Αφηρημένο

Ιστορικό

Η σωματοστατίνη (SST) έχει αντι-πολλαπλασιαστική και προ-αποπτωτικά αποτελέσματα. Οι στόχοι μας ήταν να αναλύσει και να συγκρίνει την έκφραση SST κατά τη διάρκεια της φυσιολογικής γήρανσης και του παχέος καρκινογένεση σε επίπεδα mRNA και πρωτεΐνης. Επιπλέον, εξετάσαμε την κατάσταση μεθυλίωσης του

SST

σε δείγματα βιοψίας, και την ανασταλτική δράση ανάπτυξης κυττάρου του SST αναλόγου οκτρεοτίδης στο ανθρώπινο κυτταρική σειρά ορθοκολικού αδενοκαρκινώματος.

Μέθοδοι

παχέος δείγματα συλλέχθηκαν από υγιείς παιδιά (n1 = 6), υγιείς ενήλικες (n2 = 41) και ασθενείς με ορθοκολικό καρκίνο (CRCs) (n

3 = 34) για

SST

ανάλυση έκφρασης mRNA, χρησιμοποιώντας HGU133 Plus2.0 μικροσυστοιχίες. Τα αποτελέσματα επικυρώθηκαν τόσο στο αρχικό (n

1 = 6? N

2 = 6? N

3 = 6) και ανεξάρτητα δείγματα ((n

1 = 6? N

2 = 6? n

3 = 6) με πραγματικού χρόνου PCR SST εκφράζουν κύτταρα ανιχνεύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία επί του κόλου δείγματα βιοψίας (n

1 = 14?. n

2 = 20? n

3 = . 23) Η επίδραση της οκτρεοτίδης στην κυτταρική ανάπτυξη δοκιμάστηκε σε Caco-2 κυτταρική γραμμή ποσοστό SST μεθυλίωσης σε δείγματα βιοψίας (n

1 = 5?. n

2 = 5? n

3 = 9) ορίστηκε με τη χρήση ευαίσθητων σε μεθυλίωση ένζυμο περιορισμού πέψης

Αποτελέσματα

σε περίπτωση φυσιολογικής γήρανσης έκφρασης SST mRNA δεν μετέβαλε, αλλά μειώθηκε σε καρκίνο (p & lt? 0,05). Η αναλογία των SST ανοσοδραστικών. κυττάρων ήταν σημαντικά υψηλότερη στα παιδιά (0,70% ± 0,79%) σε σύγκριση με CRC (0% ± 0%) (ρ & lt? 0,05). οκτρεοτίδη αύξησε σημαντικά το ποσοστό των αποπτωτικών κυττάρων Caco-2

SST

έδειξε σημαντικά. υψηλότερο επίπεδο μεθυλίωσης σε δείγματα όγκων (30,2% ± 11,6%) σε σύγκριση με υγιή νεαρά άτομα (3,5% ± 1,9%) (p & lt? 0,05).

Συμπεράσματα

σε καρκινικά βλεννογόνο του παχέος εντέρου, ο μειωμένος παραγωγή SST μπορεί να συμβάλει στην ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Η παρατήρησή μας ότι στο παχύ έντερο καρκινικά κύτταρα οκτρεοτίδη ενισχυθεί σημαντικά τον κυτταρικό θάνατο και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων εξασθενημένου υποδηλώνει ότι SST μπορεί να δρα ως ρυθμιστής της κινητικής των επιθηλιακών κυττάρων. Η αναστολή της έκφρασης του SST στην CRC μπορεί να ρυθμιστεί επιγενετικώς από υπερμεθυλίωση προαγωγού

Παράθεση:. Leiszter K, Sipos F, Galamb O, Krenács T, Veres G, Wichmann Β, et al. (2015) Ανάδοχος υπερμεθυλίωση που σχετίζονται με μειωμένη σωματοστατίνη Παραγωγής Προωθεί ανεξέλεγκτο πολλαπλασιασμό των κυττάρων στον καρκίνο του παχέος εντέρου. PLoS ONE 10 (2): e0118332. doi: 10.1371 /journal.pone.0118332

Ακαδημαϊκό Συντάκτης: Robert Dante, Institut national de la Santé et de la recherche médicale, Γαλλία

Ελήφθη: 4 Αυγούστου 2014? Αποδεκτές: 13η Ιανουαρίου του 2015? Δημοσιεύθηκε: 27 Φεβ 2015

Copyright: © 2015 Leiszter et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα: Πιο σχετικά δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και. αρχεία δεδομένων μικροσυστοιχιών είναι διαθέσιμα στη βάση δεδομένων Gene Expession Omnibus (GSE10714, GSE37364 και GSE37267)

Χρηματοδότηση:. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δήλωσε ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

η σωματοστατίνη (SST), ένα ρυθμιστικό-ανασταλτικό πεπτίδιο, έχει αξιοσημείωτη επίδραση στη λειτουργία του γαστρεντερικού. Καταστέλλει κινητικότητα του γαστρεντερικού σωλήνα και τη συστολή της χοληδόχου κύστης, αναστέλλει την έκκριση εξωκρινείς έντερο, ρυθμίζει την εντερική απορρόφηση θρεπτικών συστατικών και τη ροή του αίματος και μειώνει τον πολλαπλασιασμό των επιθηλιακών [1-5]. Επιπλέον SST αναστέλλει την απελευθέρωση ορμόνης (π.χ. GH, TSH, ινσουλίνη, ορμόνες εντέρου), χρησιμεύει ως νευροδιαβιβαστής και νευρορυθμιστής, και συμβάλλει στην ισορροπία του νερού [1,4,6]. Πέρα από αυτές τις φυσιολογικές ενδοκρινείς και παρακρινείς /αυτοκρινείς επιδράσεις, SST μπορεί να αναστείλει άμεσα τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και να προκαλέσουν απόπτωση μέσω των υποδοχέων σωματοστατίνης (SSTR) σηματοδότησης [4,7]. Ως εκ τούτου, τα μειωμένα επίπεδα σωματοστατίνης, που βρήκαμε σε μια πιλοτική μελέτη θα μπορούσε να έχει σημασία για το γαστρεντερικό ογκογένεση συμπεριλαμβανομένου του ορθοκολικού καρκίνου η οποία είναι μία από τις κύριες αιτίες θανάτου από καρκίνο που σχετίζονται με [8].

Η σωματοστατίνη παράγεται κυρίως στο κεντρικού και περιφερικού νευρικού συστήματος, στο ενδοκρινικό πάγκρεας και στο έντερο? Επιπλέον ανήλικος έκκριση SST επίσης έχει αποδειχθεί στο θυρεοειδή, τα επινεφρίδια, υπογνάθιους αδένες, τα νεφρά, προστάτη, πλακούντα και τα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος. SST συντίθεται από ένα μεγάλο πρόδρομο μόριο που ονομάζεται preprosomatostatin (preproSST) που υποβάλλεται σε επεξεργασία ενζυματικά να ωριμάσει προϊόντα. Δύο βιοδραστικά προϊόντα πεπτιδίου της γονιδίου που κωδικοποιεί SST είναι γνωστές, SST-14 και SST-28 [1]. SST-28 συντίθεται στο εντερικό βλεννογόνο, η οποία είναι η μεγαλύτερη περιφερειακή πηγή του πεπτιδίου και το μείζον SST κύτταρα που παράγουν στη γαστρεντερική οδό είναι βλεννογόνου δ-κύτταρα στο εντερικό επιθήλιο, D-κύτταρα στο γαστρικό άντρο και το πάγκρεας, και εγγενή νευρώνες στα μυεντερικό και υποβλεννογόνια πλέγματα κατά μήκος της πεπτικής οδού [3]. απελευθέρωση σωματοστατίνης μπορεί να διεγερθεί και να αναστέλλεται από πολλές ορμόνες, νευροπεπτίδια, νευροδιαβιβαστές, κυτοκίνες, αυξητικούς παράγοντες και θρεπτικά συστατικά. Για παράδειγμα, η αύξηση της ορμόνης απελευθέρωσης αυξητικής ορμόνης (GHRH), ορμόνη απελευθέρωσης κορτικοτροπίνης (CRH), νευροτενσίνη, μπομπεσίνη, IL-1, IL-6 και TNF-α μπορεί να διεγείρει την έκκριση SST σε διάφορους ιστούς. Από την άλλη πλευρά, η γ aminobutiric οξύ (GABA), οπιούχα, ΤΟΡ-β και της λεπτίνης είναι δυνητικοί αναστολείς της απελευθέρωσης SST. Θρεπτικά συστατικά έχουν ιστο-ειδική επίδραση στην παραγωγή SST, και η έκκριση του εντέρου SST ενεργοποιείται από αυλού, αλλά δεν κυκλοφορούν θρεπτικές ουσίες [1].

Οι πέντε γνωστοί υποδοχείς σωματοστατίνης (SSTR1, SSTR2 /SSTR2A, SSTR2B /, SSTR3, SSTR4 , SSTR5) που κωδικοποιείται από πέντε ανθρώπινων γονιδίων είναι χαρακτηριστικές G-πρωτεΐνη υποδοχέων (GPCR) με επτά α-ελικοειδή διαμεμβρανικά τμήματα. Κατά τη σύνδεση του SST με τους υποδοχείς του, αρκετές κυτταρικές λειτουργίες διαμορφωμένο μέσω πολλαπλών οδών που εξαρτώνται από σηματοδότηση G-πρωτεΐνης. Διαφορετικές οδοί σηματοδότησης ενεργοποιούνται ανάλογα με τον υπότυπο του υποδοχέα και τον εντοπισμό των ιστών. Όλες οι υπότυποι SSTR αναστέλλουν την αδενυλική κυκλάση και την παραγωγή cAMP, ρυθμίζουν φωσφατάσες πρωτεϊνών και ενεργοποίηση της G-πρωτεΐνης ρυθμίζεται προς τα μέσα ανορθωτή Κ οικογένεια

+ κανάλι (GIRK) μετά από δέσμευση συνδέτη [1,2,5,9,10].

Η εκδήλωση της αντιπολλαπλασιαστικής και προ-αποπτωτικά αποτελέσματα του SST για φυσιολογικούς και ογκογόνους κύτταρα εξαρτάται από τον τύπο του συνδέτη πρόσδεσης SSTR. SST και τα ανάλογά της έχουν έμμεσες επιδράσεις επί της ανάπτυξης κυττάρου με αναστολή της αγγειογένεσης, ρύθμιση του ανοσοποιητικού συστήματος και την αναστολή της ανάπτυξης παραγόντων (π.χ. IGF-1) και τροφικές ορμόνες απελευθέρωσης. Επιπλέον, μπορεί να επάγουν απόπτωση, αναστέλλουν τον κυτταρικό κύκλο και ρυθμίζουν την επίδραση των αυξητικών παραγόντων κατευθείαν [11-14].

Σε προηγούμενες μελέτες μας έχουμε συνόψισε τις μακροσκοπικές, μικροσκοπική και μοριακές μεταβολές που επηρεάζουν την γαστρεντερική οδό, ιδίως το παχύ έντερο κατά τη διάρκεια της φυσιολογικής γήρανσης [15-17]. Έχουμε αποδείξει ότι οι υγιείς νεανική επιθήλιο του κόλου και του παχέος εντέρου μπορούν να χαρακτηριστούν με αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων και μειωμένη απόπτωση σε σύγκριση με το βλεννογόνο του κόλου υγιή ενήλικα. Ωστόσο, ενώ ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων ρυθμίζεται αυστηρά και καλά ισορροπημένη στα παιδιά, να γίνει ανεξέλεγκτη στο CRC. Έχουμε επίσης αποκάλυψε ότι οι μεταβολές στην έκφραση του mRNA κατά τη διάρκεια της φυσιολογικής γήρανσης και του παχέος καρκινογένεση μπορεί να σχετίζεται με αυξημένη, αλλά η αύξηση διαφορετικά ρυθμιζόμενες κυττάρου [18]. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν η ανάλυση της τοπικής παραγωγής της σωματοστατίνης στο ανθρώπινο κολονικό επιθήλιο κατά τη διάρκεια της φυσιολογικής γήρανσης και του παχέος καρκινογένεση, τόσο σε mRNA και τα επίπεδα έκφρασης πρωτεΐνης. Ερευνήσαμε επίσης τα αποτελέσματα της ανάλογο σωματοστατίνης οκτρεοτίδιο στην ανθρώπινη κυτταρική σειρά ορθοκολικού αδενοκαρκινώματος (Caco-2). Από υπερμεθυλίωση προαγωγού μπορεί επιγενετικώς αλλάξει τη μεταγραφή γονιδίων τόσο κατά τη γήρανση και την καρκινογένεση, ελέγξαμε την κατάσταση μεθυλίωσης του

SST

γονίδιο.

Υλικά και Μέθοδοι

Ασθενείς και δείγματα

Μετά την εν επιγνώσει συναίνεση, του παχέος δείγματα βιοψίας ελήφθησαν κατά τη διάρκεια της ρουτίνας ενδοσκοπική επέμβαση στο 2ο Τμήμα Παθολογίας και στο 1ο Τμήμα Παιδιατρικής, Πανεπιστήμιο Semmelweis, Βουδαπέστη, Ουγγαρία. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε πριν από όλους τους ενήλικες συμμετέχοντες και από τον πλησιέστερο συγγενή, επιστάτες, φύλακες ή για λογαριασμό των ανηλίκων /παιδιών εγκριθεί από τις επιτροπές δεοντολογίας. Συνολικά, 81 δείγματα βιοψίας αναλύθηκαν σε ανάλυση μικροσυστοιχιών (6 υγιή παιδιά, 41 υγιείς ενήλικες και 34 CRCs από ενήλικες) και 36 δείγματα βιοψίας είχαν εμπλακεί σε πραγματικό χρόνο επικύρωσης PCR (12 υγιή παιδιά, 12 υγιείς ενήλικες και 12 CRCs από τους ενήλικες) . Πενήντα επτά δείγματα ιστού αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία (14 υγιή παιδιά, 20 υγιείς ενήλικες και 23 CRCs από ενήλικες) και 15 του κόλου βιοψίες διερευνήθηκαν χρησιμοποιώντας ένζυμο περιορισμού ανάλυση της σειράς μεθυλίωση ευαίσθητα σε μεθυλίωση (5 υγιή παιδιά, 5 υγιείς ενήλικες και 9 CRCs από ενήλικες). Εβδομήντα-πέντε μικροσυστοιχίες (που περιέχει τα ενήλικα δείγματα) είχε υβριδοποιήθηκε νωρίτερα? αρχεία δεδομένων τους χρησιμοποιήθηκαν στην προηγουμένως δημοσιευμένες μελέτες χρησιμοποιώντας διαφορετικές συγκρίσεις [19-21] και είναι διαθέσιμες στη βάση δεδομένων Gene Expression Omnibus (σειρά αριθμός πρόσβασης: GSE10714 και GSE37364). Τα σύνολα δεδομένων από τα πρόσφατα υβριδοποιείται 6 μικροσυστοιχίες καταχωρηθεί με τον αριθμό σειριακών ένταξη GSE37267. παιδιά ελέγχου που αναφέρεται στην κλινική εξωτερικών ασθενών με δυσκοιλιότητα, αιμορραγία από το ορθό ή χρόνιο κοιλιακό άλγος. Ileocolonoscopy ήταν μέρος της διαγνωστικής διαδικασίας τους (για να αποκλείσει οργανική νόσο) και τα δείγματα βιοψίας έδειξαν κανονική μακροσκοπική εμφάνιση και ιστολογία. Κάθε δείγμα ελέγχθηκε από ιστοπαθολόγους. Για μελέτες mRNA (ανάλυση μικροσυστοιχιών, Taqman RT-PCR) και ανάλυση της σειράς μεθυλίωση, του παχέος δείγματα αποθηκεύτηκαν σε Αντιδραστήριο RNAlater (Qiagen Inc, Germantown, US) στους -80 ° C πριν από την εκχύλιση νουκλεϊκών οξέων. Παχέος δείγματα βιοψίας συνήθως σταθερό σε φορμαλδεΰδη και ενσωματωμένα σε παραφίνη για πειράματα ανοσοϊστοχημείας.

Ηθικά εγκρίσεις (Nr .: 69/2008 και 202/2009) για αυτή τη μελέτη είχαν εκδοθεί από το περιφερειακό και θεσμικό Επιτροπής της Επιστήμης και Έρευνας Ηθικής του Πανεπιστημίου Semmelweis (Βουδαπέστη, Ουγγαρία). Λεπτομερής κλινικοπαθολογοανατομικών προδιαγραφές των δειγμάτων των ασθενών συνοψίζονται στο

Πίνακας 1

.

Η

mRNA ανάλυση μικροσυστοιχιών έκφραση

Σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή, το συνολικό RNA εξήχθη χρησιμοποιώντας RNeasy Mini Kit (Qiagen Inc., Germantown, USA). Η ποσότητα των απομονωμένων RNA χαρακτηρίστηκε με μέτρηση της απορρόφησης (NanoDrop ND-1000 Φασματοφωτόμετρο, NanoDrop Technologies, Inc., Wilmington, USA) και η ποιότητα των απομονωμένων RNA ελέγχθηκε με ηλεκτροφόρηση τριχοειδούς γέλης (2100 Bioanalyzer και RNA 6000 Pico Kit /Agilent Inc ., Santa Clara, Καλιφόρνια, ΗΠΑ /). Σύμφωνα με την περιγραφή Affymetrix, βιοτινυλιωμένο ιχνηλάτες cRNA συντέθηκαν από 1 έως 8 μg ολικού RNA με RIN (RNA Ακεραιότητα Number) μεταξύ 7-10 και αποσπασματική χρήση του One-Cycle Target επισήμανση και τον έλεγχο Kit (http: //www.affymetrix. com /support /downloads /εγχειρίδια /expression_s2_manual.pdf). Δέκα μικρογραμμάρια του κάθε δείγματος κατακερματισμένων cRNA υβριδίστηκε σε συστοιχία HGU133 Plus2.0 (Affymetrix, Santa Clara, CA, USA) στους 45 ° C για 16 ώρες. Οι μικροσυστοιχίες πλύθηκαν χρησιμοποιώντας το σταθμό ρευστών 450 της συσκευής, και βάφονται με τη μέθοδο χρώσης ενίσχυση αντίσωμα σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Φθορισμού σήματα ανιχνεύθηκαν με GeneChip Scanner 3000 (Affymetrix).

TaqMan πραγματικού χρόνου αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (RT-PCR) επικύρωσης

αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης TaqMan χρησιμοποιήθηκε για να μετρηθεί η έκφραση του mRNA του SST κωδικοποιεί γονίδιο στο πρωτότυπο (6 ιστολογικά άθικτη παιδιά, 6 ιστολογικά άθικτο ενήλικο και 6 δείγματα ενηλίκων CRC) και ανεξάρτητες ομάδες δειγμάτων (6 ιστολογικά άθικτη παιδιά, 6 ιστολογικά άθικτη ενηλίκων, 6 ενήλικα δείγματα CRC). 18S ριβοσωμικό RNA (Hs03928990_g1 *) και GAPDH (Hs03929097_g1 *) χρησιμοποιήθηκαν ως γονίδιο αναφοράς.

Σύνολο εκχύλιση RNA, ποιότητας και ποσότητας έλεγχοι διεξήχθησαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως. Χρησιμοποιώντας την υψηλής χωρητικότητας cDNA Reverse Transcription Kit με RNase Αναστολέας, 1 μg συνολικού RNA ανά δείγμα υποβλήθηκε σε αντίστροφη μεταγραφή (Life Technologies, Carlsbad, CA, USA). Η ποιότητα του cDNA ελέγχθηκε με SDHA PCR πραγματικού χρόνου (F. Hoffmann-La Roche Ltd., Basel, Switzerland). Στη συνέχεια, 16,7 ng πρότυπο cDNA ανά δείγμα χρησιμοποιήθηκε για

SST

(Hs00174949_m1 *) ανάλυση της έκφρασης του mRNA με TaqMan Gene Expression Master Mix (Τεχνολογίες Ζωής). Οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν σε LightCycler 480 (Roche) με μορφή ανίχνευση μονόχρωμο Υδρόλυση Probe /UPL Probe. Μετά από μετουσίωση στους 95 ° C για 10 λεπτά, 40 κύκλοι PCR διεξήχθησαν (ενίσχυση στους 95 ° C για 15 δευτερόλεπτα, και στους 60 ° C για 1 λεπτό).

Ανοσοϊστοχημεία για την ανίχνευση των κυττάρων που παράγουν σωματοστατίνη

Πυρήνες της διαμέτρου 2 χιλ συλλέχθηκαν από επιλεγμένες περιοχές της, μπλοκ ιστού εγκλεισμένα σε παραφίνη σταθεροποιημένα με φορμαλίνη παρασκευάζεται από 20 φυσιολογικά δείγματα παχέος εντέρου και 23 του παχέος εντέρου ενηλίκων ασθενών και εισάγεται σε μικροσυστοιχίες ιστού (TMA) παραλήπτη μπλοκ. Επιπλέον, 14 ιστολογικά άθικτη παχέος δείγματα βιοψίας από τα παιδιά εξετάστηκαν επίσης στο επίπεδο της πρωτεΐνης. 5 μm τομές πάχους του ιστού κόπηκαν από τεμάχια ΤΜΑ και από δείγματα βιοψίας, και ανοσοχρωματίστηκαν. Η ενδογενής μπλοκαρίσματος υπεροξειδάσης (0.5% υπεροξείδιο του υδρογόνου και μείγμα μεθανόλης, 30 λεπτά, θερμοκρασία δωματίου) και ανάκτηση αντιγόνου (Target Ανάκτηση Solution, Dako, Glostrup, Δανία, κωδικός: S1699, σε ρΗ 6 ρυθμιστικό διάλυμα, εκτελείται σε ένα φούρνο μικροκυμάτων στους 900 W για 10 λεπτά και σε 370 W για 40 λεπτά) διεξήχθησαν σε αποκηρωμένο δείγματα. εφαρμόστηκε μη-ειδική δέσμευση με 1% αλβουμίνη βόειου ορού. Ανοσοϊστοχημική ανίχνευση της σωματοστατίνης διεξήχθη σε υγροποιημένο θάλαμο με χρήση αντι-ανθρώπινο πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού (1:50 αραίωση, τη διάρκεια της νύχτας, Thermo Scientific, California, USA, κωδικός: RB-038-Α). σύστημα HRP EnVision + (επισημασμένο Polymer Anti-Rabbit, 40 λεπτά, Dako, κωδικός: K4003) του συστήματος και διαμινοβενζιδίνης-υδρογόνο υπεροξειδάσης-χρωμογόνου υποστρώματος (Cytomation Liquid DAB + Substrate Chromogen System, 10 λεπτά, Dako, κωδικός: K3468) χρησιμοποιήθηκαν για τη μετατροπή του σήματος. Τέλος, αιματοξυλίνη συν-χρώση πραγματοποιήθηκε.

Καταμέτρηση των κυττάρων που παράγουν σωματοστατίνη σε ψηφιακή διαφάνειες

Βιτρώ δείγματα βιοψίας και μικροσυστοιχιών ιστού (TMA) διαφάνειες ήταν ψηφιοποιημένο με υψηλή ανάλυση ψηφιακό σαρωτή (Pannoramic σάρωση, 3DHISTECH Ltd. Βουδαπέστη, Ουγγαρία) με τη χρήση πολλαπλών στρώσεων φθορισμού σάρωσης με υψηλό αριθμητικό άνοιγμα (0,8) x20 αντικειμενικό φακό και υψηλό δυναμικό εύρος AxioCam Mrm Rev.3 μαύρο και άσπρο κάμερα συνδεδεμένη με το σαρωτή. Ψηφιακή πλάκες προσβάσιμες μέσω μια οθόνη υπολογιστή και αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό Pannoramic Viewer (έκδοση 1.11.43.0). Η μονάδα λογισμικού Counter Marker με αποτέλεσμα μόνιμη σχολιασμούς στις μετρήθηκαν τα κύτταρα χρησιμοποιήθηκε για να εκτιμηθεί η σχετική αναλογία SST παράγουν και άλλα επιθηλιακά κύτταρα. Επιθηλιακά SST θετικότητα εμφανίστηκε όλα τόσο ισχυρή καφέ κυτταροπλασματική σήμανση στις διαφάνειες. Ανάλογα με το μέγεθος του δείγματος, 500-1000 επιθηλιακά κύτταρα μετρήθηκαν σε διαμήκη κρύπτες καλά-προσανατολισμένη.

Θεραπεία του Caco-2 κυττάρων με ανάλογο σωματοστατίνης οκτρεοτίδιο και μέτρηση του πληθυσμού υπο-G1 χρήση κυτταρομετρίας ροής

Κυτταρική καλλιέργεια και επεξεργασία. πείραμα κυτταρικής καλλιέργειας διατηρήθηκε σε ένα συγκεκριμένο εργαστήριο καλλιέργεια κυτταρικής μεμβράνης των παθογόνων. Caco-2 ανθρώπινων επιθηλιακών κυτταρική γραμμή αδενοκαρκινώματος ελήφθη από DSMZ (Braunschweig, Γερμανία? Cat Νο ACC-169.). Τα κύτταρα αναπτύχθηκαν σε συρροή σε μέσο ΜΕΜ (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA?. Cat Νο Μ 2279), συμπληρωμένο με 20% εμβρυϊκό βόειο ορό (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA?. Νο Cat F 24429) και 160 μg /ml γενταμυκίνη (Sandoz GmbH, Schaftenau, Αυστρία). Στη συνέχεια, 70.000 κύτταρα Caco-2 διευθετήθηκαν για l καλά σε μία πλάκα θεραπεία 24 φρεατίων σε ΜΕΜ συμπληρωμένο με γενταμυκίνη και FCS. Μετά από μέσον 24 ωρών άλλαξε: ΜΕΜ προστέθηκε με γενταμυκίνη και με 0,1, 1,0, 2,5, 5,0 και 10,0 nmol /l της οκτρεοτίδης (Sandoz GmbH) χωρίς FCS. Η μέτρηση διεξήχθη εις τριπλούν για κάθε συγκέντρωση. Μετά από 24, 48 και 72 ώρες θεραπεία τα κύτταρα συλλέχθηκαν, δύο φορές πλύθηκαν σε 0.5 ml στείρου PBS και τελικά επαναιωρήθηκαν σε 1,0 ml παγωμένης αιθανόλης 70% και αποθηκεύεται στους -20 ° C.

Η κυτταρομετρία ροής και υπο-G1 ανίχνευσης πληθυσμού. Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε φυγοκέντρηση για 3 λεπτά στις 1300 στροφές ανά λεπτό, στη συνέχεια, τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε 300 μ1 ρυθμιστικού εκχύλισης και 3 μλ RNAse (RNase Α /Τ1 Mix, Thermo Fisher Scientific Βαλτική UAB, Βίλνιους, Λιθουανία) προστέθηκε. Μετά από 15 λεπτά επώασης σε θερμοκρασία δωματίου, 3 μΐ προπιδίου jodide (Sigma-Aldrich, St. Louis, USA? Cat Νο 81845.) Προστέθηκε. Η μέτρηση FACS εκτελέστηκε σε Becton Dickinson Συστήματα Immunocytometry (Mountain View, California, USA, με αύξοντα αριθμό 81313).

Η μεθυλίωση ευαίσθητο ένζυμο περιορισμού ανάλυση της σειράς μεθυλίωσης

Βιοψία δείγματα ομογενοποιούνται σε 2 δωδεκυλ θειικό νάτριο% για την εκχύλιση του DNA, και στη συνέχεια επωάστηκαν σε πρωτεϊνάση Κ ρυθμιστικό πέψης (4 mg /ml) στους 60 ° C για 16 ώρες. εκχύλιση του DNA πραγματοποιήθηκε με υψηλής καθαρότητας Template PCR Προετοιμασία Kit (Roche Applied Science, Penzberg, Γερμανία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. DNA εκλούστηκε σε 2×100 μΐ RNase- και άνευ ϋΝάσης ύδωρ και αποθηκεύτηκε στους -20 ° C. προφίλ μεθυλίωσης DNA εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας το Σύστημα Array EpiTect Methyl qPCR (Qiagen, Hilden, Germany). Το απομονωμένο DNA επωάστηκε είτε με μεθυλίωση του DNA εξαρτώμενη από DNA ή ευαίσθητα ένζυμα περιορισμού για 16 ώρες στους 37 ° C, στη συνέχεια επωάζονται στους 65 ° C για να σταματήσει μεθυλάσης δραστηριότητα. Κάθε αντίδραση περιείχε 120 μι 500 ng γενωμικού DNA. Μετά ένζυμο πέψη, τα δείγματα αναλύθηκαν με βάση φθορισμό, ποσοτική PCR χρησιμοποιώντας LightCycler 480 (Roche Diagnostics, Basel, Switzerland). PCR διεξήχθη στις ακόλουθες συνθήκες: 95 ° C για 10 λεπτά, 40 κύκλοι (97 ° C για 15 sec? Και 72 ° C για 1 min-με απόκτησης δεδομένων σε πραγματικό χρόνο). Για να εξασφαλιστεί η ενίσχυση των επιθυμητών προϊόντων, ανάλυση καμπύλης τήξης εκτελέσθηκε ακολουθώντας την PCR αντίδραση σε πραγματικό χρόνο. Η σειρά απόκτηση δεδομένων καμπύλης τήξης ήταν 65 ° -95 ° C, κρατώντας για 1 s σε βήματα των 0,04 ° C για την PCR ανίχνευση του προϊόντος.

Στατιστική

αξιολόγηση

Για την έκφραση του mRNA προφίλ, το Affymetrix συστοιχίες έκφρασης κυρίως προ-επεξεργασία με φόντο GCRMA μέθοδο διόρθωσης με quantile εξομάλυνση και μεσαίο βερνίκι περιλήψεων. Η έκφραση του

SST

γονίδιο μεταξύ των διαφόρων ομάδων δείγμα αναλύθηκε με ΑΝΟνΑ και post-test Tukey HSD. Τα σύνολα δεδομένων είναι διαθέσιμα στο Omnibus βάση δεδομένων γονιδιακής έκφρασης (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/), σειρά αριθμών πρόσβασης:. GSE10714, GSE37364 και GSE37267

Για πραγματικού χρόνου PCR επικύρωση της έκφρασης SST 12 δείγματα αναλύθηκαν στις ακόλουθες ομάδες: παιδιά, υγιείς /κανονικούς ενήλικες και ενήλικες CRCs. Για εξομάλυνση, 18S ριβοσωμικού RNA χρησιμοποιήθηκε ως καθαριότητας εσωτερικού ελέγχου και των αξιών DCT εκπροσωπήθηκαν στη Boxplots. Ως εκ τούτου, τα δεδομένα ήταν φυσιολογικό διανέμονται για στατιστική ανάλυση δοκιμή ANOVA και Tukey HSD post-test εφαρμόστηκαν για τον προσδιορισμό σημασία. Χρησιμοποιήθηκαν τα ακόλουθα κριτήρια: Διπλώστε change≤0.5 ή Πάσο change≥2 και τιμή-p & lt? εφαρμόστηκαν 0,05

Για την στατιστική ανάλυση των αποτελεσμάτων SST ανοσοχρώση το τεστ ANOVA και Tukey HSD post-test.. Σε αμφότερες τις Κριτήρια σημαντικότητας μέθοδοι ήταν ρ & lt?. 0.05

δοκιμή Mann-Whitney χρησιμοποιήθηκε για να συγκριθεί το ποσοστό των κυττάρων Caco-2 σε διάφορα στάδια του κυτταρικού κύκλου (Sub-G1, G1, S, G2 και Μ) οκτρεοτίδης επεξεργασμένου ομάδες και στην ομάδα ελέγχου. p & lt? 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Τα αποτελέσματα της ανάλυσης σειρά μεθυλίωσης αξιολογήθηκαν με ANOVA και Tukey HSD post-test για να καθορίσει και να συγκρίνει τις αναλογίες του

SST

μεθυλίωση προαγωγού στο. τρεις ομάδες δειγμάτων.

Για την στατιστική ανάλυση R εφαρμόστηκε 3.1.0 στατιστική περιβάλλον. Boxplots αντιπροσωπεύει μέση και τυπική απόκλιση των δεδομένων των ακραίων τιμών.

Αποτελέσματα

αλλοιώσεις έκφραση σωματοστατίνης σε υπερπολλαπλασιαστικές καταστάσεις της

παχέος εντέρου

επίπεδα έκφρασης σωματοστατίνη mRNA σε παχέος δείγματα βιοψίας από υγιή νεανική, ενηλίκων και του παχέος εντέρου ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας 213921_at Affymetrix probeset ID (https://www.affymetrix.com/analysis/index.affx). mRNA έκφραση του SST δεν μετέβαλε τη διάρκεια της κανονικής γήρανσης σε σύγκριση υγιή νεαρά (Ch) και ενήλικες (Ν) δείγματα, ωστόσο, η έκφραση γονιδίου μειώθηκε σημαντικά σε ορθοκολικό καρκίνο (CRC) (ρ & lt? 0,05) σε σύγκριση με φυσιολογικούς ενήλικες (Ν) δείγματα

(Εικ. 1)

.

σε πραγματικό χρόνο PCR επικύρωση για το πρωτότυπο, η ανεξάρτητη και οι συνδυασμένες σύνολα δειγμάτων επαληθεύεται η σημαντικά μειωμένη

SST

έκφρασης στο CRC (p & lt ?. 0,05)

(Σχήμα 2)

, και αυξημένη παραγωγή SST σε υγιή δείγματα, ανεξάρτητα από την ηλικία. Ανοσοϊστοχημική ανάλυση επιβεβαίωσε την σχεδόν απούσα παραγωγή σωματοστατίνης σε δείγματα ορθοκολικού καρκινώματος σε σύγκριση με νέους και ενήλικες υγιείς βλεννογόνο του παχέος εντέρου σε επίπεδο πρωτεΐνης (p & lt? 0,05)

(Σχήμα 3, 4).

Η

mRNA. ανάλυση μικροσυστοιχιών έκφραση της σωματοστατίνης γονιδίου (SST) σε μικροσκοπικά κανονική του κόλου δείγματα βιοψίας από παιδιά (Ch) και ενήλικες (Ν) και σε ορθοκολικό δείγμα βιοψίας καρκίνου (CRCs). Κόκκινες κουκκίδες είναι οι κανονικοποιημένες τιμές έκφρασης mRNA, Boxplots αντιπροσωπεύουν την μέση και την τυπική απόκλιση.

SST

έκφραση μειώθηκε σημαντικά στο CRC.

Η

Η επικύρωση των αλλαγών έκφρασης του mRNA της σωματοστατίνης (

SST

) γονιδίου σε ιστολογικά κανονικό παχέος δείγματα βιοψίας από τα παιδιά (Χ) και ενήλικες (Ν) και σε ορθοκολικό δείγμα βιοψίας καρκίνου (CRCs) χρησιμοποιώντας αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης σε πραγματικό χρόνο (RT-PCR) για τις συνδυασμένες σύνολα δειγμάτων. Κόκκινες κουκκίδες είναι οι κανονικοποιημένες τιμές έκφρασης RT-PCR, Boxplots αντιπροσωπεύουν την μέση και την τυπική απόκλιση. RT-PCR ανάλυση επαληθεύεται η σημαντικά μειωμένη

SST

έκφραση στο CRC.

Η

Ανίχνευση των κυττάρων που παράγουν SST (καφέ κυτταρόπλασμα) κατά την κανονική γήρανση και καρκίνο του παχέος εντέρου (CRC). Οι εικόνες που λαμβάνονται με ψηφιακές μικροσκόπιο: φυσιολογικό ιστό παιδί (Ch) (80-πλάσια μεγέθυνση), φυσιολογικό ενήλικο ιστό (Ν) (55-πλάσια μεγέθυνση) και καρκίνωμα (CRC) σε ενήλικες (20-πλάσια μεγέθυνση). θα μπορούσαν να ανιχνευθούν μόνο πολύ χαμηλό επίπεδο πρωτεΐνης SST στα δείγματα CRC.

Η

Ανίχνευση της σωματοστατίνης (SST) που παράγουν κύτταρα στο ανθρώπινο κανονικό κολονικό επιθήλιο από παιδιά (Ch) και από τους ενήλικες (Ν) και σε ορθοκολικό καρκίνους (CRCs). Κόκκινο κουκίδες είναι η αναλογία του SST παράγουν κυττάρων σε σύγκριση με το συνολικό σκορ επιθηλιακών κυττάρων (%)? Boxplots αντιπροσωπεύουν την μέση και την τυπική απόκλιση των δεδομένων. παραγωγή SST μειώθηκε σημαντικά σε CRC.

Η

Τα αντι-πολλαπλασιαστικά αποτελέσματα της ανάλογο σωματοστατίνης επί καρκινικών κυττάρων του παχέος

ανάλογο σωματοστατίνης οκτρεοτίδιο προστέθηκε στον ορθοκολικό κύτταρα αδενοκαρκινώματος (Caco-2) σε διάφορες συγκεντρώσεις. Σημαντικά αυξημένες κατάτμησης DNA (πληθυσμός Sub-G1) μετρήθηκε με κυτταρομετρία ροής μετά από 48 ώρες σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου, σε συγκέντρωση-εξαρτώμενο τρόπο. Σε περιπτώσεις ανάλογο σωματοστατίνης κατεργασία σε υψηλότερες συγκεντρώσεις από 0,1 nmol /l, η αναλογία των αποπτωτικών κλασμάτων Sub-G1 ήταν σημαντικά υψηλότερη (ρ & lt? 0,05) από ότι ήταν στην ομάδα ελέγχου, ενώ η αναλογία των κυττάρων σε άλλες φάσεις του κυτταρικού κύκλου ( G1, S, G2, Μ) ήταν σημαντικά χαμηλότερη. Η υψηλότερη αποπτωτικό κλάσμα (Sub-G1) και το χαμηλότερο G1, S, G2, Μ πληθυσμού μετρήθηκαν σε συγκέντρωση οκτρεοτίδης 5,0 nmol /l. Η κυτταρομετρία ροής αποτελέσματα συνοψίζονται στο

Πίνακας 2, Πίνακας 3

και

Εικ. 5

.

Ποσοστό των κυττάρων στον έλεγχο και οκτρεοτίδης αγωγή ομάδες με μέσο όρο και την τυπική απόκλιση. Μπλε στήλες αντιπροσωπεύουν τα κύτταρα στη φάση Sub-G1 και τις αναλογίες των κυττάρων στο G1 + S + G2 + M φάση απεικονίζονται με κόκκινο στήλες. Σε υψηλότερες συγκεντρώσεις από 0,1 nmol /l προστίθενται οκτρεοτίδης, το ποσοστό των αποπτωτικών κλάσμα Sub-G1 ήταν σημαντικά υψηλότερη (ρ & lt? 0,05) από ότι στην ομάδα ελέγχου, ενώ η αναλογία των κυττάρων σε άλλες φάσεις του κυτταρικού κύκλου (G1 + S + G2 + Μ) ήταν σημαντικά χαμηλότερη. Η υψηλότερη αποπτωτικό κλάσμα (Sub-G1) και το χαμηλότερο (G1 + S + G2 + M) του πληθυσμού μετρήθηκαν σε συγκέντρωση /l οκτρεοτίδη 5,0 nmol.

Η

Η

DNA υποστηρικτής SST αλλαγές μεθυλίωσης σε υπερπολλαπλασιαστικές καταστάσεις του παχέος εντέρου

Ανάδοχος μεθυλίωση του γονιδίου σωματοστατίνης αυξήθηκε κατά την κανονική γήρανση και καρκινογένεση. Η χαμηλότερη

SST

μεθυλίωση προαγωγού βρέθηκε σε νεανική κολονικό επιθήλιο (3,5% ± 1,9%) το οποίο μπορεί να χαρακτηρίζεται από ελεγχόμενη, αυξημένο πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Ωστόσο, σε καρκίνο του παχέος εντέρου, όπου αυξημένη κυτταρική ανάπτυξη είναι απορυθμισμένη,

SST

μεθυλίωση ήταν σημαντικά υψηλότερη (30,2% ± 11,6%) (ρ & lt? 0,05). Η υψηλότερη κατάσταση μεθυλίωσης ανιχνεύθηκε σε CRC

(Εικ. 6)

.

Αξιολόγηση της μεθυλίωσης υποστηρικτής του

SST

γονίδιο στην κανονική του παχέος δείγματα βιοψίας από τα παιδιά (Χ) και από ενήλικες (Ν) και σε ορθοκολικούς καρκίνους (CRCs) χρησιμοποιώντας ένζυμο περιορισμού ανάλυση της σειράς μεθυλίωση ευαίσθητα σε μεθυλίωση. Κόκκινες κουκκίδες είναι οι αξίες μεθυλίωσης υποστηρικτής του

SST

(%)? Boxplots αντιπροσωπεύουν την μέση και την τυπική απόκλιση. Οι μεθυλίωση υποστηρικτής αυξάνεται κατά την κανονική γήρανση και καρκινογένεση, και το υψηλότερο ποσοστό μεθυλίωσης ανιχνεύθηκε στα δείγματα νεοπλασματικής.

Η

Συζήτηση

καρκίνος του παχέος εντέρου είναι μία από τις πιο συχνές κακοήθεις όγκους με τη φτωχή έκβαση σε προχωρημένες περιπτώσεις. επίπτωση της είναι χαμηλά κάτω από την ηλικία των 50, ωστόσο, αυξάνει ταχέως σε ομάδες μεγαλύτερης ηλικίας. Στις ανεπτυγμένες χώρες, η μέση ηλικία κατά τη διάγνωση είναι περίπου 70 ετών [8] και στην πλειονότητα των περιπτώσεων CRC έχει διαγνωστεί πάνω από την ηλικία των 65 ετών [22]. Ως εκ τούτου, η ηλικία μπορεί να θεωρηθεί ως ένα κυρίαρχο παράγοντα κινδύνου για ορθοκολικό καρκινογένεση [23]. Νωρίτερα αποδείξαμε ότι αυξημένα πολλαπλασιασμός των κυττάρων είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό του παχέος επιθηλίου τόσο στην παιδική ηλικία και σε καρκίνο με τη σημαντική διαφορά στον έλεγχο του πολλαπλασιασμού των κυττάρων στον καρκίνο [18]. Στην παρούσα μελέτη αποδείξαμε τόσο σε mRNA και πρωτεΐνη επίπεδα που σωματοστατίνης έκφραση δεν διαφέρει σημαντικά σε ηλικιωμένους υγιείς κολονικό επιθήλιο σύγκριση με νεανική δειγμάτων, όμως, είναι σχεδόν απούσα σε καρκίνο του παχέος εντέρου. Η περιοχή του υποκινητή του

SST

γονίδιο βρέθηκε να υπερμεθυλίωση σε CRC βιοψίες, η οποία θα μπορούσε να αντιστραφεί εν μέρει με απομεθυλίωση σε καρκινικές κυτταρικές σειρές. Δεδομένου ότι η αγωγή με το ανάλογο σωματοστατίνης οκτρεοτίδη οδήγησε σε μειωμένη κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την απόπτωση αυξημένα σε έναν άνθρωπο κυτταρική σειρά ορθοκολικού αδενοκαρκινώματος, τα αποτελέσματά μας υποδεικνύουν ότι η απουσία της τοπικής παραγωγής SST μπορεί να συμβάλλει στην αυξημένη και ανεξέλεγκτος πολλαπλασιασμός κυττάρων σε CRC.

γαστρεντερική (GI) ορμόνες (π.χ. σωματοστατίνη, η χολοκυστοκινίνη (CCK), γαστρίνη, βομβεσίνη (BBS) /απελευθέρωσης γαστρίνης πεπτίδιο (GRP), νευροτενσίνη (ΝΤ), πεπτίδιο ΥΥ (ΡΥΥ), όμοιο με γλυκαγόνη πεπτίδιο 2 (GLP-2) ) εκκρίνονται από ενδοκρινή κύτταρα, τα οποία βρίσκονται στον εντερικό βλεννογόνο και στο πάγκρεας. Αυτές οι χημικές αγγελιαφόροι ρυθμίζουν την εντερική και την έκκριση του παγκρέατος, την πέψη, απορρόφηση, την κινητικότητα και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Η σωματοστατίνη είναι ένα ρυθμιστικό-ανασταλτικό πεπτίδιο, το οποίο μπορεί να θεωρηθεί ως μια καθολική απενεργοποίησης ορμόνη, και επιπλέον μπορεί να αναστείλει την ανάπτυξη των κυττάρων σε φυσιολογικά και νεοπλαστικούς ιστούς. SST έχει ενδοκρινείς και παρακρινείς /αυτοκρινείς επιδράσεις, και μπορεί να συνδεθεί με τους υποδοχείς του της κυτταρικής επιφάνειας συζευγμένο με G πρωτεΐνη (SSTR1-5) για την έναρξη μονοπατιών μεταγωγής σήματος [24].

Σε αυτή τη μελέτη έχουμε βρει ότι η αναλογία του σωματοστατίνη κύτταρα που παράγουν είναι μικρότερη από 1% σε ιστολογικά φυσιολογικό νέων και ενηλίκων κολονικό επιθήλιο, και σημαντικά μειωμένη σε νεοπλασματικής δείγματα. Προηγούμενες ανοσοϊστοχημικές μελέτες έχουν δείξει διπλή εντόπιση της σωματοστατίνης είναι τόσο στις ενδοκρινικές D-κύτταρα και νεύρα στο παχύ έντερο [25]. Επιπλέον,

Parsons et al

. έχουν βρει επίσης σχετικά χαμηλό αριθμό των SST θετικών κυττάρων στο επιθήλιο του κόλου [26]. Στην ομάδα εργασίας μας

Galamb et al

. νωρίτερα εντοπιστεί γονίδια (π.χ.

AMN, PTGDR

) με μείωση της έκφρασης κατά τη διάρκεια του παχέος ογκογένεση [20,27]. Ομοίως με αυτούς τους δείκτες, μειώθηκαν σημαντικά την παραγωγή SST μπορεί επίσης να συμβάλει στο σχηματισμό ορθοκολικού καρκίνου.

Λόγω των επιπτώσεων της SST στην γαστρεντερική οδό, ανάλογα SST μπορεί να εφαρμοστεί αποτελεσματικά σε μη νεοπλασματικά εντερικές διαταραχές όπως η οξεία variceal αιμορραγία, παγκρεατικό συρίγγιο, σύνδρομο ντάμπινγκ, ή σε ορισμένες περιπτώσεις χρόνιας διάρροιας και εντερικής ψευδοαπόφραξη [28].

Εφαρμογή των αναλόγων SST είναι ευρέως διαδεδομένη για τη διάγνωση και τη θεραπεία των νευροενδοκρινών όγκων [29-31]. Διάγνωση αυτών των όγκων μπορεί να είναι δύσκολη και χρονοβόρα, που μπορεί να επιδεινώσει την πιθανότητα αποτελεσματικής θεραπευτικής παρέμβασης [30]. Το ραδιοσημασμένο ανάλογα σωματοστατίνης μπορούν να μαρτυρούν τον εντοπισμό των πρωτογενών και μεταστατικών όγκων που εκφράζουν υποδοχείς της σωματοστατίνης, που δεν μπορεί να ανιχνευθεί με συμβατικές τεχνικές απεικόνισης λόγω του μικρού μεγέθους τους [32]. Επιπλέον, η σωματοστατίνη και τα παράγωγά της έχει πολλές θετικές επιπτώσεις στην αγωγή των νευροενδοκρινών νεοπλασμάτων. Η αναστολή της ορμονικής υπερέκκρισης μπορεί να παρέχει συμπτωματική ανακούφιση και όγκου συρρίκνωση [7]. ανάλογα SST μπορεί να αναστέλλει την παραγωγή της GH και IGF, παράγοντες προαγωγής της ανάπτυξης του καρκίνου [33]. Μπορούν να αναστείλουν την αγγειογένεση [34,35], μπορεί να παίζει ένα ρόλο immunemodulatory [36,37], και μπορεί να προκαλέσει διακοπή του κυτταρικού κύκλου και επάγουν απόπτωση μέσω υποδοχέων σωματοστατίνης [11,14]. ανάλογα SST μπορεί να είναι ασφαλέστερα φάρμακα για μακροχρόνια χρήση από κυτταροτοξική χημειοθεραπεία, επειδή έχουν λιγότερες και ηπιότερες παρενέργειες όπως γαστρεντερικές ενοχλήσεις, χολολιθίαση και τις επιπτώσεις στο μεταβολισμό της γλυκόζης [30].

SST αναλογική σπινθηρογράφημα μπορεί να εφαρμοστεί για διάγνωση ανοσοδιαμεσολαβούμενης διαταραχές (π.χ. λεμφώματα, κοκκιωματώδη νόσο ή ρευματοειδή αρθρίτιδα) [38-41] και μη-νευροενδοκρινείς όγκους, καθώς και [42]. Υπάρχουν διάφορα πειράματα κυτταρικής καλλιέργειας, ζωικά μοντέλα και κλινικές μελέτες που διερευνούν τις θετικές επιπτώσεις της SST αναλόγων σε κακοήθεις όγκους, συμπεριλαμβανομένων των λεμφωμάτων, καρκίνου του μαστού και του καρκίνου του προστάτη [43-47].

Σε μία κλινική μελέτη η επίδραση της οκτρεοτίδης διερευνήθηκε σε ασθενείς χημειοθεραπεία πυρίμαχα με καρκίνο του στομάχου. Σημαντική βελτίωση στην επιβίωση παρατηρήθηκε στην ομάδα που υπέστη αγωγή, σε σύγκριση με την ομάδα best-υποστηρικτική φροντίδα [48]. Η θετική επίδραση της αναλογικής θεραπείας SST για ηπατοκυτταρικό καρκίνωμα (HCC) δεν είναι σαφής. Στις ίδιες περιπτώσεις χορήγησης οκτρεοτίδη βελτίωσε τη διάμεση επιβίωση χωρίς θεραπεία ασθενών σε σχέση [49,50], αλλά μετέπειτα μελέτη σε μεγαλύτερο πληθυσμό δεν έδειξαν όφελος επιβίωσης για ασθενείς με προχωρημένο HCC αγωγή με μακράς δράσης οκτρεοτίδη σε σύγκριση με το εικονικό φάρμακο [51].