Αφηρημένο

Ιστορικό

Η ικανότητα να επιλεκτική ανίχνευση και στοχεύουν τα καρκινικά κύτταρα που έχουν υποστεί epithelial- μεσεγχυματικά μετάβαση (ΕΜΤ) μπορεί να οδηγήσει σε βελτιωμένες μεθόδους για τη θεραπεία του καρκίνου, όπως ο καρκίνος του παγκρέατος. Η αναδιαμόρφωση της κυτταρικής γλυκοζυλίωσης προηγουμένως έχει συσχετισθεί με τη διαφοροποίηση των κυττάρων και μπορεί να αντιπροσωπεύει μια πολύτιμη κατηγορία μοριακοί στόχοι για ΕΜΤ.

Μεθοδολογία /Principal Εκτίμηση

Ως πρώτο βήμα προς την διερεύνηση της φύσης της γλυκοζυλίωσης μεταβολές στην EMT, χαρακτηρίσαμε την έκφραση της γλυκάνης που σχετίζονται με γονίδια σε τρεις

in-vitro

συστήματα μοντέλο που το καθένα αντιπροσώπευε μια συμπληρωματική πτυχή του παγκρέατος EMT καρκίνου. Τα μοντέλα αυτά περιλαμβάνονται: 1) TGFβ-επαγόμενη EMT, η οποία προέβλεπε μια ματιά στην ενεργό μετάβαση μεταξύ των κρατών? 2) μια ομάδα 22 παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές, οι οποίες αντιπροσωπεύονται τελική διαφοροποίηση κράτη της είτε σαν επιθηλιακά ή μεσεγχυματικά-όπως? και 3) ενεργά μετακινείται και σταθερές κυττάρων, η οποία προέβλεπε μια ματιά στο μηχανισμό της μετανάστευσης. Αναλύσαμε τα δεδομένα έκφρασης από μια λίστα των 587 γονιδίων που εμπλέκονται στη γλυκοζυλίωση (βιοσύνθεση, μεταφορά ζάχαρη, γλυκάνη-δεσμευτική, κλπ) ή EMT. Glycogenes τροποποιήθηκαν σε υψηλότερη επικράτηση από όλα τα άλλα γονίδια στα δύο πρώτα μοντέλα (ρ & lt? 0,05 και & lt? 0.005, αντίστοιχα), αλλά όχι στο μοντέλο της μετανάστευσης. Αρκετά λειτουργικά θέματα μοιράστηκαν μεταξύ του μοντέλου που προκαλείται-EMT και τον πίνακα γραμμή κυττάρων, καθώς και οι μεταβολές στα συστατικά της μήτρας και πρωτεογλυκάνες, η θείωση των γλυκοζαμινογλυκανών? μαννόζης μέλη της οικογένειας υποδοχέων? έναρξη της Ο-γλυκοζυλίωσης? και ορισμένων μορφών σιαλυλίωσης. αλλαγές πρωτεΐνη-επίπεδο επιβεβαιώθηκε με κηλίδα Western για την μαννόζη MRC2 υποδοχέα και του ενζύμου GALNT3 Ο-γλυκοζυλίωση, και κυτταρικής επιφάνειας αλλαγές θείωση επιβεβαιώθηκαν χρησιμοποιώντας βαφή Alcian Blue.

Συμπεράσματα /Σημασία

Αλλοιώσεις glycogenes είναι ένα κύριο συστατικό του ΕΜΤ καρκίνος και χαρακτηρίζονται από αλλαγές στα συστατικά της μήτρας, την θείωση του GAGs, μαννόζη υποδοχείς, Ο-γλυκοζυλίωση, και ειδικές σιαλυλιωμένη δομές. Τα αποτελέσματα αυτά παρέχουν ενδείξεις για τη στόχευση επιθετικό και ανθεκτικό στα φάρμακα μορφές του καρκίνου του παγκρέατος κύτταρα

Παράθεση:. Maupin KA, Sinha Α, Eugster Ε, Miller J, Ross J, Paulino V, et al. (2010) Έκφραση Glycogene Μεταβολές των συνδεδεμένων με καρκίνο του παγκρέατος Τα επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβαση σε συμπληρωματική Μοντέλο Systems. PLoS ONE 5 (9): e13002. doi: 10.1371 /journal.pone.0013002

Επιμέλεια: Roger Chammas, Universidade de São Paulo, Βραζιλία

Ελήφθη: 26, Απρίλη του 2010? Αποδεκτές: 30 Αύγ, 2010? Δημοσιεύθηκε: 27, Σεπτεμβρίου 2010

Copyright: © 2010 Maupin et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από το National Cancer Institute (www.cancer.gov) (R03CA139225 να BH, National Institutes of Health [ΝΙΗ] R01 CA132571 να VK, και ΝΙΗ R01 CA130940 NT), την αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία (www.cancer.org) ( CSM-116801 για VK), το Εθνικό Ινστιτούτο Νευρολογικών Διαταραχών και Εγκεφαλικού Επεισοδίου (www.ninds.nih.gov) (ΝΙΗ R01 NS042262 σε MB) και το Ινστιτούτο Ερευνών Andel Van (www.vai.org). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο καρκίνος του παγκρέατος έχει μία από τις φτωχότερες ποσοστά επιβίωσης για οποιαδήποτε σημαντική καρκίνου [1]. Η ακραία θνησιμότητα του καρκίνου του παγκρέατος σχετίζεται με την τάση του να διαδώσει σε πρώιμα στάδια πριν από τη διάγνωση [2], [3] και την αντοχή του στις χημειοθεραπευτικά [2], [4]. Η απόκτηση των μεταναστευτικών και ανθεκτικά σε φάρμακο γνωρίσματα σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα μπορεί να συμβεί με έναν τρόπο βήμα-βήμα, που συνοδεύεται από αύξηση των αλλαγών στις γενετική και μορφολογίες των καρκινικών κυττάρων. Αρχικού σταδίου και προ-κακοήθεις καταστάσεις πιστεύεται ότι αποτελείται από κύτταρα δυσπλαστικών εντός παγκρεατικών αγωγών [5], και η πρόοδος προς πόρου αδενοκαρκίνωμα χαρακτηρίζεται από πολλαπλασιαζόμενα επιθηλιακά καρκινικά κύτταρα συναρμολογούνται στην πόρου δομές μορφής σωλήνα που περιβάλλεται από ινωτική στρώμα. Η μεταστατική διάδοση του καρκίνου του παγκρέατος απαιτεί κύτταρα για να ξεφύγει από τα επιθηλιακά πορογενές δομές και να λάβει σχετικά με τα χαρακτηριστικά των μεταναστευτικών, μεσεγχυματικά κύτταρα. Η μετάβαση αυτή συνεπάγεται τεράστιες αναδιαμόρφωση του κυττάρου και είναι πιθανό οδηγείται από γενετικών ανωμαλιών, εξωκυτταρικά σήματα, και την ενεργοποίηση των προγραμμάτων διαφοροποίησης στα καρκινικά κύτταρα. Που χαρακτηρίζουν τις μοριακές αλλαγές που σχετίζονται με την φαινοτυπική διακόπτη σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα από επιθηλιακά μοιάζει με μεσεγχυματικά-όπως χαρακτηριστικά θα παρέχει γνώσεις σε λεωφόρους για τον εντοπισμό και τη στόχευση αυτής της μετατροπής.

Αυτή η σημαντική αλλαγή φαινοτυπική σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα μπορεί να είναι οδηγείται από το μεταβάσεως επιθηλίου-μεσεγχύματος (ΕΜΤ). EMT είναι ένα βιολογικό πρόγραμμα που συντονίζει την μετατροπή κυτταρικής διαφοροποίησης από επιθηλιακά χαρακτηριστικά της ισχυρής προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου, την πολικότητα, και την ομαλή μορφολογία με τα χαρακτηριστικά μεσεγχυματικά της ελάχιστης κυττάρου-κυττάρου επαφές, απώλεια της πολικότητας, και αυξημένη προεξοχές κυττάρου [2] , [6], [7], [8], [9]. Η EMT ενεργοποιείται συνήθως στην ανάπτυξη και την επούλωση τραυμάτων κατά την διάρκεια αναδιαμόρφωση των ιστών, αλλά πιστεύεται ότι ενεργοποιείται ασυνήθιστα από ορισμένους τύπους καρκινικών κυττάρων να παρέχει τα χαρακτηριστικά που σχετίζονται με ισχυρή θανατηφόρα καρκίνους. Πολλαπλές γραμμές αποδείξεως υποστηρίζουν τη σημασία της EMT στην προώθηση του παγκρέατος επιθετικότητα του καρκίνου. Η γενική ιστολογική απώλεια της κυτταρικής διαφοροποίησης είναι μια ιδιαίτερα ακριβή προγνωστικό δείκτη κακής έκβασης σε παγκρεατικού καρκίνου [10], [11], και οι ειδικοί δείκτες ΕΜΤ μειωμένης Ε-καδερίνης και αυξημένη βιμεντίνης συσχετίζονται με κακή επιβίωση [12], [13] και εισβολή [14]. μοντέλα ποντικών με καρκίνο του παγκρέατος ανακεφαλαιώνουν τη συγκεκριμένη σχέση [15]. Σε συμφωνία με τις διαπιστώσεις αυτές, η επαγωγή ενός παράγοντα μεταγραφής που ονομάζεται σαλιγκάρι, η οποία ελέγχει Ε-καδερίνης καταστολή, οδηγεί σε αυξημένη μετάσταση και χημειοαντίσταση των παγκρεατικών καρκινικών κυττάρων [16]. Επιπλέον, οι μεσεγχυματικά-όπως τα καρκινικά κύτταρα μπορεί να είναι πιο ανθεκτικά στα φάρμακα από τους ομολόγους τους επιθηλιακά-όπως, όπως προτείνεται από την συσχέτιση μεταξύ χαρακτηριστικών Γεμσιταβίνη-αντίσταση και μεσεγχυματικών [17] και την απώλεια της ευαισθησίας του EGFR αναστολέα σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα που έχουν έχασε επιθηλιακά-όπως χαρακτηριστικά [8]. Εντατικές έρευνες έχουν αποκαλύψει πολλές από τις ρυθμιστικών μηχανισμών και μοριακά χαρακτηριστικά αυτής της μετατροπής [2], [6], [7], [8], [9], αλλά οι παράγοντες in-vivo στην εργασία EMT καρκίνο και ότι οι σχετικές να παγκρέατος εξέλιξης του καρκίνου δεν είναι σαφείς.

η γλυκοζυλίωση ενός καρκινικού κυττάρου μπορεί να αναδιαμορφωθεί σημαντικά κατά τη διάρκεια της EMT, αν και η φύση αυτής της ένωσης δεν έχει χαρακτηριστεί. Η γλυκοζυλίωση είναι μια δυναμική διαδικασία που περιλαμβάνει μια συντονισμένη αλληλεπίδραση μεταξύ των διαφόρων γλυκοζυλοτρανσφεράσες και συναφών ενζύμων στο ενδοπλασματικό δίκτυο και η συσκευή Golgi [18]. Οι Glycan δομών που εμπλέκονται στην αναδίπλωση της κατάλληλης πρωτεΐνης [19], [20], [21], η ενδοκυτταρική διακίνηση [18], [20], [22], την ανάπτυξη και τη διαφοροποίηση των κυττάρων, [20], [23], την προσκόλληση και τη μετανάστευση [18], [24], και με βάση τα κύτταρα ανοσίας [20], [25], μεταξύ άλλων λειτουργιών. Οι αλλαγές σε γλυκάνες έχουν ανιχνευθεί και εμπλακεί σε διάφορες παθολογικές καταστάσεις [23], [26]. Επιπλέον, οι δομές υδατάνθρακα επί της κυτταρικής επιφάνειας και εκκρίνονται πρωτεΐνες είναι καλοί δείκτες της κυτταρικό τύπο και την κατάσταση, καθώς αλλάζουν ειδικά σε σχέση με την ανάπτυξη [27], [28], κυτταρική διαφοροποίηση και ενεργοποίηση [29], [30], και του μετασχηματισμού [31]. Ως εκ τούτου υποθέσαμε ότι η παγκρεατική EMT καρκίνος χαρακτηρίζεται από συγκεκριμένες μεταβολές γλυκοζυλίωσης που παίζουν λειτουργικό ρόλο στην διαφοροποίηση των καρκινικών κυττάρων ή τη μετανάστευση.

Ως αρχικό βήμα στη δοκιμή αυτή η υπόθεση, εξετάσαμε την έκφραση των γονιδίων γλυκοζυλίωσης που συνδέονται σε τρεις συστήματα μοντέλο της EMT ή τη μετανάστευση. Παρακολουθώντας τη γονιδιακή έκφραση είναι πειραματικά πιο προσιτό από συνολικά χαρακτηρίζουν γλυκάνης δομών που σχετίζονται με κάθε πρότυπο σύστημα, και γι ‘αυτό επιλέξαμε αυτή τη διαδρομή για μια αρχική έρευνα. Αν και δεν είναι δυνατό να συναχθεί γλυκάνης δομές απλά από γονιδιακή έκφραση glycogenes, οι μεταβολές της έκφρασης στην glycogenes παρέχουν πληροφορίες σχετικά με τις μεγάλες διαρθρωτικές αλλαγές, καθώς οδηγεί σε σημεία-στόχους για θεραπευτική παρέμβαση. μεταβολές έκφρασης σε glycogenes έχουν προηγουμένως εξεταστεί χρησιμοποιώντας εστιασμένη microarrays ή συστοιχίες PCR σχεδιασμένα για να μετρούν ειδικά τις σχετικές μεταγραφές [32], [33], [34]. Εδώ επιδεικνύουν την χρήση της έκφρασης ολόκληρου γονιδιώματος προφίλ για να συλλάβει τις ίδιες πληροφορίες με την επιλεκτική ανάλυση των δεδομένων από μια λίστα γονίδιο στόχο των 587 γλυκάνης που σχετίζονται με γονίδια (συμπεριλαμβανομένων των γονιδίων που σχετίζονται με EMT). Ένα πλεονέκτημα αυτής της προσέγγισης είναι η δυνατότητα να χρησιμοποιήσει σταθερές έκφραση προφίλ πλατφόρμες, καθώς και τα ιστορικά δεδομένα που δεν δημιουργήθηκε ειδικά για να εξετάσει glycogenes. Χρησιμοποιήσαμε συστήματα κυτταρικής καλλιέργειας στα οποία ΕΜΤ θα μπορούσε να ελέγχεται από διέγερση με ΤΟΡβ (μοντέλο 1), ή στο οποίο το τερματικό κατάσταση διαφοροποίηση μιας ποικιλίας κυτταρικών σειρών θα μπορούσαν να ταξινομηθούν ως είτε σαν επιθηλιακά ή μεσεγχυματικά-όπως (υπόδειγμα 2). Επιπλέον, εξετάσαμε τα πρότυπα γονιδιακής έκφρασης σε κύτταρα που είτε ενεργά μεταναστεύει ή στάσιμη (μοντέλο 3). Κάθε μοντέλο του συστήματος αντιπροσωπεύει μια διαφορετική πτυχή της συμπεριφοράς των κυττάρων που σχετίζονται με EMT: ενεργή μετάβαση μεταξύ των κρατών, τερματικό κρατών διαφοροποίηση, ή τη δραστηριότητα της μετανάστευσης. Αναφέρουμε εδώ τις μεγάλες αλλαγές στο γλυκάνης που σχετίζονται με την έκφραση γονιδίων που σχετίζονται με καθένα από τα συστήματα μοντέλου και που είναι κοινά μεταξύ των συστημάτων μοντέλου.

Αποτελέσματα

έκφραση Glycogene σε ΤΟΡβ-επαγόμενη EMT

Το πρώτο σύστημα μοντέλο στο οποίο εξετάσαμε glycogene αλλαγές έκφραση ήταν ΤΟΡβ επαγωγή ΕΜΤ στις κυτταρικές σειρές Panc-1 και Α549. Η Α549 κυτταρική σειρά δεν προέρχεται από καρκίνο του παγκρέατος, αλλά συμπεριλήφθηκε για την παροχή πληροφοριών σχετικά με την γενικότητα των ενώσεων με EMT. Επιπλέον, με την εξέταση για τα γονίδια που αλλάζουν στις δύο κυτταρικές σειρές, μειώσαμε τον κατάλογο των υποψηφίων γονιδίων. θεραπεία ΤΟΡβ οδήγησε σε διάλυση προσκόλλησης κυττάρου-κυττάρου και αυξήσεις στην άτρακτο προεξοχές και στις δύο γραμμές κυττάρων (Σχήμα S1). Μετρήσεις έκφραση ολόκληρου γονιδιώματος ελήφθησαν για τα επεξεργασμένα και μη επεξεργασμένα κύτταρα χρησιμοποιώντας τσιπ γονιδίων Affymetrix. Για μια εστιασμένη ανάλυση σε γονίδια που παρουσιάζουν ενδιαφέρον, χρησιμοποιήσαμε τη λίστα των 587 γονιδίων που σχετίζονται με γλυκοζυλίωση και μονοπάτια EMT-συνδέονται (βλέπε πίνακα S1).

Θα εξεταστεί, πρώτον, αν τα γονίδια γλυκοζυλίωσης που σχετίζονται παρουσίασαν υψηλότερο ποσοστό έκφρασης αλλαγές από ό, τι όλα τα άλλα γονίδια (Πίνακας 1), η οποία μπορεί να υποδεικνύει έναν εξέχοντα ρόλο για αλλαγές γλυκοζυλίωσης στην EMT. Μεταξύ όλων των γονιδίων, 1524 μοναδικές στόχους Affymetrix άλλαξε έκφραση τόσο Panc-1 και Α549 μετά την επεξεργασία με ΤΟΡβ. Δεδομένου ότι σχετίζονται γλυκάνης γονιδίων μας εκπροσωπείται 1,5% του συνόλου των μοναδικών στόχων Affymetrix U133 Plus 2.0, τυχαία εκπροσώπηση του glycogenes προβλέπει μια αντίστοιχη 1,5% αναπαράσταση του glycogenes (ή 23 γονίδια) μεταξύ εκείνων που άλλαξε την έκφραση. Ωστόσο, 40 από τα 1524 γονίδια (2,6%) ήταν glycogenes από κατάλογο στόχων μας. Αυτή η διαφορά ήταν σημαντική από την chi-square ανάλυση (X

2 = 13,05, p & lt? 0,05). Αυτό το αποτέλεσμα πρότεινε έναν εμπλουτισμό της μεταγραφικής ρύθμισης του γλυκάνης που συνδέονται με γονίδια σε ΤΟΡβ-επαγόμενη EMT.

Η

Η εξέταση των γονιδίων που μεταβλήθηκαν περισσότερο από 1,5 φορές σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Πίνακες 2 και 3 ) αποκάλυψε κάποια λειτουργικά θέματα. Η μεγαλύτερη αλλαγή ήταν στην πρωτεογλυκάνη SPOCK1, το οποίο περιέχει πλευρικές αλυσίδες γλυκοζαμινογλυκάνης της ηπαρίνης και η χονδροϊτίνη-θειική [35]. Σχετικά με αυτή την πρωτεΐνη, τα γονίδια που τροποποιούν γλυκοζαμινογλυκάνη θείωση ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω, συμπεριλαμβανομένων SULF2, CHST3, και CHST11 και HAS2 ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω, η οποία εμπλέκεται στη σύνθεση της γλυκοσαμινογλυκάνης υαλουρονάνη. Ένας υποδοχέας λεκτίνη-όπως εμπλέκονται στην κυτταρική κινητικότητα και εξωκυττάρια μήτρα αναδιαμόρφωση, MRC2, ρυθμίζεται αυξητικά. Μεταβολές στην κίνηση της Ο-γλυκοζυλίωσης υποδεικνύονται από GALNT2 και GALNT10 αλλαγές και αλλαγές προσκόλληση μήτρας που αντιπροσωπεύεται από τον προς τα πάνω ρύθμιση αρκετών ιντεγκρίνες και την πρωτεΐνη μήτρας LAMC2 (γάμμα 2 λαμινίνη). Άλλα αυξημένα γονίδια αντιπροσωπεύουν EMT και TGF λειτουργίες σηματοδότησης. Οι έξι γονίδια με μειωμένη έκφραση έδειξε καμία ιδιαίτερη εμπλουτισμό σε εξειδίκευση, με ST8SIA4 είναι η μόνη μειωμένη γλυκοζυλοτρανσφεράση.

Η

Glycogene έκφραση σε μια γραμμή κυττάρων καρκίνο του παγκρέατος Panel

Το δεύτερο μοντέλο του συστήματος ήταν ένα πάνελ 22 παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές. Μια ποικιλία των μορφολογιών κυττάρου και συμπεριφορών προσκόλληση παρατηρήθηκε μεταξύ των κυτταρικών σειρών (Εικόνα 1). Ορισμένες κυτταρικές σειρές έχουν ισχυρή επιθηλιακά χαρακτηριστικά (στρογγυλεμένες μορφολογία και πολυάριθμες επαφές κυττάρου-κυττάρου), ενώ άλλα είναι σαφώς μεσεγχυματικά-όπως (αδράχτι-όπως προβολές και λίγες συμφύσεις μεταξύ κυττάρων). Ως εκ τούτου, επιδιώξαμε να εντοπίσει τα χαρακτηριστικά έκφρασης του γονιδίου που διαφοροποιούν τις δύο αυτές συμπεριφορές. Η σύγκριση αυτή δεν αφορά άμεσα EMT, αλλά μάλλον δίνει γνώσεις σχετικά με τις τερματικές καταστάσεις διαφοροποίηση που σχετίζεται με την μεσεγχυματικών και επιθηλιακών φαινοτύπων.

Τα μεσεγχυματικά-όπως κυτταρικές σειρές που παρουσιάζονται στις δύο πρώτες σειρές, και επιθηλιακά-όπως κυτταρικές σειρές βρίσκονται στα κάτω δύο σειρές. Σημειώστε την αυξημένη σκέδαση κυττάρων και της ατράκτου, όπως φαίνεται στο προεξοχές των μεσεγχυματικών κυττάρων που μοιάζουν σε σύγκριση με την αυστηρότερη προσκόλληση κυττάρου-κυττάρου και περισσότερο σφαιρικό χαρακτηριστικό σχήμα των επιθηλιακών κυττάρων. Οι εικόνες που συλλέχθηκαν από μικροσκόπιο αντίθεσης φάσης σε μεγέθυνση 10x.

Η

Είμαστε κατατάσσονται αρχικά τις κυτταρικές σειρές είτε ως επιθηλιακά-ομοειδών ή μεσεγχυματικά-όπως με βάση την μορφολογία και την ομαδοποίηση (Σχήμα 1). Κυτταρικές γραμμές όπως Capan-2, ΗΡΑΡ-ΙΙ, και BXPC-3 έχουν πυκνή, στρογγυλεμένες αποικίες και είχαν σαφώς χαρακτηριστεί ως επιθηλιακά-όπως. Στο άλλο άκρο του φάσματος MiaPaCa-2 και Mpanc-96 έδειξε σαφώς τα χαρακτηριστικά μεσεγχυματικά των αλληλεπιδράσεων χαμηλού κυττάρου-κυττάρου και της ατράκτου, όπως κυτταρικές προεξοχές. Άλλες κυτταρικές γραμμές ήταν πιο δύσκολο να ταξινομήσει με αυτά τα χαρακτηριστικά, που δείχνει μικτή ή μερική χαρακτηριστικά κάθε τύπου. Ως εκ τούτου, εξέτασαν την έκφραση της ΕΜΤ-σχετικών γονιδίων, ως μέσο ταξινόμησης (Εικόνα S2). Μεταξύ αυτών των γονιδίων (βλέπε Εικόνα S2 για την πλήρη λίστα) ο παράγοντας μεταγραφής ZEB1 αντιστοιχούσε πιο ξεκάθαρα να μορφολογία και συσχετίζεται έντονα με τα κάτω ρύθμιση του επιθηλιακού δείκτη, Ε-καδερίνης (CDH-1) [6], [7], [8 ], [9] στο μεσεγχυματικά κύτταρα που μοιάζουν. Ένα εντυπωσιακό διχοτόμηση των κυττάρων που ήταν αρνητικά ή θετικά για ZEB1 ήταν εμφανής, διαιρώντας τις κυτταρικές σειρές σε έξι που ήταν μεσεγχυματικά-όπως και 16 που είχαν επιθηλιακό παρόμοια. Με βάση αυτή την κατάταξη, η έκφραση της E-cadherin (CDH-1) ήταν σημαντικά μέχρι ρυθμιζόμενη (p≤0.01) και την έκφραση της βιμεντίνης (VIM) ήταν σημαντικά προς τα κάτω ρύθμιση (p≤0.01) στα επιθηλιακά κύτταρα. Το μοτίβο έκφρασης πρωτεΐνης αυτών των δύο γονιδίων επιβεβαιώθηκε με στύπωμα Western (Εικόνα 2). Ως εκ τούτου χρησιμοποιήσαμε αυτή την ταξινόμηση στις επόμενες αναλύσεις.

Τα υλικά λύσεως συνελέγησαν από τις επιλεγμένες κυτταρικές σειρές, κλασματώθηκαν με SDS-PAGE, και ανιχνεύθηκαν με στύπωση Western. Οι υπογράμμισε ζώνες είναι στα αναμενόμενα μοριακά βάρη των 110 kD για το E-cadherin, 57 kD για βιμεντίνη, και 42 kD για ακτίνη.

Η

Εμείς εξέτασε κατά πόσον γλυκάνη που σχετίζονται με γονίδια ήταν διαφορετικά μεταξύ των ομάδων σε ένα υψηλότερο ποσοστό από ό, τι όλα τα άλλα γονίδια (Πίνακας 1). Αυστηρά κατά τύχη, δεδομένου ότι σχετίζονται γλυκάνης γονίδιά μας αντιπροσώπευαν το 1,5% του συνόλου των μοναδικών στόχων Affymetrix U133 Plus 2.0, περιμέναμε ένα αντίστοιχο 1,5% αναπαράσταση glycogenes στον κατάλογο των συνολικών αλλάζει τα γονίδια. Ωστόσο, από τα 3675 ανιχνευτές που έδειξαν σημαντικά αλλαγμένα επίπεδα της έκφρασης (p ≤ 0,05) μεταξύ των μεσεγχυματικών κυττάρων που μοιάζουν και τα επιθηλιακά κύτταρα όμοια, 87 (2,37%) ήταν glycogenes από κατάλογο στόχων μας. Μια ανάλυση chi-square έδειξαν τα αποτελέσματα αυτά να είναι ιδιαίτερα σημαντική (X

2 = 18,9, p≤0.005). Η τάση αυτή συνεχίστηκε σε υψηλότερα επίπεδα σημαντικότητας ως 1212 μοναδικές στόχους Affymetrix έδειξε σημαντικά διαφορετικά επίπεδα έκφρασης (p≤0.01). Των στόχων αυτών, 30 (2,48%) ήταν στη λίστα μας ως glycogenes, επίσης, μια σημαντική διαφορά από Chi-square ανάλυση (X

2 = 8,12? P≤0.005). Αυτή η ανάλυση πρότεινε έναν εμπλουτισμό της μεταγραφικής ρύθμισης του γλυκάνης που σχετίζονται με τα γονίδια στη διαφοροποίηση των κυττάρων μεταξύ μεσεγχυματικών και επιθηλιακών φαινοτύπους.

Οι αλλοιώσεις γονιδιακής έκφρασης σε αυτό το μοντέλο του συστήματος συνοψίζονται στους Πίνακες 4 και 5. Παρόμοιο με το παραπάνω, μια πρωτεογλυκάνη ήταν η πιο σημαντικά υπερεκφράζεται στα μεσεγχυματικά κύτταρα που μοιάζουν, σε αυτή την περίπτωση VCAN (βερσικάνη), και τα γονίδια που ρυθμίζουν την θείωση των γλυκοζαμινογλυκανών ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω, συμπεριλαμβανομένων SULF2, CHST7, SGSH, και NDST2. τροποποίηση της μήτρας εκπροσωπήθηκε επίσης από την προς τα άνω ρύθμιση της VIM (βιμεντίνη) και LAMA4 (alpha 4 λαμινίνη). Σε αντίθεση με το μοντέλο που προκαλείται-EMT, γονίδια που εμπλέκονται σε διακλάδωση ή την παράταση γλυκάνης αλυσίδες επάνω ρυθμισμένη στα μεσεγχυματικά κύτταρα που μοιάζουν, συμπεριλαμβανομένων MGAT5B, ST3GAL2, ST6GALNAC4, POMGNT1, και B3GNT1. Τα μεσεγχυματικά κύτταρα που μοιάζουν παρουσίασαν επίσης εντυπωσιακή ρύθμιση προς τα κάτω σε μερικά γονίδια, κυρίως GALNT3, η οποία εκκινεί Ο-γλυκοζυλίωση. GALNT3 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω σε όλα τα έξι μεσεγχυματικά κύτταρα που μοιάζουν με μέση μείωση της τάξης του περίπου 1000-φορές. Δύο λεκτίνες τύπου C, επίσης, ήταν κάτω-ρυθμίζονται, LY75 και CLEC3A. Τα πρότυπα έκφρασης αυτών των γονιδίων σαφή διάκριση των μεσεγχυματικών-όπως κυτταρικές σειρές από το επιθηλιακό-όπως (Σχήμα 3)

συμπεριλήφθηκαν

γονίδια που είχαν σημαντικά διαφορετικές (ρ & lt? 0,01). Επίπεδα έκφρασης μεταξύ των μεσεγχυματικών-όπως ( ετικέτες στήλη κόκκινο χρώμα) και τα επιθηλιακά-όπως (ετικέτες στήλη μαύρου χρώματος) κυτταρικές σειρές. Οι τιμές έκφρασης log μετασχηματίστηκαν (βάση 10) και διάμεση με επίκεντρο σειρά. Η αξία της κάθε τετραγωνικό υποδεικνύεται από το μπαρ το χρώμα

Η

Η

έκφραση Glycogene στο θέμα της μετάβασης και σταθερές παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα

Το τρίτο πρότυπο σύστημα ήταν μια σύγκριση. ενεργά μεταναστεύοντα κύτταρα σε στάσιμη κύτταρα [36]. Panc-1 και MiaPaCa-2 κύτταρα σπάρθηκαν όσο περίπου 1 mm ορίζεται περιφέρεια και τα κύτταρα αφέθηκαν να μεταναστεύσουν για 48 ώρες. Παρατηρήθηκαν δύο διακριτές μορφολογικές πληθυσμούς. Τα κύτταρα στην περιφέρεια του συμπλέγματος κυττάρου μεταναστεύσει μακριά από την περιοχή υψηλής πυκνότητας κυττάρων (RIM) και πήρε ένα κλασικό φαινότυπο μεσεγχυματικών με άτρακτο σαν προεξοχές και απώλεια των κυττάρων στην προσκόλληση των κυττάρων. Τα κύτταρα που παρέμειναν στην πυκνοκατοικημένη κέντρο (πυρήνας) έδειξε μεγαλύτερο ενδοκυτταρικής προσκόλλησης και ήταν πιο στρογγυλεμένη στην εμφάνιση. Τα κύτταρα συλλέχθηκαν σε «χείλος» και ομάδες «πυρήνα» με την επιλεκτική συλλογή από κάθε μία από τις δύο αυτές ομάδες.

2778 μοναδικές στόχους άλλαξε έκφραση τουλάχιστον +/- 0,25 φορές τόσο στην μεταναστεύουν MiaPaCa-2 και Panc-1 σε σύγκριση με τους ομολόγους τους σε στάση (Πίνακας 1). Δεδομένου ότι τα γονίδια γλυκάνη που σχετίζονται μας αντιπροσώπευαν το 3,0% του συνόλου των μοναδικών Agilent Σύνολο Ανθρώπινου Γονιδιώματος μικροσυστοιχιών Kit (4 × 44K ανιχνευτές), τυχαία πιθανότητα προέβλεψε ένα αντίστοιχο 3,0% αναπαράσταση glycogenes στον κατάλογο των γονιδίων που άλλαξε. Ότι το επίπεδο της εκπροσώπησης πράγματι παρατηρήθηκε, καθώς 84 από τα 2778 γονίδια (3,0%) με αλλοιωμένη επίπεδα έκφρασης ήταν glycogenes από κατάλογο στόχων μας. Μια ανάλυση chi-square αποκάλυψε ότι η διαφορά μεταξύ της παρατηρούμενης αλλαγής σε glycogenes δεν ήταν σημαντική σε σύγκριση με την αναμενόμενη τιμή. Αυτά τα αποτελέσματα δεν υποδεικνύουν τον εμπλουτισμό της ρύθμισης της γλυκάνης που σχετίζονται με τα γονίδια για τον χαρακτηρισμό διαφορές μεταξύ ενεργά μεταναστεύουν και σταθερές κύτταρα.

Λιγότερες γονίδια έδειξαν διαφορική έκφραση μεταξύ των ομάδων σε σχέση με τα παραπάνω μοντέλα (Πίνακες 6 και 7). Οκτώ γονίδια στόχοι αυξημένη έκφραση κατά περισσότερο από 1,5 φορές τόσο μεταναστεύουν MiaPaCa-2 και Panc-1. Δεν γονίδια αυξήθηκε κατά περισσότερο από δύο φορές σε δύο τύπους κυττάρων. Δεν σαφή θέματα σε λειτουργία glycogene ήταν ορατή μεταξύ των γονιδίων με αυξημένη έκφραση. Εννέα γονίδια στόχους μειωμένα επίπεδα έκφρασης πάνω από 1,5 φορές σε τόσο Μεταναστεύουν MiaPaCa-2 και Panc-1. Δύο σχετίζονται με την απομάκρυνση της μαννόζης στην βιοσύνθεση Ν-γλυκανών, MAN1A2 και MANBA. Η βλεννίνη MUC12 ήταν το μόνο γονίδιο με μειωμένη έκφραση περισσότερο από δύο φορές σε δύο τύπους κυττάρων.

Η

Shared Γονίδια και Λειτουργική Θέματα

επόμενο διερευνηθεί κατά πόσον ορισμένα γονιδιακής έκφρασης αλλαγές ήταν κοινή μεταξύ δύο ή περισσότερα από τα συστήματα μοντέλου. Μια τέτοια ανάλυση είναι χρήσιμη για να παρέχει περισσότερη καθοδήγηση σχετικά με το ποια γονίδια είναι σημαντικά σε πολλές πτυχές της EMT ή είναι λειτουργικά σημαντικό σε διαδικασίες που σχετίζονται με την EMT. Η επικάλυψη μεταξύ των συστημάτων μοντέλο ήταν μικρή. Κατά τη σύγκριση της ΤΟΡβ-επαγόμενη EMT και τον πίνακα κυτταρική γραμμή, μόνο τρία γονίδια ήταν κοινά: ZEB1 και SULF2 ρυθμίστηκαν προς τα πάνω και στα δύο μοντέλα, και Cdh1 μειώθηκε και στις δύο. Χρησιμοποιώντας τα δεδομένα μόνο από την κυτταρική σειρά Panc-1 στο ΤΟΡβ-επαγόμενη και μεταναστεύουν μοντέλα κυττάρου, ST6GALNAC4 αυξηθεί και Pigm μειώθηκε σε όλα τα συστήματα μοντέλου. Αυτά τα αποτελέσματα δείχνουν ότι ενώ οι glycogenes μεταβάλλεται σε κάθε μοντέλο και είναι ιδιαίτερα εμπλουτισμένα σε επαγόμενη-ΕΜΤ και τον πίνακα κυτταρική γραμμή, τα συγκεκριμένα γονίδια που εμπλέκονται σε κάθε αποκλίνουν μεταξύ των συστημάτων.

Αν και πολλά από τα γονίδια ήταν μεταβληθεί διαφορετικές μεταξύ του μοντέλου που προκαλείται-EMT και πάνελ κυτταρική γραμμή, πολλά λειτουργικά θέματα ήταν παρόντες και στα δύο. Η πιο κυρίαρχη κοινόχρηστο θέμα ήταν η διαμόρφωση της γλυκοσαμινογλυκάνης συστατικού (GAG) της εξωκυττάριας μήτρας. SPOCK1 και VCAN (βερσικάνη) είναι και οι δύο πρωτεΐνες μήτρας που φέρει αλυσίδες GAG, και τα δύο συστήματα εμφανίστηκε ρύθμιση των γονιδίων που προσθέτουν και να πάρει θειική από αυτές τις αλυσίδες, συμπεριλαμβανομένων SULF2, CHST3, CHST11, HAS2, CHST7, SGSH και NDST2. Ένα μπλε της Αλσατίας προσδιορισμός για να χαρακτηρίσει περαιτέρω το συνολικό επίπεδο θείωση μεταξύ του επιθηλίου και μεσεγχυματικά-όπως κυτταρικές σειρές, καθώς και μετά την επαγωγή της ΕΜΤ σε Panc-1 με τον ΤΟΡβ (Σχήμα 4). Μια σημαντική αύξηση της συνολικής θείωση παρατηρήθηκε για τις κυτταρικές σειρές μεσεγχυματικών-σαν (ρ = 1,29 × 10

-5). Επαγωγή EMT στο Panc-1 από TGFβ συνέχισε την τάση της να αυξήσει σημαντικά τα συνολικά επίπεδα της θειικής ομάδας (p = 0,027). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαιώνουν κυτταρικές αλλαγές σούλφωσης για τα δύο συστήματα μοντέλο στο οποίο είχαν προταθεί από την έκφραση του γονιδίου.

(Α) RT-PCR πραγματοποιήθηκε σε λύματα από τις υποδεικνυόμενες κυτταρικές γραμμές, και οι εντάσεις των ζωνών που αντιστοιχούν στην αναμενόμενη μέγεθος για κάθε γονίδιο υπολογίστηκαν ποσοτικά. t-δοκιμασία κατά Student (αποτελέσματα δίδονται από τον π τιμή) πραγματοποιήθηκε σύγκριση των εντάσεων ζώνης μεταξύ των κυτταρικών σειρών μεσεγχυματικών-σαν (με έντονους χαρακτήρες) και των επιθηλιακών κυτταρικών σειρών. Επιπλέον, ένας συσχετισμός υπολογίστηκε (αποτελέσματα δίδονται από την τιμή r) μεταξύ των αποτελεσμάτων RT-PCR και τα δεδομένα μικροσυστοιχίας. Αφυδρογονάση 3-φωσφορικής αφυδρογονάσης (GAPDH) χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος cDNA φόρτωσης. (Β) Σύγκριση των επιπέδων της πρωτεΐνης GALNT3 με κηλίδα Western σε επιλεγμένες παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές. Τα υλικά λύσεως συνελέγησαν από τις επιλεγμένες κυτταρικές σειρές, κλασματώθηκαν με SDS-PAGE, και ανιχνεύθηκαν με στύπωση Western. Μεσεγχυματικά-όπως κυττάρων επισημαίνονται με έντονους χαρακτήρες. Οι ζώνες είναι επισημαίνονται στα αναμενόμενα μοριακά βάρη 73 kD για GALNT3 και 42 kD για ακτίνη. επίπεδα (C) MRC2 πρωτεΐνη μετράται με κηλίδα Western σε ΤΟΡβ κατεργασμένα και ακατέργαστα κύτταρα. Οι κυτταρικές γραμμές είτε εκτέθηκαν σε 5 ng /mL ΤΟΡβ ή χωρίς επεξεργασία υπό στέρηση ορού για 72 ώρες πριν από την λύση των κυττάρων. Οι υπογράμμισε ζώνες είναι στα αναμενόμενα μοριακά βάρη των ~167 kD για MRC2 και 42 kD για ακτίνη.

Η

Ένα άλλο θέμα στο κοινό μεταξύ του μοντέλου που προκαλείται-EMT και τον πίνακα κυτταρική γραμμή ήταν οι μεταβολές lectin- σαν υποδοχείς της οικογένειας υποδοχέα μαννόζης. Τα τέσσερα μέλη αυτής της οικογένειας, MRC1, MRC2, LY75, και CD302, είναι διαμεμβρανικές ενδοκύττωσης υποδοχείς με πολλαπλούς τομείς σύνδεσης σε υδρογονάνθρακα. MRC2 ρυθμίζεται αυξητικά και CD302 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω στο μοντέλο επαγόμενης-ΕΜΤ και LY75 ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω στον πίνακα κυτταρική γραμμή. Τα δύο μοντέλα EMT μοιράστηκε επίσης μεταβολές μέλος της οικογένειας τρανσφεράσης Ν-ακετυλο γαλακτοζαμίνη (ΟαΙΝΑο), τα οποία καταλύουν την αρχική προσθήκη του ΟαΙΝΑο σε ένα υπόλειμμα σερίνης ή θρεονίνης στην βλεννίνη τύπου Ο-συνδεδεμένη γλυκοζυλίωση. GALNT2 και GALNT10 ήταν ρυθμισμένα προς τα πάνω σε επαγόμενη EMT, και GALNT3 ήταν ο ισχυρότερος διαχωριστής των επιθηλιακών-όπως και μεσεγχυματικά κύτταρα που μοιάζουν στον πίνακα κυτταρική γραμμή, με την έκφραση πτώση κάτω μετρήσιμη επίπεδα στα μεσεγχυματικά κύτταρα (Σχήμα 4).

Validation of Gene Expression διαφορές

Η έκφραση του γονιδίου απόκλιση στις κυτταρικές σειρές μεσεγχυματικών-όπως και επιθηλιακά-όπως επιβεβαιώθηκε για ορισμένα γονιδίων χρησιμοποιώντας RT-PCR και Western Blot (Σχήμα 5). Οι συσχετίσεις μεταξύ της RT-PCR και τα αποτελέσματα μικροσυστοιχιών ήταν γενικά σταθερή, με τις ισχυρότερες συσχετίσεις δει για GALNT3, 0,912? ZEB1, 0,774? GMPPA, 0,735? και MAN2B2, 0.713? και πιο αδύναμες συσχετίσεις για ST3GAL6, 0.509? και PMM1, 0.415. αλλαγές πρωτεΐνη-επίπεδο επιβεβαιώθηκε με Western Blot για GALNT3 και MRC2. ανίχνευση GALNT3 ήταν θετικό για τις επιθηλιακές κυτταρικές γραμμές BXPC-3, ΗΡΑΡ II και SU86.86 ενώ εξακολουθούν να μην εντοπίζονται στα μεσεγχυματικά-όπως κυτταρικές σειρές MiaPaCa-2, Mpanc-96, και Panc-1. MRC2 ανιχνεύθηκε μόνο σε Α549, Panc-1 και MiaPaCa-2 και έδειξαν αυξημένα επίπεδα μετά τη θεραπεία με ΤΟΡβ σε αυτές τις τρεις κυτταρικές σειρές. Δεν υπήρχε ανιχνεύσιμο επίπεδο MRC2 για BXPC-3 ή Hs766T παρουσία ή απουσία του ΤΟΡβ.

Ένα μπλε της Αλσατίας δοκιμασία εκτελέστηκε σε κυτταρολύματα από τις υποδεικνυόμενες κυτταρικές σειρές, και η συνολική θείωση για κάθε κυτταρική γραμμή ήταν ποσοτικοποιείται με μέτρηση της απορρόφησης της χρωστικής στα 600 nm. t-δοκιμασία κατά Student (αποτελέσματα δίδονται από τον π τιμή) πραγματοποιήθηκε σύγκριση των απορροφήσεων μεταξύ των μεσεγχυματικών-όπως κυτταρικές γραμμές (με έντονους χαρακτήρες) και επιθηλιακές κυτταρικές γραμμές, καθώς και μεταξύ Panc-1 μετά από 72 ώρες αγωγής ΤΟΡβ και μη επεξεργασμένων Panc- 1. Η ηπαρίνη χρησιμοποιήθηκε ως θειωμένη GAG ελέγχου. (Α) Η φωτογραφία της προκύπτουσας διατήρηση του μπλε της Αλσατίας βαφής μετά την καθίζηση των θειωμένων γλυκανών και την επακόλουθη επαναιώρηση. Η δεύτερη στήλη αντιπροσωπεύει τα μεσεγχυματικά-όπως κυτταρικές γραμμές και διατηρούνται περισσότερο λεκέ, υποδεικνύοντας την παρουσία υψηλότερων επιπέδων θειωμένων γλυκανών στα κυτταρικά λύματα. (Β) Bar γραφικές παραστάσεις που δείχνουν τις διαφορές στην απορρόφηση στα 600 nm για τις κυτταρικές γραμμές. Οι κυτταρικές σειρές μεσεγχυματικών-σαν (με έντονους χαρακτήρες) είχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα απορρόφησης από τα υπόλοιπα επιθηλιακών κυτταρικών σειρών (ρ = 1,29 × 10

-5). (Γ) Μπαρ γραφικές παραστάσεις που δείχνουν τις διαφορές στην απορρόφηση στα 600 nm για Panc-1 μετά από έκθεση 72 ώρες έως 5 ng /mL ΤΟΡβ ή χωρίς επεξεργασία υπό στέρηση ορού. Panc-1 μετά από θεραπεία TGFβ είχαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα απορρόφησης από το μη επεξεργασμένο Panc-1 (p = 0,027).

Η

Συζήτηση

Η ικανότητα να ανιχνεύει ή EMT ελέγχου για τον καρκίνο του παγκρέατος μπορεί να οδηγήσει σε βελτιωμένες στρατηγικές θεραπείας. Ο χαρακτηρισμός των μοριακών αλλαγών που συνδέονται με την EMT είναι ένα πρώτο βήμα για την διαλεύκανση μερικών από τους μηχανισμούς οδήγηση αυτή τη διαδικασία. Ο καθορισμός των γλυκάνης αλλαγές που σχετίζονται με EMT μπορεί να είναι ιδιαίτερα σημαντική για την κατανόηση της διαδικασίας αυτής, με δεδομένη την γνωστή εμπλοκή γλυκανών σε άλλες διαδικασίες κυτταρικής διαφοροποίησης. έκφραση ολόκληρου του γονιδιώματος διαμόρφωση της γενικής εικόνας σε συνδυασμό με μια λίστα γονίδιο στόχο των 587 γονιδίων γλυκοζυλίωσης που συνδέονται ήταν ένα πρακτικό μέσο διερεύνησης γλυκοζυλίωσης σε αυτό το βιολογικό σύστημα. Επιπλέον, η χρήση των τριών in-vitro μοντέλο συστήματα αποδείχθηκαν χρήσιμα για την εξέταση των συμπληρωματικών πλευρών του επιθηλιακών και μεσεγχυματικών πολιτείες, δηλαδή την ενεργό μετάβαση μεταξύ των κρατών, των τερματικών κράτη διαφοροποίησης, και την πράξη της μετανάστευσης.

Η σημασία της γλυκάνης μεταβολές στην ΕΜΤ υποστηρίχθηκε από τη συχνότητα των αλλαγών στα γονίδια γλυκοζυλίωση σχετιζόμενη (Πίνακας 1). γονίδια Glycan σχετιζόμενη μεταβλήθηκαν συχνότερα από ό, τι αναμενόταν σύμφωνα με δύο από τα συστήματα μοντέλου, ΤΟΡβ-επαγόμενη EMT και τα πάνελ κυτταρική γραμμή, αλλά όχι στο μοντέλο κυτταρική μετανάστευση. Η διαπίστωση ότι γλυκάνης αναδιαμόρφωση είναι μια σημαντική πτυχή της διαδικασίας της διαφοροποίησης των κυττάρων θα ήταν σύμφωνη με προηγούμενες εργασίες που δείχνουν τη σημασία της γλυκάνης μεταβολές στη βιολογία των βλαστικών κυττάρων και την ενεργοποίηση του ανοσοποιητικού συστήματος [27], [31], [37]. Η έλλειψη σημαντικών αλλαγών glycogene στη μετανάστευση των κυττάρων μεταξύ μπορεί να υποδεικνύει ότι τα κύτταρα που μεταναστεύουν δεν ήταν στην πραγματικότητα διαφοροποίηση, αλλά μάλλον απλά αλλάζοντας την έκφραση για τους μηχανικούς της μετανάστευσης. Ως εκ τούτου γλυκάνης αλλαγές μπορεί να είναι πιο σημαντικό ως δείκτες κυτταρικού τύπου και της κατάστασης παρά ως λειτουργική συνεισφέροντες για τη μετανάστευση. Ωστόσο, πρέπει να σημειωθεί ότι η μεταβολή της γλυκοζυλοτρανσφεράσης δράση σε μοντέλα κυτταρική σειρά έχουν δείξει διαφορετικά αποτελέσματα σχετικά με τα μεταναστευτικά ικανότητα

in vitro

[38], [39], [40]. Στην περίπτωση των Panc-1 και MiaPaCa-2, μπορούν ήδη κατέχουν την γλυκάνης-μηχανήματα που απαιτούνται για μια ενισχυμένη ικανότητα μεταναστευτικών? περαιτέρω μετασχηματισμός δεν μπορεί να είναι απαραίτητη. Αυτή η περιοχή της έρευνας ήταν επίσης περιορίζεται σε δύο παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές και σε πολύ συγκεκριμένες

in vitro

συνθήκες. Μελλοντικές αναλύσεις χρησιμοποιώντας πιο κυτταρικές σειρές και διαφορετικές μεθόδους διαχωρισμού μεταναστευτικών από σταθερές κύτταρα μπορεί να δώσει νέα ευρήματα.

Τα λειτουργικά θέματα από κοινού από την επαγόμενη μοντέλο EMT και τον πίνακα κυτταρική σειρά δώσει κάποιες γνώσεις σχετικά με τους ρόλους των γλυκοζυλίωσης στην EMT . Οι μεταβολές των πρωτεογλυκανών και ενζύμων θείωση δείχνουν τη σημασία του ελέγχου των GAG θείωση σε EMT. Αυτό το εύρημα είναι σύμφωνο με προηγούμενες έρευνες που δείχνουν μεταβολές στα συστατικά μήτρας όπως βερσικάνη [41] και οι αλλοιώσεις GAG θείωση [42] σε συσχέτιση με τον καρκίνο, ιδιαίτερα σε επιθετικές μορφές καρκίνου. Τα καρκινικά προάγουν τις λειτουργίες του βερσικάνη μπορεί να δράσει μέσω ρύθμισης δραστικότητα αυξητικού παράγοντα και από την αλληλεπίδραση με το ανοσοποιητικό και στρωματικά κύτταρα [43], οι λειτουργίες που θα μπορούσαν να τροποποιηθούν από αλλαγές στα θείωση. SPOCK1 μπορεί να λειτουργήσει μέσω παρόμοιων μηχανισμών, αλλά λιγότερο καλά μελετημένο. SULF2, η οποία ήταν έντονα πάνω ρυθμισμένα σε αμφότερα τα συστήματα και δρα για την απομάκρυνση θειικών από ορισμένες αλυσίδες GAG, έχει επίσης συσχετιστεί με την καρκινογένεση του πνεύμονα [44] και της ογκογονικότητας παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα [45]. Τα καρκινικά προάγουν τις λειτουργίες του SULF2 εμφανίζονται να λειτουργούν μέσω ενεργοποίησης σηματοδότηση Wnt ή απελευθέρωσης αυξητικών παραγόντων από την εξωκυττάρια μήτρα, η οποία μπορεί επίσης να έχει προ-αγγειογενετική δράση. Η συσχέτιση αυτών των λειτουργιών με EMT καρκίνο υποδηλώνει ότι τα καρκινικά κύτταρα υποβάλλονται σε EMT χρησιμοποιήσετε μια ανακαίνιση του εξωκυττάριου χώρου για να γίνει ιδιαίτερα επεμβατική.