπτώσεις EOC για τα οποία ταιριάζουν δείγματα ορού και των όγκων ήταν διαθέσιμα. Χρησιμοποιώντας NY-ESO-1 σαν μια δοκιμή αντιγόνου, αποδεικνύουμε για πρώτη φορά ένας συσχετισμός μεταξύ αυτοαντισωμάτων όγκου-ειδικά και ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ. Τα ευρήματά μας εγείρουν την πιθανότητα ότι τα αυτοαντισώματα μπορεί να διαδραματίσει έναν ρόλο στην προηγουμένως αναγνωριστεί σχέση μεταξύ ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ και τα κλινικά αποτελέσματα σε ΕΓΚ.

Αποτελέσματα

ομάδα μελέτης

διερευνήθηκε η σχέση μεταξύ αυτοαντισωμάτων όγκου-ειδικά και ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα χρησιμοποιώντας συμφωνημένα δειγμάτων όγκου και ορό από μια αναδρομική κοόρτη 35 ασθενών με υψηλού βαθμού ορώδης EOC (Πίνακας 1). Έχουμε εκλεγεί για να επικεντρωθεί σε ένα μόνο ιστολογική υπότυπο, όπως άλλες υποκατηγορίες του ΕΓΚ εμφανίζουν διακριτές βιολογικές και κλινικές ιδιότητες που θα μπορούσαν να συγχέονται με την ανάλυση [27]. Όλα τα δείγματα αίματος συλλέχθηκαν πριν από την χειρουργική επέμβαση ή χημειοθεραπεία, και όλα τα δείγματα όγκου λήφθηκαν κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης πρωτογενούς κυπαρομειωτικής πριν από τη χημειοθεραπεία. δείγματα αίματος ελέγχου ελήφθησαν από 60 ίδιας ηλικίας γυναίκες χωρίς γνωστή προσωπικό ιστορικό καρκίνου.

Η

Ανάλυση των λεμφοκυττάρων που διηθούν όγκο

ογκο-διηθητικά λεμφοκύτταρα εκτιμήθηκε με ανοσοϊστοχημεία (IHC ) χρησιμοποιώντας αντισώματα σε μία ποικιλία ανοσολογικών δεικτών (Εικόνα 1, Πίνακας 2). Όλα τα ανεπεξέργαστα δεδομένα IHC μπορεί να βρεθεί σε συμπληρωματικούς πίνακες S1 και S2. Μόνο το 23% (8/35) των αξιολογήσιμων όγκων έδειξε σημαντική CD20 + διηθήσεις Β κυττάρων. Σε αντίθεση, το 94% (33/35) των όγκων είχαν ανιχνεύσιμο διηθήσεις CD3 + Τ κυττάρων. Η χρώση με αντισώματα κατά CD4 και CD8 αποκάλυψε ότι το 59% (20/34) και 69% (24/35) των αξιολογήσιμων όγκοι είχαν σημαντική CD4 + και CD8 + κυτταρικό διηθήσεις, αντίστοιχα. κύτταρα CD4 + και CD8 + συσχετίστηκαν ισχυρά (r = 0,69, ρ Υπάρχουν πολλά στοιχεία για την υποστήριξη της πρώην δυνατότητα. Πρώτον, δεν είναι όλα τα υποσύνολα κυττάρων Τ που συνδυάζονται με την πρόγνωση? μάλλον, τα θετικά αποτελέσματα που συνδέονται με την υποσύνολο CD8 + και των φτωχών αποτελεσμάτων στο υποσύνολο CD25 + FoxP3 + [11], [12], [20], [21]. Δεύτερον, διάφοροι παράγοντες που συνδέονται με την ενεργό CD8 + κυτταρολυτικών αποκρίσεων συνδέονται επίσης με ευνοϊκά αποτελέσματα, συμπεριλαμβανομένων έκφραση της ΙΡΝ-γ [14], [15], ο υποδοχέας της ΙΡΝ-γ [16] και IL-18 [17]. MHC κατηγορίας Ι έχει επίσης συνδεθεί με την αυξημένη επιβίωση στον καρκίνο των ωοθηκών [18], [19]. Στην παρούσα μελέτη, η οποία εστιάζεται αποκλειστικά στην ορώδης υπότυπο, όλοι αξιολογήσιμα καρκινώματα εκφράζονται έχουν MHC κατηγορίας Ι Παρόμοια αποτελέσματα έχουν αναφερθεί από άλλους για ορώδες EOC [59], υποδηλώνοντας τη συντριπτική πλειοψηφία των ορώδες όγκοι είναι MHC κατηγορίας Ι θετικά και έχουν την ικανότητα να παρουσιάζουν αντιγόνο σε ογκο-διηθητικά CD8 + Τ κύτταρα. Τρίτον, ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ εμφανίζουν σημαντική κυτταροτοξικότητα κατά των όγκων των ωοθηκών

in vitro

[43], [45], [47], [60], [61]. Ωστόσο, αξίζει να σημειωθεί ότι μόνο μια μειοψηφία των όγκων σε αυτό και μια άλλη μελέτη [59] είχε σημαντικά Granzyme Β-θετικά το ανοσοποιητικό διηθήσεις, γεγονός που υποδηλώνει ότι κυτταροτοξική λειτουργία μπορεί να κατασταλεί

in vivo

. Και τέλος, όπως συζητήθηκε παραπάνω, ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ παρουσιάζουν ενδείξεις κλωνικής διαστολής [40] – [44] και την αναγνώριση των ειδικών αντιγόνων [44], [51] – [56], όπως φαίνεται εδώ για ΝΥ-ΕδΟ-1 (Σχήμα 4). Έτσι, συσσωρεύονται αποδείξεις υπέρ της ιδέας που διηθούν όγκο Τ κύτταρα διαδραματίζουν ενεργό ρόλο στην προώθηση ευνοϊκών κλινικά αποτελέσματα σε ΕΓΚ. Ομοίως, σε καρκίνο του παχέος εντέρου, οι λειτουργικοί δείκτες που συνδέονται με την ενεργό όμοια με Th1 κυτταρολυτικών Τ κυτταρικές αποκρίσεις που συνδέονται με την ευνοϊκή κλινικές εκβάσεις [62]. Αυτό υποδηλώνει ότι το ανοσοποιητικό στρατηγικές ρυθμιστικών που ενισχύουν αυτά τα φυσικά Τ κυτταρικές αποκρίσεις μπορεί να βελτιώσει περαιτέρω κλινικά αποτελέσματα.

Σε αντίθεση με διηθήσεις Τ κυττάρων, η σχέση μεταξύ αυτοαντισωμάτων όγκου-ειδικά και τα κλινικά αποτελέσματα είναι λιγότερο σαφής. Αυτό το θέμα έχει μελετηθεί πιο εκτεταμένα για την p53 αντιγόνο όγκου, που προκαλεί αυτοαντισωμάτων απαντήσεις στο 20-25% των ασθενών ΕΓΚ. Goodell et. al. ανέφεραν μια θετική συσχέτιση μεταξύ αυτοαντισωμάτων σε ρ53 και αυξημένη συνολική επιβίωση σε EOC [63]. Ωστόσο, άλλες μελέτες έχουν βρει μια αρνητική συσχέτιση [64], [65] ή καμία συσχέτιση [66], [67]. Όσο για NY-ESO-1, βρήκαμε μια τάση προς φτωχή έκβαση σε ασθενείς με αυτοαντισώματα έναντι NY-ESO-1 στο 35-υπόθεση κοόρτη που μελετήθηκαν εδώ (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), αλλά αυτή η τάση δεν παρατηρήθηκε σε μια ανεξάρτητη κοόρτη 35 ασθενείς από μια προηγούμενη μελέτη [24] (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Όπως συζητήθηκε παραπάνω, η ανοσοαπόκριση σε EOC περιλαμβάνει πολλαπλά αντιγόνα, ως εκ τούτου, θεωρούμε ότι η προγνωστική σημασία των αυτοαντισωμάτων απευθύνεται καλύτερα χρησιμοποιώντας ένα εκτεταμένο πάνελ αντιγόνων όγκου και μεγαλύτερες ομάδες ασθενών.

Η απόκριση αυτοαντισώματος σε NY-ESO -1 συσχετίζεται με κυτταρική διήθηση Τ του στρώματος του όγκου, σε αντίθεση με επιθήλιο του όγκου. Αυτό μπορεί να αντανακλά μια στατιστική ζήτημα, καθώς ο απόλυτος αριθμός των κυττάρων Τ ήταν υψηλότερη σε στρώμα όγκου σε σύγκριση με επιθήλιο, επιτρέποντας στα στρωματικά τιμές για την επίτευξη στατιστικής σημαντικότητας. Πράγματι, η ανάλυση Spearman rank συσχέτισης έδειξαν θετική σχέση μεταξύ αυτοαντισώματα προς NY-ESO-1 και διείσδυση του επιθηλίου όγκου από CD3 + και CD8 + κύτταρα, αλλά αυτό δεν έφθασε στατιστική σημασία (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Εναλλακτικά, μπορεί να υπάρχει μια βιολογική εξήγηση. Στο παράδειγμα Th1 /Th2, οι ανοσολογικές αποκρίσεις πιστεύεται να πολώσει προς χυμική ή κυτταρολυτική μηχανισμούς τελεστή [68]. Εφαρμόζεται στα αποτελέσματα μας, αυτό θα σήμαινε ότι οι ασθενείς με ισχυρές αποκρίσεις αυτοαντισώματος θα έχουν αδύναμη κυτταρολυτικών αποκρίσεων, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε ατελή (δηλαδή, στρωματικά) διήθηση του ιστού του όγκου από τα Τ κύτταρα. Μια δεύτερη πιθανότητα προτείνεται από μοντέλα ποντικών όπου αυτοαντίσωμα αντιδράσεις έχουν συνδεθεί με ασθενείς αποκρίσεις κυττάρων CD8 + κυτταρολυτικών Τ [69]. Στην περίπτωση αυτή, προτάθηκε ότι αυτοαντισώματα διευκολύνουν την πρόσληψη και την παρουσίαση των αντιγόνων όγκου από τα κύτταρα Β εις βάρος των δενδριτικών κυττάρων. Δεδομένου ότι τα κύτταρα Β είναι λιγότερο ισχυρά κύτταρα παρουσίασης αντιγόνου από τα δενδριτικά κύτταρα, το καθαρό αποτέλεσμα είναι μια κατώτερη Τ κυτταρική απόκριση εναντίον του όγκου [69]. Μια τελική σκέψη είναι ότι, στην παρούσα μελέτη, αυτοαντίσωμα αποκρίσεις σε NY-ESO-1 συσχετίστηκαν με διήθηση του όγκου από όχι μόνο CD8 + Τ κυττάρων, αλλά επίσης και από CD4 + και FoxP3 + Τ κύτταρα. Τα τελευταία κύτταρα μπορεί να αντιπροσωπεύουν ρυθμιστικά Τ κύτταρα, τα οποία θα μπορούσαν να εμποδίσουν κυτταρολυτικά κύτταρα Τ αποκρίσεων και να περιορίσει την έκταση της διήθησης του όγκου [32]. Αυτή τη στιγμή συλλογής ταιριάζουν δείγματα αίματος και όγκου από ένα μεγαλύτερο, προοπτική σειρά ασθενών του ΕΓΚ να κατανοήσουν καλύτερα τη σχέση μεταξύ του όγκου-ειδικών αυτοαντισωμάτων, ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ και τα κλινικά αποτελέσματα.

Αν και δεν είναι ο πρωταρχικός στόχος της αυτό το χαρτί, είχαμε την ευκαιρία να εκτιμήσει την επίδραση της εισαγωγική χημειοθεραπεία για ογκο-διηθητικά κύτταρα Τ σε 15 ασθενείς. Σε γενικές γραμμές, κατεργάζεται όγκων έδειξαν αυξημένη διείσδυση από όλες τις υποκατηγορίες των Τ κυττάρων, και αυτό επιτεύχθηκε στατιστική σημαντικότητα για CD3 + και CD8 + κύτταρα. Αυτό θυμίζει μελέτες στον καρκίνο του μαστού, που έδειξαν αυξημένη διείσδυση Τ κυττάρων μετά από χημειοθεραπεία με ταξάνες [70] και άλλους παράγοντες [71], καθώς και μια σύνδεση με ευνοϊκή κλινική ανταπόκριση. Ταξάνια μπορεί επίσης να προωθήσει ανοσία όγκου με την ενίσχυση της δραστικότητας Τ και ΝΚ κυττάρων [72] – [75] και την παρουσίαση του αντιγόνου [76]. Παρομοίως, παράγοντες πλατίνας μπορεί να ενισχύσει την σύνθεση κυτοκίνης από ανθρώπινα κύτταρα Τ [77], καταργεί δραστηριότητα καταστολέα Τ κυττάρου [78] και ευαισθητοποιούν κύτταρα EOC να Fas απόπτωση που διαμεσολαβείται [79]. Έτσι, η πλατίνα /ταξάνη χημειοθεραπεία με βάση μπορεί να έχει θετικές επιπτώσεις για την ασυλία υποδοχής να EOC, μια υπόθεση που διερευνά επί του παρόντος σε μια προοπτική ομάδα ασθενών.

Αρκετές ομάδες έχουν προσπαθήσει θετή ανοσοθεραπεία του καρκίνου των ωοθηκών χρησιμοποιώντας κύτταρα Τ επεκταθεί από διηθούν όγκο Τ κύτταρα [50], [80] – [89]. Παρά το γεγονός ότι έχουν πολλά υποσχόμενη ανέκδοτες αντιδράσεις έχουν αναφερθεί, οι προσπάθειες αυτές έχουν γενικά περιορισμένη επιτυχία. Είναι αξιοσημείωτο ότι τα στερεά ιστού του όγκου από IROC013 ασθενής ήταν σε μεγάλο βαθμό αρνητικό για την έκφραση του ΝΥ-ΕδΟ-1, παρά το ότι έχει NY-ESO-1-ειδικών Τ κυττάρων σε καρκινικά και ασκίτη. Εάν αυτό το σενάριο είναι αντιπροσωπευτικό των άλλων EOC ασθενείς, θα σήμαινε ότι πολλοί διηθούν όγκο Τ κύτταρα μπορούν να αναγνωρίζουν τα αντιγόνα που είναι κακώς εκφράζονται από καρκινικό ιστό, πιθανώς λόγω του ανοσοποιητικού επιλογή κατά τη διάρκεια της ανάπτυξης του όγκου. Αν θέλουμε να συνειδητοποιήσουμε την υπόσχεση της ανοσοθεραπείας για ΕΓΚ, υπάρχει επείγουσα ανάγκη να εντοπιστούν αντιγόνων-στόχων που είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη και την επιβίωση των επαναλαμβανόμενων, χημειοθεραπεία ανθεκτικά όγκους. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι οι απαντήσεις των αυτοαντισωμάτων κρατήσει πρακτική αξία για την αναγνώριση του αντιγόνου και χρήζουν περαιτέρω μελέτης σε σχέση με το ρόλο τους στην ανοσία όγκου υποδοχής και κλινικά αποτελέσματα.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα άτομα της μελέτης

Όλα τα δείγματα και τα κλινικά δεδομένα που ελήφθησαν με ενημερωμένη συγκατάθεση σύμφωνα με τα πρωτόκολλα έχουν εγκριθεί από το Διοικητικό συμβούλιο Έρευνας Ηθικής του BC Cancer Agency και στο Πανεπιστήμιο της βρετανικής Κολομβίας. Η αναδρομική περίπτωση ομάδα αποτελούνταν από 35 γυναίκες με υψηλού βαθμού ορώδες καρκίνο των ωοθηκών από τον οποίο ιστοσυμβατό ορού και του όγκου ήταν διαθέσιμο (OvCaRe ωοθηκών όγκου Τράπεζας, Vancouver, BC, Καναδάς). Ιστός όγκου ελήφθη κατά το χρόνο της χειρουργικής επέμβασης πρωτογενούς πριν από οποιαδήποτε άλλη θεραπεία. Ο Πίνακας 1 δείχνει τις γενικές κλινικά χαρακτηριστικά της 35-υπόθεση κοόρτη. Η αναδρομική ομάδα περιλαμβάνονται επίσης ιστού από επιπλέον 15 γυναίκες που έλαβαν εισαγωγική χημειοθεραπεία πριν από την πρωτογενή χειρουργική επέμβαση? αυτές οι περιπτώσεις που εξετάζονται χωριστά στα αποτελέσματα. δείγματα αίματος, ασκίτης και όγκου και συλλέγονται από μια προοπτική κοόρτη 15 ασθενών μέσω του όγκου των ιστών Αποθετήριο του BC Οργανισμού Καρκίνου. Τα δείγματα ελέγχου ορού ελήφθησαν από 60 γυναίκες χωρίς γνωστή προσωπικό ιστορικό καρκίνου των ωοθηκών ή άλλων καρκίνων. Όλα τα θέματα αυτοέλεγχο ανέφεραν ότι έλαβαν αρνητική μαστογραφίας αποτέλεσμα μέσα στο προηγούμενο έτος. Η ηλικιακή κατανομή του ομάδα ελέγχου (μέσος όρος 62,0 χρόνια, σταθερή απόκλιση 12,3 χρόνια, το εύρος 45,9 έως 88,9 έτη) ήταν παρόμοια με εκείνη της υπόθεσης ομάδα.

όγκων και ορό δείγματα

Αναδρομική κοόρτη .

ιστός όγκου ελήφθη κατά τη διάρκεια της πρωτοβάθμιας κυτταρομειωτική χειρουργική επέμβαση. Tissue είχε χρόνο ισχαιμίας λιγότερο από 30 λεπτά και πέρασε λιγότερο από 48 ώρες σε φορμόλη πριν από την επεξεργασία σε παραφίνη. Μια μικροσυστοιχία ιστού (TMA) κατασκευάστηκε με τη λήψη αντιγράφου του πυρήνες 0,6 χιλιοστών από το μπλοκ του όγκου μετά από επανεξέταση της αιματοξυλίνη και τμήματα ηωσίνη-βάφονται από έναν παθολόγο. Πυρήνες επιλέχθηκαν από τις περιοχές του όγκου που περιέχει εκπρόσωπος αναλογίες επιθήλιο και το στρώμα, αποφεύγοντας ιδιαίτερα νεκρωτικές περιοχές. TMAs συναρμολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Pathology Devices arrayer ιστού (Westminster, MD). Δείγματα ορού από τις περιπτώσεις συλλέχθηκαν πριν από τη χειρουργική επέμβαση ή χημειοθεραπεία. Τα δείγματα αίματος υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με τυπικές εργαστηριακές διαδικασίες.

Υποψήφιοι κοόρτη.

Αίμα συλλέχθηκε πριν από τη χειρουργική επέμβαση σε ηπαρινισμένους σωλήνες Vacutainer, και μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC) απομονώθηκαν με φυγοκέντρηση πυκνότητας Ficoll. κατάσταση HLA-A2 προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής σε ένα FACSCalibur (BD Biosciences, San Jose, CA) μετά από χρώση επιφάνεια PBMC με αντι-HLA-A2 αντίσωμα (κλώνος ΒΒ7.2, BD Pharmingen, San Diego, CA). Ασκίτης συλλέγονται κατά τη διάρκεια χειρουργικής επέμβασης φυγοκεντρήθηκε (1200 rpm για 10 λεπτά), και των ερυθρών αιμοσφαιρίων (RBCs) απομακρύνθηκαν με επεξεργασία με ρυθμιστικό διάλυμα λύσης ACK (Sigma, St. Louis, ΜΟ). Στερεά όγκου απομακρύνεται κατά τη διάρκεια χειρουργικής επέμβασης τεμαχίστηκε με νυστέρια για περίπου 2 mm

2 και στη συνέχεια υπέστη πέψη όλη τη νύχτα στους 4 ° C σε RPMI 1640 (Invitrogen, Carlsbad, CA) που περιέχει κολλαγενάση τύπου Ι και IV (το καθένα σε 0,05 mg /ml) , 0,025 mg /ml υαλουρονιδάση και 0,01 mg /ml ϋΝΑση Ι (όλα από την Sigma, St. Louis, ΜΟ). Μετά την πέψη, το υλικό διήλθε μέσω ενός 100 μm αποστειρωμένου κυττάρου διηθητήρα για να αφαιρέσετε συστάδες, και το προκύπτον εναιώρημα μονοκύτταροι σφαιροποιήθηκε όπως περιγράφεται παραπάνω.

Ανοσοϊστοχημεία και ανοσοκυτταροχημεία

TMAs κόπηκαν σε 5 μm επάνω Superfrost συν πλάκες (Fisher Scientific, Ottawa, ΟΝ) και επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 37 ° C. Μετά αποπαραφίνωση, τα πλακίδια τοποθετήθηκαν σε Autostainer Ventana Discovery ΧΤ (Ventana, Tucson, ΑΖ) για ανοσοϊστοχημική χρώση. πρότυπο πρωτόκολλο CC1 Ventana χρησιμοποιήθηκε για την ανάκτηση του αντιγόνου. Οι πρωτογενείς αντισώματα απαριθμούνται στο Πίνακα 2.

TMAs επωάστηκαν με πρωτεύοντα αντισώματα γιά 60 λεπτά, και το κατάλληλο cross-προσροφημένο, βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα (Jackson Immunoresearch, West Grove, ΡΑ) εφαρμόστηκε για 32 λεπτά.