Αφηρημένο

Ιστορικό

HNF1A (ηπατοκυττάρων πυρηνικού παράγοντα 1 α) είναι ένας παράγοντας μεταγραφής που είναι γνωστό για τη ρύθμιση του παγκρέατος διαφοροποίηση και διατήρηση της ομοιόστασης του ενδοκρινές πάγκρεας. Πρόσφατα, μελέτες συσχέτισης γονιδιώματος-ευρεία έχουν ενοχοποιηθεί

HNF1A

ως ένα γονίδιο ευαισθησίας για τον καρκίνο του παγκρέατος. Ωστόσο, η λειτουργική σημασία και το μοριακό μηχανισμό της

HNF1A

σε παγκρεατικά καρκινογένεση παραμένει ασαφής.

Μέθοδοι

Χρησιμοποιώντας RT-PCR, κηλίδας Western και ανοσοϊστοχημεία μεθόδους, εξετάσαμε

HNF1A

γονιδιακή έκφραση σε οκτώ παγκρεατικού κυτταρικές γραμμές καρκινώματος και σε ζεύγη όγκου και φυσιολογικών δειγμάτων ιστών από ασθενείς με εκτομή παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα. Εμείς χτύπησε κάτω από το

HNF1A

γονιδιακής έκφρασης σε δύο καρκινικές κυτταρικές σειρές χρησιμοποιώντας τρεις σειρές siRNA. Οι επιπτώσεις στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, την απόπτωση, και του κυτταρικού κύκλου καθώς και η φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών μεταγωγής σηματοδότησης Akt εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασία ΑΤΡ, κυτταρομετρία ροής και στυπώματος Western.

Αποτελέσματα

HNF1A

εκφράστηκε σε τρία από τα οκτώ παγκρεατικού αδενοκαρκινώματος κυτταρικές γραμμές και το επίπεδο του

HNF1A

έκφραση mRNA και πρωτεΐνης ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε όγκους από ότι στα φυσιολογικά γειτονικών ιστών τόσο από RT-PCR και Western Blot αναλύσεις. Ανοσοϊστοχημεία αποκάλυψε ότι το επίπεδο του

HNF1A

έκφραση ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε καρκινικούς ιστούς σε σύγκριση με μη καρκινικούς ιστούς. Επιλεκτική δέσμευση

HNF1A

από ειδικές siRNA παρείχε 2-φορές υψηλότερο ποσοστό του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, 20% αύξηση της φάσης S και G2 κύτταρα φάση και 30-40% μειωμένη απόπτωση σε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές. Δείξαμε περαιτέρω ότι το

HNF1A

νοκ ντάουν ενεργοποιημένη Akt και κατάντη στόχο της, ο στόχος της ραπαμυκίνης στα θηλαστικά (mTOR) σε καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος.

Συμπέρασμα

Οι παρατηρήσεις αυτές παρέχουν πειραματικές ενδείξεις υποστηρίζοντας μια πιθανή ογκοκατασταλτικό ρόλο της HNF1A στον καρκίνο του παγκρέατος

Παράθεση:. Luo Ζ, Li Υ, Wang Η, Φλέμινγκ J, Λι Μ, Kang Y, et al. (2015) πυρηνικού παράγοντα ηπατοκυττάρων 1Α (HNF1A) ως ένα πιθανό καταστολέα όγκου στον καρκίνο του παγκρέατος. PLoS ONE 10 (3): e0121082. doi: 10.1371 /journal.pone.0121082

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Jose Γ Trevino, Πανεπιστήμιο της Φλόριντα, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 20 του Αυγούστου, 2014? Αποδεκτές: 28 Ιανουαρίου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 20, Μαρτίου, 2015

Copyright: © 2015 Luo et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. GS Hogan Κονδυλίων Έρευνας και ο Σεΐχης Ahmed Κέντρο για καρκίνο του παγκρέατος Κονδυλίων Έρευνας. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Πρόσφατες μετά GWAS (μελέτη σύνδεσης του γονιδιώματος-wide) δεδομένα αναλύσεων έδειξαν ότι το

HNF1A

(

ηπατοκυττάρων πυρηνικού παράγοντα 1

) οι γονιδιακές παραλλαγές που σχετίζονται με τον κίνδυνο καρκίνου του παγκρέατος [ ,,,0],1-3]. Ωστόσο, η λειτουργική σημασία και μοριακών μηχανισμών της HNF1A μεσολάβηση του παγκρέατος καρκινογένεση παραμένει ασαφής.

HNF1A ανήκει στην οικογένεια πρωτεϊνών ομοιοκυτίου και αποτελεί ουσιαστικό παράγοντα μεταγραφής πολλών ηπατικών γονιδίων που εμπλέκονται στην αποτοξίνωση, ομοιόσταση και ο μεταβολισμός της γλυκόζης, λιπιδίων, στεροειδών και αμινοξέων [4]. Επιπλέον, HNF1A είναι ένα σημαντικό συστατικό των μεταγραφικών δικτύων που διέπουν την εμβρυϊκή ανάπτυξη και τη διαφοροποίηση του παγκρέατος [5], [6]. καθώς και τη διατήρηση της ανάπτυξης και της λειτουργίας των κυττάρων των νησιδίων β σε ενήλικες [7]. Βλαστικής σειράς ετερόζυγο μεταλλάξεις του

HNF1A

έχουν βρεθεί υπεύθυνη για τον τύπο 3 MODY (ωριμότητα διαβήτης της νεολαίας) [8]. Μεταλλάξεις ή κοινές παραλλαγές του

HNF1A

γονίδιο έχουν επίσης συσχετιστεί με τον κίνδυνο του διαβήτη τύπου ΙΙ [9-11].

Ως μεταγραφικός παράγοντας, HNF1A έχει επίσης αποδειχθεί ότι επηρεάζει εντερικό επιθηλιακό κύτταρο την ανάπτυξη και τη διαφοροποίηση των κυτταρικών σειρών [12], [13] και ρυθμίζουν την έκφραση microRNA-194 [14]. Προηγούμενες μελέτες σε άλλους ανθρώπινους καρκίνους έχουν προτείνει ένα ογκοκατασταλτικό ρόλο του

HNF1A

γονίδιο. Για παράδειγμα, διαλληλόμορφο σωματικές μεταβολές του

HNF1A

ήταν παρόντα στο 60% των ηπατοκυτταρικών αδενωμάτων και σε σπάνιες περιπτώσεις ηπατοκυτταρικού καρκινώματος σε μη κίρρωση του ήπατος [15].

HNF1A

σίγηση από siRNA σε κύτταρα ηπατοκυτταρικού καρκινώματος επαγόμενη υπερέκφραση ορισμένων γονιδίων που κωδικοποιούν τους υποδοχείς του αυξητικού παράγοντα, τα συστατικά του μεταφραστικού μηχανισμού, του κυτταρικού κύκλου, και ρυθμιστές της αγγειογένεσης [16]. Μεταλλάξεις του

HNF1A

γονίδιο ανιχνεύθηκαν επίσης σε καρκίνο του παχέος εντέρου με αστάθεια μικροδορυφόρου [17] και σε καρκίνο του ενδομητρίου [18]. Πολυμορφικές παραλλαγές του

HNF1A

γονίδιο έχουν συσχετισθεί με επίπεδο κυκλοφορίας του C-αντιδρώσα πρωτεΐνη (CRP), ένα βιοδείκτη της φλεγμονής [19], [20]. Μια πρόσφατη μελέτη GWAS της ανθρώπινης N-glycome προσδιορίζει HNF1A ως κύριος ρυθμιστής της πρωτεΐνης του πλάσματος φουκοσυλίωσης [21]. Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι HNF1A θα μπορούσε να διαδραματίσει ένα ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου μέσω της ρύθμισης της ανοσίας, φλεγμονώδους απόκρισης, και πρωτεϊνική αναδίπλωση, καθώς και την ανάπτυξη και διαφοροποίηση των κυττάρων. Ωστόσο, δεν υπάρχει ακόμη καμία πληροφορία σχετικά με την έκφραση ή μετάλλαξη κατάσταση και ο δυνητικός ρόλος των

HNF1A

στον ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος.

Σε αυτή τη μελέτη, έχουμε ως στόχο να καταδείξει την έκφραση του

HNF1A

γονίδιο στο ανθρώπινο καρκίνο του παγκρέατος και ο αντίκτυπος των

HNF1A

απορρύθμιση στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων, του κυτταρικού κύκλου, απόπτωση και μεταγωγή σημάτων σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα.

Υλικά και Μέθοδοι

κυτταρικές σειρές και ανθρώπινους ιστούς

Ανθρώπινο παγκρεατικό κύτταρο αδενοκαρκινώματος γραμμές AsPC-1, Panc-1, MiaPaCa-2, Hs766T και κύτταρα BxPC-3 αγοράστηκαν από την American Type Culture Collection και καλλιεργήθηκαν όπως περιγράφεται στο δελτία πληροφοριών για το προϊόν τους. Panc-28, Colo357 και ταχέως αναπτυσσόμενη (FG) υπογραμμή της, καθώς και η αθανατοποιημένη φυσιολογικά ανθρώπινα παγκρεατικού πόρου επιθηλιακά (HPDE) κυτταρική γραμμή ήταν δώρα από Drs. Craig Δ Logsdon (MD Anderson Cancer Κέντρο, Houston, TX) [22], [23]. Όλες οι κυτταρικές σειρές κυρωθεί από τη δοκιμή 14 πολυμορφικών δεικτών. Τα καρκινικά κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI 1640 ή Dulbecco τροποποιημένο μέσο Eagle συμπληρωμένο με 10% εμβρυϊκό βόειο ορό. HPDE κυττάρων διατηρήθηκε σε κερατινοκυττάρων μέσο άνευ ορού συμπληρωμένο με επιδερμικό αυξητικό παράγοντα και εκχύλισμα υποφύσεως βοοειδούς.

Τα σταθεροποιημένα με φορμαλίνη (FFPE) ενσωματωμένες σε παραφίνη τομές και κατεψυγμένα δείγματα από 48 ζεύγη χειρουργικά ιστών παγκρεατικού όγκου και τα παρακείμενα τους μη καρκινικούς ιστούς ελήφθησαν από MD Anderson Tissue Bank. FFPE χρησιμοποιήθηκε για ανοσοϊστοχημεία. Κατεψυγμένα ιστοί χρησιμοποιήθηκαν για RNA και πρωτεϊνική εκχύλιση. Όλα τα δείγματα ιστού που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη ήταν υπολειμματική χειρουργική δείγματα από ασθενείς που υποβάλλονται σε εκτομή του όγκου χωρίς προ-εγχειρητική θεραπεία στο MD Anderson Cancer Κέντρο με έγγραφη συγκατάθεση υπογράφεται από κάθε ασθενή. Όλα τα δείγματα ιστού εκτιμήθηκαν από έναν παθολόγο (Δρ Wang) για να εξασφαλιστεί η κυτταρικότητα των ιστών του όγκου και την καθαρότητα των κανονικών γειτονικών ιστών. Η μελέτη και η φόρμα συγκατάθεσης εγκρίθηκαν από MD Anderson Institutional Review Board.

Η ανοσοϊστοχημεία (IHC) και κηλίδωση Western

Μετά αποπαραφινώσεως, τομές ιστού υποβλήθηκαν σε ανάκτηση αντιγόνου και ενδογενών κλείδωμα δραστηριότητα υπεροξειδάσης. Το πρωτεύον αντίσωμα που χρησιμοποιήθηκε ήταν HNF1A κουνελιού αντίσωμα από EPITOMICS (Burlingame, CA) σε αραίωση 1: 200. Μετά τη θεραπεία με το βιοτινυλιωμένο δευτερογενές αντίσωμα, το σύμπλοκο αντίσωμα ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας ένα αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης λύση και ορατή χρησιμοποιώντας 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (Zymed Laboratories, Inc., San Francisco, CA). Ένας αρνητικός μάρτυρας συμπεριλήφθηκε σε κάθε πείραμα παραλείποντας το πρωτογενές αντίσωμα. Εικόνες αξιολογήθηκαν από έναν έμπειρο παθολόγο για χρώσης σε διαφορετικούς τύπους παγκρεατικών κυττάρων, τα διαφορετικά κυτταρικά συστατικά, καθώς και σε όγκο και φυσιολογικούς ιστούς. Τομές από τον ίδιο μπλοκ ιστού επίσης χρωματίστηκαν για φωσφορυλιωμένο ΑΚΤ και mTOR χρησιμοποιώντας αντι-φωσφο-ΑΚΤ (Ser473) και (Ser2448) αντισωμάτων-mTOR αντι-φωσφο. Η ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε ως 0 για αρνητική, 1 για την αδύναμη, 2 για το ενδιάμεσο, και 3 για την ισχυρή χρώση. Το ποσοστό των κυττάρων με θετική χρώση βαθμολογήθηκαν ως 0 για καθόλου, 1 για 1-50%, και 2 για & gt? 50%. Το τελικό σκορ χρώση ήταν το προϊόν των βαθμολογιών έντασης και το ποσοστό. Η διαφορά στις βαθμολογίες χρώση των μη-όγκου και ογκογόνους ιστούς συγκρίθηκε με ζεύγη δοκιμή t.

έκφραση πρωτεΐνης αξιολογήθηκε επίσης σε δείγματα πρωτεΐνης που εξάγεται από κυτταρικές γραμμές και δείγματα κατεψυγμένου ιστού χρησιμοποιώντας κηλίδωση Western. Η πρωτεΐνη εκχυλίστηκε από πρωτεϊνικών προϊόντων λύσης ολικού κυττάρου και η συγκέντρωση προσδιορίζεται με την μέθοδο χρώσης Bradford. Εκχυλίσματα πρωτεΐνης κλασματοποιήθηκαν με ηλεκτροφόρηση πηκτής πολυακρυλαμιδίου και μεταφέρθηκαν σε μία μεμβράνη PVDF Mini χρησιμοποιώντας ένα σύστημα μεταφοράς Trans-Blot Turbo (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Τα πρωτογενή αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν περιλαμβάνουν: HNF1A από BD Biosciences (San Jose, CA) σε αραίωση 1: 1000? ολική Akt, φωσφο-ΑΚΤ (Ser473) και φωσφο-ΑΚΤ (Thr308) σε αραίωση 1: 2000? και το σύνολο των mTOR και φωσφο-mTOR (Ser2448) σε αραίωση 1: 1000 από τη Cell Signaling (Danvers, ΜΑ). Βήτα-ακτίνη σε 1: 3000 αραιώσεις χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης. Μετά την επώαση με τα κατάλληλα δευτερεύοντα αντισώματα συζευγμένα σε υπεροξειδάση αρμορακίας, οι μεμβράνες εκτέθηκαν σε αντιδραστήριο ανίχνευσης ECL Western Blotting. Οι μεμβράνες απογυμνώθηκαν επί 30 λεπτά στους 55 ° C σε ένα ρυθμιστικό διάλυμα που περιέχει 2% SDS, 62.5 mM Tris (pH6.7), και 100 mM 2-μερκαπτοαιθανόλη για χρώση πολλαπλών πρωτεϊνών. εντάσεις χρώσης ποσοτικοποιήθηκαν με πυκνομετρική ανάλυση.

έκφραση mRNA

Ολικό RNA εξήχθη από καλλιεργημένα κύτταρα, καθώς και από 27 ζεύγη παγκρεατικού όγκου και των παρακείμενων ιστών μη-όγκου τους χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο ΤπζοΙ σύμφωνα με πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ). Συμπληρωματικό DNA συντέθηκε από 1.0 μg ολικού RNA χρησιμοποιώντας το cDNA Synthesis Kit (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA). Ποσοτική RT-PCR (qRT-PCR) πραγματοποιήθηκε σε δείγματα εις τριπλούν χρησιμοποιώντας προσχεδιασμένα εκκινητών και ανιχνευτών (Hs00167041-m1, Life Technologies, Grand Island, Νέα Υόρκη). Τα αποτελέσματα RT-PCR αρχικά κανονικοποιήθηκαν με τον κύκλο κατωφλίου (Ct) του GAPDH, που αναφέρεται ως ΔCt. Η αλλαγή φορές στην έκφραση των γονιδίων στην ομάδα όγκου σε σύγκριση με ότι στην ομάδα με φυσιολογική εκφράστηκε ως 2

-ΔΔCt, στην οποία-ΔΔCt ισούται με την ΔCt της ομάδας όγκου μείον την ΔCt της φυσιολογικής ομάδας, η οποία ήταν κανονικοποιημένη έως 1.

siRNA αποκλεισμού

μικρό παρεμβαλλόμενο RNA (siRNA) επιμολύνσεις πραγματοποιήθηκαν με χρήση αντιδραστηρίου επιμόλυνσης σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ). Τρία διαφορετικά siRNA δίπολα στόχευση

HNF1A

γονίδιο (NM_000545) ελέγχθηκαν. Οι αλληλουχίες των siRNAs είναι οι εξής: 5′-CAGUGAGACUGCAGAAGUAtt-3 ‘(

HNF1A

siRNA1), 5′-GGUCUUCACCUCAGACACUtt-3′ (

HNF1A

siRNA2), 5′-CACCUGUCCCAACACCUCAtt- 3 ‘(

HNF1A

siRNA3). Ένα αρνητικό siRNA έλεγχο ή την επιμόλυνση του αντιδραστηρίου χρησιμοποιούνται μόνο σε πλαστή επιμολύνσεις. AsPC-1 και κύτταρα BXPC-3 επιμολύνθηκαν και τα κύτταρα συλλέχθηκαν 24 ώρες έως 96 ώρες μετά την επιμόλυνση.

κυτταρικής αύξησης και πολλαπλασιασμού

Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων ποσοστώθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία ΑΤΡ (Promega, Madison , WI). Εν συντομία, 10000 κύτταρα ανά φρεάτιο σε πλάκες 96-φρεατίων επιμολύνθηκαν παροδικά με το

HNF1A

siRNA ή ελέγχουν siRNA (10 ηΜ). Ένας ίσος όγκος αντιδραστηρίου προστέθηκε στην καλλιέργεια 12, 24, 48 και 72 ώρες μετά την επιμόλυνση για ανίχνευση φωταύγειας. Τρία ανεξάρτητα πειράματα διεξήχθησαν σε κάθε χρονικό σημείο.

κυτταρικού κύκλου και απόπτωση δοκιμασία

72 ώρες μετά την επιμόλυνση, τα κύτταρα συλλέχθηκαν και εναιωρήθηκαν σε ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού σταθεροποιητικό που περιέχει 125 μg /mL ιωδιούχου προπιδίου (ΡΙ) και RNase Α κυττάρων διανομή κύκλου προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής.

η απόπτωση εκτιμήθηκε με τη χρήση της Annexin V και ιωδιούχο προπίδιο ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη (FITC) (ΡΙ) μέθοδος διπλής χρώσης 72h μετά την επιμόλυνση. Τα αποπτωτικά κύτταρα ταυτοποιήθηκαν με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής με τη χρήση του αναλυτή BD κυττάρου και FCS Express Software-Clinical Edition (BD Bioscience, San Jose, CA). Αμφότερες οι πρώιμοι και όψιμοι αποπτωτικά κύτταρα μετρήθηκαν για σχετική αποπτωτικά αλλαγές. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν εις τριπλούν.

Όλα τα δεδομένα σε επαναληπτικές πειράματα που περιγράφονται ως μέση τιμή ± SD. Paired t test ή δοκιμασία t φοιτητή (2-tailed) εφαρμόστηκαν με

P

αξία & lt? 0.05 ως το επίπεδο σημαντικότητας.

Αποτελέσματα

Η έκφραση του

HNF1A

σε κυτταρικές σειρές καρκινώματος του παγκρέατος

Χρησιμοποιώντας ποσοτική RT-PCR (qRT-PCR) και κηλίδα Western αναλύσεις, δείξαμε ότι

HNF1A

εκφράστηκε σε τρία καλά χαρακτηρισμένα κυτταρικές γραμμές παγκρεατικού καρκινώματος που προέρχονται είτε από τους πρωτογενείς όγκους του παγκρέατος αδενοκαρκίνωμα (BxPC-3) ή μεταστατικές θέσεις (AsPC-1, Colo357) με το υψηλότερο επίπεδο ανιχνεύεται σε AsPC-1 (Σχ. 1Α).

HNF1A

έκφραση ήταν μόλις ανιχνεύσιμη σε κύτταρα MiaPaCa-2 και μη ανιχνεύσιμο στις υπόλοιπες κυτταρικές σειρές καρκινώματος και HPDE (Εικ. 1). Η ανάλυση στυπώματος Western επιβεβαίωσε την παρουσία πρωτεΐνης HNF1A σε BxPC-3, AsPC-1 και τα κύτταρα Colo357, το χαμηλότερο επίπεδο σε MiaPaCa-2 και την απουσία σε Panc-1, FG, Hs766T, Panc-28 και τα κύτταρα HPDE (Σχ. 1Β ).

Α, επίπεδο έκφρασης mRNA σε ανθρώπινα παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές σε σχέση με τον έλεγχο της κυτταρικής σειράς COLO357 όπως μετράται από qRT-PCR. Β, η έκφραση της πρωτεΐνης σε αντίστοιχες κυτταρικές σειρές με κηλίδα Western. C, διπλώστε διαφορές στα επίπεδα έκφρασης του mRNA της 27ης παγκρεατικών όγκων σε σύγκριση με ζεύγη γειτονικών ιστών μη-όγκου τους. D και Ε, κηλίδες Western και ποσοτική μέτρηση της έκφρασης της πρωτεΐνης HNF1A σε οκτώ ζεύγη δειγμάτων ανθρώπινων παγκρεατικών όγκων (Τ) και των παρακείμενων μη-όγκου (Ν) ιστούς τους. Τα επίπεδα έκφρασης των HNF1A κανονικοποιούνται με εκείνα της β-ακτίνης.

Η

Μειωμένη έκφραση του

HNF1A

στο ανθρώπινο παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα

HNF1A

έκφραση mRNA ανιχνεύθηκαν με qRT-PCR σε 27 ζεύγη εκτομή ιστών παγκρεατικού όγκου αδενοκαρκινώματος και των παρακείμενων ιστών μη-όγκου τους. Το επίπεδο του

HNF1A

έκφραση ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε όγκο από ό, τι εκείνοι σε ιστούς μη-όγκου (

σ

= 0,005, σε συνδυασμό

t

test) (Εικ. 1Γ). Η μέση στάθμη του

HNF1A

έκφραση του mRNA σε ιστούς όγκων μειώθηκε σε 44,4% του ότι σε μη καρκινικούς ιστούς, αν και τα τρία από τα 27 ζεύγη έδειξαν ένα υψηλότερο επίπεδο

HNF1A

έκφραση σε οι όγκοι.

στη συνέχεια, κηλίδα Western διεξήχθησαν σε οκτώ ζεύγη όγκου και μη καρκινικών ιστών για να εξετάσει την έκφραση HNF1A στο πρωτεϊνικό επίπεδο. Με κηλίδα Western (Εικ. 1 D), βρήκαμε ένα χαμηλότερο επίπεδο πρωτεΐνης HNF1A σε 7/8 (87.5%) των όγκων σε σύγκριση με παρακείμενες μη καρκινικούς ιστούς τους (Σχ. 1Ε). Η μέση τιμή (± SD) ένταση της ζώνης HNF1A μετά κανονικοποιούνται προς εκείνη της β-ακτίνης ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε όγκο (0,71 ± 0,11) από εκείνες σε ιστούς μη-όγκου (0.80 ± 0.13) (

p

= 0,005, σε συνδυασμό

t

test). Τα πειράματα αποκάλυψαν IHC σαφείς διαφορές στην έκφραση πρωτεΐνης HNF1A μεταξύ της κανονικής (Σχ. 2Α και 2Β) και καρκινικών πάγκρεας (Σχ. 2C και 2D). πρωτεΐνη HNF1A ήταν παρούσα με ισχυρή ένταση στην κανονική ενδοκρινικό και exocrine πάγκρεας. Το κύτταρο νησιδίων και κυττάρων κυψελωτά έδειξε μια ισχυρότερη πυρήνες χρώσης από τα κύτταρα των πόρων έκαναν. Σε αντίθεση, στα οιδηματώδης ιστός, HNF1A εκφράστηκε σε μέτρια επίπεδα σε κύτταρα των νησιδίων και κυψελοειδή αλλά σε χαμηλά ή μη ανιχνεύσιμα επίπεδο πόρου κύτταρα. Στρωματικών ιστών που περιβάλλουν τις νεοπλασματικές αλλοιώσεις δεν παρουσίασαν σημαντική χρώση για HNF1A. Ο μέσος όρος χρώση (μέση τιμή ± SD) ήταν 5,08 ± 2,17 έναντι 2,27 ± 1,45 σε 48 ζεύγη των μη-όγκου και ογκογόνους ιστούς, αντίστοιχα (

P & lt?

0.001, σε συνδυασμό

t

δοκιμή) (Πίνακας 1).

Εικόνες (Α και Β) δείχνουν κυτταροπλασματική και πυρηνική έκφραση του HNF1A σε φυσιολογικό παγκρεατικό ιστό. Οι κανονικές παγκρέατος αγωγοί επισημαίνονται με ένα βέλος. Τα κύτταρα νησιδίων σημειώνονται με διπλά βέλη. Παγκρεατικών νησιδίων κύτταρα έχουν υψηλότερο επίπεδο έκφρασης HNF1A από acinar και κύτταρα των πόρων. Εικόνες (C και D) δείχνουν την έκφραση του HNF1A σε πόρου αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (σε κύκλο) και καλοήθη κύτταρα παγκρεατικού πόρου και κύτταρα νησιδίων γειτονικά προς τον όγκο (αριστερά). Πάνελ Ε-Η δείχνουν τα Αντιπροσωπευτικά μικρογραφήματα για ρ-ΑΚΤ (Ε και F) και ρ-mTOR (G και Η) έκφραση σε φυσιολογικούς ιστούς του παγκρέατος (Ε και G) και πόρου αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος (F και Η). Μεγεθύνσεις: 100Χ για τα Α, Ε και G? 400X για την Β και Η, 40X για το C, 200X για D και F.

Η

Αποκλεισμός

HNF1A

από ειδικά siRNA

Τρία διαφορετικά siRNAs ακολουθίες στόχευσης

HNF1A

εξόνιο 4 (siRNA1), το εξόνιο 1 (siRNA2) ή εξόνιο 8-9 διασταύρωση (siRNA3) μετήχθησαν σε AsPC-1 και BxPC-3 κύτταρα. Ποσοτική PCR ανάλυση έδειξε ότι 48 ώρες μετά τη θεραπεία, οι τρεις ανεξάρτητες siRNA μεσολάβηση

HNF1A

knockdowns οδήγησε σε 92%, 80% και 64% εξαφάνιση

HNF1A

έκφραση mRNA σε AsPC-1 κύτταρα, και 98%, 74% και 65% σε εξαφάνιση BxPC-3 κύτταρα, αντίστοιχα (Σχ. 3Α και 3Β). Συμπληρώνοντας τα δεδομένα mRNA, ανάλυση κηλίδος Western έδειξε ότι η έκφραση των πρωτεϊνών HNF1A σε κύτταρα κατεργασμένα με ειδικό siRNAs μειώθηκε σημαντικά (Σχ. 3C και 3D). Από την άλλη πλευρά, το επίπεδο της μεταγραφής του

HNF1A

δεν επηρεάστηκε σε ελέγχους φορέα. Με βάση αυτές τις παρατηρήσεις, χρησιμοποιήσαμε siRNA1 και siRNA2 στα ακόλουθα πειράματα.

Τα κύτταρα επιμολύνθηκαν ξεχωριστά με τρία διαφορετικά αλληλουχίες των siRNA που κατευθύνεται έναντι HNF1A (siRNA1, siRNA2, siRNA3), ή με ένα μάρτυρα siRNA (Control) . αποδοτικότητες Αναστολή αξιολογήθηκαν με qPCR για σχετικά επίπεδα mRNA HNF1A στις 24 ώρες έως 96 ώρες μετά τις επιμολύνσεις. Western Blot αναλύσεις AsPC-1 και BxPC-3 κύτταρα επιμολυσμένα με αντι-HNF1A siRNAs. Τα δεδομένα δείχνονται για 96 ώρες μετά τις επιμολύνσεις. Έκφραση της β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως εσωτερικός έλεγχος.

Η

Επιπτώσεις του

HNF1A

νοκ ντάουν στην ανάπτυξη των κυττάρων και την απόπτωση

Χρησιμοποιώντας siRNA1 και siRNA2 ως ένα αποτελεσματικό εργαλείο για φίμωση του

HNF1A

γονιδίων, βρήκαμε ότι

HNF1A

νοκ ντάουν που παρέχει μια 2-πλάσια κύτταρα αυξημένο πολλαπλασιασμό των AsPC-1 (Σχ. 4Α) και BxPC-3 (Εικ. 4Β). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η ανάπτυξη των κυττάρων δεν επηρεάστηκε από την επιμόλυνση του ελέγχου φορέα. Σταθερά, παρατηρήσαμε ότι

HNF1A

knockdown οδηγούν σε 20% μείωση του πληθυσμού G0 /G1 και 20% αυξημένη S πληθυσμός /G2 φάση στις δύο κυτταρικές γραμμές δοκιμάστηκαν (Σχ. 4C και 4D). Επιπλέον, σε σύγκριση με τον έλεγχο φορέα, διαμόλυνση με

HNF1A

siRNAs μειώθηκε σημαντικά το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων. Οι Αννεξίνη-θετικά κύτταρα (μέση ± SD) μειώθηκε από 44,57 ± 11,57 13,37 ± να 1.51 σε ASPC-1 κύτταρα, και από 54,37 ± 7,58 12,6 ± να 2.19 σε BxPC-3 κύτταρα (Σχ. 5).

Ο καρκίνος του παγκρέατος κυτταρικές σειρές επιμολύνθηκαν με μια από τις δύο siRNAs HNF1A ή όργανα ελέγχου siRNA. Ο ρυθμός πολλαπλασιασμού των siRNA-επιμολυσμένα κύτταρα εκτιμήθηκε με δοκιμασία CellTiter-Glo επί AsPC-1 (Α) και BxPC-3 (Β) κύτταρα 12 ώρες σε 72 ώρες μετά την επιμόλυνση. Η κατανομή κυτταρικού κύκλου προσδιορίστηκε με φθορισμό διαλογή κυττάρων ενεργοποιημένων ανάλυση σε AsPC-1 (C) και τα κύτταρα BxPC-3 (D). Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με ΡΙ, και αναλύθηκαν για περιεκτικότητα ϋΝΑ χρησιμοποιώντας κυτταρομετρία ροής 72h εξής επιμολύνσεις. Οι πληθυσμοί των κυττάρων σε G1, S, G2 και φάσεις που χαρακτηρίζονται από διαφορετικές εντάσεις του ΡΙ-Α φθορισμού και υποδεικνύονται. Τα δεδομένα παρουσιάζονται σε σχέση με το μάρτυρα. * P & lt?. 0.05 σε σύγκριση με την αντίστοιχη έλεγχο

Η

72 ώρες μετά την επιμόλυνση με αντι-

HNF1A

siRNAs, τα κύτταρα AsPC-1 και BxPC-3 βάφτηκαν με FITC ανεξίνη -V /PI. Ποσοστό Annexin-V κύτταρα /ΡΙ-χρώση προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής. Dot οικόπεδο διαιρέθηκε σε ένα τεταρτημόριο: (1) νεκρωτικών κυττάρων, (2) αργά αποπτωτικών κυττάρων, (3) ζώντα κύτταρα, και (4) πρόωρη αποπτωτικά κύτταρα. γράφημα Bar δείχνει το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων. Οι τιμές εκφράζονται ως μέση τιμή ± SD από τρία διαφορετικά πειράματα. * P & lt?. 0.05 σε σύγκριση με τον έλεγχο

Η

Απώλεια

HNF1A

ενεργοποιεί τη διαδρομή AKT /mTOR σηματοδότησης

Η AKT /mTOR μονοπάτι σηματοδότησης είναι ζωτικής σημασίας για πολλούς πτυχές της κυτταρικής ανάπτυξης, την επιβίωση και απόπτωση [24]. Η συστατική ενεργοποίηση της AKT /mTOR έχει εμπλακεί στην παθογένεση και την εξέλιξη του καρκίνου του παγκρέατος [25]. Για τη διαλεύκανση των μοριακών μηχανισμών που ρυθμίζονται από

HNF1A

αδρανοποίηση σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, διερευνήθηκε η επίδραση του

HNF1A

νοκ ντάουν στην AKT /mTOR μονοπάτι σηματοδότησης. Χρησιμοποιώντας κηλίδωση Western, βρήκαμε ότι ογκογόνος σηματοδότηση φωσφόρου ΑΚΤ και κατάντη phosphor- mTOR της ήταν πάνω ρυθμισμένα μετά από επιμόλυνση με

HNF1A

siRNAs στα δύο κύτταρα AsPC-1 και BxPC-3 (Εικ. 6). Κατά συνέπεια, τα επίπεδα της φωσφορυλίωσης της ΑΚΤ σε Ser473 και Thr308 ήταν σημαντικά αυξημένη σε σύγκριση με τον αντίστοιχο έλεγχο τους. Ταυτοχρόνως, οι βαθμοί φωσφορυλίωσης mTOR Ser2448 είχαν σημαντικά ενισχυμένη. Δεν παρατηρήθηκε καμία επίδραση στη συνολική ΑΚΤ και την έκφραση mTOR. ανάλυση IHC σε ζεύγη όγκου και φυσιολογικών ιστών του παγκρέατος διαπίστωσε επίσης σημαντικά υψηλότερα επίπεδα φωσφορυλιωμένου ΑΚΤ και mTOR σε όγκους από ό, τι στους φυσιολογικούς ιστούς (Σχ. 2, Πίνακας 1).

AsPC-1 και BxPC-3 κύτταρα μορφομετατράπηκαν με τον έλεγχο του siRNA και δύο διαφορετικές

HNF1A

siRNAs όπως υποδεικνύεται. 96h μετά την επιμόλυνση, κυτταρικά λύματα ανοσοστυπώθηκαν με αντίσωμα αντι- HNF1A, αντι-φωσφο-ΑΚΤ Ser473 αντισώματος, αντι-φωσφο-ΑΚΤ Thr308 αντισώματος και αντι-φωσφο-mTOR Ser2448 αντίσωμα. Οι μεμβράνες απογυμνώθηκαν και επανα-διερευνήθηκαν με αντίσωμα αντι-ΑΚΤ αντίσωμα, αντι-mTOR και αντισώματος αντι-β-ακτίνης. Οι φορές διαφορές στα επίπεδα έκφρασης της πρωτεΐνης των κυττάρων επιμολυσμένων με

HNF1A

siRNA και ο έλεγχος siRNA παρουσιάστηκε ως μέση τιμή ± SD από τρία ανεξάρτητα πειράματα.

Η

Συζήτηση

Αυτή η μελέτη, έχουμε δώσει κάποιες πειραματικές αποδείξεις που

HNF1A

γονίδιο μπορεί να δρα ως καταστολέας των όγκων στον καρκίνο του παγκρέατος. Πρώτον, η μειωμένη έκφραση του

HNF1A

ανιχνεύθηκε σε παγκρεατικό αδενοκαρκίνωμα του ανθρώπου τόσο σε mRNA και τα επίπεδα πρωτεΐνης. Δεύτερον,

HNF1A

νοκ ντάουν σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα να οδηγήσει σε αύξηση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων και μειωμένη απόπτωση. Τρίτον, η αναστολή της

HNF1A

ενίσχυσε την ενεργοποίηση της ΑΚΤ-mTOR μονοπάτι σηματοδότησης. Αυτά τα δεδομένα συμφωνούν με τις παρατηρήσεις που αναφέρθηκαν προηγουμένως σε μελέτες καρκίνου του ήπατος [15], [16]. υποστηρίζει ένα ογκοκατασταλτικό ρόλο του

HNF1A

στην ανάπτυξη των ανθρώπινων καρκίνων.

έκφραση HNF1A

γονίδιο αρχικά ανακαλύφθηκε στο ήπαρ, στη συνέχεια αποδειχθεί ότι εκφράζεται στα επιθήλια σε διάφορα όργανα συμπεριλαμβανομένου του παγκρέατος, του νεφρού και του εντέρου [13].

HNF1A

ελλιπή ως ποντίκια (

HNF1A

– /-

) γεννιούνται κανονικά, αλλά πάσχουν από ηπατική, του παγκρέατος και του νεφρού λειτουργικές ανωμαλίες [26-28] . Στους ανθρώπους, ασθενείς που φέρουν μονο-αλληλόμορφης μεταλλάξεις στο

HNF1A

πάσχουν από τύπου 3 MODY με νεφρική δυσλειτουργία [8]. Σωματικές μεταλλάξεις του

HNF1A

γονίδιο έχουν αναφερθεί σε ηπάτωμα, καρκίνο του παχέος εντέρου και του καρκίνου του ενδομητρίου [16-18]. Πρόσφατες μελέτες GWAS έχουν δείξει ότι

HNF1A

γονιδίου σχετίζεται με τον κίνδυνο καρκίνου του παγκρέατος [1-3], γεγονός που ώθησε την τρέχουσα έρευνα σχετικά με την λειτουργική σημασία αυτού του γονιδίου για τον καρκίνο του παγκρέατος.

η μελέτη αυτή, IHC ανάλυση των ανθρώπινων παγκρεατικών ιστών έχουν δείξει ότι η πρωτεΐνη HNF1A εκφράστηκε σε υψηλότερο επίπεδο σε κύτταρα νησίδων και κυψελοειδή κύτταρα σε σύγκριση με εκείνη σε επιθηλιακά κύτταρα του πόρου, η οποία είναι συνεπής με την λειτουργική σημασία αυτού του γονιδίου στη διατήρηση της ομοιόστασης των ενδοκρινικών παγκρέας. Από την άλλη πλευρά, το mRNA και το επίπεδο έκφρασης πρωτεΐνης του HNF1A (τόσο από IHC και αναλύσεις Western blot) ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε παγκρεατικών όγκων σε σχέση με περιβάλλοντες ιστούς μη-όγκου, η οποία είναι συνεπής με ένα πιθανό καταστολέα όγκου ρόλος αυτού του γονιδίου σε καρκίνο του παγκρέατος.

Το ογκοκατασταλτικό ρόλο της HNF1A υποστηρίζεται επίσης από ευρήματα από τις γονιδίου νοκ ντάουν πειράματα. Έχουμε παρατηρήσει ότι η αναστολή του

HNF1A από

siRNAs στα κύτταρα παγκρεατικού καρκινώματος είχε ως αποτέλεσμα μια σημαντικά αυξημένη κυτταρικό πολλαπλασιασμό. Παρόμοια αποτελέσματα έχουν αναφερθεί προηγουμένως από Molero Χ et al ότι HNF1A

– /- ποντίκια εμφανίζει αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων κυψελοειδή σε βασικές συνθήκες και μετά την επαγωγή παγκρεατίτιδας [29]. Για την καλύτερη κατανόηση του μηχανισμού της

HNF1A

-inactivation ανάπτυξης που προκαλείται από κύτταρο, έχουμε επιπλέον δείξει ότι η ρύθμιση προς τα κάτω των

HNF1A

οδήγησε σε μειωμένη φάση G0 /G1, αυξημένο φάσης S, και μια ήπια αύξηση της G2 φάσης κλάσμα /M. Μια προηγούμενη μελέτη που πραγματοποιήθηκε σε κυτταρικές σειρές ηπατώματος έχει βρεθεί αυξημένα επίπεδα της κυκλίνης D1 σε απάντηση

HNF1A

αδρανοποίηση [16]. Περαιτέρω μελέτη είναι απαραίτητη για να καταδείξει το οποίο ρυθμίζει ρυθμιστή του κυτταρικού κύκλου η

HNF1A

siRNA με τη μεσολάβηση του πολλαπλασιασμού σε παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές.

επόμενο έδειξε μειωμένο ποσοστό απόπτωσης σε

HNF1A

-inactivated κύτταρα καρκινώματος του παγκρέατος. Αυτή η επίδραση φαίνεται να έρχεται σε αντίθεση με παρατηρήσεις που έγιναν σε ανθρώπινα παγκρεατικά βήτα κύτταρα. Αρκετές προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η υπερ-έκφραση ενός κυρίαρχο-αρνητικό μετάλλαγμα του

HNF1A

(DN-HNF1A) είχε ως αποτέλεσμα μειωμένη φωσφοϊνοσιτιδίου-3 κινάσης (ΡΙ-3Κ) /Akt δραστηριότητα, εξασθένιση έτσι την κυτταρική ανάπτυξη και τον πολλαπλασιασμό και ευαισθητοποίησης βήτα κύτταρα σε απόπτωση [28], [30-32]. Αυτή η διαφορά θα μπορούσε να προκύψει από τη διαφορά στο κελί και παθολογική διεργασία, και δείχνουν το συγκρότημα επίδραση του

HNF1A

σε διαφορετικούς τύπους κυττάρων και παθολογικών διαδικασιών.

διευκρινιστεί περαιτέρω τα κατάντη οδούς σηματοδότησης οποίος ασκεί HNF1A ογκοκατασταλτικό λειτουργία του σε καρκίνο του παγκρέατος και διαπίστωσε ότι

HNF1A

νοκ ντάουν ενεργοποιημένη Akt /mTOR μονοπάτι σηματοδότησης. Ο άξονας ΡΙ3Κ /Akt /mTOR σηματοδότηση διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στη ρύθμιση του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, την απόπτωση, την αγγειογένεση και την μετάσταση, η οποία είναι κεντρικής σημασίας για την ανάπτυξη και τη συντήρηση των καρκινικών κυττάρων. Παρεκκλίνουσα PI3K /Akt σηματοδότησης είναι κοινή σε καρκίνο του παγκρέατος [33], [34]. Τα στοιχεία μας έδειξαν ότι το

HNF1A

-inactivation αύξησε σημαντικά τα επίπεδα της φωσφορυλίωσης της Akt Ser473 και Thr308 και mTOR 2248 φωσφορυλίωση. Είναι γνωστό ότι η φωσφορυλίωση της Akt σε Thr 308 μπορεί να ρυθμίζει την πρωτεϊνική σύνθεση και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό ενώ φωσφορυλίωση της Akt σε Ser 473 σχετίζεται με την αντίσταση στην απόπτωση ελέγχοντας υποκυτταρικός εντοπισμός των προ-αποπτωτικών πρωτεϊνών [35]. Είναι γνωστό ότι mTOR, μια κινάση σερίνης-θρεονίνης, ρυθμίζεται από φωσφορυλίωση επί Ser2448 σε απόκριση προς ΡΙ3Κ /Akt ογκογόνο σηματοδότηση. mTOR ρυθμίζει την κυτταρική ανάπτυξη, τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό, την κυτταρική κινητικότητα, την επιβίωση των κυττάρων, την πρωτεϊνική σύνθεση, και μεταγραφή. Ως εκ τούτου, είναι πιθανό ότι η επίδραση του

HNF1A

-inactivation στην κυτταρική ανάπτυξη και απόπτωση είναι, τουλάχιστον εν μέρει, μέσω του μηχανισμού της ενεργοποίησης του μονοπατιού σηματοδότησης AKT /mTOR.

Η χρόνια παγκρεατίτιδα είναι ένας γνωστός παράγοντας κινδύνου για τον καρκίνο του παγκρέατος. Γονίδια που ρυθμίζουν παγκρεατική αναγέννηση μπορεί επίσης να συμμετέχει στην ανάπτυξη της χρόνιας παγκρεατίτιδας, και του παγκρέατος καρκινογένεση. Μια πρόσφατη μελέτη που διεξήχθη σε ένα ζωικό μοντέλο παγκρεατίτιδα έχει δείξει έναν τραυματισμό αποκρίνονται ρυθμισμένα προς τα κάτω την έκφραση του

HNF1A

σε κυψελιδικά κύτταρα [29], η οποία σχετίζεται με αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων κυψελοειδή και μειωμένη πεπτικά ένζυμα. Προφανώς HNF1A ελέγχει μεταγραφική προγράμματα ιστο-ειδική, διότι ενισχύει την ανάπτυξη των κυττάρων στα παγκρεατικά νησίδια αλλά καταστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων σε ηπατοκύτταρα [36]. Η αναστολή του κυτταρικού πολλαπλασιασμού σε κυψελιδικά κύτταρα και επιθηλιακά κύτταρα του πόρου θα μπορούσε να είναι ένας από τους σημαντικότερους μηχανισμούς που συνδέουν HNF1A σε παγκρεατικά καρκινογένεση. Μια άλλη πρόσφατη μελέτη έδειξε επίσης ότι η υπερέκφραση του

HNF1A

γονιδίου στο καρκίνο του παγκρέατος κυτταρικές σειρές ανάπτυξης ανέστειλε κυττάρων, που προκαλείται G

0 /G

1 σύλληψης και απόπτωσης [37]. Αυτές οι επιδράσεις συσχετίζονται με HNF1A επαγόμενη μειορύθμιση των γονιδίων του κυτταρικού κύκλου και μειωμένη έκφραση των αντι-αποπτωτικών γονιδίων [37].

Συμπερασματικά, έχουμε δείξει ότι

HNF1A

έκφραση μειώνεται σημαντικά σε ανθρώπινους όγκους του παγκρέατος αδενοκαρκίνωμα. Επιλεκτική φραγή του

HNF1A

από ειδικά siRNA προώθησε σημαντικά παγκρέατος τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων και αναστέλλει την απόπτωση in vitro. Έχουμε αποκαλύψει περαιτέρω ότι

HNF1A

νοκ ντάουν ενεργοποιεί Akt /mTOR μονοπάτι στον καρκίνο του παγκρέατος κυτταρικές σειρές σηματοδότησης. Τα ευρήματα αυτά υποστηρίζουν ένα πιθανό ογκοκατασταλτικό ρόλο του

HNF1A

στον καρκίνο του παγκρέατος.