Αφηρημένο

Ιστορικό

Νεοεπικουρική χημειο-ακτινοθεραπεία (CRT ) που ακολουθείται από χειρουργική εκτομή είναι η τυπική θεραπεία για τοπικά προχωρημένο καρκίνο του ορθού, μολονότι πλήρης όγκος παθολογική υποχώρηση επιτυγχάνεται μόνο μέχρι το 30% των περιπτώσεων. Ένα κλινικοπαθολογοανατομικών και μοριακή προγνωστική διαστρωμάτωση των ασθενών με προχωρημένο καρκίνο του ορθού εξακολουθεί να απουσιάζει. Εδώ, c-Met και YKL-40 έχουν μελετηθεί ως υποθετικό προγνωστικών παραγόντων ανταπόκρισης CRT στον καρκίνο του ορθού, λόγω αναφερόμενη εμπλοκή τους στην chemoradioresistance σε διάφορους συμπαγείς όγκους.

Υλικά και Μέθοδοι

A πολυκεντρική μελέτη σχεδιάστηκε για να αξιολογήσει το ρόλο του c-Met και της έκφρασης YKL-40 στην πρόβλεψη chemoradioresistance και να συσχετιστούν, τα κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά με ανταπόκριση CRT. Ανοσοϊστοχημεία και φθορίζοντα in situ υβριδισμού για c-Met διεξήχθησαν σε 81 ορθού βιοψίες καρκίνου από ασθενείς με τοπικά προχωρημένο ορθού αδενοκαρκίνωμα. Όλοι οι ασθενείς υποβλήθηκαν σε τυπική (50,4 Gy σε 28 κλάσματα + ταυτόχρονη καπεσιταβίνη 825 mg /m

2) εισαγωγική CRT ή η XELOXART πρωτόκολλο. ανταπόκριση CRT τεκμηριώθηκε σε χειρουργική εκτομή δειγμάτων και καταγράφεται ως βαθμό την υποχώρηση του όγκου (TRG) σύμφωνα με τα κριτήρια Mandard.

Αποτελέσματα

Μια σημαντική συσχέτιση μεταξύ της c-Met και YKL-40 έκφραση παρατηρήθηκε (R = 0,43). Οι εκφράσεις του c-Met και YKL-40 ήταν τόσο σημαντικά που συνδέονται με την έλλειψη πλήρους ανταπόκρισης (86% και 87% του c-Met και YKL-40 θετικές περιπτώσεις, σ & lt? 0,01 και p = 0,006, αντίστοιχα). Τριάντα από τις 32 βιοψίες που συνεκφράζουν και τους δύο δείκτες είχαν μερική ή απούσα απόκριση του όγκου (TRG 2-5), ενισχύοντας θετική προγνωστική αξία τους (94%). Η αποκλειστική προγνωστική ρόλος του YKL-40 και c-Met επιβεβαιώθηκε χρησιμοποιώντας μια πολυπαραγοντική ανάλυση (ρ = 0,004 και ρ = 0,007 για YKL-40 και c-Met, αντίστοιχα). TRG ήταν ο μοναδικός μορφολογική παράμετρος που σχετίζεται με κακή έκβαση.

Συμπέρασμα

c-Met και YKL-40 έκφρασης είναι ένα αξιόπιστο προγνωστικό της μερικής /απούσα απάντηση στην εισαγωγική CRT στον καρκίνο του ορθού. Στοχευμένες πρωτόκολλα θεραπείας θα μπορούσαν να επωφεληθούν από προηγούμενες αξιολογήσεις του c-MET και τα επίπεδα YKL-40 έκφρασης για την αύξηση της θεραπευτικής αποτελεσματικότητας

Παράθεση:. Senetta R, Duregon Ε, Sonetto C, Spadi R, Mistrangelo Μ, Racca P, et al. (2015) YKL-40 /c-Met έκφραση σε ορθού βιοψίες Προβλέπει όγκου Παλινδρόμηση εξής Νεοεπικουρική Χημειοραδιοθεραπεία: Μια μελέτη πολυοργανική. PLoS ONE 10 (4): e0123759. doi: 10.1371 /journal.pone.0123759

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Jose Γ Trevino, Πανεπιστήμιο της Φλόριντα, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 16 Οκτωβρίου του 2014? Αποδεκτές: 21 Ιανουαρίου 2015? Δημοσιεύθηκε: 15, Απριλίου 2015

Copyright: © 2015 Senetta et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. RS έχει λάβει υποτροφίες από FIRC (Fondazione Italiana per la Ricerca sul Cancro). Ο χρηματοδότης δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Ιστορικό

Νεοεπικουρική χημειοακτινοθεραπεία (CRT) που ακολουθείται από χειρουργική εκτομή, σύμφωνα με την αρχή της πλήρους mesorectal εκτομή είναι η τυπική θεραπεία για τοπικά προχωρημένο μέσα ή χαμηλό καρκίνο του ορθού, δηλαδή, βλάβες Τ3-Τ4 ή /και την παρουσία των υπόπτων περιφερειακών μεταστατικούς λεμφαδένες [1-4]. Αυτή η προσέγγιση, η οποία επιτρέπει υψηλά ποσοστά τέλεσης οπισθοεκτομής όγκου και διαδικασίες σφιγκτήρα εξοικονόμησης [5], καθορίζει downstaging όγκου σε 28-62% [5,6] για τις περιπτώσεις αυτές και βελτιώνει τον τοπικό έλεγχο [7]. Ωστόσο, ανεξάρτητα από το στάδιο του όγκου, απόκριση θεραπεία είναι πολύ ετερογενής, καθώς πλήρης όγκος παθολογική υποχώρηση επιτυγχάνεται σε 10-30% των περιπτώσεων [6,8] και πολλοί ασθενείς με καρκίνο του ορθού είναι ανθεκτικοί σε προεγχειρητική CRT [9]. Ως εκ τούτου, προβλέποντας εισαγωγική απάντηση CRT μπορεί να επιτρέψει μια πιο ορθολογική επιλογή των ασθενών που πιθανότατα θα επωφεληθούν από αυτή τη θεραπεία. Κατά τη διάρκεια των τελευταίων δύο δεκαετιών, πολλές κλινικές, ραδιολογικές και μορφολογικά [10-13] παραμέτρους, όπως επίσης και μοριακών δεικτών [14-21], έχουν ερευνηθεί. Δυστυχώς, ένα πάνελ των δεικτών ή ένα γονίδιο ταξινομητής που είναι χρήσιμες για την πρόβλεψη εισαγωγική απάντηση CRT δεν έχει ακόμη καθοριστεί, και μια εκτεταμένη κλινική επικύρωση εξακολουθεί να είναι αναγκαία [18,22-27]. Μεταξύ των ενδεχόμενων δείκτες, η γλυκοπρωτεΐνη YKL-40 [28] και το ογκογονίδιο c-Met κινάσης τυροσίνης υποδοχέα είναι προγνωστικές και χημείο- και ραδιοαντοχή σχετίζονται δείκτες [29-34] και είναι υποψήφιες για στοχευμένη θεραπεία [28,29,31,32 , 35-42]. Επιπλέον, οι αναστολείς c-Met είχαν αποδειχθεί ότι αυξάνουν κυττάρου όγκου ακτινοευαισθησία, ενισχύοντας την ικανότητα της ακτινοβολίας να αναστέλλουν την ανάπτυξη του όγκου και διεισδυτικότητα σε ξενομοσχεύματα όγκου και

in vitro

[30,37,40]. Παρομοίως, ο συνδυασμός ακτινοθεραπείας και εξουδετέρωση YKL-40 αντισώματα έδειξαν μια συνεργική επίδραση στην αναστολή της αγγείωσης όγκου και της εξέλιξης σε

in vivo

μοντέλα γλοιοβλαστώματος [34]. Ωστόσο, ο ρόλος τους ως προγνωστική δείκτες δεν έχει ακόμη δοκιμαστεί σε καρκίνο του ορθού. Ως εκ τούτου, μια πολυκεντρική μελέτη με στόχο την αξιολόγηση του ρόλου του c-Met και YKL-40 στην πρόβλεψη χημειοθεραπεία και ραδιοαντοχή σχεδιάστηκε για 81 ασθενείς με τοπικά προχωρημένο ορθού αδενοκαρκίνωμα.

Εδώ, δείχνουμε ότι α) C- συναντήθηκαν και YKL-40 είναι ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες της κακής απάντηση σε CRT και β) βαθμού υποχώρηση του όγκου (TRG), αλλά ούτε και c-Met ούτε YKL-40, είναι ο μοναδικός προγνωστικός δείκτης της μικρότερης συνολικής και της νόσου επιβίωση.

Υλικά και Μέθοδοι

Θήκες συλλογή

Ογδόντα ένα ορθού προ-επεξεργασία ενδοσκοπικές βιοψίες και συμφωνημένα χειρουργικά δείγματα τους ανασύρθηκαν από διαδοχικές ομάδες από τα αρχεία των τμημάτων παθολογίας των τριών ιταλικών θεσμικών οργάνων μεταξύ Ιανουάριο 2006 και τον Δεκέμβριο του 2012: Πανεπιστήμιο του Τορίνο σε Città della Salute e della Scienza (Molinette) Νοσοκομείο του Τορίνο (46 περιπτώσεις)? San Luigi Νοσοκομείο Orbassano (16 περιπτώσεις)? και το Ινστιτούτο Έρευνας για τον Καρκίνο και τη Θεραπεία του Candiolo (19 περιπτώσεις). Όλοι οι ασθενείς είχαν τοπικά προχωρημένο ορθού αδενοκαρκίνωμα επιλέξιμες για εισαγωγική CRT (στάδιο CT3-Τ4). Πενήντα ένας ασθενείς (63%) έλαβαν CRT σύμφωνα με ένα πρότυπο σχήμα καπεσιταβίνη (50,4 Gy σε 28 κλάσματα + ταυτόχρονη καπεσιταβίνη 825 mg /m

2), ενώ οι υπόλοιποι 30 ασθενείς (37%) υποβλήθηκαν σε δοκιμή XELOXART (50 , 4 Gy σε 28 κλάσματα + capecitabine 825 mg /m

2 + οξαλιπλατίνη 60 mg) [4]. Το ποσοστό ολοκλήρωσης CRT ήταν 92,5% (75/81 ασθενείς). Έξι ασθενείς σταμάτησαν τη θεραπεία λόγω του γαστρεντερικού ή δερματική τοξικότητα και, μεταξύ αυτών, 3 ασθενείς συμπλήρωσαν μόνο τις πρώτες τρεις εβδομάδες θεραπείας. Σε όλες τις περιπτώσεις, η χειρουργική επέμβαση σχεδιάστηκε και πραγματοποιήθηκε 6-8 εβδομάδες μετά το τέλος της CRT. Η μελέτη υποβλήθηκε και εγκρίθηκε από το Διοικητικό Συμβούλιο Institutional Review ηθική για «Biobanking και τη χρήση ανθρώπινων ιστών για πειραματικές μελέτες» της Παθολογίας Υπηρεσία της Azienda Ospedaliera Città della Salute e della Scienza di Torino, Τορίνο, Ιταλία. Το πρόγραμμα παρέχεται προφορική και όχι γραπτή συγκατάθεση από τους ασθενείς λόγω της αναδρομικής προσέγγισης της μελέτης, η οποία δεν είχε επίδραση στην θεραπεία τους. Όλες οι περιπτώσεις ήταν ανώνυμα καταγράφηκαν. Το Διοικητικό κριτική Θεσμικών ενέκρινε την εν λόγω διαδικασία συναίνεσης

Η ιστοπαθολογική αξιολόγηση

Όλα αιματοξυλίνη και ηωσίνη (Η & amp? Ε). -stained Διαφάνειες που διατίθενται από βιοψίες και χειρουργικά δείγματα εξετάστηκαν, και ένας εκπρόσωπος μπλοκ παραφίνης επιλέγονται για κάθε περίπτωση. Βιοψίας και χειρουργικά δείγματα του κάθε ασθενή ξεχωριστά επανεξετάζονται από δύο ειδικές παθολόγους (RS και PC), ο οποίος επιβεβαίωσε όλες τις διαγνώσεις. Στις ορθού βιοψίες προ-επεξεργασίας, ο βαθμός όγκου (G1-G2-G3) και την απόπτωση εκτιμήθηκαν. Η απόπτωση εκτιμήθηκε με την αξιολόγηση των αποπτωτικά σώματα που ευθυγραμμίζουν την βασική μεμβράνη, και βαθμολογήθηκε ως αρνητικό (& lt? 25% ανά 100 βιώσιμα κύτταρα) ή θετικό (& gt? = 25% ανά 100 βιώσιμα κύτταρα). Η αγγειακή εισβολή δεν είχε συμπεριληφθεί μεταξύ των ιστοπαθολογικών παραμέτρους που αναλύθηκαν αφού δείγματα βιοψίας είναι συνήθως επιφανειακή και μικρού μεγέθους και επομένως θεωρούνται ανεπαρκώς αξιόπιστα για την παρουσία νεοπλασματικών εμβόλων. Απάντηση στην εισαγωγική CRT ιδρύθηκε με ιστοπαθολογική εξέταση του χειρουργικά ορθού δείγματα χρησιμοποιώντας το βαθμό υποχώρηση του όγκου (TRG), σύμφωνα με τα κριτήρια Mandard [43], τα οποία ταξινομούνται σε πέντε βαθμούς από TRG1 (πλήρης υποχώρηση) να TRG5 (χωρίς παλινδρόμηση) με βάση την παρουσία των υπολειμματικών καρκινικών κυττάρων και από τον βαθμό της ινωτικών μεταβολών. Για να απλοποιηθεί η ανάλυση, πλήρη ανταπόκριση του όγκου (TRG1) συγκρίθηκε με μερική /απούσα απόκρισης (TRG2-5).

Η ανοσοϊστοχημεία

Η ανοσοϊστοχημεία πραγματοποιήθηκε σε όλα, αλλά πέντε περιπτώσεις των βιοψιών προ-θεραπείας , που είχαν ανεπαρκή ιστό από του ορθού βιοψία. Εκτομή χειρουργικά δείγματα με εναπομένουσα καρκίνο (TRG2-5) αναλύθηκαν επίσης. Τρεις Im παχύ διαδοχικές τομές παραφίνης κάθε περίπτωση, υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ανοσοϊστοχημεία χρησιμοποιώντας ένα αυτοματοποιημένο ανοσοκηλιδωτή (Ventana BenchMark Autostainer, Ventana Medical Systems, Tucson, AZ, USA) με αντισώματα κατά του YKL-40 (Quidel Corporation, San Diego, CA, USA, κουνέλι πολυκλωνικά, αραιωμένο 1/400) και c-Met (Abcam PLC, Cambridge, UK, πολυκλωνικά κουνελιού, σε αραίωση 1: 200). Το retriewal βήμα αντιγόνο περιλήφθηκε στο αυτοματοποιημένο πρόγραμμα. Α, σύστημα ανίχνευσης βιοτίνης-free δεξτράνη αλυσίδα-based (EnVysion, Dako, Carpinteria, CA, USA) και διαμινοβενζιδίνη (Ventana Medical Systems, Tucson, ΑΖ, USA) χρησιμοποιήθηκαν ως το χρωμογόνο, σύμφωνα με πρότυπα πρωτόκολλα. Νεοπλασματικές ιστοί συναρμολογείται επί μικροσυστοιχίες ιστού, εκτός από το πρωτεύον αντίσωμα και IgG-συμφωνημένα ορό και χρησιμοποιήθηκαν ως θετικοί και αρνητικοί έλεγχοι.

Χρώση ερμηνεία και το σύστημα βαθμολόγησης

Όλα ανοσοχρώση διαφάνειες αναλύθηκαν ανεξάρτητα από RS, AC και PC, οι οποίοι δεν γνώριζαν τα κλινικά δεδομένα. YKL-40 και χρώση c-Met εκτιμήθηκε τόσο ως κατηγορική (αρνητική ή θετική εάν υπάρχει σε τουλάχιστον 1% των νεοπλασματικών κυττάρων) και τις συνεχείς μεταβλητές (βαθμολογούνται ως αριθμός θετικών νεοπλασματικών κυττάρων). Όταν θετικά, τα κύτταρα είχαν μέτρια έως ισχυρή κυτταροπλασματική δραστικότητα και για τα δύο αντισώματα. Σε περίπτωση αποκλίσεων, διαφάνειες εξετάστηκαν με τη χρήση μικροσκοπίου multihead, και επιτεύχθηκε συναίνεση.

c-Met φθορισμού in situ υβριδισμού (FISH) ανάλυση

c-Met ανάλυση FISH έγινε χρησιμοποιώντας το σύνολο μιγμάτων ανιχνευτού, ΜΕΤ /CEP7 (Abbott Molecular, Des Plaines, IL, USA), σε όλες τις βιοψίες με μια θετική ανοσοχρώση c-Met. πειράματα FISH διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή ως εξής: 10 μΙ μίγματος ανιχνευτή εφαρμόστηκε σε κάθε διαφάνεια, η οποία αμέσως καλύπτεται με καλυπτρίδα και σφραγίστηκε με ελαστικό τσιμέντου. Τα σλάϊντς καλά συν-μετουσιώθηκε στο Σύστημα Hybrite (Vysis, Downers Grove, IL, USA) στους 73 ° C για 3 λεπτά και υβριδοποιήθηκαν όλη τη νύχτα στους 37 ° C. Μία πλύση μετα-υβριδισμού διεξήχθη σε 2xSSC-0.3% ΝΡ-40 στους 73 ° C για 3 λεπτά. Στη συνέχεια, τα πλακίδια αφυδατώνονται και αντίθετα με DAPI Ι (4,6-diamidine-2-φαινυλινδολ, Vysis, Downers Grove, IL, USA). Μια αυτοματοποιημένη σταθμό σαρώσεως, MethaSystems (Carl Zeiss MetaSystems Gbmh, Altlussheim, Γερμανία), εξοπλισμένο με μικροσκόπιο επιφθορισμού AxioImager-Z1 χρησιμοποιήθηκε για να προσδιορίσει την κατάσταση του γονιδίου c-Met. αξιολογήθηκαν περιοχές του όγκου με υψηλή ποιότητα σήματος και την καλή διατήρηση των πυρήνων. Οι περιοχές αυτές αυτόματα σαρωμένο και 10 διαφορετικές διαδοχικές εστιακά επίπεδα έγιναν για κάθε σήμα FISH για να σχηματίσουν ένα ενιαίο δισδιάστατη εικόνα. Για τους παραδοσιακούς ανάγνωση, τα αυτόματα εικόνων που μεταφέρθηκαν στο λογισμικό της Ίσιδας (Carl Zeiss MetaSystems Gbmh, Altlussheim, Γερμανία) και αποθηκεύονται σε ειδικούς φακέλους. δεδομένα FISH αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας περιγράφηκε προηγουμένως κριτήρια, σύμφωνα με Capuzzo et

al

. [44].

Στατιστική Ανάλυση

Οι συσχετίσεις μεταξύ YKL-40 και αντισώματα c-Met έγιναν χρησιμοποιώντας το Chi-square test και δύο ουρά τεστ Spearman, όταν θεωρείται κατηγορηματική ή συνεχείς μεταβλητές, αντίστοιχα . Κλινικο- παθολογικές παράμετροι για μονοδιάστατες αναλύσεις για να προσδιοριστεί παράγοντες πρόβλεψης της απόκρισης σε CRT περιλαμβάνονται βαθμό του όγκου, την απόπτωση, YKL-40 και τα πρότυπα χρώσης c-Met. χρησιμοποιήθηκαν ακριβή ή Chi-square τεστ του Fisher. Όλες οι παράμετροι στην μονοπαραγοντική ανάλυση, με σημαντικό αντίκτυπο στην πρόβλεψη της απόκρισης CRT θεωρήθηκαν για πολυπαραγοντική ανάλυση χρησιμοποιώντας το μοντέλο αναλογικών κινδύνων Cox. Να αναλύσει την προγνωστική επίδραση όλων των παθολογικών μεταβλητών θεωρείται, η μονοπαραγοντική συνολική ανάλυση επιβίωσης βασίστηκε στο όριο προϊόντος εκτίμηση κατά Kaplan-Meier της κατανομής επιβίωσης. Αδιόρθωτη διαφορές μεταξύ των καμπυλών επιβίωσης εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το τεστ log-rank. Όλες οι δοκιμές πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας το στατιστικό πακέτο για την Κοινωνικών Επιστημών έκδοση 17 (SPSS Inc., Chicago, IL, USA). Χρησιμοποιήθηκε 0,05

Αποτελέσματα

1) κλινικοπαθολογοανατομικές δεδομένων και παθολογική απόκριση του όγκου αξιολογήθηκε σύμφωνα με Mandard TRG

Τα βασικά κλινικά και παθολογικά χαρακτηριστικά του? επίπεδο σημαντικότητας p & lt. ολόκληρη σειρά από 81 περιπτώσεις συνοψίζονται στον πίνακα 1.

Η

Σύμφωνα με το ΤΝΜ σταδιοποίηση, 20 περιπτώσεις (25%) είχαν μια μετα-CRT παθολογική Τ στάδιο ypT0, 4 περιπτώσεις (5%) είχαν ΥΡΤ1, 20 περιπτώσεις είχαν (25%) ypT2, 35 περιπτώσεις είχαν (43%) ypT3 και 2 περιπτώσεις είχαν (2%) ypT4. Λεμφαδενικές μεταστάσεις ανιχνεύθηκαν σε 22 περιπτώσεις (27%). Το στάδιο κλινικών T (CT) ελήφθη σε 74 περιπτώσεις (91%), και ένα T-downstaging μετά RCT παρατηρήθηκε σε 48 (65%) από αυτούς. Η εφαρμογή των Mandard κριτήρια για τον καθορισμό της TRG, 20 περιπτώσεις (25%) είχαν μία πλήρη παθολογική ανταπόκριση του όγκου σε εισαγωγική CRT (TRG1-ypT0) για τα χειρουργικά ορθού δείγματα. Στις υπόλοιπες 61 ασθενείς (75%), παρατηρήθηκε μία μερική ή απούσα απόκρισης του όγκου, με 16 περιπτώσεις (20%) που ταξινομούνται ως TRG2, 22 περιπτώσεις (27%) που ταξινομούνται ως TRG3, 21 περιπτώσεις (26%) που ταξινομούνται ως TRG4 και 2 περιπτώσεις (2%) που ταξινομούνται ως TRG5 (Σχήμα 1).

Η

Η κατανομή της πλήρους (TRG1)

έναντι

μερικής ανταπόκρισης (TRG2-5) ήταν παρόμοια και στις δύο υποομάδες της θεραπείας (RT + καπεσιταβίνη ή πρωτόκολλο XELOXART).

2) η ανοσοϊστοχημεία για YKL-40 και C-Met, FISH αναλύσεις και κλινικοπαθολογοανατομικές συσχετίζεται

σε γενικές γραμμές, YKL 40-έκφρασης όγκων παρατηρήθηκε σε 47 (62%) περιπτώσεις, με μια μέτρια ή έντονη ανοσοχρώση εντοπίζεται μέσα στο κυτταρόπλασμα των νεοπλασματικών κυττάρων (Σχήμα 2Α και 2Β), ενώ σαράντα τρεις (56%) περιπτώσεις ήταν θετικές για το c-Met με μια μέτρια ή ισχυρά κυτταροπλασματικής αντιδραστικότητα ( Σχήμα 2Α και 2Γ).

η

Τόσο YKL-40 και την έκφραση του όγκου c-Met διατηρήθηκε σε χειρουργικά δείγματα ορθού σύμφωνα με την έκφρασή τους σε ενδοσκοπικές βιοψίες. ανάλυση FISH c-Met εκτελέστηκε σε όλα τα 43 c-Met-θετικών περιπτώσεων. Καμία ενίσχυση του γονιδίου c-Met βρέθηκε, ενώ εννέα (21%) περιπτώσεις αποδεικνύεται χαμηλή /υψηλή γονίδιο polisomy (Σχήμα 2D). Η έκφραση της YKL-40 και C-Met συσχετίστηκε σημαντικά όταν εξετάζονται δύο συνεχείς μεταβλητές (r = 0,43 και p = 0,001) και κατηγορικές μεταβλητές (χ

2 = 6,96? P = 0.01). YKL-40 ήταν θετική σε μετρίως ή ασθενώς διαφοροποιημένες περιπτώσεις (ρ = 0.018) και σε εκείνα που στερούνται φλεγμονώδους διηθήματος (p = 0.01), ενώ c-Met συσχετίστηκε θετικά με την απουσία απόπτωσης (Πίνακας 2).

3) Συσχέτιση της Mandard TRG με μορφολογικά, ανοσοϊστοχημική και μοριακή χαρακτηριστικά (Πίνακας 3)

η

σε μια μονοπαραγοντική ανάλυση υποδιαίρεση όλη τη σειρά σε πλήρες (TRG1) ή μη πλήρη ανταπόκριση (TRG2 -5), ούτε βαθμός όγκου ούτε η παρουσία της απόπτωσης ανιχνεύθηκαν επί του ορθού βιοψίες προ-θεραπεία με TRG, υποδεικνύοντας ότι κανένα από αυτά τα ιστολογικά χαρακτηριστικά αποδείχθηκε αποτελεσματική στην πρόβλεψη απόκριση CRT. Αντίθετα, YKL-40 και C-Met εκφράστηκαν διαφορικά σε πέντε υποκατηγορίες TRG (σχήματα 3Α και 4Α).

Η

Στην υποομάδα TRG1, η έκφραση του όγκου YKL-40 κυμάνθηκε από 0 έως 30% (μέσος: 7.7? διάμεσος: 0), και ότι από c-Met κυμαίνονταν από 0 έως 50% (μέση τιμή: 12,5? διάμεσος: 0)? ειδικά YKL-40 και c-Met ανοσοαντίδραση ήταν απούσα σε 67% και 62% των περιπτώσεων TRG1, αντίστοιχα. Στην ομάδα της μερικής ανταποκρίθηκαν (TRG2-5), η έκφραση YKL-40 κυμαίνεται από 0 έως 80% (μέση τιμή: 17,65? Διάμεσο: 10), και ότι από c-Met κυμαίνεται από 0 έως 60% (μέση τιμή: 23,3? διάμεσος: 20). Ακόμα και όταν θεωρείται διχοτομήθηκε μεταβλητές, η έκφραση και των δύο βιοδείκτες σχετιζόταν σημαντικά με την έλλειψη πλήρη υποχώρηση του όγκου: 87% του YKL-40-θετικές περιπτώσεις και το 86% c-Met-θετικών κρουσμάτων είχε TRG2-5. Η υπερέκφραση του YKL-40 και c-Met στην ομάδα μη αποκρινόμενων (TRG2-5) σε σύγκριση με την ομάδα αποκριτή (TRG1) ήταν στατιστικά σημαντική, όταν θεωρείται ότι και οι δύο συνεχείς (ρ = 0,01 και ρ = 0,05 ή YKL-40 και c-Met έκφραση, αντίστοιχα, τα Σχήματα 3Β και 4Β) και τις μεταβλητές κατηγοριών (p = 0,006 και ρ = 0,01, αντίστοιχα) (Σχήματα 3C και 4C), και είχε υψηλή θετική προγνωστική αξία (PPV = 87% και 86% για YKL40 και c-Met, αντίστοιχα) (Πίνακας 4).

Η

για να επαληθευθεί αν YKL-40 και C-Met συν-έκφραση μπορεί να συσχετιστεί με μερική ή έλλειψη ανταπόκρισης στην εισαγωγική θεραπεία, όλες οι περιπτώσεις ήταν στρωματοποιημένη σε τρεις υποομάδες, σύμφωνα με την έκφραση του YKL-40 και c-Met σε βιοψία όγκου: i: YKL-40-αρνητική /c-Met-αρνητικό (13/65 περιπτώσεις, 20%), ii: YKL-40- θετικών /c-Met-αρνητικό ή YKL-40-αρνητική /c-Met-θετικό (20/65 περιπτώσεις, 30%) και iii: YKL-40-θετικών /c-Met-θετικό (32/65 περιπτώσεις, το 50% ) (Σχήμα 5).

Η

Είναι ενδιαφέρον, 30 από τις 32 βιοψίες ορθού συν-εκφράζουν τόσο βιοδεικτών ήταν TRG2-5 χειρουργικά δείγματα (μερική /απούσα απόκρισης). Το εύρημα αυτό ενισχύει την θετική προγνωστική αξία τους (94%).

Όταν περιπτώσεις ταξινομήθηκαν ως TRG1-2 εναντίον TRG3-5 οι δύο βιοδείκτες που διατηρούνται προγνωστική αξία τους, αν και χαμηλότερα. Αναλυτικότερα, το 68% του YKL-40-θετικές περιπτώσεις (ρ = 0,03) και 65% των περιπτώσεων c-Met-θετικά (ρ = 0.01) είχε TRG3-5. Διαστρωμάτωση από TRG3, μόνο c-Met διατήρησε την αξία του (p = 0.03).

Η πολυπαραγοντική ανάλυση επιβεβαίωσε YKL-40 και C-Met ως ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες της κακής απάντηση CRT (p = 0,004 και p = 0,007 για YKL-40 και C-Met, αντίστοιχα).

4) Συσχέτιση της YKL-40 και την έκφραση του c-Met με αποτέλεσμα τη νόσο

παρακολούθηση δεδομένων, κυμαίνεται από 6 έως 79 μηνών (διάμεσος: 40), ήταν διαθέσιμα για όλες εκτός από τρεις ασθενείς. Κατά το χρόνο της ανάλυσης, 75 (96%) των ασθενών ήταν ζωντανοί, αλλά τα υπόλοιπα τρία (5%) είχαν πεθάνει. Συνολικά, υποτροπιάζουσα νόσο μετά νεοεπικουρική CRT και χειρουργική εμφανίστηκαν σε 21 ασθενείς (28%) (Πίνακας 1). Επιπλέον, 11 ασθενείς (14%) παρουσίασαν τοπική υποτροπή με διάμεση παρακολούθηση 16 μήνες.

Όλοι οι 20 ασθενείς που προσδιορίζονται ως ανταποκρίθηκαν πλήρως (TRG1) ήταν ζωντανοί κατά τη στιγμή της τελευταίας παρακολούθησης ( μέσος χρόνος παρακολούθησης 52 μήνες), όπως ήταν 15 από τους 16 ασθενείς που ταξινομούνται ως TRG2 (μέσος χρόνος παρακολούθησης 33 μήνες)? ένας ασθενής στην ομάδα TRG2 χάθηκε. Οι τρεις ασθενείς είχαν θανών ατελής ανταπόκριση του όγκου μετά από χειρουργική του ορθού δείγματος (TRG 3, 4 και 5, αντίστοιχα), ακολουθούμενη από επανεμφάνιση του όγκου. μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης έδειξε ότι η υψηλή TRG ήταν η μόνη παράμετρος σχετίζεται σημαντικά με μια μικρότερη συνολική επιβίωση (p = 0,01) και την επιβίωση ελεύθερη νόσου (p = 0,004).

Συζήτηση

Σε αυτή τη μελέτη , βρήκαμε ότι YKL-40 και c-Met ανοσοϊστοχημική έκφραση σε προ-επεξεργασία του ορθού βιοψίες καρκίνου του προβλέπει αξιόπιστα μερική ή έλλειψη ανταπόκρισης στην εισαγωγική CRT σε ασθενείς με τοπικά προχωρημένη ορθού αδενοκαρκίνωμα. Επιπλέον, αποδείξαμε ότι c-Met και YKL-40 είναι ανεξάρτητες προγνωστικούς παράγοντες φτωχής απόκρισης στην CRT και ότι Mandard TRG είναι ο μόνος προγνωστικός παράγοντας του κακή επιβίωση.

Πρόβλεψη ρόλος του YKL-40 και c-Met

Μέχρι σήμερα, εισαγωγική CRT είναι το πρότυπο της φροντίδας για τους ασθενείς με τοπικά προχωρημένο (σταδίων ΙΙ και ΙΙΙ) αδενοκαρκίνωμα του ορθού. Ωστόσο, η αποτελεσματικότητα της είναι αρκετά απρόβλεπτη, με μια πλήρη παθολογική απόκριση (ypT0) σε έως και 30% των περιπτώσεων [25,45,46]. Μια τέτοια ετερογενή εξατομικευμένη ανταπόκριση σε ασθενείς με την ίδια φάση pT προτείνει ένα κεντρικό ρόλο του ενδογενείς βιολογικές ιδιότητες του νεοπλασματικές αλλοιώσεις σε προσδιορισμό επιδεκτικότητας CRT και υπογραμμίζει την ανάγκη για μια κλινικοπαθολογοανατομικών και μοριακών προγνωστική διαστρωμάτωση [25]. c-Met πρωτο-ογκογονιδίου κωδικοποιεί τον αυξητικό παράγοντα των ηπατοκυττάρων υποδοχέα τυροσινικής κινάσης (HGFR). Οι γενετικές αλλοιώσεις του έχουν εντοπιστεί σε μια ευρεία ποικιλία στερεών καρκίνων, και η έκφρασή της αυξάνεται σε μεταστατικές αλλοιώσεις [47] και σε καρκίνους άγνωστης πρωτογενούς προέλευσης [48]. Ως ένα ογκογονίδιο, c-Met έχει διπλή επίδραση επί των καρκινικών κυττάρων [49]. Από τη μία πλευρά, είναι ένας κύριος οδηγός της μακροχρόνιας συντήρησης του μετασχηματισμένου φαινοτύπου νεοπλασματικών, καθιστώντας τα καρκινικά κύτταρα που εξαρτώνται από την σηματοδότηση της για την ανάπτυξη και την επιβίωσή τους. Από την άλλη πλευρά, ενεργεί ως μια πρόσφορη για την επιβίωση και τη διάδοση του καρκίνου, λόγω της υπερέκφρασης της σε αντίξοες συνθήκες μικροπεριβάλλοντος, όπως υποξία [50] και θεραπευτικό ιονίζουσες ακτινοβολίες [30,37,40,51]. Από την άποψη αυτή, αρκετοί συγγραφείς κατέδειξαν μια βελτίωση στην κυτταρική ευαισθησία σε ακτινοβολία με αναστολείς c-Met και siRNA [30,37,52,53]. YKL-40, που ονομάζεται επίσης χιτινάση-3-like-1, είναι ένα εκκρινόμενο γλυκοπρωτεΐνη η οποία ρυθμίζει πολλαπλές κυτταρικές λειτουργίες, συμπεριλαμβανομένων του κυτταρικού πολλαπλασιασμού και της διαφοροποίησης, την προστασία από την απόπτωση, διέγερση της αγγειογένεσης, φλεγμονής και εξωκυτταρικό αναδιαμόρφωση των ιστών. Υψηλά επίπεδα YKL-40 στο πλάσμα βρέθηκαν σε ένα ευρύ φάσμα των χρόνιων φλεγμονωδών νόσων και κακοήθειες [54]. Εκφράζεται από αμφότερα τα καρκινικά κύτταρα και γύρω μακροφάγα που διηθούν όγκο τους, διεγείροντας την παραγωγή των διαφόρων ανάπτυξης όγκου παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων αγγειογόνοι παράγοντες, κυτοκίνες, και χημειοκίνες. Παρά το γεγονός ότι η συνολική παθολογικό ρόλο και μοριακών μηχανισμών YKL-40 στην ογκογένεση μένει να αποδειχθεί, αγγειογενετική υπογραφή του έχει αναφερθεί για τη ρύθμιση της ανάπτυξης του όγκου στον καρκίνο του μαστού, ο καρκίνος του παχέος εντέρου και το γλοιοβλάστωμα [54,55]. Είναι ενδιαφέρον, ιονίζουσες ακτινοβολίες έδειξαν να αυξάνουν YKL-40 έκφραση και την αγγειογένεση σε ένα γλοιοβλαστώματος κυτταρική γραμμή, και αυτή η κατάσταση αντιστράφηκε από εξουδετέρωσης YKL-40 αντίσωμα [31]. Επιπλέον, ιονίζουσα ακτινοβολία και την εξουδετέρωση YKL-40 αντισώματος συνεργιστικά ανέστειλε την ανάπτυξη του όγκου σε ξενομοσχεύτηκε μοντέλα όγκων του εγκεφάλου [34]. Ο σκοπός αυτής της πολυκεντρικής μελέτης ήταν να εξακριβωθεί η χρησιμότητα του c-Met και έκφραση YKL-40 στον προσδιορισμό εκείνων των ασθενών οι οποίοι θα σπανίως /δεν επωφελούνται από εισαγωγική CRT. c-Met και YKL-40 έκφρασης σε δείγματα βιοψίας είχε μια άκρως θετική προγνωστική αξία, όπως είχαν συνδέονται με την έλλειψη πλήρους ανταπόκρισης του όγκου στο 86% και το 87% των περιπτώσεων, αντίστοιχα

(

p = 0,01 και p = 0,006). Είναι ενδιαφέρον ότι, η παρατήρηση αυτή ενισχύθηκε περαιτέρω, όταν κρίθηκε μόνο συν-έκφραση: το 94% των βιοψιών του ορθού συν-έκφραση δύο βιοδεικτών έδειξε TRG2-5

ασθενών Στρωματοποίηση σύμφωνα με TRG2, τόσο YKL-40 και C-. Met διατήρησε προγνωστική αξία τους (p = 0,03 και p = 0,01 για YKL-40 και C-Met, αντίστοιχα), ενώ η διαστρωμάτωση από TRG3 c-Met μόνο αποδείχθηκε να προβλέψει την αποτελεσματικότητα της θεραπείας (p = 0.03).

Αυτές οι το αποτέλεσμα είναι σύμφωνο με το «στρες-αντίδρασης» ρόλο των δύο μορίων: όγκοι ιδιαίτερα εκφράζουν c-Met και YKL-40 πιθανότατα δεν θα επωφεληθούν από την CRT επειδή αυτά τα καρκινικά κύτταρα έχουν ήδη περάσει σε μια μεταγραφική προσαρμογή στις δυσμενείς συνθήκες microenviromental . Η απόφαση να χρησιμοποιήσει μια ανοσοϊστοχημική προσέγγιση αντί για μια μοριακή ανάλυση παρέχει πρακτικά πλεονεκτήματα. Γονιδιωματικής και πρωτεομική ανάλυση είναι ακριβά, και ειδικό εξοπλισμό και άριστα εκπαιδευμένους τεχνικούς που απαιτούνται για την εκτέλεση ορισμένων μοριακών αναλύσεων, λαμβάνοντας υπόψη ότι η ανοσοϊστοχημεία ευρέως χρησιμοποιείται σε διαγνωστικές διαδικασίες και έχει μια ευνοϊκή ισορροπία κόστους-οφέλους. Με βάση την προηγούμενη εξωτερική επικύρωση αυτών πολυοργανική αποτελέσματα, η εισαγωγή ενός πάνελ ανοσοϊστοχημεία με βάση αποτελούμενη από YKL-40 /c-Met σε πρωκτικές καρκίνο διαγνωστική ρουτίνας παράλληλα με Η &? Ε-χρώση slides θα μπορούσαν να χρησιμοποιηθούν για την αποφυγή υπερβολικό κόστος ακόμη και σε εργαστήρια διαχείριση μεγάλου αριθμού χειρουργικών δειγμάτων.

Προγνωστικές ρόλος των κλινικών και παθολογικών μεταβλητές

Ο ρόλος του c-Met σε πρόγνωση έχει αναφερθεί ότι συσχετίζεται με την υπερέκφραση της σε διάφορους συμπαγείς όγκους (όπως γαστρικό αδενοκαρκίνωμα [51], των ωοθηκών [56] και μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [57]? η υπερέκφραση του YKL-40, ιδιαίτερα ως ένα κυκλοφορούν δείκτης [54], παρομοίως συσχετίζεται με το ρόλο της στην πρόγνωση. Παρ ‘όλα αυτά, τα αποτελέσματα μας δεν υποστηρίζουν την αναφερόμενη προγνωστική ρόλο για c-Met και YKL-40 [58] σε καρκίνο του παχέος εντέρου [32,39,41,59], αν και το τελευταίο περιγράφηκε μόνο στο επίπεδο του ορού. Βρήκαμε ότι TRG , ποσοτικά σε πέντε κατηγορίες ανάλογα με την κλίμακα Mandard [43], ήταν η μόνη παράμετρος που επηρεάζει το αποτέλεσμα του ασθενούς όσον αφορά τόσο τη συνολική επιβίωση και την επιβίωση ελεύθερη νόσου, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [60-62]. Κατά συνέπεια, οι ασθενείς που ταξινομούνται ως TRG1 (πλήρης απόκριση όγκου) και TRG2 (απλά κύτταρα ή μικρές ομάδες των καρκινικών κυττάρων) έδειξε μια καλύτερη συνολική επιβίωση (100% κατά το χρόνο της τελευταίας παρακολούθησης σε αμφότερες τις ομάδες) και τον έλεγχο της εξέλιξης της νόσου (84, 2% στην ομάδα TRG1 και 80% στην ομάδα TRG2). Αν και η προγνωστική και προβλεπτική σημασία της TRG εξακολουθεί να επηρεάζεται από τις περιορισμένες τελικά σημεία και την ποιότητα και την ετερογένεια των ιστολογικών δεδομένων, TRG παρακάτω προεγχειρητική χημειοραδιοθεραπεία για τον καρκίνο του ορθού έχει μια σταθερή προγνωστική αποδείξεις. Μια μελλοντική πρόκληση παραμένει να ανακαλύψουν ένα υποκατάστατο μη επεμβατική μέθοδο για τη χειρουργική επέμβαση για να προσδιορίσει με ακρίβεια τους ασθενείς που έχουν λάβει ευνοϊκή TRG και να χρησιμοποιούν TRG για την επιλογή ασθενών για τη μετεγχειρητική επικουρική χημειοθεραπεία μετά από προεγχειρητική CRT [63].

Συμπέρασμα

YKL-40 και την έκφραση του c-Met σε προ-εισαγωγική του ορθού βιοψία του καρκίνου είναι ένα αξιόπιστο εργαλείο για την πρόβλεψη της μερικής ή την έλλειψη ανταπόκρισης του όγκου σε CRT. Κατά συνέπεια, ένα «ανοσοϊστοχημεία εμπλουτισμένο» Διαγνωστική προσέγγιση του ορθού βιοψίες, με στόχο την αύξηση της ευαισθησίας CRT, χρησιμοποιώντας ειδικά επιλεγμένα στοχευμένες θεραπείες για εκείνους που αναμένεται να είναι φτωχή ανταποκρίθηκαν, θα μπορούσε να παρέχει προγνωστική πληροφορία με την αποτελεσματικότητα κόστους-οφέλους και διευκολύνει την περαιτέρω θεραπευτική επιλογή των ασθενών.

Τέλος, προοπτικές τυχαιοποιημένες μελέτες είναι απαραίτητες για την επικύρωση του ρόλου της YKL-40 /c-Met στην πρόβλεψη αντίσταση όγκου? Αν ναι, η αποτελεσματικότητα της εισαγωγικής CRT σε αυτούς τους ασθενείς θα ωφεληθούν από ευαισθητοποιητές θεραπεία, δηλαδή στοχευμένη αναστολείς c-met, για τη βελτίωση της ανταπόκρισης.