Abstract

Είναι καλά τεκμηριωμένο ότι η εντερική μικροχλωρίδα παίζει ένα ρόλο κλειδί στην παθογένεση της νόσου του Crohn (CD) και η ελκώδης κολίτιδα (UC) συλλογικά αναφέρονται ως φλεγμονώδης νόσος του εντέρου (IBD). Επιδημιολογικές μελέτες έχουν ισχυρές ενδείξεις ότι οι ασθενείς IBD φέρουν αυξημένο κίνδυνο για την ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου (CRC). Ωστόσο, ο αντίκτυπος της μικροχλωρίδας στην ανάπτυξη της κολίτιδας που σχετίζεται με τον καρκίνο (CAC) παραμένει σε μεγάλο βαθμό άγνωστη. Σε αυτή τη μελέτη, ιδρύσαμε ένα νέο μοντέλο CAC χρησιμοποιώντας αζοξυμεθάνιο (ΑΟΜ) τα εκτιθέμενα, conventionalized-

IL10

– /-

ποντίκια και έχουν διερευνηθεί η συμβολή της μικροχλωρίδας του εντέρου υποδοχής και MyD88 σηματοδότησης για το ανάπτυξη CAC. Δείχνουμε ότι 8/13 (62%) του AOM-

IL10

– /- ποντίκια

ανέπτυξαν όγκους του παχέος εντέρου σε σύγκριση με μόνο 3/15 (20%) του AOM- άγριου τύπου (WT) ποντίκια . Συμβατική για AOM-

IL10

– /- ποντίκια ανέπτυξαν

αυθόρμητη κολίτιδα και του παχέος καρκινώματα, ενώ ΑΟΜ-WT ποντίκια ήταν κολίτιδα ελεύθερα και να αναπτυχθεί μόνο σπάνια αδενώματα. Σημαντικά, πολλαπλότητα όγκου συσχετίζονται απευθείας με την παρουσία της κολίτιδας.

IL10

– /- ποντίκια

μονο-που συνδέονται με την ήπια colitogenic βακτήριο

Bacteroides vulgatus

που αναγράφεται μειωθεί σημαντικά κολίτιδα και του παχέος πολλαπλότητα του όγκου σε σύγκριση με το

IL10

– /-

ποντίκια. Χωρίς μικρόβια ΑΟΜ που έλαβαν

IL10

– /-

ποντίκια έδειξαν φυσιολογική ιστολογία του παχέος εντέρου και στερούνται των όγκων.

IL10

– /-

?

Myd88

– /-

ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ΑΟΜ που αναγράφεται μειωμένη έκφραση του

IL12p40

και

TNFα

mRNA και δεν έδειξε σημάδια της ανάπτυξης του όγκου. Σας παρουσιάζουμε την πρώτη άμεση απόδειξη ότι η χειραγώγηση της εντερικής μικροχλωρίδας μεταβάλλει την εξέλιξη της CAC. Το μονοπάτι TLR /MyD88 είναι απαραίτητη για τη μικροχλωρίδα που προκαλείται από την ανάπτυξη της CAC. Σε αντίθεση με τα ευρήματα που λαμβάνονται χρησιμοποιώντας το μοντέλο ΑΟΜ /DSS, έχουμε αποδείξει ότι η σοβαρότητα της χρόνιας κολίτιδας συσχετίζεται άμεσα με ορθοκολικό ανάπτυξη όγκων και που οδηγεί βακτηριακή φλεγμονή που προκαλείται από την εξέλιξη από αδένωμα σε διηθητικό καρκίνωμα

Παράθεση:. Uronis JM, Mühlbauer Μ, Herfarth HH, Rubinas TC, Jones GS, Jobin C (2009) Διαμόρφωση της εντερικής μικροχλωρίδας Alters Κολίτιδα-Associated καρκίνο του παχέος εντέρου Ευαισθησία. PLoS ONE 4 (6): e6026. doi: 10.1371 /journal.pone.0006026

Συντάκτης: Stefan Bereswill, Charité-Universitätsmedizin Βερολίνο, Γερμανία

Ελήφθη: May 19, 2009? Αποδεκτές: 30 Μάη 2009? Δημοσιεύθηκε: 24 Ιούνη του 2009

Copyright: © 2009 Uronis et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από τα Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας (NIH): ROI DK 47700 και RO1 DK 73338 (Γ Jobin) και Γαστρεντερολογίας Έρευνας Εκπαίδευσης χορηγούν ΝΙΗ 5 Τ32 DK007737 (J. Uronis) και από ΝΙΗ Ρ30 DK034987 (Κέντρο γαστρεντερικού Βιολογία και Ασθένεια). Αξενικά και χωρίς μικρόβια εργασία υποστηρίχθηκε από ΝΙΗ Grant: P40RR018603. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Η ικανότητα να εξαπολύσουν μια φλεγμονώδη απόκριση μετά από τραυματισμό ή έκθεση σε ξένους οργανισμούς είναι ζωτικής σημασίας για την ομοιόσταση υποδοχής και την επιβίωση. Ωστόσο, ένα επίμονα αυξημένη ανοσολογική απόκριση, όπως αυτή που παρατηρείται σε χρόνιες φλεγμονώδεις διαταραχές εξασθενίζει σοβαρά η λειτουργία των οργάνων υποδοχής, με τελικό αποτέλεσμα τη νόσο. [1] Ένα σημαντικό κίνδυνο που σχετίζεται με χρόνια φλεγμονή είναι αυξημένη πιθανότητα ανάπτυξης καρκίνου του [2] – [4]. Η νόσος του Crohn (CD) και η ελκώδης κολίτιδα (UC) ονομάζεται συλλογικά φλεγμονώδη νόσο του εντέρου (IBD) είναι η πεμπτουσία παράδειγμα στο οποίο η χρόνια φλεγμονή μεταφράζεται σε αυξημένο κίνδυνο καρκίνου του [2]. Η αθροιστική συχνότητα του καρκίνου του παχέος εντέρου σε ασθενείς IBD κυμαίνεται από 7,6% έως 18,4%, 30 χρόνια μετά τη διάγνωση [5] – [8]. Επιπλέον, επιδημιολογικά δεδομένα δείχνουν ότι η διάρκεια και η σοβαρότητα της χρόνιας κολίτιδας αποτελούν σημαντικούς παράγοντες κινδύνου για την κολίτιδα που σχετίζεται με τον καρκίνο του παχέος εντέρου (CAC) [9] – [11]. Αν και η αιτιολογία της IBD παραμένει να διευκρινιστεί, βάσει μοντέλου μελέτες σε ζώα δείχνουν ότι η μικροχλωρίδα εντερική ξενιστή προκαλεί μια ανοσολογική απόκριση που είναι προϋπόθεση για την έναρξη της νόσου [12] – [15]. Αυτή η ανεξέλεγκτη ανοσολογική απόκριση πιθανόν αντιπροσωπεύει ένα ελάττωμα σε ένα ή περισσότερα ανοσοκατασταλτικά μηχανισμούς προορίζεται να παρέχει ανοχή στο microbiota εντερική ξενιστή, με αποτέλεσμα την υπερ-παραγωγή των προ-φλεγμονωδών μεσολαβητών [12], [16]

Η έννοια μιας ισορροπημένης ανοσοκατασταλτικής απόκρισης στόχο τη ρύθμιση της μικροχλωρίδας μπορεί να απεικονίζεται καλύτερα στην ιντερλευκίνη-10 knock-out (

IL10

– /-

) ποντίκια. Αυτά τα ποντίκια, τα οποία εμφανίζουν δυσανεξία σε εντερική μικροχλωρίδα τους αναπτύσσουν αυθόρμητη κολίτιδα, ως αποτέλεσμα της μικροβιακής επαγόμενη ενεργοποίηση των Τ κυττάρων τελεστών [17] – [19].

όσο 36.000 βακτηριακά είδη του ανθρώπινου λιμάνι κόλον του ύψους σε πάνω από 100 τρισεκατομμύρια αερόβια και αναερόβια βακτήρια [20], [21]. Ως προϊόν της συν-εξέλιξης με βακτήρια, ένα σύστημα επικοινωνίας έχει αναπτυχθεί που μας επιτρέπουν να ρυθμίζουν η μία την άλλη, διατηρώντας έτσι εντερική ομοιοστασία [21]. Αναπόσπαστο ρόλο στην cross-talk που εμφανίζεται μεταξύ του ανθρώπινου εντέρου και κάτοικος μικροχλωρίδα του γίνεται από την έμφυτη βακτηριακή αισθητήρες γνωστή ως υποδοχείς αναγνώρισης προτύπων (PRRs) [21]. Δύο κύριες κατηγορίες PRRs αποδειχθεί ότι ρυθμίζει την επικοινωνία μεταξύ του εντερικού επιθηλίου και της μικροχλωρίδας. ΤοΙΙ υποδοχέων (TLRs) και Nod-σαν υποδοχείς (ΕΜΑΜ) χρησιμεύουν για να ειδοποιήσει τον ξενιστή με την παρουσία βακτηρίων στο εξωκυτταρικό και ενδοκυτταρικό χώρους αντίστοιχα [22], [23]. Χρησιμοποιώντας το αζοξυμεθάνιο (ΑΟΜ) /DSS μοντέλο του CAC, Fukata και συνεργάτες έδειξαν ότι TLR4 συμμετέχει στην ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου [24]. Αν και ενδιαφέρουσα, αυτή η μελέτη δεν έχει ασχοληθεί άμεσα τον αντίκτυπο της μικροχλωρίδας στην ανάπτυξη CAC. Επιπλέον, ο /DSS μοντέλο ΑΟΜ του CAC φαίνεται να εμφανίζει μια διάσταση μεταξύ της σοβαρότητας της εντερικής φλεγμονής και την ανάπτυξη του καρκίνου. Σαφώς, απαιτείται επιπλέον έρευνα για την επίδραση των βακτηρίων στην ανάπτυξη της CAC.

Σε αυτή τη μελέτη, χρησιμοποιήσαμε χωρίς μικρόβια και αξενικά τεχνολογία για να διαμορφώσουν το περιεχόμενο της εντερικής μικροχλωρίδας να καθοριστεί η άμεση επίδραση των βακτηρίων σε η ανάπτυξη της CAC. Έχουμε αποδείξει ότι η ΑΟΜ που έλαβαν

IL10

– /-

ποντίκια αναπτύσσουν CAC παρουσία colitogenic βακτηρίων, ενώ χωρίς μικρόβια ποντίκια παραμένουν ελεύθερη νόσου. Η παρουσία της κολίτιδας συσχετίζεται άμεσα με τον αριθμό των όγκων και δρα ως υποκινητής του καρκίνου του παχέος εντέρου. Επιπλέον, ΑΟΜ που έλαβαν

IL10

– /-

?

Myd88

– /-

ποντίκια απέτυχαν να αναπτύξουν όγκους παχέος εντέρου, υποδεικνύοντας ότι η βακτηριακή σηματοδότηση μέσω του συστήματος /MyD88 TLR απαιτείται για την ανάπτυξη των CAC

Αποτελέσματα

. βακτηριακές μεσολάβηση κολίτιδα ενισχύει παχέος ογκογένεση

Για να διερευνήσουν το ρόλο της κολίτιδας βακτηριακής μεσολάβηση στην έναρξη του παχέος καρκινογένεσης, συμβατική για WT και

IL10

– /-

ποντίκια χορηγήθηκε ένα σχήμα του ΑΟΜ και να παρακολουθείται

in vivo

για ενδείξεις κολίτιδας και του όγκου ανάπτυξης από την κολονοσκόπηση σε καθορισμένα διαστήματα (Εικ. 1). Μετά από 16 εβδομάδες, WT ποντικοί έδειξαν καμία ένδειξη μακροσκοπικών φλεγμονή και την εμφάνιση μιας ημιδιαφανή βλεννογόνο με καλά καθορισμένες αγγείωση που σχετίζεται με ένα υγιεινό κόλον (Σχ. 2Α, αριστερό πλαίσιο). Σε αντίθεση,

IL10

– /- ποντίκια παρουσίασαν

βλεννογόνου πάχυνση και την απώλεια της φαινομενικής αγγείων που σχετίζονται με μακροσκοπικές εντερική φλεγμονή (Σχήμα 2Α, μεσαίο πάνελ.). Μακροσκοπικές αλλοιώσεις συμβατές με παρατηρήθηκαν όγκοι σε συμβατική για

IL10

– /- ποντίκια

την εβδομάδα 16 (Σχήμα 2Α, δεξί πάνελ.). Να μελετήσει περαιτέρω αυτές τις βλάβες, ιστολογική ανάλυση του παχέος ιστούς διεξήχθη σε WT και

IL10

– /-

ποντίκια. Επιβεβαιώσαμε ότι οι μακροσκοπικές βλάβες που παρατηρήθηκαν σε

IL10

– /-

ποντίκια ήταν όγκους που αναπτύσσονται στην φλεγμονή του παχέος εντέρου. Όπως φαίνεται στο Σχ. 2Β, ΑΟΜ που έλαβαν

IL10

– /-

ποντίκια έδειξαν μια δραματική αύξηση στη διεισδυτικότητα του όγκου και την πολλαπλότητα σε σύγκριση με ποντίκια WT. Στη μελέτη μας, 8/13 (62%) του

IL10

– /-

ποντίκια ανέπτυξαν όγκους του παχέος εντέρου σε σύγκριση με μόλις 3/15 (20%) των ποντικών WT. Επιπλέον, πολλαπλότητα όγκου ήταν 5 φορές υψηλότερη σε

IL10

– /- ποντίκια

με μέσο όρο 1- σύγκριση με μόνο 0,2 όγκων σε ποντικούς WT (σχήμα 2Β.) (P = 0.034). Αξίζει να σημειωθεί ότι, η ανάπτυξη του όγκου σε

IL10

– /-

ποντίκια συσχετίστηκε με αυξημένη εντερική φλεγμονή όπως καθορίζεται από ιστολογική ανάλυση (Σχήμα 2C.) (P & lt? 0,0001). Παχέος έκφραση

IL12p40

και

TNFα

mRNA ήταν σημαντικά αυξημένα σε

IL10

– /-

-. Σε σύγκριση με ποντίκια WT (Εικ. 2C)

Germ δωρεάν ποντίκια μεταφέρθηκαν σε συνθήκες SPF και αφήνονται να εγκλιματιστούν για 5 εβδομάδες. Τα ποντίκια δόθηκαν ενέσεις ΑΟΜ μία φορά την εβδομάδα για 6 εβδομάδες (μαύρα βέλη). Ανάπτυξη σχηματισμού κολίτιδας και του όγκου παρακολουθήθηκε από την κολονοσκόπηση από εβδομάδες 4 έως 18 μετά τη μεταφορά από μικρόβια σε συνθήκες SPF (λευκά βέλη). Τα ποντίκια θυσιάστηκαν μεταξύ 18 και 20 εβδομάδων και οι ιστοί υποβάλλονται σε επεξεργασία για ιστολογική και mRNA ανάλυση της έκφρασης.

Η

Α. Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα WT (αριστερό πάνελ) και

IL10

– /-

άνω και κάτω τελείες (μεσαία και δεξιά πάνελ) από ΑΟΜ-ποντίκια με αγωγή 16 εβδομάδες μετά την μεταφορά σε συνθήκες SPF. Β διεισδυτικότητα του όγκου και της πολλαπλότητας στο WT και

IL10

– /- ποντίκια

(αριστερά και δεξιά πάνελ) (p = 0,034). Γ WT και

IL10

– /-

βαθμολογίες φλεγμονή του παχέος εντέρου, του παχέος εντέρου άπω

IL12p40

και

TNFα

επίπεδα mRNA μετά από 18-20 εβδομάδες υπό συνθήκες SPF (p = 0,026).

η

Για να διερευνηθεί περαιτέρω η σχέση μεταξύ των βακτηρίων που προκαλείται από κολίτιδα και την ανάπτυξη των όγκων, πραγματοποιήσαμε ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης, συγκρίνοντας ιστολογική βαθμολογία φλεγμονής κατά σειρά όγκου. ανάλυση συσχέτισης Pearson έδειξε μια ισχυρή θετική συσχέτιση μεταξύ της φλεγμονής και ανάπτυξης όγκου κόλου (p = 0,0028). Αυτά τα στοιχεία υποδηλώνουν ότι η χρόνια κολίτιδα ενισχύει την εξέλιξη των πρώιμων γεγονότων μετασχηματισμού ξεκίνησε από ΑΟΜ, ίσως μέσω της δημιουργίας ενός μικροπεριβάλλον περισσότερο υποστηρικτική του κυτταρικού πολλαπλασιασμού.

Χρόνια κολίτιδα ενισχύει ΑΟΜ προκαλείται από ορθοκολικό την εξέλιξη του όγκου

Θεωρώντας η δραματική αύξηση της ευαισθησίας στην ανάπτυξη των όγκων του παχέος εντέρου, υποθέσαμε ότι τα ποντίκια με χρόνια κολίτιδα μπορεί επίσης να αποδείξει αυξημένη ευαισθησία σε προχωρημένο την εξέλιξη του όγκου. Η ιστολογική αξιολόγηση πραγματοποιήθηκε και οι όγκοι είχαν ταξινομηθεί ως είτε ως χαμηλής ή υψηλής βαθμού δυσπλασία ή ως επιθετικό καρκίνωμα. Επτά από τις οκτώ (88%) του εδράνου του όγκου ΑΟΜ /

IL10

– /-

ποντίκια ανέπτυξαν υψηλού βαθμού ή διηθητικό καρκίνωμα, ενώ κανένας από τους 3 όγκων παρατηρήθηκε σε ποντικούς WT παρουσίασαν στοιχεία των προηγμένων ιστολογικών σταδίου ( Σχ. 3Α). Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα ιστολογίας όγκου κόλου παρατηρήθηκε σε ΑΟΜ που έλαβαν WT και

IL10

– /-

τα ποντίκια φαίνεται στο σχήμα 3Β. Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η χρόνια κολίτιδα προδιαθέτει όχι μόνο σε αυξημένη ευαισθησία σε ΑΟΜ-επαγόμενη ανάπτυξη ορθοκολικού όγκου αλλά επίσης αυξάνει τους όγκους ογκογόνο δυναμικό, προωθώντας έτσι την εξέλιξη σε πιο προχωρημένα στάδια.

A. Τοις εκατό των όγκων που φέρουν WT και

IL10

– /-

ποντίκια με υψηλής ποιότητας ή διηθητικό καρκίνωμα (άνω πάνελ). Εκπρόσωπος αδένωμα χαμηλού βαθμού παρατηρήθηκε σε ποντικούς WT (μεσαίο πάνελ). Εκπρόσωπος διηθητικό καρκίνωμα που παρατηρείται σε

IL10

– /-.

Ποντίκια (κάτω πίνακας)

Η

ΝΡκΒ δραστικότητας και τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό σε όγκους από

IL10

– /-

ποντίκια

σηματοδότηση ΝΡκΒ διαδραματίζει έναν κρίσιμο ρόλο στην προώθηση κολίτιδα βακτηριακή προκαλείται από το

IL10

– /- ποντίκια

[25], [26]. Για να επαληθεύσετε την παρουσία ενεργοποιημένων Rel Α (ΝΡκΒ) -signaling στην ΑΟΜ /

IL10

– /-

μοντέλο του CAC, αξιολογήσαμε την έκφραση /εντοπισμός των φωσφορυλιωμένη ΚεΙΑ (S276) στο

IL10

– ιστούς

κόλον με ανοσοϊστοχημεία (IHC) – /. Παχύ έντερο από

IL10

– /-

ποντίκια έδειξαν άφθονη φωσφορυλιωμένη ΚεΙΑ θετικά διηθητικά κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος (Σχήμα 4Α.). Περαιτέρω, η παρουσία πολυάριθμων φωσφορυλιωμένου ΚεΙΑ θετική ανοσο και εντερικά επιθηλιακά κύτταρα παρατηρήθηκαν στα αδενώματα από

IL10

– /-.

Ποντικούς (Εικ. 4Β)

A. Φωσφορυλιωμένη-συνδεδεμένη Μια ανοσοχρώση της κανονικής

IL10

– /-

του παχέος εντέρου ιστού. B. Διεύρυνση της Σχετ Μια θετική ανοσοποιητικό διήθηση σε Α Γ φωσφορυλιωμένη Σχετ Μια ανοσοχρώση στο

IL10

– /-

αδένωμα. Δ Η διεύρυνση της αδενώματος σε Rabbit CE IgG αρνητικού ελέγχου.

Η

Λόγω του ρόλου της στην προώθηση κυτταρικό πολλαπλασιασμό και την επιβίωση, αξιολογήσαμε την κατανομή των Κί67 θετικών κυττάρων στο ενεργό φλεγμονή και νεοπλασματικών περιοχές του άνω και κάτω τελεία που απομονώθηκαν από ΑΟΜ /

IL10

– /-

ποντίκια. χρώση Πυρηνική Κί67 ήταν ως επί το πλείστον περιορίζεται στις βάσεις κρύπτη σε WT ποντικούς (Σχ. 5Α). Σε αντίθεση, το βλεννογόνο του κόλου από φλεγμονή

IL10

– /- ποντικοί έδειξαν

περιοχές αυξημένης πολλαπλασιασμού που εκτείνονται σε μερικές περιπτώσεις η πλήρους μήκους κρύπτη (Σχήμα 5Α).. Επιπλέον, αδενώματα του παχέος εντέρου που συλλέγονται από

IL10

– /-

ποντίκια έδειξαν με συνέπεια αυξημένη χρώση Ki67 σε σύγκριση με το φυσιολογικό βλεννογόνο (Σχήμα 5Β.). Αυτή η βελτιωμένη διάδοση είναι συνεπής με αυξημένη συσσώρευση των πυρηνικών CTNNB1 σε αδενωματώδεις ιστούς από

Il-10

– /-

ποντίκια (Εικ. 5C). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι η αυξημένη φλεγμονώδη και πολλαπλασιαστική κατάσταση που παρατηρείται στο πλαίσιο της

IL10

– /-

κόλον ποντικού συζευγμένο με ΑΟΜ-επαγόμενη ενεργοποίηση των αποτελεσμάτων οδού WNT /CTNNB1 σε μια αυξημένη τάση για τον ορθοκολικό σχηματισμό και την εξέλιξη του όγκου.

Α. Τα Ki67 θετικά κύτταρα περιορίζονται σε βάσεις κρύπτη στην κανονική του παχέος εντέρου WT. Κανονική παχύ έντερο από

IL10

– /-

ποντίκια εμφανίζουν επίμηκες κρύπτες με ενισχυμένη θετική χρώση Κί67. Β Εκπρόσωπος αδένωμα από

IL10

– /-

ποντίκι δείχνει αυξημένη Ki67 θετική χρώση (αριστερό πάνελ). Κουνέλι IgG αρνητικού ελέγχου (δεξί πάνελ). Γ

IL10

– /-

αδένωμα παρουσιάζει θετική χρώση CTNNB1

Η

Germ δωρεάν

IL10

-. /-

Ποντίκια μονο-που συνδέονται με

Bacteroides vulgatus

οθόνη μειωμένη κολίτιδα και του όγκου του παχέος εντέρου ανάπτυξης σε σύγκριση με το

IL10

– /- ποντίκια

SPF

για να οριοθετηθούν περαιτέρω ο ρόλος των βακτηρίων στην προώθηση της ανάπτυξης της CAC, έχουμε μονο-συνδέονται χωρίς μικρόβια WT και

IL10

– /-

ποντίκια με

Bacteroides vulgatus

(.

Β vulgatus

), ένα εντερικό βακτήριο, το οποίο έχει αναφερθεί προηγουμένως να προκαλούν μόνο ήπια κολίτιδα στο

IL10

– /-

μοντέλο IBD [18]. Η ιστολογική αξιολόγηση έδειξε ότι

IL10

– /- ποντίκια

αποίκισαν με

Β. vulgatus

ανέπτυξε μέτρια κολίτιδα (μέσος όρος = 1,6) σε σύγκριση με ποντίκια WT (μέσος όρος = 0,36) (Σχ. 6Α). Οι τιμές αυτές όμως ήταν σημαντικά μικρότερη από φλεγμονώδεις βαθμολογίες που παρατηρήθηκαν σε συμβατική για

IL10

– /- ποντίκια

(μέσος όρος = 2.6, p = 0,03) (Σχήμα 6Α.). Σύμφωνη με την κατάσταση φλεγμονής, μονο-σχετίζεται

IL10

– /- ποντίκια

εμφανίζεται σημαντικά μικρότερο πολλαπλότητα όγκου σε σύγκριση με συμβατική για τους ομολόγους τους (0,4 και 2,3 αντίστοιχα, p = 0,002) (Σχήμα 6Β). Pearson ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδειξε μία ισχυρή θετική συσχέτιση μεταξύ της ιστολογικής βαθμολογίας κολίτιδα και του παχέος αριθμός των όγκων μεταξύ των

Β. vulgatus

μονο-σχετίζεται ποντικούς (ρ = 0,009). Επιπλέον, ΑΟΜ-αντιμετωπίζονται χωρίς μικρόβια

IL10

– /- ποντίκια

απέτυχε να αναπτύξει κολίτιδα και, κατά συνέπεια, του παχέος όγκους όπως επιβεβαιώθηκε από ιστολογική αξιολόγηση (Σχήμα 6Α & amp?. Β). Τα ευρήματα αυτά δείχνουν ότι η παρουσία των βακτηρίων colitogenic είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη των CAC.

Α. Σύγκριση των βαθμολογιών φλεγμονής για

IL10

– /- ποντίκια

κάτω SPF,

Β. μονο-συνδέονται και φύτρα vulgatus Κατεβάστε το δωρεάν συνθήκες. Β πολλαπλότητα του όγκου στο

IL10

– /- ποντίκια

κάτω SPF,

Β. vulgatus Κατεβάστε το δωρεάν μονο-συνδέονται και φύτρα συνθήκες.

Η

σηματοδότηση MyD88 απαιτείται για βακτηριακή προκαλείται από CAC

Για να εξεταστεί ο ρόλος των TLR /MyD88 σηματοδότησης μονοπατιού στην ανάπτυξη CAC,

IL10

– /-

?

Myd88

– /- ποντίκια

χορηγήθηκαν ΑΟΜ και το σχηματισμό ορθοκολικού όγκου αξιολογήθηκε. Η κολονοσκόπηση έδειξε την παρουσία νεοπλασματικών βλαβών στο

IL10

– /- ποντίκια

ενώ

IL10

– /-

?

Myd88

– /-

ποντικοί δεν εμφάνισαν καθόλου συμπτώματα νόσου (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα). Αντιπροσωπευτικά παραδείγματα ιστολογία ιστού του παχέος εντέρου για

IL10

– /-

και

IL10

– /-

?

Myd88

– /-

τα ποντίκια φαίνεται στο σχήμα 7Α.

IL10

– /-

ποντίκια ανέπτυξαν κατά μέσο όρο 0,8 όγκους παχέος εντέρου /ποντίκι ενώ

IL10

– /-

?

Myd88

– /-

ποντίκια ήταν απαλλαγμένα από νεοπλασματικές αλλοιώσεις (Σχήμα 7Β)

Α.. Εκπρόσωπος ιστολογία που παρατηρείται σε

IL10

– /-

και

IL10

– /-

?

Myd88

– /-

ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ΑΟΜ. Β όγκων πολλαπλότητα στο

IL10

– /-

και

IL10

– /-

?

Myd88

– /-

ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ΑΟΜ. Γ Σχετική έκφραση

IL12p40

και

TNFα

mRNA στα άπω παχύ έντερο του

IL10

– /-

και

IL10

– /-

?

Myd88

– /- ποντίκια

Η

Για να διερευνήσουν τη δυνατότητα που καταργήθηκε το σχηματισμό όγκων σε

IL10

– /-

.?

Myd88

– /- ποντίκια

είναι το αποτέλεσμα αλλαγμένη φλεγμονώδους κυτοκίνης έκφρασης, χρησιμοποιήσαμε ημι-ποσοτική PCR για τον προσδιορισμό των σχετικών επιπέδων έκφρασης του mRNA των προφλεγμονωδών κυτοκινών

TNF

α και

IL12p40

στο άπω κόλον, η κυρίαρχη θέση του σχηματισμού όγκου. Παρατηρήσαμε σημαντικά χαμηλότερη

IL12p40

έκφραση mRNA (p = 0,032), καθώς και μια αξιοσημείωτη τάση προς μειωμένη

ΤΝΡα

έκφραση (p = 0,089) σε

IL10

– /- ? Myd88

– /-

σε σύγκριση με το

IL10

– /-

ποντίκια (Σχήμα 7C). Συνολικά, τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι η φλεγμονή που προκαλείται από βακτηριακή προωθεί την ανάπτυξη της κολίτιδας που σχετίζεται με τον καρκίνο του παχέος εντέρου και εξαρτάται από TLR σηματοδότηση /MyD88 οδού.

Συζήτηση

Παρά το γεγονός ότι UC αντιπροσωπεύει την πρωτότυπη παράδειγμα η σύνδεσμο που υπάρχει μεταξύ χρόνιας φλεγμονής και τον κίνδυνο ανάπτυξης καρκίνου του παχέος εντέρου, οι μηχανισμοί που διέπουν τη διαδικασία αυτή μένει να διευκρινιστεί. Αυτό είναι πιθανό να οφείλεται σε περιορισμούς που τίθενται από τις υπάρχουσες πειραματικά μοντέλα, τα οποία καθιστούν δύσκολη την ανακεφαλαίωση των αποτελεσμάτων της χρόνιας φλεγμονής σε ορθοκολικό ογκογένεση. Σε αυτή τη μελέτη, δείξαμε ότι colitogenic βακτήρια είναι απαραίτητα για την ανάπτυξη της χρόνιας εντερικής φλεγμονής που οδηγεί σε ογκογένεση. Χρησιμοποιώντας ΑΟΜ ως εκκινητή όγκου και μικροβιοτικών να προκαλέσει χρόνια κολίτιδα σε γενετικά επιρρεπείς

IL10

– /- ποντίκια

, δείχνουμε ότι η φλεγμονή συσχετίζεται άμεσα με ορθοκολικό πολλαπλότητα του όγκου και ενισχύει την εξέλιξη του όγκου. Αυτά τα γεγονότα δεν παρατηρήθηκαν σε

IL10

– /- ποντίκια

στεγάζονται υπό συνθήκες χωρίς μικρόβια και έντονα εξασθενημένα σε ποντίκια που σχετίζονται με

Β. vulgatus

, ένας ασθενής επαγωγέας του εντερική φλεγμονή. Επιπλέον, η διατάραξη της σηματοδότησης MyD88, ένα κλειδί ολοκληρωτής πολλαπλών TLRs εμπόδισε την ανάπτυξη των όγκων παχέος εντέρου σε

IL10

– /- ποντίκια

. Τα ευρήματα αυτά καθορίσει σε μεγάλο βαθμό τη μικροχλωρίδα ως κλειδί στην ενεργοποίηση εντερική φλεγμονή και νεοπλασματικές αλλοιώσεις σε ένα ευαίσθητο ξενιστή. Ο ρόλος των TLR σηματοδότηση στην ανάπτυξη του καρκίνου του παχέος εντέρου έχει αποτελέσει αντικείμενο της πρόσφατης έντονης έρευνας. Rakoff-Nahoum και συνεργάτες έδειξαν ότι MyD88 σηματοδότησης συμβάλλει στην εξέλιξη του όγκου στο

Αρο

Min

μοντέλο της ανθρώπινης οικογενή αδενωματώδη πολυποδίαση, υποδηλώνοντας ένα ρόλο για εντερική μικροοργανισμούς στη διαδικασία tumorigensis [27]. Ωστόσο, επειδή κυτοκίνες όπως IL1 και IL18 χρησιμοποιούν επίσης MyD88 να ενεργοποιεί καθοδικά γονίδια-στόχους [28], η εμπλοκή του εντερικού μικροχλωρίδας σε αυτό το μοντέλο είναι ασαφής. Επιπλέον, η συμμετοχή της σηματοδότησης MyD88 στην ανάπτυξη της CAC δεν εξετάστηκε σε αυτή τη μελέτη. Μια καλύτερη εικόνα του ρόλου των TLR σηματοδότηση στο CAC έχει αρχίσει να αναδύεται από μελέτες που χρησιμοποιούν το μοντέλο /DSS ΑΟΜ. Για παράδειγμα, Fukata και συνεργάτες απέδειξαν ότι ορθοκολικού ογκογένεση μειώνεται έντονα

ΤΙγ4

– /- ποντίκια

, υποδηλώνοντας ότι αυτή η έμφυτη υποδοχέα είναι σημαντική για την ανάπτυξη της CAC [24]. Ωστόσο, αυτή η ισχυρή μείωση των νεοπλασία δεν συνοδεύτηκε από μια συνακόλουθη μείωση της φλεγμονής. Κατά συνέπεια, υπάρχει μια προφανής αναντιστοιχία ανάμεσα εντερική φλεγμονή και την καρκινογένεση στο μοντέλο /DSS ΑΟΜ. Το φαινόμενο αυτό δεν είναι ειδικά για TLR σηματοδότηση δεδομένου ότι μια πρόσφατη έκθεση έδειξε ότι η ογκογένεση είναι δραματικά μειωμένη σε

IL6

– /-

και

Stat3

– /- ποντίκια

, παρά τη σημαντικά υψηλότερη φλεγμονώδη αποτελέσματα σε αυτά τα ποντίκια [29]. Αντίθετα, με τη χρήση του /

IL10

ΑΟΜ – /-

μοντέλο, παρατηρήσαμε μια ισχυρή συσχέτιση μεταξύ βαθμολογίας φλεγμονή και τον πολλαπλασιασμό των όγκων. Αυτό υποδηλώνει ότι η σοβαρή φλεγμονή υποστηρίζει περισσότερα εύστοχα την επιβίωση των πρώιμων γεγονότων μετασχηματισμού. Επιπλέον τα δεδομένα μας δείχνουν ότι η παρουσία της φλεγμονής, ανεξάρτητα από τη σοβαρότητα επηρεάζει την εξέλιξη του όγκου. Είναι πιθανό ότι η μικροπεριβάλλον του όγκου που υπάρχουν στο μοντέλο /DSS ΑΟΜ διαφέρει από εκείνη στην ΑΟΜ /

IL10

– /-

μοντέλο, το οποίο θα μπορούσε να εξηγήσει μειώθηκε ογκογένεση, παρά την υψηλή φλεγμονώδη κατάσταση στην πρώην μοντέλο.

Πρόσφατες εκθέσεις έχουν δώσει εικόνα για το ρόλο της κολίτιδας ως υποκινητή του παχέος ογκογένεση στο μοντέλο /DSS ΑΟΜ [24], [29]. Ωστόσο, ένα σημαντικό ερώτημα που παραμένει αναπάντητο είναι εάν αυτές οι επιδράσεις προαγωγής όγκων που προκαλείται από την αντίδραση επούλωσης τραυμάτων εγγενώς που προκαλείται από τη θεραπεία DSS ή από τη φλεγμονή που το συνοδεύει. Για παράδειγμα, Grivennikov και οι συνεργάτες του δείχνουν ότι

IL6

– /-

ποντίκια εμφανίζουν μειωμένη πολλαπλότητα του όγκου και του φορτίου σε σύγκριση με τα ποντίκια WT μετά ΑΟΜ επεξεργασία /DSS ακόμα αυτά τα ποντίκια που εμφανίζεται πιο σοβαρή φλεγμονή του εντέρου από τα ποντίκια WT . Κατά συνέπεια, μειωμένη ογκογένεση σε αυτό το μοντέλο είναι το αποτέλεσμα της εξασθενημένη IL6 /STAT3 σηματοδότηση στα εντερικά επιθηλιακά κύτταρα (IEC) και όχι απαραίτητα από εντερική φλεγμονή. Έχουμε αποδείξει εδώ ότι η ΑΟΜ /

IL10

– /-

μοντέλο της CAC μπορεί να χρησιμοποιηθεί για να ερευνήσει συγκεκριμένα, ο αντίκτυπος της κολίτιδας σε παχέος ογκογένεση. Είτε σηματοδότησης IL-6 /STAT3 είναι σημαντική για την ανάπτυξη της CAC στην ΑΟΜ /

IL10

– /- ποντίκια

μένει να διερευνηθεί. Επιπλέον, δείχνουμε ότι CAC συμβαίνει στο πλαίσιο της ενεργοποιημένης μονοπάτι σηματοδότησης ΝΡκΒ, όπως φαίνεται από την παρουσία του ΝΡκΒ θετικών κυττάρων του ανοσοποιητικού συστήματος που υποδηλώνει ότι αυτή η φλεγμονώδης οδό σηματοδότησης είναι σημαντική για την ανάπτυξη και /ή την προώθηση της νεοπλασίας. Πρόσθετες μελέτες θα πρέπει να καθορίσει πιο συγκεκριμένα έναν ρόλο για ΝΡκΒ φλεγμονώδεις σηματοδότηση σε CAC.

Εν περιλήψει, δείχνουμε ότι η μικροχλωρίδα του εντέρου είναι απαραίτητη για την ανάπτυξη του CAC και ότι η χρόνια κολίτιδα προωθεί το ογκογόνο δυναμικό των όγκων παχέος εντέρου με αποτέλεσμα την εξέλιξη σε προχωρημένα στάδια. Οι εκδηλώσεις αυτές εξαρτώνται από την μικροβιακή αναγνώριση από το σύστημα TLR /MyD88. Διαμόρφωσης αυτού του σημαντικού έμφυτο σύστημα ανίχνευσης θα μπορούσε να αποτελέσει ένα νέο μέσο με το οποίο για την πρόληψη /εξασθενεί την ανάπτυξη των CAC.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση Ηθικής

εγκρίθηκαν Όλα τα πρωτόκολλα των ζώων από την Επιτροπή Θεσμικών Ζωικά Φροντίδα και Χρήση του Πανεπιστημίου της Βόρειας Καρολίνας στο Chapel Hill

Ποντίκια και επαγωγή CAC

WT και

IL10

-. /-

ποντίκια στο παρασκήνιο 129 SvEv εκτράφηκαν και στεγάζεται στο Μηχανισμό ΑΕενικοί των ζώων στο Πανεπιστήμιο της Βόρειας Καρολίνας στο Chapel Hill. Δέκα έως δώδεκα εβδομάδων χωρίς μικρόβια ποντίκια μεταφέρθηκαν σε ελεύθερες συνθήκες (SPF) ειδικού παθογόνου (συμβατική για), και μετά από 5 εβδομάδες εγχύθηκαν ί.ρ. με 10 mg /kg βάρους σώματος AOM (Sigma Aldrich) μία φορά την εβδομάδα για 6 εβδομάδες.

IL10

– /-

?

Myd88

– /- ποντίκια

και ελέγχου

IL10

– /-

ποντίκια (C57BL /6J /129) τέθηκαν υπό συνθήκες SPF και στις 12 εβδομάδες της ηλικίας ένεση με ΑΟΜ, όπως περιγράφεται παραπάνω. Όλα τα ποντίκια δοκιμάζονται χωρίς Helicobacter hepaticus και Helicobacter pylori, δύο γνωστοί επαγωγείς της ογκογένεσης στο

IL10

– /-.

Ποντίκια [30]

Η βακτηριακή αποίκιση

IL10

– /-

– και τα ποντίκια WT ήταν μονο-συνδέονται σε 10-12 εβδομάδες της ηλικίας με τη διατροφή καθετήρα και ορθού επιχρισμάτων με βιώσιμα βακτήρια καλλιεργούνται από ινδικό χοιρίδιο απομονώσεις του

Bacteroides vulgatus

. Μονο που σχετίζονται με τα ποντίκια διατηρήθηκαν σε διευκόλυνσης ΑΕενικοί των ζώων στο Πανεπιστήμιο της Βόρειας Καρολίνας στο Chapel Hill. Βακτηριακές συνεταιρίζεσθαι και την απουσία μόλυνσης από άλλα είδη βακτηρίων επιβεβαιώθηκαν από περιοδικές αερόβια καλλιέργεια των δειγμάτων κοπράνων και χρώση gram.

νεκροψία και όγκου ιστολογία

Μετά την θυσία, άνω και κάτω τελείες αφαιρέθηκαν από το τυφλό έντερο έως το ορθού, ξεπλένεται με PBS, διευρύνονται κατά μήκος και οι όγκοι μετρήθηκαν. δείγματα περιφερικού παχέος εντέρου ιστού συλλέχθηκαν και καταψύχθηκαν. Κόλον swiss έλασης από το περιφερικό προς το κεντρικό άκρο, σταθερό για όλη τη νύχτα σε 10% φορμαλίνη και εγκλεισμένα σε παραφίνη. Έξι μm τομές παρασκευάστηκαν και χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη για ιστολογική ανάλυση. Οι όγκοι βαθμολογήθηκαν για τη φλεγμονή και τον βαθμό του όγκου.

Ιστολογική αξιολόγηση φλεγμονή του βλεννογόνου πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα βαθμολόγησης από το 0 έως 4 για την ταξινόμηση του βαθμού lamina propria διείσδυση μονοπύρηνων κυττάρων, κρύπτη υπερπλασία, εξάντληση λαγηνοειδών κυττάρων και αρχιτεκτονικά παραμόρφωση , όπως περιγράφηκε προηγουμένως [18]. Όγκοι ταξινομούνται ως χαμηλού βαθμού δυσπλασία, όταν εμφανίζεται μια αποδιοργανωμένη επιθήλιο επένδυση από υπερχρωματικό κυττάρων με πυρηνική pseudostratification. Οι όγκοι ταξινομούνται ως υψηλής ποιότητας όταν περιείχαν back-to-back αδένες, υψηλή πυρήνα προς κυτόπλασμα αναλογίες, αυξημένη πυρηνική πλειομορφία και απώλεια της κυτταρικής πολικότητας. Όγκοι ταξινομούνται ως διηθητικά καρκινώματα όταν δεν υπήρχε σαφής διείσδυση της δυσπλαστικών περιοχή μέσω της μυϊκό βλεννογόνο με αποτέλεσμα δεσμοπλαστικού απάντηση από τον γειτονικές στρώμα. Φλεγμονή και νεοπλασματικών βλαβών βαθμολογήθηκαν από έναν εκπαιδευμένο παθολόγο.

Ανοσοϊστοχημεία

Τομές ιστού αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο και επανυδατώθηκαν μέσω διαβαθμισμένης σειράς πλύσεων αλκοόλης. Ανοσοϊστοχημεία για φωσφορυλιωμένη-Rel Α (ΚεΙΑ 276) πραγματοποιήθηκε με ένα πολυκλωνικό αντίσωμα κουνελιού αραιωμένο 1:50 (Cell Signaling Technology) χρησιμοποιώντας το κιτ IgG Κουνελιού Vectastain Elite (Vector Laboratories). Κί67 immunohistochemisry πραγματοποιήθηκε ως εξής: Η ενδογενής δραστικότητα υπεροξειδάσης αποκλείστηκε με επώαση σε 0.3% Η

2O

2 για 30 λεπτά. Το αντιγόνο ανάκτηση διεξήχθη με τμήματα βρασμό επί 7 λεπτά σε ρυθμιστικό διάλυμα 0.01 Μ κιτρικού ρΗ 6.0 και ψύχεται σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά. Ο αποκλεισμός πραγματοποιήθηκε με 3% BSA σε αλατόνερο ρυθμισμένο με φωσφορικό (PBS) για 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. μονόκλωνα αντισώματα Ki67 (Dako) αραιώθηκε 1:200. Βιοτινυλιωμένο δευτερεύον αντίσωμα (Vector Laboratories) αραιώθηκε 1:200 σε 1% BSA /PBS. Τα επόμενα στάδια διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας το κιτ Vectastain ABC σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. CTNNB1 immunohistohistochemistry πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα αντίσωμα αντι-ποντικού CTNNB1 αραιωμένο 1:100 (Transduction Laboratories) με την M.O.M. κιτ υπεροξειδάσης (Vector Laboratories). στάδια επώασης πρωτογενές αντίσωμα διεξήχθησαν όλη τη νύχτα στους 4 ° C. Οπτικοποίηση διεξήχθη χρησιμοποιώντας 3,3′-διαμινοβενζιδίνη (Dako).

Real-time PCR

Το RNA απομονώθηκε από τους ιστούς άπω κόλον χρησιμοποιώντας την μέθοδο ΤΚΙζοΙ (Invitrogen, Carlsbad, CA). cDNA παρασκευάστηκε με αντίστροφη μεταγραφή 1 μα RNA χρησιμοποιώντας 126 μονάδες Μ-ΜΕν αντίστροφης μεταγραφάσης, 1 mM dNTPs και 875 pmol τυχαίων εκκινητών (Invitrogen). Ημι-ποσοτική PCR πραγματικού χρόνου πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα Eppendorf Realplex κύριο Cycler. αντίδραση PCR: 150 ηΜ τελική συγκέντρωση του προς τα εμπρός και αντίστροφοι εκκινητές, 6 μΐ QuantiTect SYBR Green PCR Master Mix (Qiagen, Valencia, CA) και 50 ng του εκμαγείου cDNA σε ένα σύνολο 12 μλ. Χρησιμοποιήθηκαν οι ακόλουθες συνθήκες PCR: 95 ° C, 15 λεπτά? (95 ° C, 15 δευτερόλεπτα? 56 ° C, 30 δευτερόλεπτα? 72 ° C, 30 δευτερόλεπτα) × 40 κύκλους. Ιδιαιτερότητα και η γραμμικότητα ενίσχυσης για κάθε σύνολο εκκινητή προσδιορίστηκε με ανάλυση καμπύλης τήξης και τον υπολογισμό της κλίσης από σειριακή αραιωμένα δείγματα. Σχετική πολλαπλές μεταβολές προσδιορίστηκαν χρησιμοποιώντας τη μέθοδο υπολογισμού ΔΔCT. Οι τιμές κανονικοποιήθηκαν προς το εσωτερικό έλεγχο β-ακτίνης. Εκκινητές:.

ΤΝΡα

(5 ‘3’ και ATGAGCACAGAAAGCATGATC 5 ‘TACAGGCTTGTCACTCGAATT 3’) και

IL12p40

(5 ‘CACGGCAGCAGAATAAATATG 3’ και 5 ‘TTGCATTGGACTTCGGTAGA 3’)

Η στατιστική ανάλυση

οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση GraphPad Prism έκδοση 5.0a. Συγκρίσεις μεταξύ WT και

IL10

– /-

ή

IL10

– /-

και

IL10

– /-

?

Myd88

– /- ποντίκια

αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας δίπλευρη unpaired t-test. Συγκρίσεις μεταξύ SPF,

Β. vulgatus

μονο-συνδέεται και χωρίς μικρόβια ποντίκια αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης (ANOVA). Μεμονωμένα συγκρίσεις στη συνέχεια κατασκευάζεται χρησιμοποιώντας ένα δίπλευρη unpaired t-test. ανάλυση συσχέτισης Pearson διεξήχθη για να εκτιμήσει συσχέτιση μεταξύ του αριθμού των όγκων και σοβαρότητα της φλεγμονής σε ΑΟΜ που έλαβαν WT και

IL10

– /-

ποντίκια (n = 22) με χρήση SAS (SAS Institute, Cary NC)

κολονοσκόπηση

κολονοσκόπηση διεξήχθη 4, 8, 12, 16 και 18 εβδομάδες μετά τη μεταφορά των ποντικών από ελεύθερα μικροβίων σε SPF συνθήκες (Εικ. 1) για να ακολουθήσει την εξέλιξη της κολίτιδας και σχηματισμού όγκου .

In vivo

οπτικοποίηση των όγκων πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας ένα «Coloview System» (Karl Storz Κτηνιατρικά Ενδοσκόπησης). Οι ποντικοί αναισθητοποιήθηκαν με τη χρήση 1,5% έως 2% ισοφλουράνιο και ~ 4 cm του παχέος εντέρου από το πρωκτικό χείλος από το σπληνική flecture οπτικοποιήθηκε. Οι διαδικασίες ψηφιακά καταγράφονται σε AIDA Compaq PC.

Ευχαριστίες

Σας ευχαριστούμε Maureen Bower και η Cindy Spivey στο The National Resource Center ΑΕενικοί Τρωκτικό για τη βοήθεια των εμπειρογνωμόνων τους στον τομέα της τεχνολογίας των τρωκτικών χωρίς μικρόβια. Οι συγγραφείς θα ήθελα να ευχαριστήσω Amber McCoy από το Κέντρο για την γαστρεντερικού Βιολογίας και Ασθενειών (CGIBD) Ιστολογία Πυρήνας Διευκόλυνση για βοήθεια με την ιστολογική επεξεργασία.