Αφηρημένο

Ιστορικό

Η αξιολόγηση διάγνωσης και έγκαιρης βιοδεικτών ανίχνευσης απαιτεί τη σύγκριση συγκεντρώσεις πρωτεΐνης ορού μεταξύ biosamples εξακριβωθεί από άτομα με και χωρίς καρκίνο. Οι προσπάθειες που γίνονται συνήθως για την τυποποίηση των συνθηκών μεταποίησης και αποθήκευσης του αίματος για τις περιπτώσεις και τους ελέγχους, αλλά οι συνθήκες συλλογή του δείγματος αίματος δεν μπορεί να ελεγχθεί πλήρως. Για παράδειγμα, δείγματα αίματος από τις περιπτώσεις συχνά λαμβάνονται από άτομα γνωρίζουν διαγνώσεις τους, και συλλέγονται μετά από νηστεία ή σε χειρουργική επέμβαση, ενώ δείγματα αίματος από κάποιους ελέγχους μπορούν να ληφθούν σε διαφορετικές συνθήκες, όπως μια κλινική επίσκεψη. Με τη μέτρηση των επιπτώσεων των διαφορών στις συνθήκες συλλογής σε τρεις διαφορετικούς δείκτες, ερευνήσαμε τις δυνατότητες αυτών των αποτελεσμάτων με τις μελέτες επικύρωσης προκατάληψη.

Μεθοδολογία και Αρχή Ευρήματα

Αναλύσαμε συγκεντρώσεις των τριών ορού μελετηθεί στο παρελθόν υποθετική του ορού του καρκίνου των ωοθηκών βιοδείκτες-CA 125, προλακτίνη και ΜΙΡ-σε υγιείς γυναίκες, οι γυναίκες με καρκίνο των ωοθηκών που υποβάλλονται σε γυναικολογικό χειρουργείο, οι γυναίκες που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση για καλοήθη παθολογία των ωοθηκών, καθώς και γυναίκες που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση με παθολογικά φυσιολογικές ωοθήκες. Για τις γυναίκες που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση, ένα δείγμα αίματος συλλέχθηκε είτε στην κλινική 1 έως 39 ημέρες πριν από τη χειρουργική επέμβαση, ή την ημέρα του χειρουργείου μετά την αναισθησία χορηγήθηκε αλλά πριν από την χειρουργική διαδικασία, ή και τα δύο. Βρήκαμε ότι ένας δείκτης, προλακτίνη, επηρεάστηκε έντονα από τις συνθήκες συλλογής, ενώ η CA 125 και MIF ήταν ανεπηρέαστες. επίπεδα προλακτίνης δεν διέφεραν μεταξύ υπόθεσης και τον έλεγχο των ομάδων αφού ληφθούν υπόψη και οι συνθήκες της συλλογής δειγμάτων, γεγονός που υποδηλώνει ότι το δείγμα διαπίστωση θα μπορούσε να εξηγήσει μερικά ή όλα από τα προηγούμενα αποτελέσματα για το δυναμικό του ως βιοδείκτη για τον καρκίνο των ωοθηκών.

Συμπεράσματα

μελετών επικύρωσης των βιοδεικτών θα πρέπει να χρησιμοποιούν τυποποιημένες συνθήκες συλλογής, χρησιμοποιήστε πολλές ομάδες ελέγχου, ή /και τη συλλογή δειγμάτων από περιπτώσεις πριν από την επιρροή της διάγνωσης, όποτε είναι εφικτό για να εντοπίζουν και να διορθώνουν για πιθανές προκαταλήψεις που σχετίζονται με τη συλλογή του δείγματος.

Παράθεση: Thorpe JD, Duan Χ, Forrest R, Lowe K, L Brown, Segal Ε, et al. (2007) Επιδράσεις της Συλλογής Αίματος Προϋποθέσεις για καρκίνο των ωοθηκών Ορός Δείκτες. PLoS ONE 2 (12): e1281. doi: 10.1371 /journal.pone.0001281

Ακαδημαϊκό Επιμέλεια: Αλίκη Rumbold, Menzies Σχολή Ερευνών Υγείας, Αυστραλία

Ελήφθη: 17 Οκτωβρίου του 2007? Αποδεκτές: 9 του Νοέμβρη του 2007? Δημοσιεύθηκε: 5 του Δεκέμβρη του 2007

Copyright: © 2007 Thorpe et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Είμαστε ευγνώμων για τη γενναιόδωρη χρηματοδότηση από τον Ειρηνικό ωοθηκών Cancer Research Consortium (POCRC) /SPORE σε καρκίνο των ωοθηκών (Ρ50 CA83636, NU), το Υπουργείο άμυνας /CDMRP (DAMD17-02-1-0691, NU), και το Canary Ιδρύματος.

Αντικρουόμενα συμφέροντα: Elliot Segal είναι ο Πρόεδρος και Διευθύνων Σύμβουλος της Ογκο Ανιχνευτές International LLC, η οποία κατασκευάζει τη δοκιμασία MIF ELISA που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη. Δεν υπάρχουν άλλα ανταγωνιστικά συμφέροντα.

Εισαγωγή

Υποθέτουμε ότι ακόμη και με τα ίδια επεξεργασία και την αποθήκευση του δείγματος πρωτόκολλα το περιβάλλον και τις συνθήκες της συλλογής του δείγματος μπορεί να επηρεάσει τα επίπεδα των βιοδεικτών, και ότι αυτές οι πιθανές προκαταλήψεις πρέπει να να προβλεφθεί στο σχεδιασμό βιοδείκτη μελέτη επικύρωσης. Ειδικότερα, το περιβάλλον γύρω από τη διάγνωση και τη συλλογή δειγμάτων από περιπτώσεις, όπως χειρουργική προετοιμασία, μπορεί να επηρεάσει τη χημεία του αίματος με τρόπο που να εισάγει συστηματικές αλλαγές που μπορεί να αποδοθεί εσφαλμένα στην κατάσταση της νόσου. Έχουμε αποδείξει αυτά τα αποτελέσματα αξιολογώντας τις συνθήκες της συλλογής αίματος σε μία εγκατεστημένος και δύο νέα δείκτες ορού του καρκίνου των ωοθηκών: CA 125, προλακτίνη, και μετανάστευση μακροφάγων Παράγοντας Αναστολής (MIF). Δείχνουμε ότι η CA 125 και MIF συμπεριφέρονται όπως έχουν αναφερθεί στο παρελθόν αλλά η απόδοση της εν λόγω προλακτίνης επηρεάζεται έντονα από τις προκαταλήψεις στην διαπίστωση του δείγματος.

Οι μελέτες επικύρωσης πρώιμο δείκτη ανίχνευσης του καρκίνου σχεδιαστεί για να καθορίσει ποιες πρωτεΐνες μπορούν να διακρίνουν μεταξύ των υγιών ανθρώπων και εκείνων με Καρκίνος. Σε αντίθεση, ένας διαγνωστικός δείκτης προτίθεται να διακρίνει μεταξύ ατόμων με καρκίνο και εκείνα με καλοήθη συνθήκες. Σε δυνητικά θνησιμότητα από καρκίνο των επιπτώσεων ένας δείκτης πρέπει να δείξει μη φυσιολογικά επίπεδα στο αίμα των περιπτώσεων σε σύγκριση με κατάλληλους ελέγχους τους, καθώς και για σκοπούς έγκαιρης ανίχνευσης πρέπει να ανυψώσει αρκετά νωρίς στη διαδικασία της νόσου για τον εντοπισμό της νόσου σε πρώιμο και πιο θεραπεύσιμη κατάσταση [1] . Αξιολογώντας μια πρωτεΐνη σε προ-κλινικά δείγματα που συλλέγονται πολύ πριν από την υποψία ή διάγνωση του καρκίνου θα ήταν ιδανικό για τις μελέτες έγκαιρη ανίχνευση, ενώ τα δείγματα που λαμβάνονται σε κλινική εικόνα της νόσου είναι οι πλέον κατάλληλες για διαγνωστικούς δείκτες. Ωστόσο, επειδή προ-κλινικά δείγματα είναι σπάνια διαθέσιμα, ειδικά για τις σπάνιες ασθένειες, μελέτες επικύρωσης έγκαιρη ανίχνευση της πρώτης φάσης συχνά επιδιώκουν να καθοριστεί εάν ή όχι ένας δείκτης μπορεί να διακρίνει τα άτομα με συμπτωματική νόσο από υγιείς ελέγχους πριν από την περαιτέρω επενδύσεις [2].

η κύρια πρόθεση της μελέτης επικύρωσης βιοδείκτη μας είναι να διαπιστωθεί σε ποιο βαθμό η απόδοση ταξινόμησης ενός βιοδείκτη μπορεί να αποδοθεί σε ασθένειες που σχετίζονται ανταπόκριση και όχι σε προκαταλήψεις διαπίστωση στη συλλογή του δείγματος. Είναι κοινό να κατασκευάσει την περίπτωση και τον έλεγχο των ομάδων που είναι συμφωνημένα στην δείγματος πρωτόκολλα συλλογής, η διάρκεια αποθήκευσης, με την επιφύλαξη της ηλικίας, και άλλες επιδημιολογικές πληροφορίες, προκειμένου να μειωθεί το δυναμικό προκαταλήψεις που σχετίζονται με αυτούς τους παράγοντες. Λιγότερη έμφαση έχει δοθεί στην χρήση πολλαπλών πηγών ελέγχου ή υπόθεση ομάδες για τον εντοπισμό πιθανών προκαταλήψεις ή σχετικά με τη χρήση διαδικασιών που μπορούν να προσαρμοστούν για τις προκαταλήψεις, όπως οι συνθήκες της συλλογής δειγμάτων. Σε αυτό το χειρόγραφο που καταδεικνύουν την πιθανή αξία στη διεξαγωγή μελετών επικύρωσης βιοδείκτη που χρησιμοποιούν πολλαπλές πηγές και σχολιασμένη ομάδες περίπτωση και ελέγχου. Έχουμε αποδείξει ότι η προλακτίνη είναι ιδιαίτερα ευαίσθητη στις συνθήκες της συλλογής: μετά την προσαρμογή για τις συνθήκες της συλλογής ο δείκτης δεν θεωρείται πλέον μια βιώσιμη υποψήφιος. CA 125 και MIF φαίνονται να μην είναι ιδιαίτερα επιρρεπή σε αυτές τις συνθήκες.

Έχουμε επιλέξει τρεις δείκτες-CA 125, προλακτίνη και ΜΙΡ-να αξιολογήσουν με εξαιρετικά σχολιασμένη σύνολο των δειγμάτων υπόθεσης και του ελέγχου.

CA 125 είναι μια που ομοιάζει με μουκίνη γλυκοπρωτεϊνη η οποία έχει αποδειχθεί ότι είναι αυξημένα σε περισσότερες γυναίκες με OC σε σύγκριση με έναν υγιή πληθυσμό [3]. CA 125 έχει επίσης αξιολογηθεί σε προκλινικές δείγματα ορού, και κάθε μελέτη δείχνει ότι η CA 125 είναι μια έξυπνη δείκτη που γίνεται όλο και πιο ισχυρή με την εγγύτητα προς τη διάγνωση [4] – [6]. Ωστόσο, CA 125 είναι επίσης αυξημένη σε πολλές καλοήθεις συνθήκες και μπορεί επίσης να είναι ένας δείκτης φλεγμονής [7]. Λόγω ανεπαρκούς ευαισθησίας και ειδικότητας, CA125 δεν χρησιμοποιείται κλινικά ως δοκιμασία διαλογής μόνος περίπτερο. πέφτουν CA 125 επίπεδα μετά τη θεραπεία που χρησιμοποιείται για να επιβεβαιώσει την ανταπόκριση στις ειδικές θεραπείες [8] και την ανύψωση των επιπέδων CA 125 σηματοδοτήσει υποτροπής [9]. CA 125 είναι ένας συνδετήρας του Mesothelin [10], το οποίο μπορεί να παίζει ρόλο στην μετάσταση OC στο περιτόναιο [11].

MIF είναι μια προφλεγμονώδης κυτοκίνη η οποία έχει ταυτοποιηθεί ως ένας δείκτης υποψήφιος για την έγκαιρη ανίχνευση OC [12], αν και η ανάλυση της απόδοσης του ως βιοδείκτη για τον καρκίνο των ωοθηκών πρώιμο στάδιο πρότεινε ότι δεν επιδεικνύει μεγαλύτερη ευαισθησία ή ειδικότητα από CA 125 [13]. Η αναστολή των αντι-φλεγμονώδεις ιδιότητες των γλυκοκορτικοειδών είναι ένα σημαντικό αποτέλεσμα του MIF [14], [15]. MIF μπορεί επίσης να μεσολαβήσει ορισμένες από τις διεγερτικές επιδράσεις της φλεγμονής στην εξέλιξη του καρκίνου. Αποδεικτικά στοιχεία για το ρόλο του MIF στην ρύθμιση των γονιδίων καταστολής όγκων όπως το ρ53 [16], [17] και την αγγειογένεση [18], [19] δείχνει μια πιθανή σχέση μεταξύ της χρόνιας φλεγμονής και της ανάπτυξης του καρκίνου.

η προλακτίνη έχει ταυτοποιηθεί ως ένας δείκτης πρώιμης ανίχνευσης υποψήφιος για τον καρκίνο των ωοθηκών με αναφορές εντυπωσιακά υψηλή ευαισθησία (& gt? 90%) και η ειδικότητα (& gt? 98%) [12]. Αυξημένα επίπεδα κυκλοφορούντος προλακτίνης (υπερπρολακτιναιμία) έχουν από καιρό συσχετιστεί με όγκους υπόφυσης [20], αλλά πιο πρόσφατα προλακτίνης έχει αναφερθεί σε σχέση με μια ποικιλία από επιπλέον καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του μαστού [21] – [23], του προστάτη [24], και το καρκίνωμα του παχέος εντέρου [25].

Μέθοδοι

πληθυσμός μελέτης και δείγματα ορού συλλογή

δείγματα ορού συλλέχθηκαν από τον Ειρηνικό ωοθηκών Cancer Research Consortium για χρήση σε πειράματα επικύρωση βιοδεικτών. Τα δείγματα που χρησιμοποιήθηκαν σε αυτή τη μελέτη συλλέχθηκαν στο σουηδικό Ιατρικό Κέντρο ή Virginia Mason Νοσοκομείο (Seattle, WA, USA) μεταξύ 1ης Ιουλίου 2004 και 30 Ιουνίου 2006. Οι συμμετέχοντες είχαν προσληφθεί από τις ακόλουθες ομάδες πληθυσμού: φαινομενικά υγιείς γυναίκες παρακολουθούν τακτικά προσυμπτωματικό έλεγχο του καρκίνου του μαστού εξετάσεις (υγιείς μάρτυρες), οι γυναίκες που υποβάλλονται σε γυναικολογική χειρουργική επέμβαση για μια ποικιλία συνθηκών, αλλά με φυσιολογική παθολογία των ωοθηκών (χειρουργική έλεγχοι), οι γυναίκες χωρίς κακοήθεια αλλά με καλοήθη νόσο των ωοθηκών (καλοήθης έλεγχοι), και οι γυναίκες διαγνώστηκαν με καρκίνο των ωοθηκών, καρκίνος των σαλπίγγων, ή πρωτοβάθμια περιτοναϊκή διηθητικό καρκίνο. Πανομοιότυπα πρωτόκολλα επεξεργασίας δείγματος χρησιμοποιήθηκαν για όλες τις ομάδες.

Ένα δείγμα των θεμάτων από κάθε μία από αυτές τις συνθήκες επιλέχθηκε για μελέτες επικύρωσης βιοδείκτη. Ασθενείς με προηγούμενη ωοθηκεκτομή ή διάγνωση του καρκίνου των ωοθηκών αποκλείστηκαν από τον πληθυσμό της μελέτης. Περιπτώσεις που περιλαμβάνονται 50 διαδοχικά προσλαμβάνονται ασθενείς με ωοθηκών (n = 45), σάλπιγγα (n = 1), και καρκίνο του περιτοναίου (n = 4). Οι ομάδες ελέγχου περιλάμβαναν υγιείς μάρτυρες (n = 36), η χειρουργική έλεγχοι (n = 14), και η καλοήθης έλεγχοι (η = 30). Η μελέτη επικύρωσης ήταν τροφοδοτείται να ανιχνεύσει ένα δείκτη με 30% ευαισθησία στο 95% ειδικότητα, ή καλύτερα. Δημογραφικά στοιχεία των ασθενών που συμπεριλήφθηκαν στη μελέτη αυτή περιγράφονται στη συμπληρωματική πίνακες S1 και S2.

Τα υγιή, χειρουργικές και καλοήθεις έλεγχοι που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη επιλέχθηκαν από μεγαλύτερους πληθυσμούς ελέγχου (n = 346, 63, και 38 αντίστοιχα ) για να ταιριάζει με τις υποθέσεις σχετικά με την ηλικία, τη φυλή, το οικογενειακό ιστορικό καρκίνου των ωοθηκών και του μαστού [26], και την ημερομηνία συλλογής του αίματος. Χρησιμοποιήσαμε σκορ τάση που ταιριάζουν για να εξισορροπήσει τη συνολική κατανομή των ομάδων [27]. Εν συντομία, ένα σκορ τάση υπολογίζεται από την πρόβλεψη καθεστώτος περίπτωση τη χρήση της λογιστικής παλινδρόμησης για κάθε μία από τις μεταβλητές ενδιαφέροντος. Μετά την πρώτη επιλογή της ομάδας περίπτωση, επιλέχθηκαν επιμέρους ελέγχους ότι οι περισσότεροι στενά αντιστοιχισμένο μια τυχαία προσδιορίζονται μέλος της υπόθεσης ομάδας στον ανατεθεί βαθμολογίας τάση μέχρι το προκαθορισμένο αριθμό για κάθε ομάδα ελέγχου είχαν επιλεγεί.

Οι συμμετέχοντες στο χειρουργική έλεγχος, καλοήθης έλεγχο και την περίπτωση των πληθυσμών δωρίζονται δείγματα ορού είτε σε μια προ-χειρουργική ραντεβού 1 έως 39 ημέρες πριν από τη χειρουργική επέμβαση ή την ημέρα της χειρουργικής επέμβασης μετά τη χορήγηση αναισθησίας αλλά πριν τη χειρουργική θεραπεία ή χημειοθεραπεία. Για να μεγιστοποιήσετε τη δύναμη να ανιχνεύει τις διαφορές στα επίπεδα δείκτη οφείλεται στις συνθήκες της συλλογής, που περιλαμβάνονται δείγματα που συλλέχθηκαν τόσο κατά την ημέρα της χειρουργικής επέμβασης και κατά την προ-χειρουργική διορισμό από τον ίδιο ασθενή (n = 30), όποτε αυτό είναι δυνατό. Οι συμμετέχοντες στον υγιή πληθυσμό ελέγχου αιμοδοσίας σε ένα τακτικό ραντεβού μαστογραφία.

Οι εργαστηριακές μέθοδοι

προλακτίνη και MIF Αναλύσεις.

Τα επίπεδα ορού της προλακτίνης και ΜΙΡ μετρήθηκαν με ELISA χρησιμοποιώντας κιτ που αποκτήθηκε από Diagnostic Systems Laboratories (Webster, ΤΧ) και Ογκο Ανιχνευτές International LLC (Bethesda, MD) αντίστοιχα. Οι δοκιμασίες διεξήχθησαν σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Οι συγκεντρώσεις ανθρώπινης προλακτίνης και MIF προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας μια γραμμική πρότυπη καμπύλη που κατασκευάστηκε με γραφική παράσταση της μέση απορρόφηση κατά τη γνωστή συγκέντρωση για κάθε πρότυπο αναφοράς. Δείτε κείμενο για λεπτομέρειες S1.

CA 125 Δοκιμασία.

Τα επίπεδα ορού του CA 125 μετρήθηκαν με ανοσοδοκιμασίες με βάση σφαιρίδια όπως περιγράφηκε προηγουμένως [28] χρησιμοποιώντας αντι-CA monocolonal αντισώματα ποντικού 125 × 306 (σύλληψη) και × 52 (ανίχνευσης) που αποκτήθηκαν από την Research Diagnostics, Inc (ΕΑΚ, Φλάνδρα, NJ). Αναγνώσεις από την ανοσολογική δοκιμή ομαλοποιούνται και στη συνέχεια z-scores υπολογίστηκαν από το κεντράρισμα και την κλιμάκωση παρατηρήσεις, έτσι ώστε υγιείς μάρτυρες έχουν μέση τιμή 0 και διακύμανση 1. Βλ Κείμενο S1 για λεπτομέρειες.

Τα δείγματα χωρίστηκαν τυχαία σε δύο πλάκες με 80 δείγματα το καθένα, και εργαστηριακό προσωπικό δεν γνώριζαν την κατάσταση υπόθεση ανά πάσα στιγμή.

Η στατιστική ανάλυση

δέκτης που λειτουργούν καμπύλες (ROC) χρησιμοποιήθηκαν για να προσδιοριστεί εάν οι συγκεντρώσεις στον ορό δείκτη διάκριση μεταξύ των περιπτώσεων και των υγιών μαρτύρων [29 ]. Η περιοχή κάτω από κάθε καμπύλη ROC (AUC) υπολογίστηκε και σημασία για τις διακρίσεις δείκτη (AUC διαφορετικό από 0,5) προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το Mann-Whittney U στατιστική. ROC καμπύλες για υγιή δείγματα ελέγχου και τα δείγματα περίπτωση συλλέγονται είτε πριν από το χειρουργείο ή την ημέρα της χειρουργικής επέμβασης για κάθε δείκτη συγκρίθηκαν με τη χρήση της μεθόδου που περιγράφεται από Metz et al [30].

Για να αξιολογηθεί το κατά πόσον τα επίπεδα δείκτη διέφερε μεταξύ περίπτωση και ομάδες ελέγχου μετά την προσαρμογή για τις συνθήκες της συλλογής αίματος, μπορούμε εφοδιασμένο πολλαπλής γραμμικής παλινδρόμησης μοντέλα για κάθε δείκτη ως εξαρτημένη μεταβλητή με μεταβλητές δείκτης για την κάθε περίπτωση /πληθυσμό ελέγχου και μια μεταβλητή δείκτης για τις συνθήκες της συλλογής δειγμάτων αίματος (κλινική επίσκεψη ή σε χειρουργική ) ως ανεξάρτητες μεταβλητές. Το μοντέλο παλινδρόμησης για το

i

ου γυναίκα σε χρόνο

t

ήταν:

Η ομάδα αναφοράς σε κάθε μοντέλο είναι η υγιής ομάδα ελέγχου. Αυτό το μοντέλο μπορεί ενδεχομένως να διαχωριστούν τα συστατικά της διακύμανσης λόγω των συνθηκών της συλλογής δείγματος και παρουσία κακοήθειας. Ειδικότερα, για τους δείκτες που ανεβάζουν λόγω της παρουσίας του καρκίνου των ωοθηκών και επηρεάζονται επίσης από τις συνθήκες συλλογής αίματος, κάθε αποτέλεσμα μπορεί να εκτιμηθεί από τις παραμέτρους του μοντέλου. Παλινδρομήσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση γενικευμένων εξισώσεις εκτίμησης μεθόδους (GEE) για να αποφευχθεί η μεροληψία στις εκτιμήσεις των τυπικών σφαλμάτων, διότι τα επίπεδα δείκτη μετρήθηκαν δύο φορές για 30 γυναίκες στη μελέτη.

P-τιμές για τις διαφορές μεταξύ των μερικώς συσχετίζονται καμπύλες ROC υπολογίστηκαν με το πακέτο λογισμικού ROCKIT [31] χρησιμοποιώντας τη διμεταβλητή δοκιμής. Όλες οι άλλες οι υπολογισμοί πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση της γλώσσας στατιστικών R προγραμματισμού [32].

Αποτελέσματα

επίπεδα Marker από κάθε ομάδα περιπτώσεων /ελέγχου συλλέγονται σε χειρουργική επέμβαση και κατά την προ-χειρουργική κλινική επίσκεψη φαίνονται στο Σχήμα 1 και συνοψίζονται στον πίνακα 1. η ανάλυση ROC έδειξε ότι CA 125 και MIF συγκεντρώσεις διάκριση μεταξύ υγιών ελέγχων και περιπτώσεις συλλέγονται είτε σε χειρουργική επέμβαση ή 1 έως 39 ημέρες πριν από την χειρουργική επέμβαση (σχήμα 2α, b? ρ & lt? 0,05 για κάθε δείκτη και κατάσταση) . Επιπλέον, οι τιμές AUC δεν ήταν σημαντικά διαφορετική μεταξύ των δύο προϋποθέσεις συλλογής (σχήμα 2α, β? P = 0,297 και 0,416 αντίστοιχα)

διακεκομμένες γραμμές συνδέουν χειρουργικές και προ-χειρουργική επίπεδα δείκτης μετράται μέσα στις ίδιες τις γυναίκες κάτω από τα δύο. χειρουργικές και μη χειρουργικές συνθήκες

Η

ελήφθησαν δείγματα υπόθεση είτε σε χειρουργική επέμβαση (χειρουργική σύγκριση? διακεκομμένη γραμμή) ή 1 έως 39 ημέρες πριν από την χειρουργική επέμβαση (προ-χειρουργική σύγκριση? συνεχής γραμμή). Η προ-χειρουργική σύγκριση δείχνει ότι τα επίπεδα της προλακτίνης δεν κάνουν διακρίσεις μεταξύ των γυναικών με και χωρίς καρκίνο στη ρύθμιση κλινική. * Υποδηλώνει AUC διαφορετικό από 0,5 σε άλφα = 0.05 επίπεδο σημαντικότητας (Mann Whitney U test)

Η

Τα επίπεδα προλακτίνης ήταν ιδιαίτερα αυξημένα στην περίπτωση δειγμάτων που συλλέχθηκαν σε χειρουργική επέμβαση (σχήμα 1γ) και τα επίπεδα προλακτίνης διακρίσεις μεταξύ περίπτωση δειγμάτων που συλλέγονται κατά τη χειρουργική επέμβαση και υγιείς μάρτυρες με υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα (Σχήμα 2C, διακεκομμένη γραμμή). Ωστόσο, αυτή η διαφορά εξαφανίστηκε όταν συγκρίναμε τα δείγματα συλλέχθηκαν περίπτωση 1 έως 39 ημέρες πριν από τη χειρουργική επέμβαση για να τους υγιείς μάρτυρες (εικόνα 2c, συνεχής γραμμή). Η AUC για διάκριση μεταξύ περιπτώσεων και ελέγχων ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε δείγματα που συλλέχθηκαν σε σύντομο χρονικό διάστημα πριν από την εγχείρηση απ ‘ότι για τα δείγματα που ελήφθησαν κατά τη χειρουργική επέμβαση (Σχήμα 2C, ρ

διαφορά στα AUC & lt? 0,0005). Επιπλέον, τα επίπεδα προλακτίνης ορού δεν κάνει διάκριση μεταξύ υγιών μαρτύρων και την υπόθεση δείγματα που συλλέγονται 1-39 ημέρες πριν από τη χειρουργική επέμβαση (σχήμα 2γ, συμπαγής γραμμή AUC = 0,497).

Εμείς χρησιμοποιούνται πολλαπλά μοντέλα γραμμικής παλινδρόμησης για να εξεταστεί κατά πόσον οι διαφορές στην επίπεδα δείκτη συσχετίστηκαν με την κατάσταση υπόθεση ή /και με τις συνθήκες της συλλογής δείγματος αίματος. Στα μοντέλα παλινδρόμησης, CA 125 και MIF συγκεντρώσεις δεν επηρεάστηκαν σημαντικά από τις συνθήκες της συλλογής αίματος (πίνακας 2, ρ = 0,60 και 0,71 αντίστοιχα) και ήταν αυξημένα στις περιπτώσεις σε σχέση με τους υγιείς ελέγχους (πίνακας 2, σελ & lt? 0,005 για κάθε δείκτη). επίπεδα προλακτίνης, ωστόσο, ήταν σημαντικά αυξημένα σε δείγματα ορού που συλλέγονται σε χειρουργική (πίνακας 2, σελ & lt? 0.005) και μετά την προσαρμογή για τις συνθήκες της συλλογής αίματος, προλακτίνη δεν ήταν αυξημένος σε περιπτώσεις σε σχέση με τους υγιείς μάρτυρες (πίνακας 2, p = 0.69). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι οι διαφορές που παρατηρούνται με προλακτίνης μπορεί να αποδοθεί εξ ολοκλήρου με τις συνθήκες συλλογής αίματος, χωρίς υπολειμματικό σήμα που σχετίζεται με κακοήθεια.

Η

Συζήτηση

Η προσέγγιση της χρησιμοποιώντας εμπορικά διαθέσιμες δοκιμασίες για να επικύρωση υποψήφιος βιοδείκτες είναι πολύ ελπιδοφόρα. Ωστόσο, τα αποτελέσματα μπορεί να είναι παραπλανητικά εάν οι συνθήκες της συλλογής δειγμάτων αίματος για τις περιπτώσεις και τους ελέγχους δεν είναι τυποποιημένα ή αλλιώς αντιπροσώπευαν. Δείχνουμε εδώ ότι τα επίπεδα προλακτίνης ορού επηρεάζεται έντονα από τις συνθήκες της συλλογής του αίματος και ότι η προλακτίνη δεν κάνει διακρίσεις μεταξύ καρκίνου και μη ασθενείς με καρκίνο σε δείγματα ορού που συλλέγονται ομοίως σε μια ρύθμιση κλινική. Σε αντίθεση, CA 125 και ΠΔΠ δεν επηρεάστηκαν από τις συνθήκες της συλλογής του αίματος? και οι δύο δείκτες διακρίσεις μεταξύ των περιπτώσεων και ελέγχων ανεξάρτητα από το αν τα δείγματα ορού συλλέχθηκαν σε χειρουργική επέμβαση ή σε σύντομο χρονικό διάστημα πριν από το χειρουργείο.

Αυτό το εύρημα είναι σύμφωνο με προηγούμενες αναφορές ότι τα επίπεδα της προλακτίνης ανυψώσει κατά τη χειρουργική επέμβαση και μετεγχειρητικά σε θηλυκούς ασθενείς που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση με αλοθάνιο (γενικά) αναισθησία [33]. Η προλακτίνη επίπεδα είναι αυξημένα σε αρουραίους που υποβάλλονται σε γενική αναισθησία με πεντοβαρβιτάλη, ανεξάρτητα από τη χειρουργική επέμβαση [34]. Στη μελέτη μας, δείγματα που συλλέχθηκαν από την ημέρα της χειρουργικής επέμβασης λήφθηκαν μετά από γενική αναισθησία χορηγήθηκε αλλά πριν γίνουν οποιεσδήποτε τομές. επίπεδα προλακτίνης στον ορό σε χειρουργική επέμβαση μπορεί να έχουν επηρεαστεί από την αναισθησία ή με άλλους όρους της χειρουργικής επέμβασης, όπως το στρες [20].

Σε πολλαπλά γραμμικά μοντέλα παλινδρόμησης, οι διαφορές στα επίπεδα CA125 και MIF συνδέθηκαν με το καθεστώς υπόθεση, αλλά όχι από οι όροι της διαπίστωσης του δείγματος. Για προλακτίνης, η αντίστροφη ήταν αλήθεια υποδηλώνοντας ότι τα επίπεδα προλακτίνης επηρεάζονται από τις συνθήκες της χειρουργικής επέμβασης και μπορεί να μην είναι ένας δείκτης του καρκίνου των ωοθηκών. Αυτά πολυπαραγοντική ανάλυση συμπληρώνεται η ROC ανάλυση από την προσαρμογή για τις συνθήκες της συλλογής του αίματος, επιτρέποντας έτσι την πιθανότητα ότι μια κακοήθεια σήματα δείκτη παρά το γεγονός ότι επηρεάζεται από τις συνθήκες της συλλογής αίματος. Προσαρμογή για τους όρους συλλογής στην ανάλυση είναι χρήσιμη γενικότερα, όταν τα δείγματα αίματος που συλλέγονται υπό τις ίδιες συνθήκες δεν είναι διαθέσιμες από κάθε συμμετέχοντα σε μια μελέτη.

Η χρήση πολλαπλών πηγών των δειγμάτων ελέγχου που συλλέγονται κάτω από διάφορες συνθήκες μπορεί να προειδοποιήσει τους ερευνητές να δυναμικό προκαταλήψεις. Έχουμε αποδείξει ότι επιτρέπει συνθήκες συλλογής να ποικίλουν σε περιπτώσεις και τους ελέγχους, αλλά χρησιμοποιώντας σωστή επισημειώσεις μπορεί να προειδοποιήσει τους ερευνητές σε πιθανά προβλήματα. Όποτε δεν είναι εφικτό να αποκτήσει πολλές συλλογές από τις περιπτώσεις (τόσο εντός όσο και εκτός της χειρουργικής επέμβασης) η χρήση των χειρουργικών ελέγχου μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως οθόνη για τις πιθανές επιπτώσεις της κατάστασης είσπραξης. Για παράδειγμα, μπορεί να φανεί στο σχήμα 1γ ότι τα επίπεδα της προλακτίνης είναι υψηλότερο στις ομάδες ελέγχου όπου τα δείγματα συλλέχθηκαν σε χειρουργική επέμβαση σε σχέση με υγιείς μάρτυρες, υποδεικνύοντας και πάλι ότι τα αυξημένα επίπεδα της προλακτίνης μπορεί να μην είναι ειδικά για κακοήθεια.

Η περιορισμένη διαθεσιμότητα των προ-κλινικά δείγματα από ασθενείς με καρκίνο των ωοθηκών παρουσιάζει μια σημαντική πρόκληση για τους ερευνητές προσπαθούν να ανακαλύψουν ή να επικυρώσει νέων βιολογικών δεικτών για την έγκαιρη διάγνωση. Η πλειοψηφία των δειγμάτων από ασθενείς με καρκίνο που είναι διαθέσιμα για την έρευνα δεν συλλέγονται από τις γυναίκες ή τους κλινικούς γιατρούς που είναι τυφλοί για επικείμενη διάγνωσή τους. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι οι προκαταλήψεις μεταξύ υπόθεση και τον έλεγχο του πληθυσμού μπορεί να οδηγήσει σε ψευδώς θετικά πειραματικά αποτελέσματα και ότι ο έλεγχος για τις συνθήκες της συλλογής του αίματος μπορεί να μειώσει ψευδείς ανακάλυψη και ψευδείς επικύρωσης σε πειράματα βιοδείκτη. Είναι σημαντικό για τον εντοπισμό, και όποτε είναι δυνατόν να διορθωθεί, προκαταλήψεις σε συνθήκες συλλογής αίματος όταν προσπαθούν να ανακαλύψουν και την επικύρωση νέων βιοδεικτών.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1.

Περίληψη δημογραφικά στοιχεία του ασθενούς με βάση την κατάσταση περίπτωση

doi: 10.1371 /journal.pone.0001281.s001

(0,03 MB DOC)

Πίνακας S2.

Περίληψη των καρκίνων των ωοθηκών από το στάδιο και ιστολογία

doi: 10.1371 /journal.pone.0001281.s002

(0,03 MB DOC)

Κείμενο S1.

Λεπτομερείς περιγραφές των διαδικασιών προσδιορισμού

doi: 10.1371 /journal.pone.0001281.s003

(0,03 MB DOC)