Αφηρημένο

γαστρικός καρκίνος είναι η δεύτερη συχνότερη αιτία θανάτου που σχετίζονται με τον καρκίνο παγκοσμίως και διαθέτει άκρως αποτελεσματική θεραπεία για προχωρημένη νόσο. ΝΑΒ-paclitaxel είναι ένα νέο μικροσωληνίσκων-ανασταλτική κυτταροτοξικός παράγοντας που δεν έχει δοκιμαστεί σε γαστρικό καρκίνο από ακόμα. Σε αυτή τη μελέτη, η ανθρώπινη γαστρικού καρκίνου κυτταρικές γραμμές AGS, ΝΟΙ-Ν87 και SNU 16 μελετήθηκαν. ΝΑΒ-πακλιταξέλη αναστέλλει τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων με IC50 5 ηΜ σε SNU 16, 23 ηΜ σε AGS και 49 ηΜ σε κύτταρα NCI-Ν87 μετά από θεραπεία 72 ωρών, η οποία ήταν χαμηλότερη από εκείνη της οξαλιπλατίνης (1.05 μΜ έως 1.51 μΜ) και επιρουβικίνη ( 0,12 μΜ έως 0.25 μΜ). επεξεργασία συλλαμβάνω-πακλιταξέλη αυξημένη έκφραση της μιτωτικής ατράκτου, που σχετίζονται φωσφο-stathmin ανεξαρτήτως της συνολικής βάσης ή φωσφορυλιωμένη επίπεδο stathmin, και προκάλεσε το θάνατο μιτωτική κυττάρων όπως επιβεβαιώνεται μέσα από αυξημένη έκφραση της διασπασμένης PARP και κασπάσης-3. Μετά από δύο εβδομάδες ΝΑΒ-πακλιταξέλη, οξαλιπλατίνη ή επιρουβικίνη θεραπεία, ο μέσος in vivo τοπικό ποσοστό αναστολής της ανάπτυξης του όγκου ήταν 77, 17,2 και 21,4 τοις εκατό, αντίστοιχα (ρ = 0,002). Επιδράσεις της θεραπείας επί όγκων πολλαπλασιαστικών και αποπτωτικών δεικτών αντιστοιχούσε με δεδομένα αναστολής της ανάπτυξης του όγκου, ενώ η έκφραση φωσφο-stathmin αυξήθηκε επίσης σε ιστούς. Υπήρξε μια αύξηση στη μέση επιβίωση των ζώων μετά ΝΑΒ-paclitaxel θεραπείας (93 ημέρες) σε σύγκριση με τους μάρτυρες (31 ημέρες, p = 0,0007), οξαλιπλατίνη (40 ημέρες, p = 0,0007) ή σε θεραπεία με docetaxel (81 ημέρες, p = 0.0416) . Η ισχυρή αντικαρκινική δραστικότητα του ΝΑΒ-paclitaxel σε πειραματικά γαστρικό καρκίνο, υποστηρίζουν τέτοια μικροσωληνίσκους ανασταλτική στρατηγική για κλινική εφαρμογή. Συλλαμβάνω-πακλιταξέλη οφέλη παρατηρήθηκαν ανεξάρτητα από φωσφορυλιωμένη έκφραση stathmin στη βασική γραμμή, θέτοντας υπό αμφισβήτηση την εξέταση της χρήσης ΝΑΒ-πακλιταξέλη σε καρκίνο του στομάχου που βασίζονται στο παρόν υποθετικό βιοδείκτη

Παράθεση:. Zhang C, Awasthi Ν, Schwarz ΜΑ, Hinz S, Schwarz RE (2013) Superior αντικαρκινική δράση της νανοσωματιδίων δεσμευμένη με λευκωματίνη σύνδεση πακλιταξέλη στην Πειραματική γαστρικού καρκίνου. PLoS ONE 8 (2): e58037. doi: 10.1371 /journal.pone.0058037

Επιμέλεια: Lu-Gang Yu, το Πανεπιστήμιο του Λίβερπουλ, Ηνωμένο Βασίλειο

Ελήφθη: 20, Νοεμβρίου του 2012? Αποδεκτές: 29 Ιαν 2013? Δημοσιεύθηκε: 27 Φεβρουαρίου 2013

Copyright: © 2013 Zhang et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Καρκίνος στομάχου (GC) είναι η τέταρτη πιο διαδεδομένη. καρκίνος και η δεύτερη πιο κοινή αιτία θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με ολόκληρο τον κόσμο [1] – [3]. Οι περισσότεροι ασθενείς έχουν προχωρήσει ή μεταστατική νόσο κατά τον χρόνο της διάγνωσης [4], [5]. Ο συνδυασμός των οξαλιπλατίνη και 5-φθοριοουρακίλη, με και χωρίς epirubicin, έχει γίνει η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη αγωγή σε χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής για προχωρημένο καρκίνο του στομάχου [6], [7]. Ωστόσο, αυτή η θεραπεία συνδυασμού έχει το δυναμικό για σημαντικές παρενέργειες και φέρει ακόμα περιορισμένη αποτελεσματικότητα, ενώ πρόγνωση των ασθενών παραμένει μελαγχολική με μια μέση επιβίωση περίπου 10 μήνες [8] – [11]. Σε μια προσπάθεια να βελτιωθεί η επιβίωση και να μειωθεί η τοξικότητα, μοριακά στοχευμένη θεραπεία διερευνάται ενεργά για τη θεραπεία του γαστρικού καρκίνου [12].

Οι μικροσωληνίσκοι έχουν από μακρού θεωρηθεί ως στόχο ενδιαφέροντος για μερικά αντικαρκινικά φάρμακα, λόγω της καθολική ο ρόλος τους στην πολλαπλασιαζόμενα κύτταρα και ουσιαστικό ρόλο τους στη μίτωση [13] – [15]. Η πακλιταξέλη και δοκεταξέλη είναι κλασικά αναστολείς μικροσωληνίσκων που ασκούν τη δράση τους μέσω της προώθησης πολυμερισμού τουμπουλίνης και τη σταθεροποίηση των μικροσωληνίσκων που προκύπτουν σε G2-M σύλληψης φάσης και μιτωτικό κυτταρικό θάνατο [15]. Ο μιτωτικός θάνατος κυττάρου είναι ένας τρόπος κυτταρικού θανάτου που λαμβάνει χώρα ειδικά κατά τη μιτωτική στάδια επάγεται από παράγοντες που βλάπτουν το DNA και τα δηλητήρια ατράκτου /μιτωτικούς αναστολείς [16], [17]? είναι κυρίως κασπάσης εξαρτάται, αλλά κάτω από σπάνιες περιπτώσεις μπορεί επίσης να κασπάση ανεξάρτητη [18]. Η πακλιταξέλη έχει δοκιμαστεί για προηγμένες και υποτροπιάζοντα γαστρικών καρκίνων με ένα ποσοστό απόκρισης 43% σε συνδυασμό με 5-φθοριοουρακίλη και φολινικό οξύ [9], [19]. Σε σύγκριση με το ποσοστό ανταπόκρισης 38~45% απέδωσε με συνδυασμό οξαλιπλατίνης με 5-φθοριοουρακίλη και φολινικό οξύ, το paclitaxel δεν κατέληξε σε ανώτερη επιβίωση αλλά προκάλεσε περισσότερες παρενέργειες, ιδιαίτερα σε ηλικιωμένους ασθενείς [9], [20] – [ ,,,0],22]. Paclitaxel απαιτείται γαλακτωματοποίηση με διαλύτες για να επιτρέψει την ενδοφλέβια χορήγηση η οποία έχει οδηγήσει σε αντιδράσεις υπερευαισθησίας και δυνητικά δραματικές παρενέργειες σε ασθενείς [23], [24]. Νανοσωματιδίων λευκωματίνη δεσμευμένο (συλλαμβάνω) paclitaxel είναι ένα νέο λευκωματίνη σταθεροποιημένο, cremophor-free και υδατοδιαλυτά νανοσωματιδίων της πακλιταξέλης. Είναι καλά ανεκτή χωρίς αντιδράσεις υπερευαισθησίας μετά την ενδοφλέβια έγχυση [25]. Κλινικές και πειραματικές μελέτες έδειξαν ότι σε σύγκριση με πακλιταξέλη με βάση διαλύτες, ΝΑΒ-paclitaxel είχε υψηλότερη διατήρηση του όγκου, χαμηλότερη τοξικότητα [23], [26] και πιο ισχυρές επιδράσεις κατά του όγκου στον καρκίνο του μαστού, μη μικροκυτταρικός καρκίνος του πνεύμονα (NSCLC), του παγκρέατος καρκίνο, μελάνωμα, και καρκίνο κεφαλής και τραχήλου [27] – [31]. Ωστόσο, ο πιθανός ρόλος της ΝΑΒ-paclitaxel σε γαστρικά καρκινικά κύτταρα δεν δοκιμάζεται από ακόμα

Stathmin, μια φωσφοπρωτεϊνη μικροσωληνίσκων-αποσταθεροποίησης, είναι ένας σημαντικός ρυθμιστής της μικροσωληνίσκων πολυμερισμού και της δυναμικής [32] – [34]. , και βρέθηκε ότι σχετίζεται με αντίσταση ταξάνης σε ορισμένους τύπους όγκων μέσω μεταβληθεί σύνδεσης φαρμάκου και καθυστέρηση G2-M μετάπτωσης φάσης [33], [35]. αναστολή Stathmin είχε μια συνεργιστική αντιαγγειογενετική και αντικαρκινική δράση με ταξόλη [36]. έκφραση Stathmin έχει βρεθεί να είναι παρών σε μία ευρεία ποικιλία ανθρώπινων καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του στομάχου και ως εκ τούτου μπορεί να αντιπροσωπεύει έναν ελκυστικό στόχο για θεραπεία του καρκίνου [34], [37], [38]. Jeon et al. Βρέθηκε ότι stathmin μπορούσε να χρησιμεύσει ως προγνωστικός δείκτης και ένα πιθανό θεραπευτικό στόχο για τον καρκίνο του στομάχου [37]. Η φωσφορυλίωση του stathmin μειώνει μικροσωληνίσκους αποσταθεροποιητικά αποτελέσματα της, ένα φαινόμενο που έχει επίσης αποδοθεί σε δραστηριότητα ταξάνιο [34].

Αυτή η μελέτη αξιολόγησε τις δραστικότητες κατά του όγκου του ΝΑΒ-paclitaxel σε ανθρώπινο γαστρικό καρκινικά κύτταρα in vitro και in vivo. Συγκρίναμε την αντικαρκινική αποτελεσματικότητα του ΝΑΒ-paclitaxel σε άλλους κυτταροτοξικούς παράγοντες για την τοπική ανάπτυξη του όγκου και την επιβίωση των ζώων. Μετρήσαμε επίσης την έκφραση της συνολικής stathmin και φωσφο-stathmin in vitro και vivo για την αξιολόγηση του ρόλου τους ως προγνωστική δείκτες στο ΝΑΒ-paclitaxel αντικαρκινική απόκριση.

Υλικά και Μέθοδοι

Κυτταρική καλλιέργεια και αντιδραστηρίων

Οι ανθρώπινου γαστρικού γραμμές AGS καρκινικού κυττάρου, NCI-Ν87 και SNU 16 λήφθηκαν από την American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, MD) και καλλιεργήθηκαν σε μέσο RPMI 1640 (Sigma Chemical Co. St. Louis, ΜΟ ) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) στους 37 ° C σε υγροποιημένη 5% CO

2 ατμόσφαιρα. ΝΑΒ-πακλιταξέλη αγοράστηκε από Abraxis BioScience (Los Angeles, CA). Η οξαλιπλατίνη αγοράστηκε από την εταιρεία Sanofi Aventis (Bridgewater, NJ). Docetaxel, επιρουβικίνη και 5-φθοριοουρακίλη ελήφθησαν από ένα τοπικό φαρμακείο. Το αντιδραστήριο πολλαπλασιασμού κυττάρου WST-1 αγοράστηκε από την Roche Diagnostic Corporation (Indianapolis, ΙΝ).

Κυτταρική βιωσιμότητα δοκιμασία

Η βιωσιμότητα των κυττάρων αξιολογήθηκε με την χρωματομετρική δοκιμασία WST-1. Η μέτρηση βασίζεται στην ικανότητα των βιώσιμων κυττάρων να διασπούν το σουλφονωμένης άλας τετραζολίου WST-1 (4- [3- (4-ιωδοφαινυλ) -2- (4-νιτροφαινυλ) -2Η-5-τετραζολιο] -1, 3- βενζόλιο δισουλφονικό) με μιτοχονδριακών δεϋδρογενασών [39]. Γαστρικό καρκινικά κύτταρα (5000 κύτταρα ανά φρεάτιο) επιστρώθηκαν σε πλάκα 96 φρεατίων σε κανονικό μέσο ανάπτυξης και υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ΝΑΒ-paclitaxel, 5-φθοριοουρακίλη, οξαλιπλατίνη και επιρουμπικίνη μετά από 16 ώρες επώασης. Το εύρος των συγκεντρώσεων που χρησιμοποιήθηκαν (1 ηΜ έως 10 μΜ) ήταν συγκρίσιμη με κλινικά επιτεύξιμες συγκεντρώσεις τους. Μετά από επιπλέον επώαση 72 ωρών, 10 μΐ WST-1 αντιδραστηρίου προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο που ακολουθείται από επώαση για 2 ώρες. Η απορρόφηση στα 450 nm μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη μικροπλακός.

κυτταρικού κύκλου ανάλυση

Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου διεξήχθη με κυτταρομετρία ροής με φθορίζουσα χρώση ιωδιούχου προπιδίου (ΡΙ). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ΝΑΒ-πακλιταξέλη, οξαλιπλατίνη, επιρουβικίνη και ντοσεταξέλη για 8 έως 24 ώρες. Τα κύτταρα στη συνέχεια συλλέχθηκαν και μονιμοποιήθηκαν σε 75% αιθανόλη-PBS όλη τη νύχτα στους -20 ° C. Τα κύτταρα φυγοκεντρήθηκαν για 5 λεπτά στα 2000 χ g. Το κυτταρικό ίζημα επαναιωρήθηκε και επωάστηκε σε 0,05 mg /ml ΡΙ, 0.1% Triton Χ-100, και 1 mg /ml RNAse Α σε PBS για 45 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Το εναιώρημα στη συνέχεια αναλύθηκαν επί Becton Dickinson FACScan. Η αναλογία των κυττάρων στην υπο-G1, G1, S, G2 και Μ-φάσεις του κυτταρικού κύκλου προσδιορίστηκε με περιεχόμενο DNA τους.

Η ανοσοκυτταροχημική ανάλυση

Γαστρικό καρκινικά κύτταρα (1 χ 10

5 κύτταρα ανά θάλαμο) απλώθηκαν σε ένα slide 4-θάλαμο σε κανονικό μέσο ανάπτυξης. Μετά από 24-ωρη τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ΝΑΒ-πακλιταξέλη για 16 ώρες και στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη. Τα κύτταρα επωάστηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα αποκλεισμού CAS ακολουθούμενο από 1 ώρα επώαση με φωσφο-stathmin αντίσωμα (1:100) και 40 λεπτά επώασης με Cy3 (1:200 αραίωση) δευτερογενές αντίσωμα. Τα πλακίδια στερεώθηκαν χρησιμοποιώντας διάλυμα στερέωσης που περιέχει 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (ϋΑΡΙ) (Invitrogen, Carlsbad, CA). μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση σημάτων φθορισμού με τη χρήση του μικροσκοπίου IX81 Ολύμπου εξοπλισμένα με Hamamatsu Orca ψηφιακή κάμερα (Hamamatsu Corporation, Bridgewater, NJ).

ανάλυση Western blot

Υπο-συρρέουσες μονοστοιβάδες κυττάρων υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ΝΑΒ-πακλιταξέλη, οξαλιπλατίνη και επιρουβικίνη. Τα κυτταρολύματα και προϊόντα λύσης όγκου ελήφθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [40]. Τα υπερκείμενα ανακτήθηκαν με φυγοκέντρηση στις 13.000 rpm, μετρήθηκαν οι συγκεντρώσεις πρωτεΐνης και ίσες ποσότητες ολικής πρωτεΐνης διαχωρίστηκαν με SDS-PAGE. Οι πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες PVDF (Bio-Rad, Hercules, CA) και οι μεμβράνες αποκλείστηκαν για 1 ώρα σε ΤΒδ-Τ. Οι μεμβράνες επωάστηκαν όλη τη νύκτα στους 4 ° C με τα ακόλουθα αντισώματα: συνολική stathmin, φωσφο-stathmin (Ser38), που διασπάται πολυ (ADP-ριβόζη) πολυμεράσης-1 (PARP-1), διασπασμένη κασπάση 3 (όλα από την Cell Signaling Technology , Beverly, ΜΑ), α-τουμπουλίνης και β-ακτίνης (αμφότερα από την Sigma, St. Louis, ΜΟ). Οι μεμβράνες στη συνέχεια επωάστηκαν με τα αντίστοιχα συζευγμένο με HRP δεύτερα αντισώματα (Pierce Biotechnologies, Santa Cruz, CA) για μία ώρα. Ειδικές ζώνες ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας το αντιδραστήριο ενισχυμένης chemoilluminescence (ECL, Perkin Elmer Life Sciences, Boston, MA) σε φιλμ αυτοραδιογραφίας.

υποδόρια ανάπτυξη όγκου μελέτη

Όλα τα ζωικά πειράματα διεξήχθησαν σύμφωνα με οι κατευθυντήριες γραμμές και εγκεκριμένα πρωτόκολλα του Πανεπιστημίου του Τέξας Southwestern Medical Center (Dallas, TX) Θεσμική Φροντίδα ζώων και Επιτροπή Χρήσης (Αριθμός άδειας 2012 – 0081). Τα ζώα παρακολουθήθηκαν καθημερινά όλο το πείραμα για οποιοδήποτε σημάδι δυσφορίας. Θηλυκά ποντίκια SCID (6 έως 8 εβδομάδες) χρησιμοποιήθηκαν για συγκριτικούς μοντελοποίηση της ανάπτυξης υποδόριου όγκου. Γαστρικό καρκινικά κύτταρα (10 χ 10

6 NCI-Ν87 ή 20 × 10

6 SNU 16 κύτταρα) εγχύθηκαν υποδόρια σε κάθε ποντίκι. Οι ποντικοί ζυγίστηκαν δύο φορές την εβδομάδα. Δεκατέσσερις ημέρες μετά την ένεση των καρκινικών κυττάρων, όλα τα ποντίκια είχαν μετρήσιμη όγκου (μέσο μέγεθος όγκου από 100 έως 150 mm

3). Οι ποντικοί στη συνέχεια ομαδοποιήθηκαν τυχαίως (η = 6~8 ανά ομάδα) και αγωγή ενδοπεριτοναϊκά με PBS (έλεγχος), συλλαμβάνω-paclitaxel (10 mg /kg σε 100 μΙ PBS, 2 φορές την εβδομάδα), οξαλιπλατίνη (5 mg /kg σε 100 μΙ PBS, 2 φορές την εβδομάδα), και επιρουβικίνη (1 mg /kg σε 100 μΙ PBS, 2 φορές την εβδομάδα) για 14 ημέρες. Το μέγεθος του όγκου μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα μέσω της δαγκάνας, και ο όγκος του όγκου (V) υπολογίστηκε με χρήση του τύπου V = ½ [L Χ (W)

2], L = το μήκος και το πλάτος W =. Σχετική όγκος του όγκου (RTV) προσδιορίστηκε σύμφωνα με τον τύπο RTV = V

n /V

0 όπου V

0 και V

1 αντιπροσωπεύουν όγκο του όγκου κατά την ημέρα 0 και την επιτυχία ημερών μέτρησης, αντίστοιχα. Ο ρυθμός αναστολής ανάπτυξης όγκου υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τον τύπο (1-RTVt /RTVC) × 100% όπου Τ και C παριστάνουν ομάδα θεραπείας και ελέγχου. Μετά την ολοκλήρωση της θεραπείας, όλοι οι ποντικοί υποβλήθηκαν σε ευθανασία με CO2, οι όγκοι αφαιρέθηκαν, ζυγίστηκαν, αποκόπηκαν και επεξεργασία για ιστολογική, ανοσοϊστοχημική και ανάλυση κηλίδας Western.

Ανοσοϊστοχημική ανάλυση

δείγματα καρκινικού ιστού μονιμοποιήθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη και εγκλείστηκαν σε παραφίνη. Η ενδονεοπλασματική πολλαπλασιασμός μετρήθηκε με χρώση πυρηνικό αντιγόνο Κί67 σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή (Abcam, Cambridge, ΜΑ). τμήματα ιστού εγκλεισμένα σε παραφίνη κόπηκαν (5 μm), αποπαραφινοποιήθηκαν, επανυδατώθηκαν και αντιγόνο ανακτηθεί. Οι τομές ιστών επωάστηκαν με ρυθμιστικό μπλοκαρίσματος CAS ακολουθούμενο από 1 ώρα επώαση με 1:200 αραίωση του πρωτογενούς Κί67 ή φωσφο-stathmin αντίσωμα (1:200) και 40 λεπτά επώασης με Cy3 (1:200 αραίωση) δευτερογενές αντίσωμα. Τα πλακίδια στερεώθηκαν χρησιμοποιώντας διάλυμα στερέωσης που περιέχει 4 ‘, 6-διαμιδινο-2-φαινυλινδόλη (ϋΑΡΙ) (Invitrogen). Η ενδονεοπλασματική πολλαπλασιαστική δράση δείκτη και stathmin αξιολογήθηκε με υπολογισμό των θετικών κυττάρων από πέντε διαφορετικούς τομείς υψηλής ισχύος (HPF) με τυφλό τρόπο. Η ενδονεοπλασματική αποπτωτική δραστικότητα αξιολογήθηκε με χρώση τομών ιστού με «ApopTag Απόπτωση Detection Kit» σύμφωνα με τις οδηγίες (Millipore) του κατασκευαστή. μικροσκόπιο φθορισμού χρησιμοποιήθηκε για την ανίχνευση σημάτων φθορισμού με τη χρήση του μικροσκοπίου IX81 Ολύμπου εξοπλισμένα με Hamamatsu Orca ψηφιακή κάμερα (Hamamatsu Corporation, Bridgewater, NJ) και μια μονάδα κλώση ομοεστιακό ΣΕΔ χρησιμοποιώντας το λογισμικό Slidebook (Καινοτομίες Intelligent Imaging, Philadelphia, PA).

Η επιβίωση των ζώων ανάλυση

μελέτες επιβίωσης σε ζώα διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας 6- έως 8-εβδομάδων θηλυκά ποντίκια SCID [41]. Οι ποντικοί ενδοπεριτοναϊκώς ένεση με SNU 16 (40 × 10

6) κύτταρα και το σωματικό βάρος μετρήθηκε δύο φορές την εβδομάδα. Τρεις εβδομάδες μετά τα ποντίκια ένεση νεοπλασματικών κυττάρων ομαδοποιήθηκαν τυχαίως (η = 6 έως 8 ανά ομάδα).

Στην πρώτη μελέτη επιβίωσης, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή ενδοπεριτοναϊκά με PBS (έλεγχος), συλλαμβάνω-paclitaxel (10 mg /kg σε 100 μΙ PBS, 2 φορές την εβδομάδα), και οξαλιπλατίνη (5 mg /kg σε 100 μΙ PBS, 2 φορές την εβδομάδα) για 2 εβδομάδες. Στη δεύτερη μελέτη επιβίωσης, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή ενδοπεριτοναϊκά με PBS (έλεγχος), συλλαμβάνω-paclitaxel (10 mg /kg σε 100 μΙ PBS, 2 φορές την εβδομάδα), docetaxel (3 mg /kg σε 100 μΙ PBS, 2 φορές την εβδομάδα ) ή οξαλιπλατίνη (5 mg /kg σε 100 μΙ PBS, 2 φορές την εβδομάδα) για 2 εβδομάδες. Ταλαιπωρία των ζώων μειώθηκε κατά ευθανασία όταν στρίβουν ετοιμοθάνατο σύμφωνα με προκαθορισμένα κριτήρια που περιλαμβάνουν ταχεία απώλεια ή αύξηση βάρους (& gt? 15%), αποτυχία να φάει ή να πιει, λήθαργο, αδυναμία να παραμείνει όρθια και η έλλειψη δύναμης. Η επιβίωση των ζώων αξιολογήθηκε από την πρώτη ημέρα της θεραπείας μέχρι το θάνατο.

Η στατιστική ανάλυση

ανάλυση

Η επιβίωση αξιολογήθηκε με GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, San Diego, CA). In vitro κύτταρο τα δεδομένα πολλαπλασιασμού εκφράζονται ως μέση τιμή ± τυπική απόκλιση. Η στατιστική ανάλυση έγινε με ANOVA για τη σύγκριση πολλαπλών ομάδα και t-test του Student για τη σύγκριση επιμέρους ομάδα. Επιβίωση σύγκριση ομάδα έγινε μέσω δοκιμασία log-rank μέσα σε μια ανάλυση τύπου Kaplan-Meier. Οι τιμές του ρ & lt? 0,05 θεωρήθηκαν ότι αντιπροσωπεύουν στατιστικώς σημαντικές διαφορές ομάδα

Αποτελέσματα

έκφραση Stathmin στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα

ανάλυση του ανθρώπινου γαστρικού καρκίνου κύτταρα AGS, NCI-. Ν87 και SNU 16 αποκάλυψε ότι οι τρεις γραμμές που εκφράζονται stathmin. Καμία διαφορά της συνολικής έκφρασης stathmin βρέθηκε ανάμεσα σε αυτές τις τρεις κυτταρικές σειρές. Η έκφραση του φωσφο-stathmin κυμαινόταν μεταξύ των κυτταρικών σειρών, με την ακόλουθη σειρά: SNU 16 & gt? AGS & gt? κύτταρα NCI-Ν87 (Σχήμα 1Α).

(Α) Συνολική κυτταρικά εκχυλίσματα του γαστρικού καρκίνου κύτταρα αναλύθηκαν με ανοσοστύπωση ως προς την έκφραση του stathmin και φωσφο-stathmin. (Β-D) Ανθρώπινα γαστρικού καρκίνου κύτταρα SNU 16 (Β), NCI-Ν87 (C) και AGS (D) απλώθηκαν σε πλάκες 96 φρεατίων και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με 1 ηΜ έως 1000 ηΜ συγκεντρώσεις ΝΑΒ-paclitaxel, 5-φθοριοουρακίλη, οξαλιπλατίνη και επιρουβικίνη. Μετά από 72 ώρες, 10 μΐ WST-1 αντιδραστηρίου προστέθηκαν σε κάθε φρεάτιο και επωάστηκαν για 2 επιπλέον ώρες. Η απορρόφηση στα 450 nm μετρήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη μικροπλακών. Η προκύπτουσα αριθμός των βιώσιμων κυττάρων υπολογίσθηκε με μέτρηση της απορρόφησης του χρώματος που παράγεται σε κάθε φρεάτιο. Τα δεδομένα είναι η μέση τιμή ± SD τριπλών προσδιορισμών.

Η

Nab-πακλιταξέλη αναστέλλει γαστρική πολλαπλασιασμού καρκινικών κυττάρων

Nab-paclitaxel ανέστειλε γαστρικού πολλαπλασιασμού των καρκινικών κυττάρων σε ένα δοσοεξαρτώμενο τρόπο, και η αναστολή στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό φάνηκε να ακολουθούν την ίδια σειρά ως έκφραση της φωσφο-stathmin (Εικόνα 1Β). Στα 100 ηΜ αναστολή συγκέντρωση του πολλαπλασιασμού των κυττάρων ήταν 94,5, 66,7 και 41,8 τοις εκατό σε SNU 16, AGS και τα κύτταρα NCI-Ν87 αντίστοιχα. Nab-paclitaxel έδειξε την υψηλότερη αντιπολλαπλασιαστική δραστικότητα με χαμηλότερη αποτελεσματική δοσολογία που βρέθηκαν σε όλες τις κυτταρικές σειρές που εξετάστηκαν 3 σε σύγκριση με 5-fluouracil, οξαλιπλατίνη και επιρουβικίνη. Το IC

50 του ΝΑΒ-paclitaxel ήταν 5 ηΜ σε SNU 16, 23 ηΜ σε AGS και 49 ηΜ σε κύτταρα ΝΟΙ-Ν87, το οποίο ήταν μικρότερο από 5-fluouracil (6,46 μΜ σε SNU 16, & gt? 10 μΜ σε AGS και 10.2 μΜ σε κύτταρα NCI-Ν87), οξαλιπλατίνη (1,51 μΜ σε SNU 16, 1,64 μΜ σε AGS και 1,05 μΜ σε κύτταρα NCI-Ν87) ή επιρουβικίνη (0,12 μΜ σε SNU 16, 0,16 μΜ σε AGS και 0,25 μΜ σε κύτταρα NCI-Ν87) ( Εικόνα 1Γ).

Nab-πακλιταξέλη προκαλεί G2 σύλληψη και μιτωτικό κυτταρικό θάνατο in vitro

Για να αξιολογεί τον υποκείμενο μηχανισμό της αναστολής της ανάπτυξης με συλλαμβάνω-πακλιταξέλη, το προφίλ του κυτταρικού κύκλου αναλύθηκε. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2Α, ΝΑΒ-paclitaxel (100 ηΜ) είχε ως αποτέλεσμα G2-M διακοπή του κυτταρικού κύκλου σε κύτταρα SNU 16. Το ποσοστό των ιωδιούχο προπίδιο θετικών κυττάρων σε φάση G2-M αυξήθηκε από 35,6 να 71,6 μετά από 100 ηΜ θεραπεία ΝΑΒ-πακλιταξέλη για 12 ώρες. Παρόμοιες αλλαγές παρατηρήθηκαν σε κύτταρα AGS και ΝΟΙ-Ν87 με ΝΑΒ-paclitaxel και docetaxel θεραπεία αλλά όχι με οξαλιπλατίνη και θεραπεία epirubicin (Σχήματα S1 και S2).

(Α) κύτταρα SNU 16 καλλιεργήθηκαν για 24 ώρες και στη συνέχεια κατεργάζεται με 100 ηΜ ΝΑΒ-πακλιταξέλη για 12 ώρες. Η ανάλυση κυτταρικού κύκλου διεξήχθη με κυτταρομετρία ροής. Τα αποτελέσματα που παρουσιάζονται είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων. (Β-ϋ) Έκφραση του φωσφο-stathmin και μιτωτικό κυτταρικό θάνατο αξιολογήθηκε σε SNU 16 (Β), NCI -N87 (C), και AGS κύτταρα (C). Τα καλλιεργημένα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με ΝΑΒ-paclitaxel (10 μΜ) και έδειξαν αυξημένη διαμόρφωση σύλληψης μιτωτική και έκφραση φωσφο-stathmin με ανοσοκυτταροχημική χρώση. Μιτωτικές συλλήψεις ανιχνεύθηκαν με την παρουσία της έκφρασης φωσφο-stathmin. (D) Ένα υπο-συρρέουσα μονοστιβάδα ανθρώπινων γαστρικών καρκινικών κυττάρων AGS, ΝΟΙ-Ν87 και SNU 16 υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ΝΑΒ-paclitaxel (10 μΜ) για 3, 6 και 9 ώρες και αναλύθηκαν με ανοσοκηλίδωση για φωσφο-stathmin και συνολική stathmin. (Ε) Ανθρώπινα γαστρικού καρκίνου κυτταρική υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ΝΑΒ-paclitaxel (10 μΜ), οξαλιπλατίνη (10 μΜ), και επιρουβικίνη (10 μΜ) για 16 ώρες και αναλύθηκαν για διασπασμένης ΡΑΚΡ-1 και κασπάσης-3. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά δύο ανεξάρτητων πειραμάτων με παρόμοια αποτελέσματα.

Η

Επίδραση της ΝΑΒ-paclitaxel στην μιτωτική κυτταρικού θανάτου, η έκφραση της φωσφο-stathmin και πρωτεϊνών που σχετίζονται με την απόπτωση μετρήθηκε με immunocystochemistry και στύπωμα Western. ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία προκάλεσε αναστάτωση μικροσωληνίσκων και μιτωτική συλλήψεις στα γαστρικά καρκινικά κύτταρα, όπως παρατηρήθηκε από τον πυρήνα του κατακερματισμού και καρυοπυκνώσεως (Εικόνα 2Β). Η έκφραση του φωσφο-stathmin αυξήθηκε μετά ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία, και υψηλότερη έκφραση φωσφο-stathmin συσχετίστηκε με μεγαλύτερο βαθμό μιτωτικών συλλήψεις, κατακερματισμός πυρήνας ή καρυοπυκνώσεως, και θάνατο των κυττάρων (Σχήμα 2Β και 2C). Πυρηνική κατακερματισμός και καρυοπυκνώσεως εμφανίστηκαν σε 16,7% των κυττάρων με χαμηλή έκφραση του φωσφο-stathmin αλλά σε 95,7% των κυττάρων με υψηλή έκφραση του φωσφο-stathmin (r = 0,672, ρ & lt? 0.001). Υπήρχε επίσης απόδειξη για το χρόνο που εξαρτώνται από αυξημένη έκφραση του φωσφο-stathmin με επεξεργασία συλλαμβάνω-paclitaxel (Σχήμα 2D).

Εξετάσαμε εάν το μιτωτικό κυτταρικό θάνατο που επάγεται από συλλαμβάνω-πακλιταξέλη θα μπορούσε εν μέρει να συσχετισθεί με την επαγωγή της απόπτωσης . Αξιολόγηση της PARP-1 διάσπασης και η διάσπαση της κασπάσης-3 ως δείκτες της επαγωγής της απόπτωσης αποκάλυψε ότι στο γαστρικό καρκίνο κύτταρα ΝΑΒ-πακλιταξέλη, οξαλιπλατίνη και επιρουμπικίνη θεραπεία προκάλεσε μια αύξηση στην έκφραση τόσο διασπασμένη PARP-1 και κασπάσης-3. Αυτή η έκφραση των πρωτεϊνών που σχετίζονται με την απόπτωση εμφανίστηκε υψηλότερη μετά από ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία σε σύγκριση με οξαλιπλατίνη ή επιρουβικίνη αγωγές (Σχήμα 2Ε).

Nab-paclitaxel αναστέλλει την ανάπτυξη γαστρικού ξενομοσχεύματα καρκίνου

In vivo αντικαρκινική επιδράσεις του ΝΑΒ-paclitaxel αξιολογήθηκαν σε ένα μοντέλο ξενομοσχεύματος ποντικού χρησιμοποιώντας SNU 16 κύτταρα. ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία με 10 mg /kg δύο φορές την εβδομάδα για δύο εβδομάδες ήταν καλά ανεκτή χωρίς εμφανή σημεία τοξικότητας, όπως κρίνεται από το βάρος του ποντικιού και καθημερινά αξιολόγησης. Μετά από θεραπεία δύο εβδομάδων, συλλαμβάνω-paclitaxel θεραπεία είχε σαν αποτέλεσμα στατιστικά σημαντική αναστολή της ανάπτυξης του όγκου (ρ = 0.0004), η οποία ήταν μεγαλύτερη από εκείνες της οξαλιπλατίνης (p = 0,0361) και επιρουβικίνη (p = 0,032) σε σύγκριση με τον έλεγχο του οχήματος, αντίστοιχα (Σχήμα 3Α). Ο ρυθμός αναστολής ανάπτυξης όγκου μετά από μια θεραπεία 2 εβδομάδων με ΝΑΒ-πακλιταξέλη, οξαλιπλατίνη και επιρουμπικίνη ήταν 77, 17,2 και 21,4 τοις εκατό (p = 0.002), αντίστοιχα. Μόνο ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία δημιούργησε μια μείωση του μεγέθους του υποδόριου αλλοιώσεων σε σύγκριση με το προκαθορισμένο μέγεθος του όγκου τους. Μέσο βάρος όγκου μειώθηκε σημαντικά με κατεργασία συλλαμβάνω-paclitaxel (0,154 ± 0,075 g vs. 0,756 ± 0,232 g, ρ = 0.037), αλλά όχι με οξαλιπλατίνη (0,408 ± 0,12 g) ή επιρουβικίνη (0,46 ± 0,172 g) θεραπεία σε σύγκριση με όχημα ελέγχου, αντίστοιχα (Σχήμα 3Α). Αξιολογήσαμε επίσης τα αποτελέσματα κατά των όγκων της ΝΑΒ-paclitaxel σε NCI-Ν87 τοπικές όγκους ξενομοσχεύματος ποντικού. Μετά από δύο εβδομάδες θεραπείας, ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία οδήγησε σε σημαντική αναστολή του όγκου του όγκου (ρ = 0.0023) (Σχήμα 3Β) και ο ρυθμός αναστολής ανάπτυξης όγκου ήταν 72,8 τοις εκατό. Μέσο βάρος του όγκου στην ομάδα αγωγής ΝΑΒ-paclitaxel ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην ομάδα οχήματος (0,093 ± 0,026 g vs. 0.288 ± 0.02 g, ρ = 0.0054) (Σχήμα 3Β). Καμία σημαντική αλλαγή στο σωματικό βάρος ποντικών παρατηρήθηκε σε οποιοδήποτε από τα ΝΑΒ-πακλιταξέλη, οξαλιπλατίνη ή θεραπεία επιρουβικίνη ομάδες.

(Α) ποντίκια SCID εγχύθηκαν υποδορίως με κύτταρα SNU 16 (20 × 10

6) και κατεργάζεται με ΝΑΒ-πακλιταξέλη, οξαλιπλατίνη και επιρουμπικίνη για 2 εβδομάδες. (Β) ποντίκια SCID εγχύθηκαν υποδορίως με κύτταρα NCI-Ν87 (10 × 10

6) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ΝΑΒ-paclitaxel για 2 εβδομάδες. αξιολογήθηκαν σχετικός όγκος του όγκου και του βάρους του όγκου για την τελική ημέρα. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά του μέσου τιμές ± τυπική απόκλιση από 6-8 ποντικούς ανά ομάδα. Σύμβολο * αντιπροσωπεύει σημαντική διαφορά (p & lt? 0,05) και το σύμβολο ** αντιπροσωπεύει σημαντικές διαφορές (p & lt? 0.001) σε σύγκριση με τους ελέγχους οχημάτων? ns = όχι σημαντική διαφορά.

Η

Nab-paclitaxel προκαλεί μιτωτική κυτταρικό θάνατο in vivo

Μηχανισμοί in vivo δραστικότητα κατά του όγκου του ΝΑΒ-paclitaxel εξετάστηκαν περαιτέρω σε ιστούς όγκων που λαμβάνονται από SNU 16 και NCI-Ν87 ξενομοσχευμάτων. Μια σημαντική αύξηση στην έκφραση του φωσφο-stathmin παρατηρήθηκε σε SNU 16 (Σχήμα 4Α) και ΝΟΙ-Ν87 (Σχήμα 4Β) ξενομοσχεύματος όγκους με τη θεραπεία του ΝΑΒ-paclitaxel τόσο ανοσοϊστολογική και Western blot αναλύσεις.

SCID ποντικοί υποδορίως SNU 16 κύτταρα (20 χ 10

6) ή κύτταρα NCI-Ν87 (10 × 10

6) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ΝΑΒ-paclitaxel για 2 εβδομάδες. Η ενδονεοπλασματική έκφραση φωσφο-stathmin μετρήθηκε σε SNU 16 (Α) ή ΝΟΙ-Ν87 (Β) του ιστού του όγκου με ανοσοχρώση τομών ιστού για φωσφο-stathmin (Ser38) αντιγόνο και φωτογραφήθηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού. Προϊόντα λύσης όγκου παρασκευάστηκαν από δείγματα ιστού όγκου που λαμβάνεται από SNU 16 (Α) ή ΝΟΙ-Ν87 (Β) ποντικών που φέρουν όγκο SCID μετά ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία και στη συνέχεια αναλύθηκαν με ανοσοκηλίδωση για φωσφο-stathmin και συνολική stathmin.

Η

ιστός όγκου από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή ΝΑΒ-paclitaxel εμφάνισαν μειωμένο ρυθμό πολλαπλασιασμού των κυττάρων του όγκου. Ένα ενδοογκική πολλαπλασιαστική δείκτης Κί67 έκφραση που βασίζεται μειώθηκε κατά 90.7% (ρ = 0,001) σε σύγκριση με ελέγχους στην ομάδα που λάμβανε ΝΑΒ-paclitaxel, σε αντίθεση με 72,6% (ρ = 0,004) στην ομάδα θεραπείας οξαλιπλατίνη και 67.7% (ρ = 0,003 ) στην ομάδα θεραπείας epirubicin (Σχήμα 5Α). ΝΑΒ-paclitaxel προκάλεσε μία ισχυρότερη επίδραση της αναστολής επί του πολλαπλασιασμού των κυττάρων του όγκου από οξαλιπλατίνη και επιρουμπικίνη.

ποντίκια SCID εγχύθηκαν υποδορίως SNU 16 κύτταρα (20 χ 10

6) και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ΝΑΒ-paclitaxel για 2 εβδομάδες. πολλαπλασιασμός (Α) Η ενδονεοπλασματική μετρήθηκε με ανοσοχρώση τομών ιστού με το πυρηνικό αντιγόνο Κί67 ακολουθούμενη από φθορίζον μικροσκόπιο φωτογραφία. Κί67-θετικά κύτταρα μετρήθηκαν σε πέντε πεδία υψηλής ισχύος ανά δείγμα. Φορές αλλαγή σε πολλαπλασιαστικές δείκτη τυποποιήθηκε με τους ελέγχους (τιμή 1) και άλλα δείγματα σε σύγκριση σε σχέση με αυτό το δείγμα. (Β) Η ενδονεοπλασματική απόπτωση μετρήθηκε με χρώση τμήμα καρκινικού ιστού με τη διαδικασία TUNEL και την επακόλουθη φθορισμού φωτογραφία μικροσκοπίου. αποπτωτικών κυττάρων TUNEL θετικά μετρήθηκαν σε πέντε πεδία υψηλής ισχύος ανά δείγμα. Και για τις δύο ανοσοχρώσης πειράματα, κάθε ομάδα είχε τουλάχιστον τρία δείγματα μετρήθηκαν και τα δεδομένα εκφράζονται ως μέσος όρος ± τυπική απόκλιση. Σύμβολο * αντιπροσωπεύει σημαντική διαφορά σε σύγκριση με την ομάδα του οχήματος (ρ & lt? 0,05).

Η

Εξέταση απόπτωσης σε ιστούς όγκων αποκάλυψε ότι η επαγωγή σε αποπτωτικό δείκτη ήταν 7,9 φορές στην ομάδα του ΝΑΒ-paclitaxel (p = 0,013), 5,7-φορές σε οξαλιπλατίνη αγωγή ζώα (p = 0,024), και 5,2-φορές στην ομάδα θεραπείας epirubicin (p = 0.042) πάνω από τη γραμμή βάσης μέσα στην ομάδα ελέγχου (Σχήμα 5Β)

.

Nab- πακλιταξέλη αυξάνει την επιβίωση των ζώων

στην πρώτη μελέτη επιβίωσης, η μέση επιβίωση των ποντικών SCID-NOD ήταν 24 ημέρες στην ομάδα ελέγχου. Αυτό αυξήθηκε σε 86 ημέρες μετά την ΝΑΒ-paclitaxel αγωγή (ρ = 0,0004 έναντι ομάδας ελέγχου, ρ = 0.0005 vs. ομάδα οξαλιπλατίνη) και σε 37,5 ημέρες μετά τη θεραπεία οξαλιπλατίνη (p = 0,0004 έναντι ομάδας ελέγχου). Το εύρος επιβίωση ομάδα ήταν επίσης ανώτερο μετά ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία (εύρος: 75 έως 95 ημέρες) σε σύγκριση με τη θεραπεία οξαλιπλατίνη. (Εύρος: 34 έως 41 ημέρες) (Σχήμα 6Α)

αποτέλεσμα (Α) Αντικαρκινική του ΝΑΒ -πακλιταξέλη σε σύγκριση με οξαλιπλατίνη. κύτταρα SNU (40 × 10

6) ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά σε ποντίκια SCID, που ακολουθείται από κατεργασία μετά 2 εβδομάδες με ΝΑΒ-paclitaxel (10 mg /kg, 2 φορές την εβδομάδα) και οξαλιπλατίνη (5 mg /kg, 2 φορές την εβδομάδα) για 2 εβδομάδες. (Β) Αντικαρκινική δράση του ΝΑΒ-paclitaxel σε σύγκριση με οξαλιπλατίνη και docetaxel. κύτταρα SNU (40 × 10

6) ενέθηκαν ενδοπεριτοναϊκά σε ποντίκια SCID, που ακολουθείται από κατεργασία μετά 2 εβδομάδες με ΝΑΒ-paclitaxel (10 mg /kg, 2 φορές την εβδομάδα), οξαλιπλατίνη (5 mg /kg, 2 φορές την εβδομάδα), ή docetaxel (3 mg /kg, 2 φορές την εβδομάδα) για 2 εβδομάδες. Η καμπύλη αναπαριστά τον χρόνο επιβίωσης των ζώων από την έναρξη της θεραπείας. Σύμβολο * αντιπροσωπεύει σημαντική διαφορά σε σχέση με τον έλεγχο του οχήματος (ρ & lt? 0.05), το σύμβολο

§ αντιπροσωπεύει σημαντικές διαφορές σε σύγκριση με οξαλιπλατίνη (p & lt? 0.05), και το σύμβολο

# αντιπροσωπεύει σημαντικές διαφορές σε σύγκριση με docetaxel (p & lt? 0,05).

η

στη δεύτερη μελέτη επιβίωσης, διάμεση επιβίωση των ποντικών SCID-NOD ήταν 31 ημέρες στην ομάδα ελέγχου. Αυτό αυξήθηκε σε 93 ημέρες μετά την ΝΑΒ-paclitaxel αγωγή (ρ = 0,0007 έναντι του ελέγχου και της ομάδας οξαλιπλατίνη, και ρ = 0,0416 έναντι ομάδα docetaxel), σε 81 ημέρες μετά τη θεραπεία docetaxel (p = 0,0007 έναντι ελέγχου) και σε 40 ημέρες από την οξαλιπλατίνη (ομάδα ελέγχου p = 0,038 έναντι). Το εύρος επιβίωση της ομάδας ήταν 75 έως 96 ημέρες μετά την ΝΑΒ-paclitaxel θεραπεία σε σύγκριση με τη θεραπεία docetaxel (εύρος: 74 έως 93 ημέρες) και η θεραπεία οξαλιπλατίνη (εύρος: 35 έως 45 ημέρες). (Σχήμα 6Β)

Συζήτηση

Για προχωρημένους καρκίνο του στομάχου είναι απειλητική για τη ζωή και αποτελεί μια τεράστια πρόκληση θεραπεία. Παραδοσιακά δίκλινα ή τρίκλινα σχήματα κυτταροτοξική χημειοθεραπεία έχουν περιορισμένες επιπτώσεις και μπορεί να προκαλέσει παρενέργειες και χημειοαντίσταση [42] – [44]. Η παρούσα μελέτη καταδεικνύει σαφώς ότι η ΝΑΒ-paclitaxel έχει σημαντικά ισχυρότερες επιδράσεις κατά του όγκου επί κυτταρικών γραμμών γαστρικού καρκίνου από χρησιμοποιούνται σήμερα κυτταροτοξικών παραγόντων οξαλιπλατίνη και epirubicin in vitro και in vivo, μετρούμενη με αντιπολλαπλασιαστικές επιδράσεις, απόπτωση, μιτωτικό κυτταρικό θάνατο, εντοπισμένη απόκριση κατά του όγκου και η επιβίωση των σχετικών του φορτίου του όγκου.

In vitro μελέτη έδειξε ότι συλλαμβάνω-πακλιταξέλη είναι πολύ ισχυρή στην αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων που προορίζονται για ανθρώπινη γαστρικού κυτταρικές σειρές από οξαλιπλατίνη και epirubicin. κύτταρα SNU 16 είναι πιο ευαίσθητοι σε συλλαμβάνω-paclitaxel από τα κύτταρα NCI-Ν87. Ορισμένες μελέτες διαπίστωσαν ότι stathmin συσχετίστηκε με την αντίσταση ταξάνης και stathmin νοκ ντάουν μπορεί να αυξήσει την ευαισθησία σε ταξάνη [33], [36]. Ελέγξαμε την έκφραση του stathmin και βρέθηκε καμία διαφορά μεταξύ αυτών των τριών κυτταρικών γραμμών. Είναι ενδιαφέρον ότι, όταν εξετάσαμε την έκφραση του φωσφο-stathmin βρήκαμε ότι η ικανότητα του ΝΑΒ-paclitaxel για την αναστολή του πολλαπλασιασμού των κυττάρων in vitro ήταν στην ίδια σειρά κατάταξης ως έκφραση φωσφο-stathmin σε αυτούς τους τρεις γαστρικά καρκινικά κύτταρα: SNU 16 & gt? AGS & gt? NCI-Ν87. Έτσι, φάνηκε αρχικά ότι φωσφο-stathmin έκφραση συσχετίστηκε με αποτελεσματικότητα ΝΑΒ-paclitaxel, προσδίδοντας κάποια στήριξη σε μια υπόθεση ότι η φωσφο-stathmin μπορεί να χρησιμεύσει ως ένα δυνητικό βιοδείκτη για την πρόβλεψη ΝΑΒ-paclitaxel αντικαρκινική ανταπόκριση σε γαστρικό θεραπεία του καρκίνου.

Πραγματοποιήσαμε μια μελέτη ξενομόσχευμα NCI-Ν87 για να αξιολογήσει την αντικαρκινική δράση της ΝΑΒ-paclitaxel. Μάλλον απροσδόκητα, ΝΑΒ-πακλιταξέλη αναστέλλει σημαντικά NCI-Ν87 ανάπτυξη ξενομοσχεύματος όγκου σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου. Αυτά κάπως αντιφατικά αποτελέσματα φαίνεται να δείχνουν ότι η in vivo αντικαρκινική δράση της ΝΑΒ-paclitaxel σε καρκίνο του στομάχου μπορεί να είναι ανεξάρτητη από τη γραμμή βάσης έκφραση φωσφο-stathmin ή ολική stathmin. Δεδομένου ότι μόνο τρεις κυτταρικές σειρές ελέγχθηκαν, δεν μπορούμε να κάνουμε ένα οριστικό συμπέρασμα για τη σχέση μεταξύ stathmin ή φωσφο-stathmin και συλλαμβάνω-πακλιταξέλη αποτελεσματικότητα στον καρκίνο του στομάχου. Περαιτέρω έρευνα με stathmin νοκ-άουτ θα πρέπει να είναι χρήσιμο να εξετάσει το ζήτημα και να διερευνήσει το ρόλο των stathmin ως βιοδείκτη για την αποτελεσματικότητα NAB-paclitaxel.

Στην παρούσα μελέτη, στη συνέχεια, σε σύγκριση με αντικαρκινική δράση της ΝΑΒ πακλιταξέλη με οξαλιπλατίνη και epirubicin για SNU 16 ξενομόσχευμα τοπικών όγκων. Nab-paclitaxel έδειξε ισχυρότερη αντικαρκινική αποτελεσματικότητα από οξαλιπλατίνη και επιρουμπικίνη που ήταν σύμφωνο με in vitro αποτελέσματα κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του ιστού του όγκου και των δεδομένων απόπτωση.