Αφηρημένο

Επέκταση των λευκοκυττάρων μυελοειδούς-συγγενικής σε ποντίκια που φέρουν όγκο έχει προταθεί ως αιτία της συστημικής ανοσοκαταστολής. Έχουμε αποδείξει ότι η θεραπεία ακτινοβολίας των όγκων οδηγεί σε μια μείωση σε μυελοειδή αριθμούς κυττάρων στο αίμα και τη μείωση του μεγέθους της σπλήνας. Η συχνότητα των μυελοειδών κυττάρων δεν μειώνεται με το επίπεδο σε ποντίκια άνευ όγκου: αποδεικνύουμε ότι μεταστατική νόσο μπορεί να αποτρέψει μυελοειδή αριθμούς κυττάρων από το να επιστρέψουν στην αρχική τους κατάσταση, και ότι υποτροπής του όγκου από υπολειμματικής νόσου συσχετίζεται με την εκ νέου διαστολή του κύτταρα μυελοειδούς προέλευσης. Αποτελέσματα Η θεραπεία με ακτινοβολία σε αυξημένο πολλαπλασιασμό των Τ κυττάρων στη σπλήνα και ενώ Τ κυτταρικές αποκρίσεις σε ξένα αντιγόνα δεν μεταβάλλονται από το φορτίο του όγκου ή μυελοειδή κυτταρική επέκταση, οι αποκρίσεις σε αντιγόνα που σχετίζονται με όγκους αυξήθηκε μετά από θεραπεία με ακτινοβολία. Αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι οι αριθμοί των κυττάρων μυελοειδούς συνδέονται άμεσα με πρωτογενή φορτίο όγκου, ότι αυτό συμβάσεις πληθυσμού μετά τη θεραπεία με ακτινοβολία, και ότι η ακτινοθεραπεία μπορεί να ανοίξει ένα θεραπευτικό παράθυρο για την ανοσοθεραπεία του υπολειμματικής νόσου

Παράθεση:. Crittenden MR, Savage Τ, Cottam Β, Bahjat KS, Redmond WL, Bambina S, et al. (2013) Η επέκταση Περιφερική Μυελογενής Καθοδηγείται από ποντικών Καρκίνος Εξέλιξη αντιστρέφεται με ακτινοθεραπεία του όγκου. PLoS ONE 8 (7): e69527. doi: 10.1371 /journal.pone.0069527

Επιμέλεια: Μαρία Γ Κάστρο, του Πανεπιστημίου του Michigan Ιατρική Σχολή, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 5η Απριλίου του 2013? Αποδεκτές: 11, Ιουν, 2013? Δημοσιεύθηκε: 25 Ιουλ, 2013

Copyright: © 2013 Crittenden et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από τη χρηματοδότηση της έρευνας από τη Susan G Komen για την απονομή Cure Καριέρα Καταλύτης (KG110131) και μια αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία έρευνας Scholar Grant (RSG-12-168-01-LIB) για να MJG, και Wayne Δ Κούνι και Joan Ε . Κούνι Ίδρυμα Κούνι Scholar Award για την MRC. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μυελοειδή κύτταρα έχουν έναν σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και εξέλιξη του καρκίνου. Tumor-συνδέονται μακροφάγα είναι κρίσιμες για την αγγειογένεση, εισβολή, μετάσταση, ανοσοκαταστολή και η απόκριση στη θεραπεία [1], [2], [3]. Πρόσφατα μελέτες έχουν εστιάσει στον πληθυσμό μυελοειδών κυττάρων που συχνά επεκτείνεται στο περιφερικό αίμα των ασθενών με καρκίνο [4], [5]. Ορισμένα μοντέλα ποντικού που συνδέεται με την ακραία μυελοειδή επεκτάσεις ανιχνεύσιμα στον όγκο, σπλήνα και περιφερικό αίμα, και αυτά τα μυελοειδή κύτταρα είναι ικανά να καταστείλουν την ενεργοποίηση των κυττάρων Τ

in vitro

[6], [7], [8].

Μεταμοσχεύσιμα μοντέλα όγκων με κλωνική πανομοιότυπα καρκινικά κύτταρα τους παρέχουν ένα χρήσιμο μοντέλο για τη μελέτη των βασικών χαρακτηριστικών της μυελοειδούς επέκτασης. Εάν η μυελοειδή επέκταση συνδέεται με τον αριθμό των καρκινικών κυττάρων, τότε η θεραπεία του πρωτογενούς όγκου θα πρέπει να εμποδίζει μυελοειδή επέκτασης. Η γεμσιταβίνη και 5-FU χημειοθεραπεία έχει αποδειχθεί ότι ελέγχουν την μυελοειδή επέκταση στις σπλήνες των ποντικών που φέρουν όγκο [9], [10], [11]. Ωστόσο, κάθε από αυτούς τους παράγοντες έχει περιγραφεί να έχουν μια άμεση ανασταλτική επίδραση επί μυελοειδών πληθυσμούς

in vitro

[10], [11]. Αν και αυτά δεν είναι ιδιαίτερα μυελοτοξικών χημειοθεραπείες, οι δυνητικές συστημικές συνέπειες των χημειοθεραπειών σε ενεργά πολλαπλασιαζόμενα μυελοειδή πρόδρομες ουσίες μπορεί να συγχύσει τη συμβολή της μειωμένης επιβάρυνσης του όγκου. Η χειρουργική αφαίρεση του πρωτογενούς όγκου προκαλεί επίσης μια μείωση σε μυελοειδή κύτταρα [9], [12]. Είναι ενδιαφέρον ότι η επίδραση αυτή είναι ελλιπής, καθώς τα κύτταρα δεν επιστρέφουν στην αφελή επίπεδα. Αυτά τα δεδομένα προτείνουν ότι οι όγκοι έχουν επιπτώσεις στα μυελοειδή κύτταρα που επιμένει πέρα ​​εκτομή. Ωστόσο, σε αυτό το μοντέλο η επίδραση της εκτομής του όγκου είναι παροδική, καθώς μυελοειδή επέκταση επιστρέφει με υποτροπή του πρωτογενούς όγκου και των μεταστάσεων [12]. Ως εκ τούτου, τα δεδομένα αυτά θα μπορούσαν να ερμηνευθεί εκ νέου να υποδεικνύουν ότι υπολειμματικό καρκινικά κύτταρα μπορεί να εμποδίσει την πλήρη εξομάλυνση των μυελοειδών αριθμών. Στο χειρουργικό μοντέλο, τραύμα μπορεί επίσης να ενεργεί ως παράγοντας σύγχυσης. Τραύμα έχει δειχθεί ότι προκαλεί την κινητοποίηση των μυελοειδών κυττάρων με παρόμοια φαινοτυπική, μορφολογικές και λειτουργία ιδιότητες μυελοειδή κύτταρα όγκου που προκαλείται από [13]. Αυτό τραύμα που προκαλείται από μυελοειδή διαστολής μπορεί να υποκρύπτει την έκταση της μείωσης σε μυελοειδή κύτταρα που προκαλείται από χειρουργική αφαίρεση του πρωτογενούς όγκου, και προσθέστε σε κάθε μυελοειδή επέκταση υπέστη υπολειμματικής νόσου.

Η συνέπεια της θεραπείας με ακτινοβολία όγκου σε συστημική μυελοειδή πληθυσμοί δεν έχει περιγραφεί. Η θεραπεία ακτινοβολίας μπορεί να παραδοθεί σε ένα εξαιρετικά τοπο-ειδικό τρόπο, με αποτέλεσμα τον έλεγχο των στοχευμένων όγκων και υπό κανονικές συνθήκες δεν υπάρχει αποτέλεσμα επί όγκων εκτός του πεδίου στόχου. Έτσι, η θεραπεία με ακτινοβολία παρέχει μια τεχνική για να επηρεάσει του πρωτογενούς όγκου σε περιφερικά μυελοειδή κύτταρα χωρίς τις συνυπάρχουσες επιδράσεις της χημειοθεραπείας και της χειρουργικής. Έχουμε αποδείξει ότι η θεραπεία ακτινοβολίας 4Τ1 όγκων προκαλεί μια πτώση σε μυελοειδή αριθμούς κυττάρων στο αίμα και μείωση του μεγέθους της σπλήνας. Συστηματικές ασθένεια, όπως μετράται με μεταστάσεις στους πνεύμονες, δεν επηρεάζεται από την θεραπεία με ακτινοβολία του πρωτογενούς όγκου. Έχουμε αποδείξει ότι μυελοειδή επέκταση ακολουθεί πιστά πρωτογενή ανάπτυξη του όγκου, αλλά ότι μετά την αγωγή, μυελοειδή αριθμοί δεν μειώνονται στο επίπεδο παρατηρείται σε ποντικούς άνευ όγκου, γεγονός που υποδηλώνει ότι μετά τοπική θεραπεία, υπολειμματική τοπικές και μεταστατικής νόσου συνδυάζονται για να διατηρήσουν μυελοειδή αριθμούς. Όταν πρωτογενών όγκων υποτροπίασαν, ως αποτέλεσμα της υπολειμματικής τοπικών ασθενειών, μυελοειδή επέκταση επιστρέφονται. Έχουμε αποδείξει ότι ενώ οι αριθμοί μυελοειδή ρυθμίζονται από την ανάπτυξη του όγκου και επηρεάζεται από θεραπεία με ακτινοβολία, οι αριθμοί των κυττάρων Τ δεν αλλάζουν. Ωστόσο, η θεραπεία ακτινοβολίας του πρωτογενούς όγκου βελτίωσε την μυελοειδή: CD8 και οδηγεί σε αυξημένο πολλαπλασιασμό των ενδογενών Τ κυττάρων στη σπλήνα. Για να ελεγχθεί αν διαστολή και συστολή μυελοειδή επηρεάζονται in vivo αποκρίσεις Τ κυττάρου, μετρήθηκε η αντιγόνου ειδική απόκριση προς αντιγόνα εμβολίου που σχετίζονται και που σχετίζονται με όγκους. Έχουμε αποδείξει ότι δεν υπήρξε καμία αλλαγή στο

in vivo

απάντηση

Listeria monocytogenes

εμβολιασμό σε όγκο που φέρει και ποντίκια με αγωγή, αλλά ότι ο συνδυασμός της ακτινοθεραπείας με τα αποτελέσματα του εμβολιασμού σε αυξημένες αντιδράσεις στο εμβόλιο αντιγόνο από κοινού με τον όγκο. Αυτά τα δεδομένα υποστηρίζουν την υπόθεση ότι μυελοειδή επέκταση είναι άμεσα συνδεδεμένη με το φορτίο του όγκου, ότι αυτά τα κύτταρα σύμβαση μετά από θεραπεία με ακτινοβολία, και ότι η θεραπεία με ακτινοβολία μπορεί να ανοίξει ένα θεραπευτικό παράθυρο για την ανοσοθεραπεία της υπολειμματικής νόσου.

Υλικά και Μέθοδοι

Ηθική

Όλα τα πρωτόκολλα των ζώων εγκρίθηκαν από το Earle Α Chiles Research Institute IACUC (Animal Welfare Διασφάλισης Νο A3913-01).

Ζώα και κυτταρικές γραμμές

Η κυτταρική σειρά καρκινώματος του μαστού 4Τ1 [14] (BALB /c) ελήφθη από την ATCC (Manassas, VA). Η κυτταρική γραμμή αδενοκαρκινώματος Panc02 ποντικού παγκρέατος [15] (C57BL /6) παρασχέθηκε ευγενώς από τον Dr Woo (Mount Sinai School of Medicine, NY). Ηλικίας 6-8 εβδομάδων C57BL /6 ποντίκια και BALB /c ελήφθησαν από τα Charles River Laboratories (Wilmington, ΜΑ) για χρήση σε αυτά τα πειράματα.

Αντισώματα και Αντιδραστήρια

φθορισμό αντισώματα συζευγμένα CD11b -AF700, Gr1-ΡΕ-Cy7, ΙΑ (MHC τάξης II) -e780, Ly6C-PerCP-Cy5.5, CD4-E450, FoxP3-E450, CD25-APC, CD4-PerCP Cy5.5, CD8-FITC, ΙΡΝγ -APC, και CD40L-ΡΕ αγοράστηκαν από eBioscience (San Diego, CA). Κί67-FITC, CD4-V500, TNFa-ΡΕ-Cy7 και Ly6G-FITC αγοράσθηκαν από BD Biosciences (San Jose, CA). CD8-ΡΕ-TxRD αγοράστηκε από την Invitrogen (Carlsbad, CA).

Ακτινοβολία θεραπεία των όγκων

Οι όγκοι εμβολιάστηκαν υποδορίως στο δεξί πόδι κάτω από το γόνατο σε μία δόση των 5 × 10

4 4Τ1 κύτταρα ή 2 × 10

5 Panc02 και αφήνεται να δημιουργήσει για 14 ημέρες πριν από την έναρξη της θεραπείας. Δοσολογία βασίστηκε σε πρόσφατες κλινικές μελέτες [16], με τρία καθημερινά 20 κλάσματα θεραπεία Gy δοθεί χρησιμοποιώντας ένα Elekta Synergy γραμμικό επιταχυντή (Atlanta, GA) με 6 MV φωτόνια που ενσωματώνει ένα μισό τετράγωνο δέσμης για την ελαχιστοποίηση της δόσης στον κορμό και 1 εκατοστό εφόδου.

κλωνογόνος ανάλυση των μεταστατικών κυττάρων καρκίνου

Για κλωνογόνο ανάλυση των μεταστατικών καρκινικών κυττάρων, οι πνεύμονες αποκόπηκαν σε τεμάχια περίπου 2 mm και ακολουθεί ανάδευση σε 1 mg /mL κολλαγενάση (Invitrogen), 100 μg /mL υαλουρονιδάση (Sigma, St Louis, ΜΟ), και 20 mg /mL DNase (Sigma) σε PBS για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Το προϊόν πέψης διηθείται μέσω 100 μm νάιλον πλέγμα για την απομάκρυνση μακροσκοπική συντρίμμια. Διαδοχικές αραιώσεις των κυττάρων του όγκου σπάρθηκαν σε πλάκες ιστοκαλλιέργειας 6 φρεατίων σε μέσα που περιέχουν 60 μΜ 6-θειογουανίνη για την επιλογή για τα καρκινικά κύτταρα πάνω στρωματικά κύτταρα και οι αποικίες μετρήθηκαν μετά από 7 ημέρες. Η σειριακή αραίωση και η καταμέτρηση των αποικιών χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό του αριθμού των κλωνογόνων καρκινικών κυττάρων στο αρχικό όργανο.

κυτταρομετρίας ροής μυελοειδούς κυττάρων στο αίμα και τη σπλήνα

Η επέκταση της μυελοειδή κύτταρα σε το περιφερικό αίμα μετρήθηκε χρησιμοποιώντας δοκιμασία ολόκληρη χάντρα αίμα. Ολικό αίμα συλλέχθηκε σε EDTA σωλήνες από ενεργούς ποντικούς μέσω της σαφηνούς φλέβας, και 25 μΙ φρέσκο ​​αίμα χρωματίστηκε άμεσα με φθορίζουσες κοκτέιλ αντισωμάτων. Μια γνωστή αριθμός σφαιριδίων φθορισμού Accucheck (Invitrogen) προστέθηκαν σε κάθε δείγμα, τότε τα ερυθρά αιμοσφαίρια λύθηκαν με Cal-Lyse διάλυμα λύσης ολικού αίματος (Invitrogen), και τα δείγματα αναλύθηκαν σε ένα BD LSRII κυτταρόμετρο ροής. Προσδιορίσαμε τον απόλυτο αριθμό των κυττάρων στο δείγμα με βάση τη σύγκριση κυτταρικά γεγονότα να χάντρα εκδηλώσεις (κύτταρα /μl). Για ανάλυση κυτταρομετρίας ροής των σπληνοκυττάρων, ομογενοποιημένο σπλήνες πλύθηκαν και χρωματίστηκαν με αντισώματα ειδικά για αντιγόνα επιφάνειας, τότε τα κύτταρα πλύθηκαν και σταθεροποιήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα κιτ χρώσης ρυθμιστικών Τ κυττάρων (EBiosciences) και ενδοκυτταρικά χρωματίστηκαν για FoxP3 και Κί67. Η αναλογία κάθε κυτταρικό τύπο που διηθούν αναλύθηκε σε BD LSRII. διαλογή ροής των κυττάρων του αίματος εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας μία BD FACSAria διαχωριστή κυττάρων προς καθαρότητα μεγαλύτερη από 98%. Η μορφολογία των κυτταρικών πληθυσμών ταξινομημένα προσδιορίστηκε με cytospin ακολουθούμενη από χρώση DiffQuick. κηλίδες αίματος βάφτηκαν χρησιμοποιώντας Wright’s-χρώση Giemsa (Ricca Chemical Company, Arlington, TX). Οι εικόνες ελήφθησαν χρησιμοποιώντας ένα Nikon Eclipse TE2000-S μικροσκόπιο φθορισμού με λογισμικό απόκτησης και της ανάλυσης ΝΑΚ-Στοιχεία, ή σε ένα σαρωτή διαφανειών Leica SCN400.

κυτοκίνης Δοκιμασία Στεφάνη

Οι όγκοι συλλέχθηκαν σε πάγο και ομογενοποιούνται σε 4.5 μl PBS που περιέχει αναστολέα πρωτεάσης ΣΤΑΜΑΤΗΣΕΙ ανά mg ιστού. Τα κυτταρικά υπολείμματα απομακρύνθηκαν με φυγοκέντρηση στα 14.000 g για 15 λεπτά στους 4 ° C, και τα υπερκείμενα αποθηκεύτηκαν σε υποπολλαπλάσια στους -80 ° C μέχρι να χρησιμοποιηθούν. επίπεδα κυτοκινών στα υπερκείμενα ανιχνεύθηκαν χρησιμοποιώντας δοκιμασία ποντικού multiplex σφαιριδίων (Life Technologies, Grand Island, ΝΥ) και διαβάστηκε σε ένα αναγνώστη συστοιχία Luminex 100. Οι συγκεντρώσεις κυτοκίνης για τις επαναλήψεις κάθε δείγματος όγκου υπολογίστηκαν σύμφωνα με μια πρότυπη καμπύλη.

βακτηριακό στέλεχος και εμβολιασμός

ΑκτΑ-διαγράφεται (Δ

actA

)

L. monocytogenes

εκφράζουν το πεπτίδιο AH1-A5 LM-AH1-Α5) έχουν περιγραφεί προηγουμένως [17]. Βακτηρίδια αναπτύχθηκαν σε μεσολογαριθμική στον εγκέφαλο-καρδιά ζωμό έγχυσης, πλύθηκαν και επαναιωρήθηκαν σε DPBS για ένεση. Μια δόση 5 × 10

6 CFU παραδόθηκε ενδοφλεβίως και επιβεβαιώνεται από επιμετάλλωση του υπολειμματικού εμβολίου. ποντίκια ελέγχου ή ποντίκια που φέρουν 4Τ1 όγκων αφεθεί χωρίς θεραπεία ή θεραπεία όπως παραπάνω με τρία καθημερινά 20 κλάσματα θεραπεία Gy εμβολιάστηκαν μία ημέρα μετά την τελική δόση ακτινοβολίας με 5 × 10

6 CFU LM-AH1-Α5. Οι σπλήνες συλλέχθηκαν 7 ημέρες μετά τον εμβολιασμό εναιωρημάτων και κυττάρων διεγέρθηκαν με 2 μΜ LLO

91-99 (GYKDGNEYI), AH1 (SPSYVYHQF), ή φορέα DMSO με την παρουσία Brefeldin Α για 5 ώρες στους 37 ° C. Διεγερμένα κύτταρα πλύθηκαν και βάφτηκαν με CD4-PerCP Cy5.5 και CD8-FITC, στη συνέχεια σταθεροποιήθηκαν και κατέστησαν διαπερατά χρησιμοποιώντας ένα BD Cytofix /Cytoperm συν kit (BD Biosciences) και καταψύχθηκε στους -80 ° C. Για την ανάλυση τα κύτταρα αποψύχθηκαν και ενδοκυτταρικά χρωματίστηκαν με ΙΡΝγ-APC, TNFa-ΡΕ-Cy7 και CD40L-ΡΕ. Τα κύτταρα πλύθηκαν και αναλύθηκαν με κυτταρομετρία ροής BD LSRII και τα δεδομένα ανακρίθηκε χρησιμοποιώντας BD FACSDiva (BD Biosciences) και FloJo (Tree Star, Ashland, OR).

Στατιστικά

Τα δεδομένα αναλύθηκαν και γράφημα χρησιμοποιώντας Prism (GraphPad Software, La Jolla, CA). αριθμούς μυελοειδή αίματος πάροδο του χρόνου είχαν τοποθετηθεί σε δεύτερης τάξης πολυώνυμο καμπύλες χρησιμοποιώντας Prism. Ατομική σύνολα δεδομένων σε σχέση με τη χρήση T-test και ανάλυση Φοιτητών σε πολλές ομάδες διεξήχθη χρησιμοποιώντας ANOVA με μεμονωμένες ομάδες αξιολογούνται με βάση τη σύγκριση του Tukey.

Αποτελέσματα

Η επέκταση της μυελοειδούς πληθυσμών συνδέεται με την εξέλιξη του καρκίνου σε ζωικά μοντέλα και σε ασθενείς με καρκίνο. Σε ποντίκια, ο μυελοειδής επέκταση ποικίλλει μεταξύ των μοντέλων όγκων, για παράδειγμα με ιδιαίτερα έντονη μυελοειδή επεκτάσεις που περιγράφεται στο μοντέλο καρκινώματος μαστικού 4Τ1 [18]. Σε αυτά τα μοντέλα, τα ποντίκια που φέρουν προηγμένη όγκοι παρουσιάζουν εξαιρετικά μεγάλη σπλήνα, το οποίο περιέχει ένα ιδιαίτερα αισθητή επέκταση του CD11b

+ Gr1

+ πληθυσμού. Για να παρακολουθείτε μυελοειδή επέκταση σε ποντικούς μέσω της ανάπτυξης του όγκου χωρίς την ανάγκη να ευθανασία του ζώου που παρακολουθείται μυελοειδή πληθυσμούς στο περιφερικό αίμα. Τυπική παρασκευή μονοπύρηνα κύτταρα περιφερικού αίματος (PBMC) με φυγοκέντρηση διαβάθμισης πυκνότητας μπορεί να οδηγήσει σε απώλεια των πληθυσμών των κοκκιοκυττάρων, που αποτελούν την πλειοψηφία των μυελοειδών κυττάρων στο περιφερικό αίμα. Ως εκ τούτου, έχουμε αναπτύξει μια ολόκληρη τη ροή του αίματος κυτταρομετρία δοκιμασίας που ενσωματώνει καταμέτρηση-σφαιρίδια για τη μέτρηση του απόλυτου αριθμού των κυκλοφορούντων μυελοειδών κυττάρων. Επαναλαμβανόμενες μετρήσεις πολλαπλών ποντίκια έδειξαν ότι αυτή η μυελοειδούς πληθυσμός αυξήθηκε κατά 2-3 καταγράφει μέσα από την ανάπτυξη του όγκου, αυξάνοντας κατακόρυφα τη συνολική κυτταροβρίθεια του περιφερικού αίματος. Στην αφελή ποντίκια η CD11b

+ μυελοειδή κύτταρα σε γενικές γραμμές αποτελούνταν από Gr1

+ και Gr1

– κυττάρων (Σχήμα 1α), όπου η CD11b

+ Gr1

+ κύτταρα ήταν ομοιόμορφα MHC τάξης II ( ΙΑ) αρνητικά και το CD11b

+ Gr1

– τα κύτταρα που ενσωματώνονται τόσο MHC τάξης II αρνητικά και θετικά κύτταρα (Εικόνα 1 ΑΠ). Σε 4Τ1 ποντικών που φέρουν όγκο παρατηρήσαμε παρόμοια φαινοτύπους, αλλά μια μεγάλη αύξηση στον αριθμό των κυττάρων αυτών, ιδίως ένα επέκτασης σε CD11b

+ + κυττάρων Gr1

, σύμφωνα με τις παρατηρήσεις άλλων ερευνητών παρατηρήθηκε [4] , [19]. Η θεραπεία με ακτινοβολία ποντικών που έφεραν όγκους εγκατεστημένος 4Τ1 ελέγχει την ανάπτυξη του όγκου? Ωστόσο, παρά τις υψηλές δόσεις ακτινοβολίας, οι όγκοι επαναληφθεί σε τοπικό επίπεδο (Σχήμα 1β). Η θεραπεία με ακτινοβολία του πρωτογενούς όγκου είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική διαφορά στα περιφερικά κύτταρα μυελοειδούς, σε σύγκριση με χωρίς θεραπεία ποντικούς, μέσα σε μία εβδομάδα της θεραπείας με ακτινοβολία (ρ & lt? 0,01 την ημέρα 21 μετά την πρόκληση όγκου) (Σχήμα 1β). Σε αυτό το σημείο, ο αριθμός των κυκλοφορούντων κυττάρων μυελοειδούς σε ποντίκια που έλαβαν θεραπεία ήταν σημαντικά χαμηλότερα από τα επίπεδα προ της θεραπείας για λίγο πάνω από μία εβδομάδα πριν από την επέκταση επέστρεψε (RT d14 εναντίον RT D21 (p & lt? 0.05), RT D14 εναντίον RT D23 ( p & lt? 0.05), RT D14 εναντίον RT D27 (p = 0.26)). Οι αριθμοί των κυκλοφορούντων μυελοειδών κυττάρων σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή παρέμειναν σημαντικά χαμηλότερα από ό, τι σε ποντίκια χωρίς θεραπεία μέχρι περίπου δύο εβδομάδες μετά τη θεραπεία (ρ & lt? 0,05 ημέρα 27 μετά την πρόκληση όγκου). Σε αυτό το σημείο, η επανεμφάνιση του πρωτογενούς όγκου ήταν εμφανής (Σχήμα 1Bi) υποδηλώνοντας μια πιθανή σχέση μεταξύ της πρωτοβάθμιας φορτίο του όγκου και μυελοειδή αριθμούς. Αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι η θεραπεία με ακτινοβολία του πρωτογενούς όγκου αντιστρέφει παροδικά το σχετιζόμενο με τον όγκο διαστολής μυελοειδή.

α) i) Η κυτταρομετρία ροής φρέσκου πλήρους περιφερικού αίματος από ποντικούς BALB /c 4Τ1 αφελή και φέρουν όγκο, δείχνοντας CD11b

+ SSC

hi μυελοειδή πληθυσμούς. ii) Gr1 και ΙΑ (MHC τάξης II) χρώση σε περιφραγμένο CD11b

+ SSC

hi μυελοειδή πληθυσμών από αφελείς και 4Τ1 ποντικών που έφεραν όγκους. β) i) μέσο και τυπικό σφάλμα του διάμετρος πόδι ποντικών BALB /c που φέρουν 4Τ1 όγκων αφεθεί χωρίς θεραπεία (ΝΤ) ή έχουν δεχθεί ξεκινώντας από την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστιακής ακτινοβολίας (RT). Μυελοειδή κύτταρα /μl περιφερικό αίμα ii) ποντικούς αφεθεί χωρίς θεραπεία και αγωγή iii) ποντικούς που αρχίζουν την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστιακής ακτινοβολίας. iv) εφοδιασμένο καμπύλες από γραφικές παραστάσεις ii) και iii) απεικονίζονται χωρίς μετρήσεις. γ) i) Κλωνογόνος δοκιμασίες πνευμονικών μεταστάσεων παρόν σε ευθανασία σε ποντίκια BALB /c που φέρουν 4Τ1 όγκων αφεθεί χωρίς θεραπεία (κενοί κύκλοι – NT) ή έχουν δεχθεί ξεκινώντας από την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστιακής ακτινοβολίας (μαύροι κύκλοι – RT). ii) μυελοειδή κύτταρα /μl περιφερικό αίμα παρθένα ποντίκια (παρθένα) και ποντικούς ημέρα 17 μετά την ένεση του 4Τ1 ε.φ. (I.v.) ή υποδορίως (S.c.) iii) Συνολική σπλήνα κυτταρικότητα σε παρθένα ποντίκια (ΝΤ) και ποντικούς ημέρα 24 μετά την έγχυση του 4Τ1 ε.φ. (I.v.) ή υποδορίως (S.c.) δ) i) μυελοειδή κύτταρα /μl περιφερικό αίμα C57BL /6 ποντικούς που φέρουν όγκο Panc02 συλλέγονται σε διαφορετικά χρονικά σημεία. ii) ημέρα 24 διαμέτρου πόδι και iii) μυελοειδή κύτταρα /μl περιφερικό αίμα C57BL /6 ποντικούς που φέρουν όγκο Panc02 αφεθεί χωρίς θεραπεία (ΝΤ) ή κατεργασία που αρχίζουν την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστιακής ακτινοβολίας (RT). Σε κάθε γράφημα, το κάθε σύμβολο αντιπροσωπεύει ένα ποντίκι. NS = Μη σημαντικό? * = P & lt? 0,05? ** = Ρ & lt? 0,01? *** = Ρ & lt? 0.005? **** = P & lt? 0.001. Δεδομένων αντιπροσωπεύει πολλαπλά πειράματα επανάληψη.

Η

Το μοντέλο 4Τ1 είναι αυθόρμητα μεταστατικό, κυρίως στους πνεύμονες. Οι μεταστάσεις εμβολιάζονται εντός 10 ημερών από την εμφύτευση του όγκου πρωτογενούς – μετά από αυτό το χρονικό διάστημα χειρουργική αφαίρεση του πρωτογενούς όγκου δεν θεραπεύει ποντικούς, αλλά αντ ‘αυτού τελικά οδηγεί σε θνησιμότητα λόγω της προοδευτικής αύξησης της μεταστατικής νόσου [20]. Για την παρακολούθηση μεταστατική εξέλιξη στο μοντέλο μας ακτινοθεραπεία, συλλέξαμε πνεύμονες από ποντίκια που απαιτείται ευθανασία λόγω πρωτοπαθούς όγκου τους υπερβαίνει τα 12 mm, ή οφείλεται σε κακή κατάσταση. Σε ποντικούς που υπέστησαν αγωγή με θεραπεία ακτινοβολίας 14 ημέρες μετά την πρόκληση όγκου, έλεγχος του πρωτογενούς όγκου είχε σαν αποτέλεσμα καθυστερημένη συγκομιδή του πνεύμονα σε σύγκριση με χωρίς θεραπεία ποντικούς. Ωστόσο, για τη συγκομιδή του πνεύμονα, κλωνογονικού ανάλυση έδειξε ότι οι μεταστάσεις συνέχισε να προοδεύει (Σχήμα 1 Ci). Ακόμη και σε ποντίκια, όπου η ακτινοβολία επεξεργασμένο όγκο ήταν σταθερό, ή προχωρούν με αργούς ρυθμούς, μέσα σε 35-50 ημέρες από την πρόκληση όλα τα ποντίκια έγιναν αρκετά καλά για να απαιτήσει την ευθανασία, και αυτή η νοσηρότητα ήταν καθολικά συνδέονται με μια εκτεταμένη επιβάρυνση της πνευμονικής νόσου. Αυτά τα δεδομένα επιβεβαιώνουν εκτεταμένη ιστορικά στοιχεία ότι εστιακή ακτινοθεραπεία του πρωτεύοντος όγκου είναι ένα ιδιαίτερα τοπική θεραπεία με αποτέλεσμα τον έλεγχο του καρκίνου αποκλειστικά στο πεδίο ακτινοβολία: σε εκατοντάδες χιλιάδες ασθενών που έλαβαν ανά έτος με ακτινοθεραπεία, abscopal αποτελέσματα – επαγόμενη θεραπεία ελέγχου της όγκοι εκτός του πεδίου ακτινοβολίας – είναι εξαιρετικά σπάνιες όπου ακτινοβολία είναι η μόνη μορφή θεραπείας [21]. Δεδομένου ότι μυελοειδή επέκταση σε ασθενείς έχει συσχετιστεί με επεμβατικές και μεταστατική νόσο [5], είναι πιθανό ότι η υπολειμματική μεταστατική νόσο εμποδίζει την πλήρη εξομάλυνση των μυελοειδών αριθμούς εξής τοπική θεραπεία. Για να εξεταστεί η συμβολή της μεταστατικής νόσου σε μυελοειδή επέκταση, τα ποντίκια ενέθηκαν με 4Τ1 όγκους ενδοφλεβίως για να σχηματίσει άμεσα μεταστάσεις σε απουσία ενός πρωτογενούς όγκου. Ποντικοί που φέρουν μόνο μεταστατική νόσο εμφάνισαν περιφερική μυελοειδή διαστολής (Σχήμα 1 CII), αλλά υπήρχαν ουσιαστικά λιγότερες μυελοειδή κύτταρα που υπάρχουν σε σχέση με ποντίκια με σύγχρονη πρωτογενείς όγκους υποδόρια. Αυτή η σχέση διατηρήθηκε στο σπλήνα, όπου ποντίκια που φέρουν μόνο μεταστάσεις εμφάνισαν σημαντικά περισσότερα κύτταρα από ποντίκια που φέρουν μη-όγκου, αλλά αυτό ήταν σημαντικά λιγότερα από τα ποντίκια με υποδόρια πρωτογενείς όγκους (Σχήμα 1ciii). Επειδή γνωρίζουμε ότι η εστιακή ακτινοθεραπεία ελέγχει τον πρωτοπαθή όγκο σε τοπικό επίπεδο, αλλά δεν ελέγχει μεταστάσεων, τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ακτινοβολία διατηρούν τόσο υπολειμματική τοπική νόσο τους

και

φορτίο όγκου πνεύμονα τους. Συνεπώς, αυτά τα δεδομένα είναι συνεπή με το συνδυασμό του υπολειμματικού τοπικών και μεταστατικής νόσου πρόληψη μυελοειδή αριθμούς επιστρέφοντας στην αρχική μετά από θεραπεία ακτινοβολίας, και είναι σύμφωνο με τις παρατηρήσεις που ακολουθούν τη χημειοθεραπεία [9] και χειρουργική εκτομή [9], [12].

Αυτή η επίδραση της θεραπείας με ακτινοβολία δεν περιορίστηκε στο μοντέλο 4Τ1. Το μοντέλο Panc02 παγκρεατικού αδενοκαρκινώματος του όγκου οδηγεί μυελοειδούς επέκταση με την εξέλιξη του όγκου, αν και σε μικρότερο βαθμό από ό, τι 4Τ1 (Εικόνα 1di). Η θεραπεία με ακτινοβολία των όγκων Panc02 προκάλεσε παροδική έλεγχο της ανάπτυξης του όγκου (Σχήμα 1dii), που ακολουθείται από ένα επιθετικό έκφυση [22]. Όπως θεραπεία του 4Τ1, ακτινοθεραπεία όγκων Panc02 είχε σαν αποτέλεσμα σημαντική μείωση στην περιφερική μυελοειδή κύτταρα (Εικ. 1diii). Μαζί, αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι κυτταροτοξική θεραπεία στοχεύουν πρωτογενούς όγκου προκαλεί μια συστημική, αν και παροδική αντιστροφή της μυελοειδούς επέκτασης οδηγείται από την ανάπτυξη του όγκου.

Στο ναδίρ των κυττάρων μυελοειδούς αίματος μετά την ακτινοθεραπεία, οι σπλήνες εμφανώς μικρότερο (Σχήμα 2α). Μετρήσαμε κύτταρα στον σπλήνα ως μέτρο της μυελοειδούς συστολή μετά από θεραπεία ακτινοβολίας, και ενώ η συνολική κυτταρικότητα σπλήνα μειώθηκε επτά ημέρες μετά την ακτινοθεραπεία, παρέμεινε σε ένα ενδιάμεσο μέγεθος – πολύ λιγότερο κύτταρα από τα ποντίκια χωρίς θεραπεία (ρ & lt? 0,01) και σημαντικά περισσότερα κύτταρα από ποντίκια χωρίς όγκους (ρ & lt? 0,01) (Σχήμα 2 Β Ι). Για να καθοριστεί εάν η μείωση στον αριθμό των συστημικών μυελοειδή προκλήθηκε από θεραπεία με ακτινοβολία ανεξάρτητα από αποτελέσματα επί του όγκου, ποντίκια που φέρουν όγκους 4Τ1 υποβλήθηκαν σε θεραπεία με ακτινοβολία με την ετερόπλευρη μη φέροντα όγκο πόδι. Οι ποντικοί που έλαβαν θεραπεία με ακτινοβολία στον όγκο που εμφανίζεται σημαντικά λιγότερες συνολικών κυττάρων σε σπλήνα από ποντίκια χωρίς θεραπεία ή έλαβαν αγωγή στο αντίπλευρο σκέλος (Σχήμα 2 Β Ι). CD11b

+ κυττάρων ήταν κατά πολύ τον μεγαλύτερο πληθυσμό στη διευρυμένη σπλήνα των ποντικών που φέρουν όγκο, και η CD11b

+ πληθυσμό στην σπλήνα έδειξε παρόμοια ενδιάμεσο αποτέλεσμα μετά από θεραπεία με ακτινοβολία του πρωτογενούς όγκου, με τα ποντίκια που έλαβαν θεραπεία με ακτινοθεραπεία όγκων εμφανίζουν σημαντικά λιγότερες CD11b

+ κυττάρων από ποντίκια χωρίς θεραπεία ή ποντίκια ακτινοβολούνται για τη μη φέροντα όγκο πόδι (Σχήμα 2 Β ΙΙ). Πάλι, παρά την μείωση που προκαλείται από την ακτινοβολία του όγκου, ποντίκια με αγωγή διατήρησε μία σημαντική ανύψωση σε μυελοειδή κύτταρα πάνω ποντίκια που φέρουν μη-όγκου και δεν υπήρχε σημαντική διαφορά μεταξύ ποντικών χωρίς θεραπεία και ποντικών ακτινοβολήθηκαν στο πόδι άνευ θεραπείας (Σχήμα 2 Β ΙΙ). Η παρόμοια μυελοειδή απόκριση στην ακτινοβολία του όγκου παρατηρήθηκε στο περιφερικό αίμα και στα αποτελέσματα σπλήνα σε μια στενή συσχέτιση μεταξύ αυτών των μέτρων, ανεξάρτητα από την κατάσταση του όγκου ή θεραπεία (Σχήμα 2c). Επειδή η θεραπεία με ακτινοβολία στον όγκο και στο αντίθετο άκρο θα ακτινοβολήσει την πισίνα του αίματος μέσω της θεραπείας, ότι η ακτινοθεραπεία που παραδίδεται στο απέναντι άκρο είναι να μην μειώνει μυελοειδή αριθμούς στη σπλήνα υποδεικνύει ότι η επίδραση επί μυελοειδών πληθυσμούς δεν οφείλεται στην άμεση επίδραση του ακτινοβολία επί μυελοειδών κυττάρων ή οποιωνδήποτε πιθανών διασποράς-δόσεις.

α) Φρέσκο ​​αποκόπηκε σπλήνες από d24 4Τ1 ποντικών BALB /c που φέρουν όγκο αφέθηκαν χωρίς θεραπεία (ΝΤ) ή κατεργασία που αρχίζουν την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστιακή ακτινοβολία (RT). Κουτιά που εμφανίζονται είναι ευρεία 3 cm. β) i) Συνολική σπλήνα κυτταρικότητα σε παρθένα ποντίκια (αριθ όγκου) και ποντικούς ημέρα 24 μετά την έγχυση του 4Τ1 αφεθεί χωρίς θεραπεία (Tumor ΝΤ) ή κατεργασία που αρχίζουν την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστιακής ακτινοβολίας στον όγκο (Tumor RT) ή στην αμέτοχος απέναντι άκρων (Tumor Leg RT). ii) Ο αριθμός των CD11b

+ κύτταρα ανά σπλήνα σε ποντικούς από το πείραμα που φαίνεται στο i). γ) Ο αριθμός των

+ κύτταρα CD11b στο σπλήνα συναρτήσει του αριθμού των CD11b

+ κύτταρα /μl περιφερικού αίματος κατά τη συγκομιδή για κάθε ομάδα όγκων και τη θεραπεία.

Η

Για να προσδιοριστεί εάν οποιαδήποτε ειδική μυελοειδή πληθυσμού που πλήττονται ιδιαίτερα από την ακτινοθεραπεία, είχαμε διενεργήσει επιπρόσθετες υπο-φαινοτυπική των περιφερικών κυττάρων μυελοειδούς αίματος. Το αντίσωμα αναγνωρίζει τόσο Gr1 Ly6G και Ly6C, και αντισώματα προς αυτούς τους δείκτες χρησιμοποιήθηκαν για να διακρίνει υποπληθυσμούς εντός CD11b

+ κύτταρα [6]. Σύμφωνα με την βιβλιογραφία, εντός του CD11b

+ Gr1

+ κυττάρων ήταν δύο σημαντικοί πληθυσμοί διακρίνονται από Ly6C και Ly6G: μια σαφώς διακριτή πληθυσμό Ly6G

-Ly6C

+ κύτταρα και ένα μεγάλο μέρος του πληθυσμού της Ly6G

+ κύτταρα που εμφανίζονται ποικίλες έκφραση Ly6C (Σχήμα 3ai-III). Μετά από θεραπεία με ακτινοβολία, υπήρξε μια προφανή απώλεια CD11b

+ Gr1

+ Ly6G

+ κυττάρων που εκφράζουν χαμηλότερα επίπεδα Ly6C (Σχήμα 3aiii). Χρησιμοποιώντας τους ελέγχους για τον εντοπισμό Ly6G

+ Ly6C

– κυττάρων (Σχήμα 3aiv) αποδείξαμε ότι η θεραπεία ακτινοβολίας στον όγκο οδήγησε σε σημαντική μείωση των CD11b

+ Gr1

+ Ly6G

+ κύτταρα που ήταν Ly6C

-. Αυτό δεν συνέβη, όταν το αντίθετο σκέλος είχε ακτινοβοληθεί (Σχήμα 3av). Για να χαρακτηρίσουμε τους πληθυσμούς αυτούς, εμείς ταξινομημένο αυτές υπο-φαινοτύπων από το περιφερικό αίμα των ποντικών που φέρουν όγκους 4Τ1 (Εικόνα 3b). Σε συμφωνία με τις προηγούμενες χαρακτηρισμούς [6], Ly6G

-Ly6C

+ κύτταρα είχαν μονοκυττάρων μορφολογία, Ly6G

+ Ly6C

+ είχαν την μορφολογία των ουδετερόφιλων και Ly6G

+ Ly6C

– κύτταρα είχαν τη μορφολογία των ώριμων ουδετερόφιλων. Παρομοίως, επιχρίσματα αίματος από ποντίκια που φέρουν όγκο κατέδειξε μία αξιοσημείωτη επέκταση σε ουδετερόφιλα, τα οποία μειώθηκαν σημαντικά μετά από θεραπεία με ακτινοβολία στον όγκο (Σχήμα 3c). Αυτά τα δεδομένα καταδεικνύουν ότι η θεραπεία ακτινοβολίας των αποτελεσμάτων όγκου σε ένα συγκεκριμένο αντιστροφή του όγκου με γνώμονα την επέκταση των ουδετερόφιλων.

α) Η κυτταρομετρία ροής φρέσκου πλήρους περιφερικού αίματος από i) παρθένα ποντίκια ή ποντίκια που φέρουν όγκους 4Τ1 ii) αφεθεί χωρίς θεραπεία ή iii) ακτινοβοληθεί, δείχνοντας Ly6C και Ly6G στο περιφραγμένο CD11b

+ Gr1

hi μυελοειδή πληθυσμούς. iv) Τα ιστογράμματα της έκφρασης Ly6C σε περιφραγμένη CD11b

+ Gr1

hiLy6G

+ κυττάρων, συμπεριλαμβανομένων χρώση αρνητικού ελέγχου (ΠΑΥ) και δείχνει το ποσοστό Ly6C

– σε ποντίκια που έχουν ακτινοβοληθεί στην όγκων (Tumor RT) ή το αντίθετο άκρο (Tumor Leg RT). v) Το ποσοστό των CD11b

+ Gr1

hiLy6G

+ κύτταρα που είναι Ly6C

– από την αφελή ποντίκια (αριθ όγκου) και τα ποντίκια την ημέρα 24 μετά την ένεση του 4Τ1 αφεθεί χωρίς θεραπεία (Tumor NT) ή επεξεργασμένα ξεκινώντας την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις 20 Gy εστιακής ακτινοβολίας στον όγκο (Tumor RT) ή το αμέτοχος απέναντι άκρου (Tumor Leg RT). Κάθε σύμβολο αντιπροσωπεύει έναν ποντικό. β) κυτταροσπίν των ταξινομημένων CD11b

+ Gr1

hi κύτταρα από ποντίκια χωρίς θεραπεία που είναι i) Ly6C

+ Ly6G

-, ii) Ly6C

+ Ly6G

+, ή iii) Ly6C

-Ly6G

+. Κάθε κυτταροπεριστροφής εμφανίζεται δίπλα από το οικόπεδο καθαρότητα είδος με αυξημένη μεγέθυνση στο κουτί ένθετο. γ) Wright-Giemsa χρώση των επιχρισμάτων D24 αίματος από i) παρθένα ποντίκια (αριθ όγκου) και ποντικούς ημέρα 24 μετά την έγχυση του 4Τ1 ii) αφεθεί χωρίς θεραπεία (Tumor ΝΤ) ή iii) κατεργάζεται ξεκινώντας από την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστίασης της ακτινοβολίας στον όγκο (Tumor RT). Το κουτί ένθετο περιστρέφεται και παρουσιάζεται αυξημένο μεγέθυνση. NS = Μη σημαντικό? * = P & lt? 0,05? ** = Ρ & lt? 0,01? *** = Ρ & lt? 0.005? **** = P & lt? 0.001. Δεδομένων αντιπροσωπεύει πολλαπλές αναπαραχθεί πειράματα? κάθε subfigure περιλαμβάνει δεδομένα από ένα διαφορετικό πείραμα αντίγραφο.

Η

Όγκου καθοδηγείται μυελοειδή επεκτάσεις που συνδέονται με την τοπική φλεγμονώδη περιβάλλον και μηχανικής έκφραση του GM-CSF [23] ή IL-1β [24] από τον καρκίνο κύτταρα έχει δειχθεί ότι οδηγούν μυελοειδή επέκτασης. Για να προσδιοριστεί αν η θεραπεία με ακτινοβολία επηρεάζεται μυελοειδή αριθμούς με διαμόρφωση αυτών των κυτοκινών, αναλύσαμε τα επίπεδα τους στον όγκο. Τα επίπεδα του GM-CSF, IL-1α, και IL-1β δεν μεταβλήθηκαν στον όγκο μετά από θεραπεία με ακτινοβολία (Σχήμα 4α). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι η ισορροπία αυτών των φλεγμονωδών κυτοκινών και αυξητικών παραγόντων στον όγκο δεν κατευθύνει την αλλαγή σε μυελοειδή αριθμούς. Αν και δεν μπορούμε να αποκλείσουμε ρύθμιση άλλων αυξητικών παραγόντων, είναι ίσως πιο σημαντικό ότι μετά την ακτινοθεραπεία οι πρωτογενείς όγκοι είναι σημαντικά μικρότερη από τη διάμετρο (Σχήμα 4bi) και το βάρος (Σχήμα 4bii). Εάν υπολογίσουμε τον αριθμό των κυττάρων στο σπλήνα ανά mg πρωτογενούς όγκου, δεν υπάρχει καμία διαφορά μεταξύ μη επεξεργασμένα και ακτινοβολημένα ποντίκια (Σχήμα 4biii). Έτσι, ακόμη και χωρίς ρύθμιση του αυξητικού παράγοντα στη θέση του όγκου, μια μικρότερη φορτίο του όγκου θα σημαίνει λιγότερες όγκου παράγοντες ανάπτυξης που λαμβάνονται για να επηρεάσουν τους αριθμούς μυελοειδή. Συνεπώς, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι μυελοειδή συστολή μετά από κυτταροτοξική και κυτταρομειωτική θεραπεία καθορίζεται κυρίως από τις διακυμάνσεις του αριθμού των καρκινικών κυττάρων.

α) δοκιμασία Στεφάνη για i) GM-CSF, ii) η IL-1α και iii) IL-1β σε ομογενοποιήματα των 4Τ1 όγκων κατά την ημέρα 24 μετά την ένεση του 4Τ1 αφεθεί χωρίς θεραπεία (ΝΤ) ή κατεργασία που αρχίζουν την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστιακής ακτινοβολίας στον όγκο (RT) ή το αμέτοχος απέναντι άκρου (RT Opp ). β) γραφήματα πρόκληση D24 παρακάτω όγκου δείχνουν i) διαμέτρου πόδι ii) το βάρος του όγκου και iii) σπλήνας ανά σπλήνα βάρους /όγκου για ποντίκια αφεθεί χωρίς θεραπεία (ΝΤ) ή θεραπεία αρχίζει την ημέρα 14 με 3 ημερήσιες δόσεις των 20 Gy εστιακής ακτινοβολίας (RT) . Σε κάθε γράφημα, το κάθε σύμβολο αντιπροσωπεύει ένα ποντίκι. NS = Μη σημαντικό? * = P & lt? 0,05? ** = Ρ & lt? 0,01? *** = Ρ & lt? 0.005? **** = P & lt? 0.001. Τα δεδομένα είναι αντιπροσωπευτικά τριών επαναληπτικών πειραμάτων.

Η

Υποπληθυσμοί των μυελοειδών κυττάρων από ποντίκια που φέρουν όγκο μπορεί να ασκήσει κατασταλτικά αποτελέσματα επί της λειτουργίας των Τ κυττάρων

in vitro

. Για το λόγο αυτό εξετάζεται Τ κυττάρων στη σπλήνα μετά από θεραπεία με ακτινοβολία. Λόγω μυελοειδή επέκταση στο σπλήνα, τα Τ κύτταρα συνθέτουν ένα μικρότερο ποσοστό των σπληνοκυττάρων? Ωστόσο συνολικός αριθμός CD8 Τ κυττάρων δεν ήταν διαφορετική σε ποντικούς που φέρουν όγκο ή μετά από θεραπεία με ακτινοβολία του όγκου (Σχήμα 5α). Αυτό CD8 Τ κύτταρα παραμένουν σταθερά ενώ μυελοειδή κύτταρα αυξάνουν ως αποτέλεσμα μια δραματικά λοξή μυελοειδή: αναλογία των Τ κυττάρων – στον σπλήνα ο δείκτης αυξάνεται από μία μέση τιμή περίπου 1,7 CD11b

+ ανά CD8

+ για 29 CD11b

+ ανά CD8

+ (p & lt? 0.001). Το αποτέλεσμα της ακτινοβολίας που προκαλείται από πτώση σε μυελοειδή κύτταρα είναι μία βελτίωση στην μυελοειδή: CD8 αναλογία στο σπλήνα – έως 20 CD11b

+ ανά CD8

+ (ρ & lt? 0,01) – γεγονός που υποδηλώνει μια κάπως βελτιωμένο δυναμικό για την κίνηση

de novo

ανοσολογικές αποκρίσεις. Σε συμφωνία με τα δεδομένα σε CD8 Τ κύτταρα, δεν υπήρξε καμία αλλαγή στον αριθμό των μη κανονιστικών CD4 Τ κύτταρα σε ποντικούς που φέρουν όγκο και υποβλήθηκε σε επεξεργασία ποντικούς σε σύγκριση με τους μάρτυρες (Σχήμα 5β). Ωστόσο, το φορτίο του όγκου και ακτινοθεραπεία συνοδεύεται από αύξηση του αριθμού των ρυθμιστικών κυττάρων Τ (Τ

reg) στον σπλήνα (5β Σχήμα), όπως μετριέται με CD4

+ κύτταρα που εκφράζουν CD25 και FoxP3 (Σχήμα S1 ). Είναι ενδιαφέρον ότι, η θεραπεία με ακτινοβολία αύξησε σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των CD8 Τ κυττάρων και μη ρυθμιστικών CD4 Τ κύτταρα (Σχήμα 5c), όπως μετράται με έκφραση του Κί67 (Σχήμα S1), υποδηλώνοντας ότι η ενδογενής ανοσοαποκρίσεις μπορεί να είναι πιο ενεργός στην σπλήνα μετά από θεραπεία με ακτινοβολία του πρωτογενούς όγκου.