Αφηρημένο

Ιστορικό

Επικουρική χημειοθεραπεία για τον ορθοκολικό του καρκίνου βασίζεται κυρίως στο συνδυασμό 5-φθοριοουρακίλη, φολινικό οξύ και οξαλιπλατίνη (FOLFOX-4). Η φαρμακολογική στόχος της οξαλιπλατίνη παραμένει ενδοκυτταρικά και ως εκ τούτου, εξαρτάται από τη θέση της σε κύτταρα. Η ενδοκυτταρική διανομή οξαλιπλατίνη διαμεσολαβείται από οργανικό κατιόν μεταφορείς 1, 2 και 3 (OCT1, 2 και 3), μεταφορέας χαλκός 1 (CTR1) και ΑΤΡάσης Cu

2+ πολυπεπτίδιο μεταφοράς βήτα (ATP7B) και μπορεί να ρυθμίζουν την αποτελεσματικότητα της οξαλιπλατίνη χημειοθεραπεία με βάση. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να εκτελέσει μια αναδρομική μελέτη για την αξιολόγηση της σχέσης μεταξύ της έκφρασης των μεταφορέων οξαλιπλατίνη σε καρκίνο του παχέος εντέρου πριν από τη χημειοθεραπεία και την απόκριση σε FOLFOX-4 επικουρική χημειοθεραπεία σε ασθενείς ανταπόκρισης και μη ανταπόκρισης.

Μέθοδοι

η αναδρομική αυτή μελέτη διεξήχθη σε ένα μόνο κέντρο (Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Clermont-Ferrand, Γαλλία). Ο πληθυσμός στόχος ήταν οι ασθενείς με χειρουργήσιμο καρκίνο του παχέος εντέρου λειτούργησε μεταξύ 2006 και 2013. Τα κριτήρια ένταξης ορίστηκαν για τους ασθενείς ανταπόκρισης καθώς δεν υποτροπής του καρκίνου τρία χρόνια μετά το τέλος της χημειοθεραπείας, καθώς και για τους ασθενείς μη ανταπόκρισης ως υποτροπή του καρκίνου μέσα σε 1 χρόνο. Άλλα κριτήρια συμπερίληψης ήταν τα στάδια IIb-IV καρκίνους, πρώτης γραμμής ανοσοενισχυτικό FOLFOX-4 χημειοθεραπεία, και η διαθεσιμότητα εκτομή δειγμάτων πρωτογενούς όγκου. Τα κριτήρια αποκλεισμού ήταν η προεγχειρητική χημειοθεραπεία ή /και ακτινοθεραπεία, μια στοχευμένη θεραπεία, άλλα αντικαρκινικά φάρμακα, η επανεμφάνιση του καρκίνου μεταξύ του πρώτου και του τρίτου έτους μετά το τέλος της χημειοθεραπείας και της παρακολούθησης & lt? 3 χρόνια. Ανοσοχρώση των μεταφορέων οξαλιπλατίνη (OCT1, 2, 3, CTR1 και ATP7B) και Ki-67 εκτιμήθηκε σε δείγματα όγκων.

Αποτελέσματα

Εκ των υστέρων, οι 31 ασθενείς έχουν επιλεγεί σύμφωνα με την ενσωμάτωση και τον αποκλεισμό κριτήρια (15 ανταποκρίθηκαν και 16 μη ανταποκρινόμενοι). Πριν FOLFOX-4 θεραπευτική αγωγή, η έκφραση OCT3 ήταν σημαντικά χαμηλότερη στους ασθενείς αποκριτή σε σύγκριση με μη-ανταποκρινόμενους (ρ & lt? 0.001). Σύμφωνα με την πολυπαραγοντική ανάλυση, OCT3 παραμένει ανεξάρτητο κριτήριο για την απάντηση χημειοθεραπεία επικουρική FOLFOX (p = 0,039). Καμία σημαντική σχέση αναφερθεί μεταξύ απόκριση σε χημειοθεραπεία και την έκφραση του OCT1 (p = 0.49), OCT2 (p = 0.09), CTR1 (p = 0.45), ATP7B (p = 0.94) και Ki-67 (p = 0.34) σε όγκους .

Συμπεράσματα

Υψηλή έκφραση OCT3 θα μπορούσε να είναι ένας ανεξάρτητος παράγοντας που σχετίζονται με την αντίσταση στην FOLFOX-4 χημειοθεραπεία

Παράθεση:. Le Roy B, Tixier L, Pereira Β, SAUVANET Ρ, Buc Ε, Pétorin C, et al. (2016) Αξιολόγηση της σχέσης μεταξύ της έκφρασης των οξαλιπλατίνη μεταφορείς στον Καρκίνο του παχέος εντέρου και να αντιμετωπίζουν την FOLFOX-4 επικουρική χημειοθεραπεία: μια μελέτη ελέγχου υπόθεση. PLoS ONE 11 (2): e0148739. doi: 10.1371 /journal.pone.0148739

Επιμέλεια: Shrikant Anant, Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρική Σχολή, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 5 Οκτ, 2015? Αποδεκτές: 22 Ιανουαρίου, 2016? Δημοσιεύθηκε: 9 Φεβρουαρίου 2016

Copyright: © 2016 Le Roy et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του Υποστηρίζοντας αρχεία πληροφοριών του χαρτιού και

χρηματοδότηση:.. Οι συγγραφείς δεν έχουν καμία υποστήριξη ή χρηματοδότηση για να αναφέρετε

Αντικρουόμενα συμφέροντα:. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν αντικρουόμενα συμφέροντα

Συντομογραφίες: ATP7B, ΑΤΡ Cu

2 + μεταφορά πολυπεπτίδιο beta? ΔΜΣ, δείκτης μάζας σώματος? CRC, καρκίνο του παχέος εντέρου? CTR1, Transporter χαλκού 1? FOLFOX, 5-φθοριοουρακίλη, φολινικό οξύ και οξαλιπλατίνη? HES, αιματοξυλίνη /ηωσίνη /σαφρανίνης? OCT1, Οργανική μεταφορείς κατιόντων 1? OCT2, Οργανική μεταφορείς κατιόντων 2? OCT3, Οργανική μεταφορείς κατιόντων 3? SLC, διαλυμένη ουσία οικογένεια φορέα? ΤΝΜ, μετάσταση στους λεμφαδένες όγκου

Ιστορικό

Η συνολική επιβίωση των ασθενών με καρκίνο του παχέος υψηλού κινδύνου (CRC) (στάδια II, III ή IV) βελτιώνεται από επικουρική χημειοθεραπεία [1,2] . Χημειοθεραπεία πρώτης γραμμής συσχετίζει συνήθως 5-φθοριοουρακίλη, φολινικό οξύ και οξαλιπλατίνη στο πρωτόκολλο FOLFOX-4. Ωστόσο, σχεδόν οι μισοί από τους ασθενείς που λάμβαναν επικουρική θεραπεία δεν επωφελούνται από οξαλιπλατίνη [2,3]. άλατα λευκόχρυσου (π.χ. οξαλιπλατίνη) προσαγωγοί μορφή λευκοχρύσου σε διπλών κλώνων του DNA, με αποτέλεσμα την αναστολή της αντιγραφής του DNA. Κατά συνέπεια, η κυτταρική κατανομή των αλάτων πλατίνας θεωρείται ότι είναι ένας σημαντικός παράγοντας που καθορίζει την ευαισθησία του φαρμάκου [4]. Μεμβράνη μεταφορείς των ξενοβιοτικών είναι σημαντικοί παράγοντες που εμπλέκονται στην ενδοκυτταρική διανομή και την αποτελεσματικότητα των αντικαρκινικών φαρμάκων [4].

In vitro

μελέτες έχουν αποδείξει ότι οι μεταφορείς οργανικό κατιόν OCT1, OCT2 και OCT3, που ανήκουν στην οικογένεια φορέα διαλυμένης ουσίας 22 (SLC22a1, SLC22a2 και SLC22a3, αντίστοιχα), εμπλέκονται στην κυτταρική πρόσληψη των αλάτων πλατίνας, ειδικά για οξαλιπλατίνη [5-7]. Ο μεταφορέας χαλκού 1 (CTR1), που ανήκει στην οικογένεια μεταφορέα διαλυμένης ουσίας 31 (SLC31A1), συνδέεται επίσης με την εισροή των αλάτων πλατίνας όπως οξαλιπλατίνη σε κύτταρα, ενώ εκροή του μπορεί να συνδέεται με το μεταφορέα χαλκό, ΑΤΡάση Cu

2+ μεταφορά βήτα πολυπεπτίδιο (ATP7B) [8]. Έτσι, στο πλαίσιο της CRC, την έκφραση του όγκου των OCT1, OCT2, OCT3, CTR1 και ATP7B μπορεί να επηρεάσει την απάντηση FOLFOX-4 χημειοθεραπεία. Ωστόσο, σε αυτήν την ημερομηνία, πολύ λίγο κλινικές μελέτες έχουν γίνει σε CRC και καμία μελέτη στο πλαίσιο της επικουρική χημειοθεραπεία. Σε μεταστατικό CRC, μια υψηλή έκφραση του OCT2 έχει συσχετιστεί με καλύτερη προγνωστικό και υψηλή έκφραση του ATP7B με κακή προγνωστική [9-11]. Δεν κλινική μελέτη αξιολόγησε ποτέ τη σχέση μεταξύ της απόκρισης χημειοθεραπεία και την έκφραση της OCT1, OCT3 και CTR1 στο CRC. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να εκτελέσει μια αναδρομική εκτίμηση, σε δείγματα όγκων μετά από χειρουργική επέμβαση και πριν από τη χημειοθεραπεία, για τη σχέση μεταξύ της έκφρασης των μεταφορέων οξαλιπλατίνη (OCT1, OCT2, OCT3, CTR1 και ATP7B) και την απάντηση σε επικουρική FOLFOX-4 χημειοθεραπεία , σε ασθενείς ανταπόκρισης και μη ανταπόκρισης.

Μέθοδοι

ασθενείς και το σχεδιασμό της μελέτης

η αναδρομική αυτή μελέτη διεξήχθη σε ένα ενιαίο κέντρο, το Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Clermont-Ferrand ( Γαλλία). Ο πληθυσμός στόχος ήταν οι ασθενείς με χειρουργικά εξαιρέσιμων CRC που λειτουργούν στην Χειρουργική Μονάδα για το πεπτικό σύστημα του Πανεπιστημιακού Νοσοκομείου του Clermont-Ferrand (Γαλλία) μεταξύ 2006 και 2013. Τα κριτήρια ένταξης ορίστηκαν για τους ασθενείς ανταπόκρισης καθώς δεν υποτροπής του καρκίνου (που ανακαλύφθηκε στην απεικόνιση ή κολονοσκόπηση) 3 χρόνια μετά το τέλος της χημειοθεραπείας, και για τους ασθενείς μη ανταποκριθέντες ως υποτροπής του καρκίνου εντός 1 έτους μετά το τέλος της χημειοθεραπείας. Άλλα κριτήρια ένταξης ήταν τα στάδια Πο, Πο, ΙΙΙ ή IV CRC, πρώτης γραμμής ανοσοενισχυτικό FOLFOX-4 (φολινικό οξύ, 5-φθοριοουρακίλη και οξαλιπλατίνη) χημειοθεραπεία μετά CRC εκτομή, και η διαθεσιμότητα εκτομή δείγματα πρωτογενούς όγκου. Τα κριτήρια αποκλεισμού ήταν η προεγχειρητική χημειοθεραπεία ή /και ακτινοθεραπεία, μια στοχευμένη θεραπεία, άλλα αντικαρκινικά φάρμακα, η επανεμφάνιση του καρκίνου μεταξύ του πρώτου και του τρίτου έτους μετά το τέλος της χημειοθεραπείας και της παρακολούθησης & lt? 3 χρόνια. Δεοντολογική έγκριση ελήφθη από την Τοπική Επιτροπή Δεοντολογίας (CPP sud-est 6? IRB: 00.008.526). Λαμβάνοντας υπόψη τη σοβαρότητα αυτού του τύπου της νόσου (CRC), την απουσία της γενετικής έρευνας και σύμφωνα με το γαλλικό δίκαιο, η Τοπική Επιτροπή Δεοντολογίας έχει δώσει την έγκρισή της για την απαλλαγή από την υποχρέωση να ενημερώνουν τους ασθενείς.

Ιστός δείγματα και ιστοπαθολογική ανάλυση

Μετά την εκτομή του όγκου, φρέσκα δείγματα μεταφέρθηκαν στο εργαστήριο παθολογίας, σταθερό σε οξικό οξύ /φορμόλη, το αλκοόλ (AFA), ενσωματωμένο σε παραφίνη, κομμένο σε φέτες 5 mm, και αναλύονται με HES λεκές (αιματοξυλίνη /ηωσίνη /σαφρανίνης). Οι όγκοι οργανώθηκαν σύμφωνα με την κατάταξη κόμβο μετάσταση όγκου (ΤΝΜ) της 7ης

ου αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο /Ένωσης για τη Διεθνή Έλεγχο του Καρκίνου. Τα ακόλουθα στοιχεία αξιολογήθηκαν επίσης για κάθε όγκο:. Βαθμός διαφοροποίησης (κακή, μέτρια ή υψηλή), περινευρικές εισβολή, αγγειακή ή /και του λεμφικού εμβολή, και το καθεστώς περιθωρίου

Η ανοσοϊστοχημεία

Πέντε τμήματα μικρομέτρου εγκλεισμένο σε παραφίνη ιστό σημάνθηκαν με πολύκλωνα αντισώματα κουνελιού: αντι-OCT1 (1: 125, Novus Biologicals, UK), αντι-OCT2 (1:50, αντισώματα Atlas, USA), αντι-CTR1 (1: 200, Novus Biologicals, UK), αντι-ATP7B (1:25 Abcam, Γαλλία), μονοκλωνικά αντισώματα κουνελιού: αντι-OCT3 (κλώνος EPR6630, 1: 300, Abcam, Γαλλία) και αντι-Ki-67 (κλώνος ΜΙΒ-1, έτοιμο προς χρήση, Dakko, Δανία). Ki-67 χρησιμοποιήθηκε ως κυτταρικός δείκτης για πολλαπλασιασμό και προγνωστικός παράγοντας σε CRC [12]. Ανοσοχρώση πραγματοποιήθηκε με το Ultra Kit Δείτε Ανίχνευση σε ένα Benchmark χρώσης XT (Ventana Medical Systems, USA). Η αξιολόγηση πραγματοποιήθηκε ανεξάρτητα από 2 έμπειρους παθολόγους (συντάκτες: LT και PD), οι οποίοι αξιολογούνται ΥΧΕ, CTR1, ATP7B και Ki-67 εκφράσεις με οπτικό μικροσκόπιο. ΥΧΕ και CTR1 βαθμολογήθηκαν ημι-ποσοτικά με ένα H-score, όπως περιγράφηκε προηγουμένως [13]. Ένταση χρώσης βαθμολογήθηκε από 0 έως 3+ (0: καμία χρώση? 1+: ασθενής χρώση, 2+: μέτρια χρώση, 3+: ισχυρή χρώση). Το ποσοστό των χρωσμένων κυττάρων όγκου αξιολογήθηκε για κάθε ένταση και ένα Η-βαθμολογία (0-300) υπολογίστηκε ως ακολούθως: (1χ ποσοστό των κυττάρων που φιλοξενούν ασθενής χρώση 1+) + (2χ ποσοστό των κυττάρων που φιλοξενούν μέτρια χρώση 2+) + (ποσοστό 3x των κυττάρων που φιλοξενούν ισχυρή χρώση 3+). ATP7B και Ki-67 αξιολογήθηκαν από το ποσοστό των χρωματισμένων κυττάρων. Όταν υπήρχαν διαφορές μεταξύ των παρατηρητών,

Διαχείριση δεδομένων και στατιστική ανάλυση

δεδομένα Μελέτη συλλέχθηκαν και διαχειρίζεται χρησιμοποιώντας το αχθοφόρος σιδηροδρομικού σταθμού (Έρευνα Electronic Data Capture) εφαρμογή τα δείγματα εξετάστηκαν μέχρι να επιτευχθεί συναίνεση. φιλοξενείται στο Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο του Clermont-Ferrand [14]. Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε με τη χρήση Stata 13 λογισμικό (StataCorp LP, College Station, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής). Οι δοκιμές ήταν δύο όψεων, με σφάλμα τύπου Ι που στο α = 0,05. Φάνηκε δύσκολο να προτείνει μια εκτίμηση του μεγέθους του δείγματος σύμφωνα με την έλλειψη γνώσεων σχετικά με τη λογοτεχνία για τον κύριο στόχο και συνδέονται αποτέλεσμα σε αυτόν τον πληθυσμό. Επίσης, το μέγεθος του δείγματος έχει καθοριστεί σύμφωνα με την ικανότητα πρόσληψης και σύμφωνα με διαδοχική σχεδίαση χωρίς πληθωρισμό σφάλμα τύπου Ι [15]. Ωστόσο,

προτάθηκε εκ των υστέρων

υπολογισμό στατιστική ισχύ. Οι πτυχές αυτές διευκρινίστηκαν στη συζήτηση. Τα αρχικά χαρακτηριστικά παρουσιάστηκαν ως μέσος όρος (± τυπική απόκλιση-) ή διάμεση [εύρος διατεταρτημοριακό] για συνεχή δεδομένα (υπόθεση ομαλότητας αξιολογείται χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Shapiro-Wilk) και καθώς ο αριθμός των ασθενών και των συναφών ποσοστά για κατηγορηματική παραμέτρους. Συγκρίσεις των χαρακτηριστικών των ασθενών μεταξύ των ανεξάρτητων ομάδων (απάντηση της χημειοθεραπείας) έγιναν χρησιμοποιώντας chi-τετράγωνο ή ακριβές εξετάσεις του Fisher για τις κατηγορικές μεταβλητές (φύλο, το είδος της χειρουργικής επέμβασης, οι πρωτογενείς εντοπισμό του όγκου, η ιστολογική κατάσταση, βαθμός νευροτοξικότητα), και το t-test Student ή Mann-Whitney, αν οι υποθέσεις του t-test δεν συνέτρεχαν ((1) ομαλότητα και (2) η υπόθεση της ομοσκεδαστικότητα μελετήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία Fisher-Snedecor) για ποσοτικές παραμέτρους (ηλικία, ο δείκτης μάζας σώματος (ΔΜΣ), κρεατινίνη ορού, καρκινικοί δείκτες, αριθμό των κύκλων χημειοθεραπείας, αθροιστικές δόσεις του οξαλιπλατίνη). Η σχέση μεταξύ των ποσοτικών παραμέτρων μελετήθηκε χρησιμοποιώντας συντελεστές συσχέτισης (Pearson ή Spearman σύμφωνα με την στατιστική κατανομή). Ένα πολυπαραγοντικό μοντέλο λογιστικής παλινδρόμησης χρησιμοποιήθηκε για να μελετηθεί η σχέση μεταξύ της έκφρασης των μεταφορέων οξαλιπλατίνη σε απάντηση χημειοθεραπεία (εξαρτημένη μεταβλητή), λαμβάνοντας υπόψη προσαρμογές για τις σχετικές κλινικές παραμέτρους: την τοποθεσία του όγκου, ταξινόμηση ΤΝΜ, λεμφική και φλεβική εμβολή, περινευρικές εισβολή, ο αριθμός των απομονωμένων κόμβους, αθροιστικές δόσεις οξαλιπλατίνης και ο αριθμός των κύκλων χημειοθεραπείας. Λόγω του σχετικά μικρού μεγέθους του δείγματος, ένας εκκίνησης εκτίμηση θεωρήθηκε για να ολοκληρωθεί η πολυμεταβλητή ανάλυση. Το τελικό μοντέλο είχε επικυρωθεί με μια διαδικασία bootstrapping δύο σταδίων. Σε κάθε βήμα, 1.000 δείγματα bootstrap με αντικαταστάσεις δημιουργήθηκαν από το σύνολο εκπαίδευσης. Στην πρώτη, χρησιμοποιώντας την σταδιακή διαδικασία, προσδιορίσαμε το ποσοστό των μοντέλων συμπεριλαμβανομένων κάθε μία από τις αρχικές μεταβλητές. Στο δεύτερο βήμα, ανεξάρτητα υπολόγισε τις υλικοτεχνική παραμέτρους παλινδρόμησης του τελικού μοντέλου. Οι εκτιμήσεις εκκίνησης του κάθε συμμεταβλητή συντελεστή και το τυπικό σφάλμα της μέσης κατά μέσο όρο από αυτές τις επαναλήψεις. Μια ανάλυση χρησιμοποιώντας μια καμπύλη ROC (δέκτης λειτουργικό χαρακτηριστικό) προτάθηκε και αρκετές ευρετήρια στη συνέχεια υπολογίστηκε (δείκτης Youden, το ευρετήριο του Liu, αποτελεσματικότητα) για να διερευνήσει την οριακή τιμή για τη βελτιστοποίηση της ευαισθησίας και της ειδικότητας της έκφρασης OCT3 να προβλέψουμε απόκριση χημειοθεραπεία. Όταν χρειάζεται (για την περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC (AUC-ROC) και τις αποδόσεις-αναλογία), 95% διάστημα εμπιστοσύνης υπολογίστηκαν. Η AUC-ROC ήταν σε σύγκριση με 0,75 [16].

Αποτελέσματα

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών

Εκ των υστέρων, οι 31 ασθενείς έχουν επιλεγεί σύμφωνα με τα κριτήρια ένταξης και αποκλεισμού (Εικόνα 1) . Δεκαπέντε ασθενείς θεωρούνταν ως ανταποκρινόμενες και 16 ασθενείς ως μη ανταποκρινόμενοι. Τα κλινικά, παθολογικά και θεραπευτικά αποτελέσματα αυτών των 31 ασθενείς συνοψίζονται στον Πίνακα 1. Όλοι οι ασθενείς ήταν Καυκάσιους και χωρίς καμία διάγνωση των καρκίνων κατά τα τελευταία 5 χρόνια. Καμία διαφορά μεταξύ των ασθενών ανταπόκρισης και μη ανταπόκρισης ταυτοποιήθηκε ως προς την ηλικία, το φύλο, BMI, χειρουργική επέμβαση, μετεγχειρητικές επιπλοκές, τη θέση του πρωτοπαθούς όγκου, ιστολογικά δεδομένα, φλεβική, λεμφική ή νευρικό εισβολή, η διαφοροποίηση του όγκου, ή βιοδείκτες όγκων. Ωστόσο, ο αριθμός των κύκλων χημειοθεραπείας και τις αθροιστικές δόσεις οξαλιπλατίνης ήταν σημαντικά υψηλότερες για τους ασθενείς αποκριτή σε σύγκριση με τα μη-ανταποκρινόμενους (p = 0,004 και ρ = 0,04, αντίστοιχα).

Οι ασθενείς ταυτοποιήθηκαν και επιλέγονται από η βάση δεδομένων του Πεπτικού Μονάδα Χειρουργικής μεταξύ 2006 και 2013.

η

η έκφραση των ΥΧΕ, CTR1 και ATP7B μεταφορείς

η χρώση των OCT1 και ATP7B αποκάλυψε σωματιδιακή subnuclear εντοπισμού, ενώ OCT2 και OCT3 βρίσκονταν στην κυτταροπλασματική μεμβράνη και επίσης στο κυτταρόπλασμα. CTR1 από την πλευρά της βρίσκεται στο κυτταρόπλασμα (Σχήμα 2). Δεν παρατηρήθηκε σημαντική διαφορά του μέσου H-score βρέθηκε μεταξύ των ασθενών ανταπόκρισης και μη ανταπόκρισης για OCT1 (80 [20-160]

vs

65 [6-170], p = 0,49), OCT2 (130 [100 -185]

vs

175 [148-203], p = 0,09), CTR1 (95 [80-110]

vs

80 [48 – 130], p = 0.45) και ATP7B (35 [4-60]

vs

33 [2-70], ρ = 0,94) (Σχήμα 3). Για την έκφραση OCT3 σε όγκους, η διάμεση H-σκορ ήταν σημαντικά χαμηλότερη στους ασθενείς ανταπόκρισης σε σύγκριση με ασθενείς που δεν ανταπόκρισης (5 [0-60]

vs

123 [70 – 178], p & lt? 0.001) (Εικ 3). Έκφραση OCT3 σε φυσιολογικό κολονικό ιστό έχει αξιολογηθεί σε 5 δείγματα των ασθενών ανταπόκρισης και 5 δείγματα των ασθενών μη-αποκριτής. Σε σύγκριση με τα δείγματα κολονικού όγκου, η ένταση ανοσοχρώση ήταν χαμηλή σε φυσιολογικό ιστό. Καμία διαφορά της OCT3 ανοσοχρώση έχει τεθεί σε αποδείξεις μεταξύ ομάδας ασθενών (ασθενείς ανταπόκρισης: 3 ασθενείς χωρίς ανοσοχρώση και 2 ασθενείς με ανοσοχρώση? Ασθενείς μη ανταποκρινόμενος: 2 ασθενείς χωρίς ανοσοχρώση και 3 ασθενείς με ανοσοχρώση). Παραδείγματα OCT3 ανοσοχρώση σε φυσιολογικό κολονικό ιστό φαίνεται στο Σχ 4.

Διάφορα ένταση του ανοσοχρώση: (Α) Αρνητικός μάρτυρας, (Β) η υψηλή έκφραση (3+) του OCT1, (Γ) OCT2, ( Δ) OCT3, (Ε) CTR1 και (F) ATP7B (X400? γραμμή κλίμακας = 25 μm)

Η

(NS:. δεν είναι σημαντική, p & gt? 0,05? ***: p & lt? 0.001).

Η

Διάφορα ένταση της ανοσοχρώσης: (α) δεν έκφραση σε έναν ασθενή ανταπόκρισης, (Β) υψηλή έκφραση ενός ασθενούς ανταπόκρισης, (C) δεν έκφραση σε έναν ασθενή μη ανταπόκρισης, (D) υψηλής έκφραση σε έναν ασθενή μη-ανταπόκρισης,. (X400? γραμμή κλίμακας = 25 μm)

η

η σχέση μεταξύ της έκφρασης των ΥΧΕ σε όγκους και την αντιμετώπιση των FOLFOX-4 χημειοθεραπεία, αξιολογήθηκε από πολυπαραγοντική ανάλυση (λαμβάνοντας υπόψη το ακόλουθες μεταβλητές: την τοποθεσία του όγκου, ταξινόμηση ΤΝΜ, λεμφική και φλεβική εμβολή, περινευρικές εισβολή, ο αριθμός των μεμονωμένων κόμβων, αθροιστικές οξαλιπλατίνη δόσεις και ο αριθμός των κύκλων χημειοθεραπείας). Η πολυπαραγοντική ανάλυση έδειξε ότι μόνο χαμηλή έκφραση OCT3 σε όγκους διατηρήσει την ανεξάρτητη προγνωστική σημασία της ανταπόκρισης χημειοθεραπεία για να (λόγος πιθανοτήτων = 0,95 IC

95% [0,91 – 0,98]? P = 0,039). Μετά την ανάλυση με μια καμπύλη ROC (AUC-ROC = 0.92 IC

95% [0,82 – 1]) και τον καθορισμό της διαχωριστικής δείκτη για το H βαθμολογία του OCT3, το όριο των 67,5 βρέθηκε να είναι η πιο διακριτική τιμή μεταξύ ασθενείς ανταπόκρισης και μη ανταπόκρισης (ευαισθησία = 87% IC

95% [60% -98%], η ειδικότητα = 88% IC

95% [62% -98%]) (Σχήμα 5). Λαμβάνοντας υπόψη αυτό το όριο H-βαθμολογία 67,5, 86,7% (13/15) των ασθενών ανταπόκρισης ήταν κάτω από αυτό το όριο, έναντι μόλις 12,5% (2/16) των ασθενών μη ανταπόκρισης (p & lt? 0.001).

x -άξονα: 1-ειδικότητα, y-άξονα:. ευαισθησία

η

η έκφραση του Ki-67

Καμία διαφορά του Ki-67 έκφρασης έχει βρεθεί μεταξύ των ασθενών ανταπόκρισης και μη ανταποκρίθηκαν (65 [40-80]

vs

52.5 [43,75 – 60], ρ = 0,34) (Σχήμα 3). Ki-67 έκφραση δεν συσχετίστηκε με την έκφραση OCT3 σε δείγματα όγκων (rho του Spearman = -0.12).

Συζήτηση

OCT1, OCT2, OCT3, CTR1 και ATP7B ανιχνεύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία σε διάφορα επίπεδα σε δείγματα ιστού CRC μετά από χειρουργική επέμβαση και πριν από επικουρική χημειοθεραπεία. Παρά τον μικρό αριθμό ασθενών, υψηλή έκφραση του OCT3 σε δείγματα όγκων παρέμεινε ανεξάρτητο παράγοντα CRC μη απάντησης σε επικουρική FOLFOX-4 χημειοθεραπεία. Η έκφραση της OCT1, OCT2, CTR1 και ATP7B δεν είχαν σχέση με το FOLFOX-4 απόκρισης. Όπως αναφέρθηκε στα στατιστικά ζητήματα (βλέπε παραπάνω), λόγω των δυσκολιών να προτείνει την εκτίμηση του μεγέθους του δείγματος,

υστέρων

υπολογισμό στατιστικής ισχύος προτάθηκε σύμφωνα με τα αποτελέσματα που παρατηρήθηκαν για την πρωτοβάθμια αποτέλεσμα. Με η = 15 ανταποκρίθηκαν και n = 16 ασθενείς μη ανταποκριθέντες, η στατιστική ισχύς ήταν μεγαλύτερη από 95% για να δείξει μια διαφορά 118 βαθμών για έκφραση σε όγκους OCT3 (H-score: 5 [0-60]

vs

123 [70-178]), η εντολή sampsi του λογισμικού Stata θεωρώντας μη κανονική κατανομή [17]. Αυτή η στατιστική ισχύς φαινόταν ικανοποιητική. Για την έκφραση του OCT2, η στατιστική ισχύς ήταν περίπου 80% (H-score: 130 [100 – 185]

vs

175 [148-203]). Εάν η διαφορά φάνηκε κλινικά σημαντική για την έκφραση του OCT2, ήταν πιο διφορούμενη για την έκφραση της OCT1, CTR1 και ATP7B. Όπως υποδεικνύεται από Feise [18], θα πρέπει να είναι προσεκτικοί για να επικεντρωθεί όχι μόνο με στατιστική σημαντικότητα, αλλά και από την ποιότητα της έρευνας στα πλαίσια της μελέτης και το μέγεθος της διαφοράς. Τέλος, το μέγεθος αποτελέσματος (διαφορά μεταξύ των μέσων διαιρούνται με τυπική απόκλιση) για έκφραση OCT3 μεταξύ ανταποκρίθηκαν και μη-ανταποκρινόμενοι ήταν περίπου 1,84 [0,98? 2.68], το οποίο μπορεί να θεωρηθεί ως μεγάλη (≥0.8) [19].

In vitro

, η έκφραση της OCT1, OCT2, OCT3 και CTR1 θετικά που σχετίζονται με την εισροή των οξαλιπλατίνη μέσα στα κύτταρα και κυτταροτοξικότητα, ενώ ATP7B είχε σχέση με την εκροή και την αντίσταση [5,7,8] του. Στην περίπτωση του CRC, η σχέση μεταξύ OCT1, OCT3 και CTR1 και την ανταπόκριση χημειοθεραπείας δεν έχει αξιολογηθεί σε κλινικές δοκιμές. Μόνο δύο μελέτες έχουν παρατηρήσει μια θετική σχέση μεταξύ της έκφρασης OCT2 στο μεταστατικό CRC με καλύτερη επιβίωση χωρίς εξέλιξη και την ανταπόκριση του όγκου [9,10]. Ωστόσο, η σύγκριση με τα αποτελέσματά μας είναι μάλλον δύσκολη, επειδή μόνο CRC ασθενείς με μεταστατικό συμπεριλήφθηκαν, αντιμετωπίζονται από FOLFOX-4 χημειοθεραπεία, με ή χωρίς bevacizumab. Οι μόνες κλινικές εκβάσεις ήταν η επιβίωση χωρίς εξέλιξη και την ανταπόκριση του όγκου. Επιπλέον, ο αριθμός των ασθενών που έλαβαν θεραπεία με bevacizumab, κύκλους χημειοθεραπείας και αθροιστικές δόσεις οξαλιπλατίνη ήταν άγνωστη [9,10]. Οι ίδιες παρατηρήσεις μπορούν να γίνουν με την προηγούμενη κλινική μελέτη για την ίδρυση μια σύνδεση μεταξύ της έκφρασης υψηλή ATP7B και κακή έκβαση σε ασθενείς που λαμβάνουν CRC οξαλιπλατίνη χημειοθεραπεία με βάση [11]. Αυτή η μελέτη περιελάμβανε μόνο μεταστατικό CRC ασθενείς και τα χαρακτηριστικά της θεραπείας δεν αναφέρθηκαν [11].

Κατά την άποψη του η

in vitro

αποτελέσματα της Yokoo

et al

., Θα μπορούσαμε να αναμένουμε ότι η έκφραση της πρωτεΐνης του OCT3 στο CRC θα είναι θετικά με την απάντηση χημειοθεραπεία [7]. έκφραση γονιδίου OCT3 ήταν σημαντικά υψηλότερη σε ιστούς CRC σε σχέση με φυσιολογικούς ιστούς και κύτταρα επιμολυσμένα με cDNA ανθρώπινης OCT3 συσσωρευμένες σημαντικά περισσότερο πλατίνα από τα κενά-φορέα επιμολυσμένα κύτταρα [7]. Ωστόσο,

in vivo

, η ακριβής λειτουργία του OCT1, OCT2 και OCT3 στην κυτταρική κατανομή των ξενοβιοτικών παραμένει ασαφές [20]. ΥΧΕ διευκολύνονται διάχυση αμφίδρομης μεταφορείς από ένα ευρύ φάσμα των ξενοβιοτικών και μετατοπίζουν τα υποστρώματα τους κάτω την ηλεκτροχημική κλίση κατά μήκος της μεμβράνης [20]. Με βάση την βιβλιογραφία, OCT2 φάνηκε να εκφράζεται στην βασεοπλευρική πλευρά του εντεροκυττάρων, OCT3 στην ακραία πλευρά και OCT1 και στις δύο πλευρές [21-23]. Στα ποντίκια, OCT1 μπορεί να διευκολύνει την εντερική έκκριση του τετρααιθυλαμμωνίου από το αίμα προς τον εντερικό αυλό [24]. Επίσης, τα πρόσφατα έργα για τη συσσώρευση μετφορμίνης και έκκριση σιελογόνοι αδένες δείχνουν ότι OCT3 μπορεί να μεσολαβήσει τόσο την εισροή και την εκροή της μετφορμίνης σε σιελογόνων αδένων [25]. OCT3 μεταφορέα σε μη μεταστατικό CRC θα μπορούσαν να συμμετέχουν στην εκροή της οξαλιπλατίνης από τα καρκινικά κύτταρα, και, τέλος, να μειώσει την κυτταροτοξικότητα της οξαλιπλατίνης σε αυτά τα καρκινικά κύτταρα. Αλλά πρέπει να λάβουμε προληπτικά μέτρα για να ερμηνεύσει όλα αυτά τα αποτελέσματα, γιατί παρέκταση μεταξύ

in vitro

και

in vivo

αποτελέσματα είναι εδώ αντιφατική. Θα ήταν ενδιαφέρον να αξιολογηθεί σε καλλιεργημένα κύτταρα και ζωικά μοντέλα του CRC που εκφράζουν OCT3 μεταφορέα, τη διανομή και την κυτταροτοξικότητα του οξαλιπλατίνη, λαμβάνοντας υπόψη διάφορους έκφραση ή δραστικότητα OCT3 μεταφορέα. Ακόμα κι αν αυτά τα προκαταρκτικά αποτελέσματα πρέπει να επιβεβαιωθούν, θα μπορούσε να είναι ενδιαφέρον να συζητήσουν εναλλακτική στρατηγική για να ξεπεραστούν OCT3 υπερέκφραση σε ασθενείς CRC. Ιρινοτεκάνη (CPT-11) έχει επιδείξει καλή αποτελεσματικότητα σε μεταστατικό ορθοκολικό καρκίνους [26,27] και θα ήταν μια ενδιαφέρουσα υποψήφιος ως αντικατάσταση των οξαλιπλατίνη, σε ασθενείς με υψηλή έκφραση OCT3 πρωτεΐνης. Ιρινοτεκάνη φαίνεται να είναι τόσο ένα υπόστρωμα και έναν αναστολέα της OCT1 [28,29] και καμία πληροφορία δεν είναι πραγματικά διαθέσιμα στοιχεία σχετικά με την αλληλεπίδραση της με OCT3. Κατά τον ίδιο τρόπο, διάφορα φάρμακα όπως οι αναστολείς αντλίας πρωτονίων μπορεί να αναστείλει OCT3 μεταφορών [30], και ως εκ τούτου, θα είναι σε θέση να αυξήσει την οξαλιπλατίνη κυτταροτοξικότητα στο CRC.

Μερικές κριτική μπορεί να γίνει για το έργο μας. Μια ποσοτική εκτίμηση των γονιδίων και πρωτεϊνών εκφράσεις στα φρέσκα δείγματα όγκων και αναλύσεις συσχέτισης θα ενισχύσει τα αποτελέσματά μας. Κατά τον ίδιο τρόπο, αφού η 5-FU είναι επίσης ένα βασικό φάρμακο στη χημειοθεραπεία CRC, θα ήταν ενδιαφέρον να διερευνήσει 5-FU και νουκλεοζίτη μεταφορείς. Για παράδειγμα, η υψηλή έκφραση του ανθρώπινου εξισορροπητικού νουκλεοτιδικού μεταφορέα 1 (hENT1) θα μπορούσε να σχετίζεται με κακή κλινική απόκριση σε CRC [31]. Στους ασθενείς που ανταποκρίνονται, τον αριθμό των κύκλων FOLFOX-4 και αθροιστικές δόσεις οξαλιπλατίνης ήταν υψηλότερα από ότι σε ασθενείς μη ανταποκριθέντες (p = 0,004 και ρ = 0,04, αντίστοιχα). Οι διαφορές αυτές εξηγούνται από την αποτυχία της θεραπείας. Για όλους τους ασθενείς, η ανταπόκριση στη χημειοθεραπεία, αξιολογήθηκε μετά από 6 κύκλους FOLFOX-4 με υπολογιστική τομογραφία σαρώσεις. Για τους ασθενείς μη ανταπόκρισης, το πρωτόκολλο χημειοθεραπείας έχει αλλάξει από οξαλιπλατίνη σε ιρινοτεκάνη (FOLFIRI) και για τους ασθενείς ανταπόκρισης FOLFOX-4 χημειοθεραπεία διατηρήθηκε μέχρι 12 κύκλους. Στη συνέχεια, στους ασθενείς μη ανταπόκρισης, τα μεγέθη του όγκου έτειναν να είναι μεγαλύτερες (PT, ανταποκρίθηκαν

vs

δεν ανταποκρίθηκαν, p = 0.07) και 3 ασθενείς από αυτούς ήταν σε μεταστατικό επίπεδο. Αυτά τα 3 μεταστατικό ασθενείς είχαν μόνο μία μετάσταση στο ήπαρ και οι πρωτογενείς και δευτερογενείς όγκους έχουν εκτομή πλαίσιο της ίδιας χειρουργικής διαδικασίας. Παθολογική ανάλυση του κάθε εκτομή αλλοιώσεων έχει αναφερθεί ένα R0 εκτομές. Με μια εκτομή R0 όλης μεταστατικής νόσου, το 5-ετή συνολική επιβίωση έχει αναφερθεί να είναι τόσο υψηλή όσο 58% [32]. Η εκτομή του μεταστατικού ήπατος παραμένει η πιο αποτελεσματική στρατηγική για την επίτευξη μακροπρόθεσμης συνολικής επιβίωσης και η μόνη θεραπευτική επιλογή για ηπατικές μεταστάσεις ορθοκολικού ειδικά με ένα μόνο μεταστατική βλάβη [33]. Τέλος, η υψηλή έκφραση OCT3 σε αυτή την ομάδα θα μπορούσε επίσης να σχετίζεται με την επιθετικότητα ή εξέλιξης του καρκίνου, αλλά η πολυπαραγοντική ανάλυση της έκφρασης OCT3 παρέμεινε σημαντική ανεξάρτητα από το καθεστώς TNM των ασθενών, και καμία συσχέτιση έχει τεθεί σε αποδείξεων μεταξύ των OCT3 και Ki-67 εκφράσεις .

Συμπέρασμα

Αυτή η μελέτη είναι η πρώτη για την αντιμετώπιση της σχέσης μεταξύ της έκφρασης OCT3 στο CRC και FOLFOX-4 απόκρισης. Σε αυτή την αναδρομική κλινική μελέτη, η έκφραση της OCT3 σε όγκους ήταν αντιστρόφως ανάλογη προς απάντηση χημειοθεραπεία. Μεγαλύτερης κλίμακας και προοπτική μελέτη είναι απαραίτητη για να επιβεβαιωθούν αυτά τα προκαταρκτικά αποτελέσματα και περαιτέρω

στο /ex vivo είναι

μελέτες απαιτούνται για να διευκρινίσουν την οικεία ρόλο των OCT3 στη φαρμακοκινητική των αλάτων πλατίνας.

Υποστήριξη Πληροφοριών

S1 συνόλου δεδομένων.

doi:. 10.1371 /journal.pone.0148739.s001

(XLSX)

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Εμμανουήλ Bourgeois για τη βοήθειά του στην ανοσοϊστοχημική χρώση