Αφηρημένο

Στόχος

Τα μονοκύτταρα και τα μακροφάγα μπορούν να διεισδύσουν στο μικροπεριβάλλον του όγκου και να ρυθμίζουν την εξέλιξη των όγκων. Η μελέτη αυτή αποσκοπεί στον προσδιορισμό της συχνότητας των διαφόρων υποσυνόλων των κυκλοφορούντων μονοκυττάρων και των μακροφάγων που διεισδύουν σε όγκο (TIMS) σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC).

Μέθοδοι

Η συχνότητα των διαφορετικών υποσυνόλων των κυκλοφορούντων μονοκυττάρων χαρακτηρίστηκε σε 46 ασθενείς CRC και 22 υγιείς ελέγχους (HC) με κυτταρομετρία ροής. Η συχνότητα των διαφορετικών υποσυνόλων μακροφάγων αναλύθηκε σε τα TIM από 30 καρκινικούς ιστούς και σε χορίου μονοπύρηνα κύτταρα (LPMCs) από 12 μη καρκινικούς ιστούς. Προσδιορίστηκαν οι συγκεντρώσεις των κυτοκινών στο πλάσμα και καρκινοεμβρυονικό αντιγόνο (CEA). Η πιθανή σύνδεση των μέτρων αυτών με τις τιμές των κλινικών παραμέτρων αναλύθηκε.

Αποτελέσματα

Σε σύγκριση με το ότι στο HC, τα ποσοστά των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ , CD14

+ CD169

+ CD163

+ και CD14

+ CD169

+ CD206

+ μονοκύτταρα και τα TIM CD14

+ CD169

+, καθώς και IL- 10

+ CD14

+ CD169

+, αλλά όχι IL-12

+ CD14

+ CD169

+ μακροφάγα ήταν σημαντικά αυξημένη, η οποία συνοδεύεται από τα υψηλότερα επίπεδα της IL-10 στο πλάσμα οι ασθενείς CRC. Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και μακροφάγα ΤΙΜ σχετίστηκαν με το στάδιο της νόσου και συσχετίζεται θετικά με τα επίπεδα της IL-10 πλάσματος και CEA σε ασθενείς CRC.

Συμπέρασμα

Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι η αύξηση της συχνότητας των CD14

+ CD169

+ κύτταρα μπορεί να σχετίζεται με την ανάπτυξη και την εξέλιξη του CRC και ταυτόχρονη αύξηση και των δύο, προ-όγκου (Μ2-όπως , IL-10 που παράγουν) και αντι-όγκου (Μ1-όπως, IL-12 που παράγουν) μονοκύτταρα και μακροφάγα που έχουν διεισδύσει. Η συχνότητα των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και μακροφάγα που έχουν διεισδύσει μπορεί να χρησιμεύσει ως βιοδείκτη για την αξιολόγηση των παθογόνων βαθμούς CRC

Παράθεση:. Li C, Luo Χ, Λιν Υ, Tang Χ , Ling L, Wang L, et al. (2015) Μια υψηλότερη συχνότητα του CD14

+ CD169

+ μονοκυττάρων /μακροφάγων σε ασθενείς με καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (10): e0141817. doi: 10.1371 /journal.pone.0141817

Επιμέλεια: Hiromu Suzuki, Σαπόρο Ιατρικό Πανεπιστήμιο, ΙΑΠΩΝΙΑ

Ελήφθη: May 22, 2015? Αποδεκτές: 13, Οκτωβρίου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 28 Οκτ 2015

Copyright: © 2015 Li et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Όλα τα σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έλαβαν καμία ειδική χρηματοδότηση για το έργο αυτό

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Εισαγωγή

Ο ορθοκολικός καρκίνος (CRC) είναι μία από τις πιο διαδεδομένες κακοήθεις όγκους με υψηλή θνησιμότητα. συχνότητα εμφάνισης της αυξάνεται σε πολλές χώρες και CRC επηρεάζει & gt? 1,2 εκατομμύρια ανθρώπους ετησίως στον κόσμο [1]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η ανάπτυξη και εξέλιξη της CRC συνδέονται με την τοπική φλεγμονή [2-5]. Πράγματι, διάφορα είδη φλεγμονώδεις διηθήσεις, ιδιαίτερα για τα μακροφάγα, είναι παρόντα στους ιστούς CRC και την ισορροπία του και κατά του όγκου protumor φλεγμονώδεις διηθήσεις πιστεύεται ότι είναι κρίσιμης σημασίας για την ανάπτυξη, την πρόοδο και την εισβολή του CRC [3-4, 6]. Ως εκ τούτου, εικονογράφηση των διαφόρων τύπων φλεγμονωδών διηθήσεων και δυνητικές λειτουργίες τους θα έχει μεγάλη σημασία για την κατανόηση της παθογένεσης της CRC.

μακροφάγα, ως επαγγελματίας κύτταρα παρουσίασης αντιγόνου (APC) στο έμφυτο ανοσοποιητικό σύστημα, είναι τα αφθονότερο πληθυσμό του ανοσοποιητικού κυττάρων στο μικροπεριβάλλον του όγκου [7, 8], και παίζουν σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της ομοιόστασης των ιστών και ανοσολογική κατάσταση. Τα μακροφάγα στους ιστούς του εντέρου μπορεί να είναι από αυτο-ανανέωσή τους [9] και μπορεί επίσης να προέρχονται από την μετανάστευση των μονοκυττάρων στο εντερικό υμένα, τη διατήρηση της ομοιόστασης του εντέρου [10, 11]. Τα μακροφάγα μπορεί να ενεργοποιηθεί κλασικά μέσα σε κύτταρα Μ1 που εκφράζουν διεγέρσιμο νιτρικό οξειδάσης (iNOS), IL-12 και τα υψηλά επίπεδα των μορίων συν-διεγέρτη ενώ κάτοικος ιστικά μακροφάγα και τα μακροφάγα που σχετίζονται με όγκους είναι πιθανό να εκφράσουν CD163, 206, αργινάσης και IL-10 , ένα φαινότυπο Μ2 [12-17]. Επιπλέον, μακροφάγα, όπως και η γονική μονοκύτταρα τους, εκφράζουν CD14, ένα συν-υποδοχέα του TLR4, το οποίο έχει συνήθως χρησιμοποιηθεί για την ταυτοποίηση μακροφάγων και μονοκυττάρων από εντερικό βλεννογόνο και το περιφερικό αίμα [18, 19]. Μονοκύτταρα και μακροφάγα που διηθούν όγκο (ΤΙΜ) επίσης εκφράζουν CD169, sialoadhesin, ένα μόριο κυτταρικής προσκόλλησης [20] και MAC387, ένα δείκτη για ανώριμα μακροφάγα [21]. CD169

+ μακροφάγα είναι σημαντικοί παίκτες στην έναρξη και την εξέλιξη των φλεγμονωδών και αυτοάνοσων ασθενειών [22]. Επιπλέον, CD169

+ μακροφάγα και μονοκύτταρα έχουν σκεφτεί να κυριαρχήσει προ-φλεγμονής ανοσίας [22-25]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι τα κύτταρα Μ2 στο περιβάλλον του όγκου που συνδέεται με την εξέλιξη και τη μετάσταση του καρκίνου [15, 26-27]. Επιπλέον, CD169

+ μακροφάγων στον τοπικούς λεμφαδένες σχετίζονται με μια ευνοϊκή πρόγνωση σε ασθενείς CRC [28]. Ωστόσο, το είδος των μακροφάγων στο περιβάλλον του όγκου συσχετίζεται με την πρόοδο της CRC παραμένει αμφιλεγόμενη. Έχει επιβεβαιωθεί ότι CD169

+ μακροφάγα εξόδου στο χόριο του παχέος εντέρου, κυρίως περιβάλλει τις κρύπτες και την ανάπτυξή τους υποστηρίζεται από τη βιταμίνη Α σε ποντίκια [29]. Η συχνότητα των κυκλοφορούντων CD169

+ μονοκύτταρα και μακροφάγα που διηθούν όγκο στο CRC και πιθανή συσχέτιση τους με την εξέλιξη της CRC δεν έχουν διευκρινιστεί.

Στην παρούσα μελέτη, χαρακτήρισε την συχνότητα διαφορετικά υποσύνολα CD14

+ CD169

+ κύτταρα σε κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM με κυτταρομετρία ροής και ανιχνεύονται τα επίπεδα της IL-10 πλάσματος και IL-12 καθώς και καρκινοεμβρυονικό αντιγόνο (CEA) σε ασθενείς CRC. Επιπλέον, αναλύσαμε την πιθανή συσχέτιση των ποσοστών των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα και τα TIM με τα επίπεδα των κυτοκινών και CEA, καθώς και τις κλινικές παραμέτρους σε ασθενείς CRC. Βρήκαμε σημαντικά αυξημένα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ και στα δύο κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM των ασθενών CRC. Επιπλέον, τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM συσχετίστηκαν θετικά με τα παθογόνα στάδια της CRC και συσχετίστηκε με τα επίπεδα της IL-10 πλάσματος και CEA σε ασθενείς CRC. Έτσι, τα δεδομένα μας υποστηρίζουν την ιδέα ότι μια αυξημένη στη συχνότητα των CD14

+ CD169

+ κύτταρα μπορεί να σχετίζεται με την ανάπτυξη και την εξέλιξη του CRC και ταυτόχρονη αύξηση τόσο του προ-όγκου (Μ2-όπως, IL -10 παραγωγής), καθώς και κατά του όγκου (Μ1-όπως, IL-12 που παράγουν) μονοκύτταρα και μακροφάγα που διηθούν όγκο.

Υλικά και Μέθοδοι

Θέματα και τα δείγματα

η γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από τους επιμέρους συμμετέχοντες. Το πειραματικό πρωτόκολλο ιδρύθηκε, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της Διακήρυξης του Ελσίνκι και εγκρίθηκε από την Επιτροπή Ανθρωπίνων Ηθικής του Πανεπιστημίου Jilin (Πανεπιστήμιο Jilin, Changchun, Κίνα). Συνολικά 46 ασθενείς με CRC προσλήφθηκαν στην υπηρεσία νοσηλείας του Τμήματος παχέος & amp? Πρωκτικό Χειρουργικής, το πρώτο νοσοκομείο, το Πανεπιστήμιο Jilin από το Φεβρουάριο του 2013 έως το Δεκέμβριο του 2014. Σε μεμονωμένους ασθενείς διαγνώστηκαν με θετικό κοπράνων τεστ αίματος στα κόπρανα, η ιστολογική εξέταση βιοψίας καρκινικών ιστών που λαμβάνονται κατά τη διάρκεια της κολονοσκόπησης, και μια αξονική τομογραφία (CT). Μεμονωμένα δείγματα όγκων αξιολογήθηκαν για την ταξινόμησή τους όγκου, η ιστολογική βαθμούς, και της λέμφου κατάσταση μετάσταση στους λεμφαδένες από παθολόγους με τυφλό τρόπο και ανέβασε, σύμφωνα με τον όγκο-κόμβο-μετάσταση (TNM) σύστημα ταξινόμησης της Διεθνούς Ένωσης κατά του Καρκίνου (έκδοση 7) [ ,,,0],30]. Για την ανάλυση στρωματοποίησης, οι ασθενείς με σταδίου Ι /ΙΙ του CRC θεωρήθηκαν σε πρώιμο στάδιο, ενώ εκείνοι με το στάδιο III /IV της CRC θεωρήθηκαν σε προχωρημένο στάδιο. Μεμονωμένους ασθενείς αποκλείστηκαν εάν αυτός /αυτή έλαβε ακτινοθεραπεία, χημειοθεραπεία ή ανοσοθεραπεία. Επιπλέον, οι ασθενείς είχαν επίσης αποκλείεται, αν αυτός /αυτή είχε κακή φυσική κατάσταση. Ένα άλλο 22 με την ηλικία και το φύλο-συμφωνημένα υγιή άτομα και 12 άτομα μη-όγκου προσλήφθηκαν στο Κέντρο φυσική εξέταση και ένα άλλο τμήμα του ίδιου νοσοκομείου. Όλοι οι συμμετέχοντες δεν είχαν ιστορικό καρκίνου, αυτοάνοσων νοσημάτων, πρόσφατες μολυσματικές ασθένειες, ασθένειες φλεγμονώδους εντέρου και οικογενής πολυποδίαση. Ελήφθησαν δείγματα αίματος από 46 νέα CRC ασθενείς έναρξη, και 22 υγιείς ελέγχους (HC). Χειρουργικά δείγματα ιστού ορθοκολικού εκτομή ελήφθησαν από 30 ασθενείς CRC και 12 μάρτυρες μη όγκου, οι οποίοι υποβλήθηκαν σε χειρουργική εκτομή των μικτών αιμορροΐδες. Η φλεγμονή μπορεί να σχετίζεται με την ανάπτυξη των αιμορροΐδων. Ωστόσο, μια προηγούμενη μελέτη έχει προσδιορίσει ότι αιμορροΐδες δεν φαίνεται να σχετίζεται με αυξημένο κίνδυνο για καρκίνο του πρωκτού [31] και τη φύση της φλεγμονής μεταξύ των περιβαλλόντων του CRC και αιμορροΐδες είναι διαφορετική. Είναι λογικό να χρησιμοποιήσει αυτούς τους ιστούς καθώς οι έλεγχοι μη-όγκου στη μελέτη μας. Τα δημογραφικά και κλινικά δεδομένα των επιμέρους συμμετεχόντων συλλέχθηκαν από τα αρχεία του νοσοκομείου και αναθεωρούνται από έμπειρους χειρουργούς. Τα δημογραφικά και κλινικά χαρακτηριστικά τους φαίνονται στον Πίνακα 1.

Η

Απομόνωση μονοπύρηνων κυττάρων περιφερικού αίματος (PBMCs)

Η νηστεία δείγματα φλεβικού αίματος συλλέχθηκαν από μεμονωμένους συμμετέχοντες, και ένα τμήμα του αίματος χρησιμοποιήθηκε για την παρασκευή μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) με φυγοκέντρηση βαθμίδωσης πυκνότητας με χρήση Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare). Τα υπόλοιπα δείγματα αίματος φυγοκεντρήθηκαν για την παρασκευή δειγμάτων πλάσματος.

Απομόνωση lamina propria μονοπύρηνα κύτταρα (LPMCs) και τα TIM

Ο μονοπύρηνα κύτταρα χορίου (LPMCs) απομονώθηκαν από αυτά τα 12 μη-όγκου ασθενείς και τα TIM απομονώθηκαν από 30 προσφάτως εκτομή δείγματα χειρουργικής όγκου, όπως περιγράφηκε προηγουμένως με ελάσσονες τροποποιήσεις [29, 32]. Εν συντομία, το προσφάτως εκτομή βλεννογόνο ή ιστούς CRC υπέστησαν επεξεργασία εντός 30 λεπτών μετά τη συλλογή και επωάστηκαν σε ασβέστιο και μαγνήσιο απαλλαγμένο ισορροπημένο διάλυμα άλατος του Hank (HBSS, Sigma-Aldrich) που περιείχε 2,5% θερμικά απενεργοποιημένο ορό εμβρύου μόσχου (FBS) και 1 mM διθειοθρεϊτόλη (Sigma-Aldrich) σε πάγο. Οι ιστοί επωάστηκαν σε ρυθμιστικό ασβεστίου και ελεύθερο μαγνησίου HBSS που περιέχει 5 mM EDTA, 1 mM διθειοθρεϊτόλη, 2,5% θερμοαπενεργοποιημένο FBS, 0,1% ν /ν β-μερκαπτοαιθανόλη (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA) στους 37 ° για 25 λεπτά υπό συνεχή ανάδευση για την απομάκρυνση της βλέννας και των επιθηλιακών κυττάρων. Στη συνέχεια, τα υπόλοιπα τμήματα κόπηκαν σε μικρά τεμάχια και υπέστη πέψη με 250 μg /ml ϋΝΑση (Roche) και 125 μg /ml liberaseTM (Roche) σε HBSS στους 37 ° για 30 λεπτά υπό συνεχή ανάδευση. Μετά από φυγοκέντρηση, τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν με RPMI-1640 και διηθείται μέσα από ένα σουρωτήρι κύτταρο 40 μΜ, που ακολουθείται από τη φόρτωση επί της επιφανείας του Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare). Μετά από φυγοκέντρηση στα 800 g για 20 λεπτά, τα LPMCs και τα TIM ανακτήθηκαν από τη διαχωριστική επιφάνεια και πλύθηκαν με PBS δύο φορές για κυτταρομετρία ροής.

Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής

Για να προσδιοριστεί η συχνότητα των διαφορετικών υποσυνόλων CD14

+ κύτταρα, PBMCs ή LPMCs (10

6 κύτταρα /σωλήνα) βάφτηκαν με Alexa Fluor 647 αντι-CD169 (Biolegend), ΑΡΟ-H7-αντι-CD14 (BD PharMingen), BV421-αντι- CD163 (BD ​​PharMingen) και PerCP-Cy5.5-αντι-CD206 (Biolegend) στους 4 ° C για 30 λεπτά, αντίστοιχα. Στη συνέχεια, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν και κατέστησαν διαπερατά χρησιμοποιώντας το διάλυμα διαπερατότητας (BD Biosciences), ακολουθούμενη από ενδοκυτταρική χρώση με ΡΙΤΟ-συζευγμένο αντι-MAC387 (Abcam).

λιποπολυσακχαρίτη (LPS) μπορεί να ενεργοποιήσει μονοκύτταρα ή μακροφάγα με αλληλεπίδραση με TLR4 και CD14 και επάγουν την παραγωγή κυτοκινών όπως IL-6, IL-10 και IL-12 [33-34]. Για την ανίχνευση της συνάρτησης, PBMCs ή LPMCs (10

6 κύτταρα /φρεάτιο) διεγέρθηκαν εις διπλούν με 50 ng /ml λιποπολυσακχαρίτη (LPS) και οξική μυριστική φορβόλη (ΡΜΑ) και 1,0 μg /ml ιονομυκίνης (Sigma-Aldrich ) σε 10% FBS RPMI-1640 στους 37 ° C για 2 ώρες σε 5% CO

2 και εκτέθηκαν σε Brefeldin Α (GolgiPlug? BD Biosciences) για άλλες 4 ώρες, όπως περιγράφηκε προηγουμένως στο εργαστήριο μας (21). Αφού πλυθεί, βάφτηκαν με Alexa Fluor 647 αντι-CD169, APC-H7-αντι-CD14, σταθερό, και διαπερατά χρησιμοποιώντας το διάλυμα διαπερατότητας, που ακολουθείται από ενδοκυτταρική χρώση με ΡΕ-CF594-αντι-IL-10 (JES3-9D7 , BD Biosciences) ή ΡΕ-αντι-IL-12 (BD PharMingen). Οι μάρτυρες ισοτύπου ποντίκι της APC-H7-IgG1, FITC-IgG 1, PE-Ig2a, PerCP-Cy5.5-IgG 1, PE-CF594-IgG1 και Alexafluor-IgG 1 χρησίμευσαν ως μάρτυρες. Τα μονοπύρηνα κύτταρα περιφραγμένη σύμφωνα με το μέγεθος των κυττάρων και την εσωτερική δομή. Για την καλύτερη διάκριση θετικών από αρνητικά πληθυσμό, εκτελέσαμε φθορισμού Minus One (FMO), με την οποία, τα κύτταρα επωάστηκαν με το σύνολο των φθοριοχρωμίων εκτός από εκείνο που είχε μετρηθεί (CD14, CD169, CD163). Η συχνότητα των διαφορετικών υποσυνόλων CD14

+ μονοπύρηνα κύτταρα προσδιορίστηκε με ανάλυση κυτταρομετρίας ροής σε ένα FACSCalibur BD (Becton Dickinson) και τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας FlowJo 7.6.2.

Ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία (ELISA)

Οι συγκεντρώσεις της IL-10 πλάσματος και IL-12ρ70 σε μεμονωμένους συμμετέχοντες προσδιορίστηκαν με ELISA χρησιμοποιώντας ανθρώπινη IL-10 και IL-12p70 κιτ ELISA, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή (R &? D Systems ). Εν συντομία, το ανθρώπινο πλάσμα ελέγχθηκαν εις τριπλούν και υπολογίστηκαν οι συγκεντρώσεις των IL-10 και IL-12ρ70 σε μεμονωμένα δείγματα, σύμφωνα με τις πρότυπες καμπύλες με τη χρησιμοποίηση ανασυνδυασμένων κυτοκινών που παρέχονται.

καρκινοεμβρυϊκό αντιγόνο (CEA) δοκιμασία

Οι συγκεντρώσεις του CEA στο πλάσμα σε μεμονωμένα δείγματα προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας ένα σύστημα ανοσοπροσδιορισμού ADVIA Κένταυρος XP (Siemens Healthcare Diagnostics, Tarrytown, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής).

η στατιστική ανάλυση

Όλα τα δεδομένα εκφράζονται ως μεμονωμένες τιμές, μέση, και το εύρος κάθε ομάδας θεμάτων. Η διαφορά μεταξύ των ομάδων αναλύθηκε με τη χρήση του Mann-Whitney U. Η διαφορά μεταξύ των ιστών του όγκου και μη όγκου αναλύθηκε με Wilcoxon rank test. Η πιθανή συσχέτιση μεταξύ των μεταβλητών αναλύθηκε με τη δοκιμή βαθμού συσχέτισης Spearman. Όλες οι στατιστικές δοκιμές πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του SPSS 19.0. Ένα δύο όψεων τιμή Ρ & lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Χαρακτηρισμός του κυκλοφορούντος CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα στο CRC ασθενείς

Για να προσδιορίσετε τους πιθανούς ρόλους των κυκλοφορούντων CD14

+ προσλήφθηκαν CD169

+ μονοκυττάρων στην ανάπτυξη του CRC, μια ομάδα ασθενών και την ηλικία CRC και φύλου HC. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 1, δεν υπήρξε σημαντική διαφορά στην κατανομή των ηλικίας και του φύλου, οι αριθμοί των WBC και μονοκυττάρων μεταξύ των ασθενών και HC. Επιπλέον, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στην τοποθεσία του όγκου και η διαφορική βαθμούς τους μεταξύ των ασθενών με πρώιμο και προχωρημένο CRC. Όπως ήταν αναμενόμενο, οι ασθενείς εμφάνισαν σημαντικά υψηλότερα επίπεδα του CEA στο πλάσμα από την HC (P & lt? 0,05).

Προηγούμενη μελέτη είχε δείξει ότι CD14

+ μονοκυττάρων αντιπροσωπεύει το 80-90% του συνόλου των κυκλοφορούντων μονοκυττάρων [35] . Το CD14

+, CD169

+ και CD163

+ κύτταρα περιφραγμένη σύμφωνα με τους αντίστοιχους ελέγχους ισοτόπου και ελέγχους FMO (S1 Σχήμα). Αναλύσαμε τη συχνότητα των διαφορετικών υποσυνόλων των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα από ασθενείς CRC και HC με κυτταρομετρία ροής (Σχήμα 1Α και 1Β). Ποσοτική ανάλυση αποκάλυψε ότι τα ποσοστά των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα από τους ασθενείς ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από την HC (18.21% έναντι 1,42%, P & lt? 0,0001? Σχήμα 1Γ). Ως εκ τούτου, αύξησε σημαντικά τα ποσοστά των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα υπήρχαν σε ασθενείς CRC.

Μονοπυρηνικά κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMCs) ελήφθησαν από μεμονωμένα άτομα και χρωματίστηκαν με αντι-CD14 και αντι CD169. Η συχνότητα των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα χαρακτηρίστηκε με κυτταρομετρία ροής. Τα κύτταρα περίφραξη αρχικά σε μονοπύρηνα κύτταρα και στη συνέχεια στο CD14

+ κύτταρα. Στη συνέχεια, προσδιορίστηκαν τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα. Για να χαρακτηρίσουμε διαφορετικά υποσύνολα CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα, PBMCs βάφτηκαν με φθορίζοντα αντισώματα κατά του CD14, CD169 και CD163, CD206 ή MAC387. Τα κύτταρα περίφραξη σε CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα και τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ CD163

+, CD14

+ CD169

+ CD206

+ και CD14

+ CD169

+ MAC387 προσδιορίστηκαν

+ μακροφάγα. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά διαγράμματα του κυτταρομετρίας ροής και εκφράζονται ως τιμές των μεμονωμένων υποκειμένων. Οι οριζόντιες γραμμές δείχνουν το μέσο για μεμονωμένες ομάδες. (Α) Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα /μακροφάγα. (Β) Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των διαφόρων υποσυνόλων των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκυττάρων /μακροφάγων. (C) Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα. (Δ) Η συχνότητα των CD14

+ CD169

+ CD163

+ μακροφάγα. (Ε) Η συχνότητα των CD14

+ CD169

+ CD206

+ μακροφάγα. (Στ) τη συχνότητα των CD14

+ CD169

+ MAC387

+ μακροφάγα.

Η

Περαιτέρω χαρακτηρισμός έδειξε ότι το ποσοστό των CD14

+ CD169

+ CD163

+ κυττάρων στο σύνολο κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα από ασθενείς CRC ήταν σημαντικά υψηλότερη από ότι σε HC (74,27% έναντι 60,14%, P & lt? 0,0001, Σχήμα 1D). Επιπλέον, η συχνότητα των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ CD206

+ μονοκύτταρα στο σύνολο των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα από ασθενείς CRC ήταν επίσης σημαντικά υψηλότερη από ότι σε HC (3,35% έναντι 0,82%, P & lt? 0,0001? Σχήμα 1Ε). Σε αντίθεση, τα ποσοστά των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ MAC387

+ μονοκύτταρα στο σύνολο των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκυττάρων σε ασθενείς CRC ήταν χαμηλότερες από ότι σε HC (76.31% έναντι 80,15%, Ρ = 0,0041, Σχήμα 1 F). Συλλογικά, οι ασθενείς CRC εμφανίζεται μια ανισορροπία των διαφόρων υποσυνόλων του κυκλοφορούντος CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα.

Ανάλυση των CD14

+ CD169

+ μακροφάγων στον ορθοκολικό νεοπλάσματα

Περιφερειακά μονοκύτταρα μεταναστεύουν εντός οργάνων και ιστών για τη ρύθμιση της φλεγμονής. Για να κατανοήσουμε τη σημασία των διαφόρων υποσυνόλων CD14

+ CD169

+ μακροφάγων στην ανάπτυξη του CRC, τα ποσοστά των διαφόρων υποσυνόλων CD14

+ CD169

+ μακροφάγων στο LPMCs από 12 ασθενείς με μη-όγκου και τα TIM από 30 ασθενείς CRC αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής (Σχήμα 2Α). Αν και προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι μακροφάγα στο propria έντερο ελάσματος μπορεί να εκφράσει διαφορετικά επίπεδα CD14 [18, 36], ένα κλάσμα του CD14

+ μακροφάγα παρουσιάστηκαν στο χορίο (S1 Σχήμα Α) και εστιάσαμε σε αυτό τον πληθυσμό των εντερικών μακροφάγων. Το CD14

+, CD169

+ και CD163

+ κυττάρων σε LPMCs ή τα TIM ήταν περιφραγμένη σύμφωνα με ΠΑΥ ελέγχει το S1 Εικ. Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ μακροφάγων στον τα TIM ήταν σημαντικά υψηλότερες από ότι σε LPMCs των ασθενών μη-όγκου (25,36% έναντι 1,83%, P & lt? 0,0001? Σχήμα 2Β). Επίσης, αναλύσαμε τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ CD163

+ ή CD14

+ CD169

+ CD206

+ κυττάρων σε LPMCs ή τα TIM με κυτταρομετρία ροής (Σχήμα 2C) . Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ CD163

+ ή CD14

+ CD169

+ CD206

+ μακροφάγων στον τα TIM ήταν σημαντικά υψηλότερες από ότι σε LPMCs (78,05% έναντι 64,21 %, P & lt? 0,0001? 3,85% έναντι 1,63%, P & lt? 0,0001? σχήμα 2D και 2Ε). Είναι ενδιαφέρον, ανιχνεύσαμε επίσης σημαντικά υψηλότερα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ CD163

+ ή CD14

+ CD169

+ CD206

+ μακροφάγων στον τα TIM από ό, τι σε κυκλοφορούντα μονοκύτταρα των ασθενών CRC (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται), γεγονός που υποδηλώνει ότι περιφερικού αίματος CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα μπορεί να μεταναστεύσουν στο χόριο και έγινε M2-όπως τα κύτταρα.

Ένα σύνολο από 30 φρέσκα χειρουργική ιστούς όγκων CRC ήταν πέψη για τον χαρακτηρισμό των μακροφάγων που διεισδύουν σε όγκο (TIMS). Επιπλέον, 12 υμένα ιστούς από ασθενείς με μη-όγκου υπέστησαν πέψη για το χαρακτηρισμό των μακροφάγων στο σύνολο χορίου μονοπύρηνα κύτταρα (LPMCs). Στη συνέχεια, τα κύτταρα βάφτηκαν με αντι-CD14, CD169 και CD163 ή CD206. Η συχνότητα των CD14

+ CD169

+, CD14

+ CD169

+ CD163

+ και CD14

+ CD169

+ CD206

+ μακροφάγων στο LPMCs και τα TIM προσδιορίστηκε με κυτταρομετρία ροής. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά διαγράμματα ή εκφράζονται ως τιμές των μεμονωμένων υποκειμένων. Οι οριζόντιες γραμμές δείχνουν το μέσο για μεμονωμένες ομάδες. (Α) Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των CD14

+ CD169

+ σε LPMCs και τα TIM. (Β) Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ μακροφάγων στο LPMCs και τα TIM. (C) με κυτταρομετρία ροής των CD14

+ CD169

+ CD163

+ και CD14

+ CD169

+ CD206

+ μακροφάγων στο σύνολο CD14

+ CD169

+ LPMCs και τα TIM μακροφάγα. (Δ) Η συχνότητα των CD14

+ CD169

+ CD163

+ μακροφάγων στο LPMCs και τα TIM. (Ε) Η συχνότητα των CD14

+ CD169

+ CD206

+ μακροφάγων στο LPMCs και τα TIM.

Η

Μια υψηλότερη συχνότητα της IL-10

+ CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα και μακροφάγα σε ασθενείς CRC

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η IL-10

+ M2 συνδέονται με την ανάπτυξη του CRC [26, 37-38]. Για τον προσδιορισμό της λειτουργίας του κυκλοφορούντος CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα και τα TIM, τα απομονωμένα κύτταρα διεγείρονται in vitro και τα ποσοστά της IL-10

+ ή IL-12

+ CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM προσδιορίστηκαν με κυτταρομετρία ροής (Σχήμα 3Α). Τα ποσοστά της IL-10

+ CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM συνολικά CD14

+ CD169

+ κύτταρα από ασθενείς με CRC ήταν σημαντικά υψηλότερο από εκείνο από το μη-όγκου άτομα (3,79% έναντι 0,76%, P & lt? 0,0001 για κυκλοφορούντα μονοκύτταρα? 7,12% έναντι 1,23%, P & lt?. 0.0001 για τα TIM Σχήμα 3Β). Σε αντίθεση, δεν υπήρχε σημαντική διαφορά στη συχνότητα των IL-12

+ CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM μεταξύ των ασθενών CRC και υποκείμενα μη-όγκου (0,24% έναντι 0,22%, P = 0.2854 για κυκλοφορούντα μονοκύτταρα? 0,37% έναντι 0,36%, P = 0.4729 για τα TIM Σχήμα 3C).. Περαιτέρω ανάλυση των CD14

+ CD169

– κυττάρων αποκάλυψε δεν υπάρχει σημαντική διαφορά στη συχνότητα της IL-10

+ ή IL-12

+ CD14

+ CD169

– κύτταρα συνολικά CD14

+ CD169

– κυττάρων μεταξύ των ασθενών CRC και θέματα μη όγκου σε αυτόν τον πληθυσμό (IL-10: 0.017% έναντι 0,024%, P = 0.6428 για κυκλοφορούντα μονοκύτταρα? 0,018% έναντι 0,014% , Ρ = 0.8125 για τα TIM? IL-12: 0,019% έναντι 0,013%, Ρ = 0.1628 για κυκλοφορούντα μονοκύτταρα? 0,015% έναντι 0,013%, Ρ = 0.8678 για τα TIM S2 Εικ.). Το πιο σημαντικό, τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ IL-10

+ κύτταρα συσχετίζεται θετικά με τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM στους ασθενείς CRC (R = 0,5375, Ρ = 0.0001 για κυκλοφορούντα μονοκύτταρα? R = 0,5637, Ρ = 0.0009 για τα TIM, Σχήμα 3D και 3Ε). Ως εκ τούτου, οι ασθενείς CRC εμφανίζεται μια υψηλότερη συχνότητα της IL-10

+ CD14

+ CD169

+ μακροφάγα.

PBMCs και τα TIM απομονώθηκαν από μεμονωμένα άτομα και διεγείρονται με LPS και ΡΜΑ /ιονομυκίνης . Τα κύτταρα χρωματίστηκαν με αντι-CD169 και αντι-CD14 για 30 λεπτά, σταθερό, και διαπερατά, ακολουθούμενη από ενδοκυτταρική χρώση με αντι-IL-10 ή αντι-IL-12. Τα κύτταρα πρώτη περίφραξη σε CD14

+ CD169

+ κύτταρα και τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ IL-12

+ Μ1 και CD14

+ CD169

+ IL-10 κύτταρα

+ M2 σε PBMCs ή τα TIM από μεμονωμένα υποκείμενα προσδιορίστηκαν με κυτταρομετρία ροής. Τα επίπεδα της IL-10 πλάσματος και IL-12 σε μεμονωμένα υποκείμενα προσδιορίζεται με ELISA. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά διαγράμματα ή εκφράζονται ως τιμές των μεμονωμένων ασθενών. Οι οριζόντιες γραμμές δείχνουν το μέσο για μεμονωμένες ομάδες. (Α) Η ανάλυση κυτταρομετρίας ροής. (Β) Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ IL-10

+ κύτταρα Μ2. (C) Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ IL-12

+ κυττάρων Μ1. Οι οριζόντιες γραμμές υποδεικνύουν τις διάμεσες τιμές. (Δ) Η πιθανή συσχέτιση μεταξύ των ποσοστών των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ IL-10

+ κύτταρα και CD14

+ CD169

+ κυττάρων σε ασθενείς με CRC. (Ε) Η πιθανή συσχέτιση μεταξύ των ποσοστών τα TIM CD14

+ CD169

+ IL-10

+ κύτταρα και CD14

+ CD169

+ κυττάρων στους ιστούς CRC. (F) Τα επίπεδα της IL-10 στο πλάσμα. (G) Τα επίπεδα της IL-12 στο πλάσμα. (Η) Η συσχέτιση της IL-10 επίπεδα στο πλάσμα με τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ IL-10

+ μονοκυττάρων σε PBMCs από ασθενείς με CRC. (Ι) Η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων της IL-10 πλάσματος και CEA σε CRC ασθενείς.

Η

Μετρήσαμε τις συγκεντρώσεις της IL-10 πλάσματος και IL-12 σε μεμονωμένα υποκείμενα με ELISA. Όπως φαίνεται στο Σχ 3F και 3G, οι συγκεντρώσεις της IL-10 στο πλάσμα, αλλά όχι IL-12, στους ασθενείς CRC ήταν σημαντικά υψηλότερες από ότι στο HC (Ρ & lt? 0,0001). Οι συγκεντρώσεις της IL-10 στο πλάσμα συσχετίζονται θετικά με τα ποσοστά των κυκλοφορούντων IL-10

+ CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα (R = 0.6018, Ρ & lt? 0,0001? Σχήμα 3Η) και τα επίπεδα στο πλάσμα CEA σε ασθενείς CRC (R = 0,413, Ρ = 0,0043? Εικ 3θ).

Διαστρωμάτωση αναλύσεις της συχνότητας των CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα και μακροφάγα σε ασθενείς CRC

στη συνέχεια, στρωματοποιημένη τους ασθενείς, σύμφωνα με όγκο στάδια παθολογική ΤΝΜ τους και διαπιστώσαμε ότι τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντων μονοκυττάρων ήταν σημαντικά χαμηλότερη στους ασθενείς με πρώιμο στάδιο της CRC από εκείνους με προηγμένες στάδιο του CRC (11,81% έναντι 15,91%, Κ = 00 003, Σχήμα 4Α). Ομοίως, τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ μακροφάγα τα TIM από τους ασθενείς με πρώιμο στάδιο της CRC ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι σε εκείνες που βρίσκονται σε προχωρημένο στάδιο της CRC (22,45% έναντι 26,93%, P & lt? 0,0001, Σχήμα 4Α). Επιπλέον, τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα από ασθενείς είτε με πρώιμο στάδιο ή προχωρημένο στάδιο της CRC ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι σε τα TIM από την ίδια ομάδα ασθενών (P & lt? 0,00001, P & lt? 0,0001 , αντίστοιχα? Σχήμα 4Α). Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα συσχετίζεται θετικά με τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ μακροφάγα τα TIM από τους ασθενείς με πρώιμη (R = 0,4361, Ρ = 0,0073 Εικ. 4Β) ή προχωρημένο στάδιο (R = 0,8191, Ρ = 0.0001.Fig 4C) της CRC.

Οι ασθενείς CRC κατανεμήθηκαν ως νωρίς (Ι /ΙΙ, n = 21) ή σε προχωρημένο στάδιο (III /IV, n = 25) και τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM σε μεμονωμένους ασθενείς αναλύθηκαν. Επιπλέον, η πιθανή συσχέτιση μεταξύ των ποσοστών των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα ή τα TIM και τα επίπεδα του CEA στο πλάσμα σε επιμέρους ομάδες ασθενών αναλύθηκαν. Τα δεδομένα είναι ο μέσος όρος των μεμονωμένων ατόμων. (Α) Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ μονοκυττάρων σε PBMCs (n = 21 για το πρώιμο στάδιο, η = 25 για προχωρημένο στάδιο των ασθενών CRC) και τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ μακροφάγων στον τα TIM από νωρίς (n = 14) ή προχωρημένο (n = 16) των ασθενών σταδίου CRC. Οι οριζόντιες γραμμές δείχνουν το μέσο για μεμονωμένες ομάδες. (Β) Η συσχέτιση μεταξύ των ποσοστών των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM σε πρώιμο στάδιο των ασθενών CRC. (Γ) Η συσχέτιση μεταξύ των ποσοστών των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM σε προχωρημένο στάδιο των ασθενών CRC. (Δ) Η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων του CEA στο πλάσμα και τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντων μονοκυττάρων σε ασθενείς CRC. (Ε) Η συσχέτιση μεταξύ των επιπέδων του CEA στο πλάσμα και τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ τα TIM στους ασθενείς CRC.

Η

Τα επίπεδα πλάσματος CEA παραμένουν ένα πολύτιμο βιοδείκτη για την αξιολόγηση της εξέλιξης CRC [39]. Έτσι, εξετάσαμε την πιθανή συσχέτιση μεταξύ των ποσοστών των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM με τα επίπεδα του CEA στο πλάσμα σε ασθενείς CRC. Βρήκαμε ότι τα επίπεδα του CEA στο πλάσμα συσχετίζονται θετικά με τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα (R = 0.7655, Ρ & lt? 0,0001? Σχήμα 4D) και CD14

+ CD169

+ μακροφάγων στον τα TIM (R = 0,5768, Ρ = 0,0009? Σχήμα 4Ε) στους ασθενείς CRC. Μαζί, τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM θετικά που σχετίζονται με τις παθολογικές στάδια του CRC σε αυτόν τον πληθυσμό ασθενών.

Συζήτηση

Για να αξιολογηθεί η δυναμικό δείκτη CD14

+ CD169

+ κύτταρα στο παθογόνο εξέλιξη της CRC, εξετάσαμε το φαινότυπο και την κλινική σημασία των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ μονοκύτταρα και τα TIM σε ασθενείς CRC. Τα δεδομένα μας έδειξαν ότι κυκλοφορούντα CD14

+ CD169

+ M2-όπως τα μονοκύτταρα και τα TIM συσσωρευτεί στα νεοπλάσματα και συσχετίστηκε με τα επίπεδα των IL-10 και CEA σε ασθενείς CRC πλάσμα. Σαφώς, η συχνότητα του CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM συνδέθηκαν με τα παθογόνα στάδια της CRC. Για το καλύτερο της γνώσης μας, αυτή ήταν η πρώτη έκθεση που σημαντικά υψηλότερα ποσοστά των κυκλοφορούντων CD14

+ CD169

+ M2-όπως τα μονοκύτταρα ή τα TIM συνδέθηκαν με παθογόνους εξέλιξη της CRC στον άνθρωπο.

οι φλεγμονώδεις διηθήσεις στο μικροπεριβάλλον του όγκου είναι ζωτικής σημασίας για την εξέλιξη και τη μετάσταση των όγκων [7, 8]. Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι εναλλακτικώς ενεργοποιημένα μακροφάγα Μ2 μπορεί να συμμετέχει στη διαδικασία παθογόνων διαφορετικών τύπων συμπαγών όγκων με προαγωγή αγγειογένεσης και της μετάστασης και αναστολή της δράση κατά των όγκων [16, 40-41]. Σε αυτή τη μελέτη, διαπιστώσαμε μια σημαντικά υψηλότερη συχνότητα κυκλοφορούν και που διηθούν όγκο CD14

+ CD169

+ CD163

+ και CD14

+ CD163

+ CD206

+ M2-όπως μακροφάγων σε CRC ασθενείς. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι περιφερικά μονοκύτταρα μπορεί να μεταναστεύσουν σε καρκινικούς ιστούς και ρυθμίζουν την ανάπτυξη του όγκου και την ασυλία. Τα ποσοστά των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM σε ασθενείς με προχωρημένο στάδιο της CRC ήταν σημαντικά υψηλότερα από εκείνα με πρώιμο στάδιο της CRC. Αυτά τα δεδομένα έδειξαν επίσης ότι η συχνότητα των CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα και τα TIM συνδέθηκαν με τα παθογόνα βαθμούς CRC. Τα δεδομένα μας επεκτάθηκε προηγούμενες παρατηρήσεις σχετικά με φλεγμονώδη νόσο και υποδεικνύουν ότι CD169

+ μπορεί να εκφραστεί από τα μακροφάγα σε ιστούς όγκων [23-25, 42]. Πράγματι, έχουν CD169

+ μακροφάγα έχουν ανιχνευθεί σε φυσιολογικό χόριο του παχέος εντέρου [29]. Δεδομένου ότι CD169 είναι ένα μόριο προσκόλλησης είναι πιθανό ότι το CD14

+ CD169

+ κυκλοφορούντα μονοκύτταρα μπορούν να μεταναστεύουν και να ενεργοποιηθεί στο περιβάλλον του όγκου για τη ρύθμιση της εξέλιξης και μετάστασης του CRC. Τα αποτελέσματά μας ήταν διαφορετική από μια προηγούμενη παρατήρηση ότι CD169

+ μακροφάγων στον τοπικούς λεμφαδένες συσχετίστηκαν με ευνοϊκή πρόγνωση σε ασθενείς CRC [28].