Αφηρημένο

Ιστορικό

Η χειρουργική επέμβαση είναι η θεραπεία εκλογής για ασθενείς με μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) στάδια Ι-IIIA. Ωστόσο, περισσότερο από το 20% αυτών των ασθενών αναπτύσσουν υποτροπή και να πεθάνει λόγω της νόσου τους. Η απελευθέρωση των καρκινικών κυττάρων στο περιφερικό αίμα (ΚΜΑ) είναι μία από τις κύριες αιτίες της επανεμφάνισης του καρκίνου. Οι στόχοι αυτής της μελέτης είναι να προσδιορίσει την προγνωστική αξία της παρουσίας και τον χαρακτηρισμό των CTCs στο περιφερικό αίμα σε ασθενείς που υποβάλλονται σε ριζική εκτομή για NSCLC.

Ασθενείς και Μέθοδοι

56 ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ριζική χειρουργική επέμβαση για μη προθεραπευμένο ΜΜΚΠ εντάχθηκαν σε αυτή την προοπτική μελέτη. Περιφερικό δείγματα αίματος για ανάλυση CTC ελήφθησαν πριν και ένα μήνα μετά την επέμβαση. Εκτός ΚΜΑ ήταν φαινοτυπικά χαρακτηρίζεται από τον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) έκφρασης.

Αποτελέσματα

51,8% των ασθενών που αξιολογήθηκαν ήταν θετικά με την παρουσία των CTCs κατά την έναρξη. Μία μείωση στο ρυθμό ανίχνευσης CTCs παρατηρήθηκε σε αυτούς τους ασθενείς, ένα μήνα μετά την επέμβαση (32,1%) (ρ = 0,035). Ο μέσος αριθμός ΚΜΑ ήταν 3,16 ανά 10 ml (εύρος 0-84) προεγχειρητικά και 0,66 (εύρος 0-3) σε μετεγχειρητικούς προσδιορισμό. EGFR έκφραση βρέθηκε σε 89,7% των ασθενών κατά την έναρξη και σε 38,9% των ασθενών ένα μήνα μετά την επέμβαση. Η παρουσία της ΚΜΑ μετά την επέμβαση ήταν σημαντικά σχετίζεται με πρώιμη υποτροπή (p = 0,018) και μικρότερη επιβίωσης χωρίς νόσο (DFS) (p = 0.008). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση CTC παρουσία μετά την επέμβαση (HR = 5,750, 95% CI: 1,50 – 21,946, p = 0,010) και Ν κατάστασης (HR = 0,296, 95% CI: 0,091 – 0,961, p = 0,043) ήταν ανεξάρτητοι προγνωστικοί παράγοντες για την DFS .

Συμπέρασμα

ΚΜΑ μπορεί να ανιχνευθεί και η οποία χαρακτηρίζεται από ασθενείς που υποβάλλονται σε ριζική εκτομή για μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. Η παρουσία τους θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί για τον εντοπισμό ασθενών με αυξημένο κίνδυνο πρόωρης επανάληψης

Παράθεση:. Bayarri-Lara C, Ortega FG, Cueto Ladrón ντε Γκεβάρα Α, Puche JL, Ruiz Zafra J, de Miguel-Pérez D, et al. (2016) Κυκλοφορούν Tumor Cells εντοπίζουν έγκαιρα υποτροπών σε ασθενείς με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα καρκίνο που υποβάλλονται σε ριζική εκτομή. PLoS ONE 11 (2): e0148659. doi: 10.1371 /journal.pone.0148659

Επιμέλεια: Jeffrey Chalmers, το Ohio State University, Ηνωμένες Πολιτείες |

Ελήφθη: 28 του Οκτώβρη 2015? Αποδεκτές: 21, Ιανουαρίου, 2016? Δημοσιεύθηκε: 25 Φεβρουαρίου, 2016

Copyright: © 2016 Bayarri-Lara et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Όλη η δεδομένα είναι εντός του χαρτιού

Χρηματοδότηση:. η εργασία αυτή χρηματοδοτήθηκε από Fundacion de Investigacion Basica Alenjando Otero (www.Fibao.es) (MJS). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή δεδομένων και αναλύσεις, η απόφαση για τη δημοσίευση ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν ανταγωνιστικά συμφέροντα υπάρχουν

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα αποτελεί την πρώτη αιτία θανάτου που σχετίζονται με τον καρκίνο και για τους άνδρες και τις γυναίκες, ακόμα και σε πρώιμα στάδια αποτελέσματα παραμένουν φτωχά [1]. Παρά τη βέλτιστη χειρουργική θεραπεία περισσότερο από το 20% των ασθενών που χαρακτηρίζονται ως πρώιμα στάδια με συμβατικά κριτήρια, θα επαναληφθεί και τελικά πεθαίνουν από υποτροπιάζοντα μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) [2,3]. Αυτή η ομάδα των ασθενών με χειρότερη από ό, τι αναμενόταν πρόγνωση καθιστά αναγκαίο να βελτιωθεί η διαστρωμάτωση κινδύνου με πιο ευαίσθητα προγνωστικούς παράγοντες. Αυτές οι νέες προγνωστικοί παράγοντες πρέπει να είναι το αποτέλεσμα της καλύτερης κατανόησης της μεταστατικής διαδικασίας, άρρηκτα συνδεδεμένο με την ανίχνευση των CTCs.

Σε αυτό το πλαίσιο ολοένα και περισσότερες ενδείξεις δείχνουν ότι η πρώιμη υποτροπή σε εκτομή ασθενείς με NSCLC μπορεί να προκύψουν από κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων ( CTCs) που ρίχνουν από τον πρωτογενή όγκο στο αγγειακό σύστημα από την αρχή της κακοήθους διεργασίας. Η ανίχνευση αυτών των ΚΜΑ μπορεί να προσδιορίσει τους ασθενείς με υψηλό κίνδυνο υποτροπής και θα μπορούσε να είναι μια πιο συγκεκριμένη ένδειξη για επικουρική θεραπεία σε αυτούς τους ασθενείς [4].

προγνωστική αξία της CTC απαρίθμησης έχει δειχθεί σε διάφορους τύπους επιθηλιακών όγκων και μια χειρότερη επιβίωση έχει περιγραφεί σε ασθενείς με μεγαλύτερο αριθμό CTCs σε μαστού, του προστάτη και του παχέος εντέρου [5-8]. Στον καρκίνο του πνεύμονα περισσότερες κλινικές μελέτες έχουν επικεντρωθεί στην ανίχνευση CTCs σε ασθενείς με καρκίνο μεταστατικό ως προγνωστικός παράγοντας και ως βιοδείκτη της ανταπόκρισης στη θεραπεία [9]. Απομόνωση της ΚΜΑ σε πρώιμο στάδιο NSCLC είναι πιο δύσκολο και μόνο λίγα άρθρα μπορούν να βρεθούν γεγονός που υποδηλώνει ότι οι αριθμοί ΚΜΑ μπορεί να σας βοηθήσει να προβλέψουμε την πρόγνωση [10-13].

Πρόσφατα ευρήματα σχετικά ΚΜΑ δείχνουν ότι απλά καταμέτρηση σε ένα ορισμένο στιγμή μπορεί να μην είναι επαρκής [14,15]. Έχει αποδειχθεί ότι ΚΜΑ είναι στην πραγματικότητα ένας ετερογενής πληθυσμός και είναι γνωστό ότι οι γενετικές και φαινοτυπικά χαρακτηριστικά των καρκινικών κυττάρων που είναι γνωστό ότι αλλάζουν την πάροδο του χρόνου σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία. Ως εκ τούτου, όχι μόνο καταμέτρηση, αλλά και CTC χαρακτηρισμός θα πρέπει να εκτελείται σε διαφορετικές στιγμές κατά μήκος της παρακολούθηση. CTC χαρακτηρισμός μπορεί να συμβάλλει στην ταυτοποίηση διαφορετικών υποπληθυσμών του ΚΜΑ με διαφορετικές πιθανές επιπτώσεις στην πρόγνωση των ασθενών [14]. Επιπλέον CTC χαρακτηρισμός θα μπορούσε να παρέχει πληροφορίες σχετικά με γενοτυπικών και φαινοτυπικών χαρακτηριστικών ενός όγκου χωρίς την ανάγκη για μια επεμβατική βιοψία, για παράδειγμα, την ανίχνευση του υποδοχέα επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) μεταλλάξεις σε ασθενείς με NSCLC [15]. Παρ ‘όλα αυτά, πρέπει να ληφθεί υπόψη η ύπαρξη τυχόν ασυμφωνία μεταξύ των γονότυπων που λαμβάνεται με βιοψία του όγκου και του προσδιορισθέντος ΚΜΑ. Έχει περιγραφεί σε μια πρόσφατη μελέτη που σχετίζεται με αυτές τις ασυμφωνίες με τεχνολογικές διαφορές καθώς και τη δειγματοληψία διαφορετικών πληθυσμών των κυττάρων του όγκου [16].

Τα επιθηλιακά υποδοχέα αυξητικού παράγοντα (EGFR) έχει ταυτοποιηθεί σε διάφορους ανθρώπινους όγκους, συμπεριλαμβανομένων των καρκίνων του μαστού, των ωοθηκών, του στοματοφάρυγγα και του οισοφάγου, ενώ έχει προβλεφθεί η κακή έκβαση των ασθενών [17]. Μεταλλάξεις που οδηγούν σε υπερέκφραση EGFR ή υπερδραστηριότητα έχουν συσχετιστεί με έναν αριθμό καρκίνων, συμπεριλαμβανομένου του καρκίνου του πνεύμονα. Αυτές οι σωματικές μεταλλάξεις που περιλαμβάνουν EGFR οδηγούν σε συνεχή ενεργοποίηση του, η οποία παράγει ανεξέλεγκτη κυτταρική διαίρεση [18].

Ως εκ τούτου, μας ενδιαφέρει να εξερευνήσετε την παρουσία της ΚΜΑ και να προσδιοριστεί η έκφραση EGFR σε κέντρα θεραπείας χολέρας σε ασθενείς με NSCLC. ανίχνευση και χαρακτηρισμό CTC μπορεί να γίνει ένα πολύτιμο εργαλείο για να καθορίσει την πρόγνωση και να χρησιμεύσει ως μια βιοψία του όγκου σε πραγματικό χρόνο για την εξατομικευμένη θεραπεία του καρκίνου

Σε αυτό το πλαίσιο, πραγματοποιήσαμε αυτή τη μελέτη με τους ακόλουθους στόχους:. (i) καθορίσει αν ΚΜΑ είναι ανιχνεύσιμα σε ασθενείς που υποβάλλονται σε ριζική εκτομή για NSCLC, (ii) να χαρακτηρίσει φαινοτυπικά αυτές τις ΚΜΑ και (iii) να αξιολογήσει την προγνωστική σημασία της ανίχνευσης CTC σε αυτούς τους ασθενείς από την άποψη της υποτροπής και επιβίωσης χωρίς νόσο.

ασθενείς και Μέθοδοι

σχεδιασμός μελέτης και ασθενείς

με δεδομένο αυτό το φόντο πραγματοποιήσαμε μια προοπτική διαχρονική μελέτη κοόρτης από 56 ασθενείς με ΜΜΚΠ οι οποίοι υποβλήθηκαν σε θεραπευτική εκτομή στο Τμήμα Χειρουργικής θώρακος, Virgen de las Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο Nieves στη Γρανάδα (Ισπανία), από το Νοέμβριο του 2012 και Ιανουαρίου 2014. δείγματα περιφερικού αίματος συλλέχθηκαν πριν από τη λειτουργία (2-16 ώρες πριν) και ένα μήνα μετά την επέμβαση και στάλθηκαν σε Τζένιο Κέντρο (Κέντρο Γονιδιωματική και Ογκολογικό έρευνα βρίσκεται στη Γρανάδα) για την ανάλυση της CTC. δείγματα αίματος ελέγχου που προέρχονται από 16 υγιείς εθελοντές χωρίς ιστορικό κακοήθους νόσου. Ενημερωμένη συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή, και η μελέτη εγκρίθηκε από την τοπική επιτροπή δεοντολογίας. Διάμεση παρακολούθηση για όλους τους ασθενείς ήταν 16 μήνες (εύρος 3-23). Κλινικά αποτελέσματα αξιολογήθηκαν από την άποψη της υποτροπής και επιβίωσης χωρίς νόσο. Τα δεδομένα συλλέχθηκαν για την ηλικία, το φύλο, το κάπνισμα, η ιστολογική υπότυπο, SUV (τυποποιημένη τιμή πρόσληψης), η αξία των τομογραφία εκπομπής ποζιτρονίων-αξονική τομογραφία (PET CT), η χειρουργική προσέγγιση, η έκταση της εκτομής, παθολογικές στάδιο, επικουρική θεραπεία, την επιβίωση, και ανταπόκριση.

Όλοι οι 56 ασθενείς με NSCLC υποβλήθηκαν σε ανατομική εκτομή πνευμονικού και συστηματική λεμφαδένων με θεραπευτική πρόθεση. Πλήρης εκτομή ορίστηκε ως επίδειξη του καρκίνου χωρίς χειρουργικά όρια, τόσο κατάφωρα και ιστολογικά. Κανένας από αυτούς τους ασθενείς έλαβαν επαγωγή χημειοθεραπεία ή ακτινοθεραπεία. Ένα άλλο κριτήρια αποκλεισμού ήταν είτε ταυτόχρονη ή προηγούμενη κακοήθεια κατά τα προηγούμενα 5 χρόνια και το θάνατο μέσα σε 30 ημέρες λειτουργίας. Επιπλέον, προεγχειρητική αξιολόγηση περιλαμβάνεται το ιστορικό, τη φυσική εξέταση και εργαστηριακές και ακτινολογικές μελέτες, συμπεριλαμβανομένων PET CT.

Τα κλινικοπαθολογοανατομικών χαρακτηριστικά αυτών των 56 ασθενών συνοψίζονται στον Πίνακα 1.

Η

Το παθολογικό στάδιο προσδιορίστηκε σύμφωνα με την 7η έκδοση του συστήματος διεθνούς όγκου-node-μετάσταση (TNM). Η ιστολογική τους υποτύπους του καρκίνου του πνεύμονα είχαν ανατεθεί σύμφωνα με την ταξινόμηση του Παγκόσμιου Οργανισμού Υγείας.

Ένδειξη για την επικουρική θεραπεία ιδρύθηκε από την Τοπική Επιτροπή όγκων, σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές ASCO. Στην περίπτωση της επικουρικής θεραπείας που ξεκίνησε μετά τη δεύτερη εκχύλιση του αίματος.

Το πρόγραμμα παρακολούθησης ήταν το συνήθως εκτελούνται για την εκτομή NSCLC και αποτελούνταν από ένα πρώτο κλινικό επίσκεψη ένα μήνα μετά την επέμβαση, τότε κάθε 3 μήνες κατά το πρώτο έτος μετά την εκτομή και τέλος μία κάθε 6 μήνες από το δεύτερο έως το πέμπτο έτος. Τουλάχιστον μία αξονική τομογραφία θώρακος έγινε κάθε 6 μήνες και μια μελέτη PET-CT ανά έτος

Τοπική υποτροπή ορίστηκε ως εμφανιζόμενη στις ακόλουθες περιοχές:. Σύστοιχο πνεύμονα, βρογχικό κολόβωμα ή συνεχείς γραμμή, και οι περιφερειακές λεμφαδένες κόμβου (subcarinal, periesophageal, σύστοιχο ή ετερόπλευρη μεσοθωράκιο, υπερκλείδιους, ή hiliar λεμφαδένες).

απομακρυσμένη υποτροπή περιλαμβάνεται μεταστάσεις στο ετερόπλευρο πνεύμονα, το ήπαρ, τα επινεφρίδια, τον εγκέφαλο, οστά, ή άλλες τοποθεσίες. Μοτίβα επανάληψης προσδιορίστηκαν από την κλινική αξιολόγηση, ακτινολογική δοκιμής και συμπληρωματικά στοιχεία από βρογχοσκόπηση, βιοψία, και PET.

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας του Νοσοκομείου. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από όλους τους ασθενείς με καρκίνο και υγιείς εθελοντές σε αυτή τη μελέτη.

Στατιστική Ανάλυση

Οι ασθενείς θεωρήθηκαν CTC θετικό εάν τουλάχιστον μία CTC απομονώθηκε. ΚΜΑ αξιολογήθηκαν τόσο ως συνεχή μεταβλητή και ως δυαδική μεταβλητή (παρουσία /απουσία). Οι σχέσεις μεταξύ της ΚΜΑ και άλλες μεταβλητές εξακριβωθεί με ένα t-test και ANOVA (σύγκριση των μέσων) όταν CTC ήταν συνεχής και ακριβής δοκιμασία του Fisher, όταν CTC θεωρήθηκαν ως δυαδική μεταβλητή. Για να συγκρίνετε ΚΜΑ μετριέται σε δύο διαφορετικούς χρόνους χρησιμοποιήθηκε το signed-rank test Wilcoxon. Η επιρροή της CTC στην επιβίωση ελεύθερη νόσου μετρήθηκε με μονομεταβλητών μεθόδους (Kaplan-Meier) και διαδικασίες πολυπαραγοντική (Cox παλινδρόμησης). Κατά την επιλογή των μεταβλητών που πρέπει να περιλαμβάνονται στην πολυμεταβλητή παλινδρόμηση Cox, εφαρμόστηκε το κριτήριο της περισσότερο από μια αλλαγή 10% στην εκτίμηση του συντελεστή CTC [19].

Αρίθμηση και χαρακτηρισμός των CTCs από CK και της έκφρασης EGFR

Ένα σύνολο των 20 ml αίματος συλλέχθηκαν από κάθε δότη σε δύο σωλήνες συλλογής αίματος κυττάρων Αποθήκευση Συντηρητικά (Veridex, LLC, Johnson & amp? Johnson Company) ανίχνευσης CTC έγινε με θετική ανοσομαγνητική επιλογή. Τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία σύμφωνα με το πρωτόκολλο που έχουμε δημιουργήσει προηγουμένως [8] (S1 κειμένου)

Εν συντομία, τα δείγματα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με φυγοκέντρηση σε διαβάθμιση πυκνότητας (Histopaque 1119?. Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA ). Για τον εμπλουτισμό της CTC, χρησιμοποιήσαμε το καρκίνωμα των κυττάρων Εμπλουτισμός και Ανίχνευση κιτ με τεχνολογία MACS (Miltenyi Biotec, Μπέργκις Γκλάντμπαχ, Γερμανία). ΚΜΑ ταυτοποιήθηκαν με ανοσοκυτταροχημικές μεθόδους και οπτικοποιούνται υπό άμεσο οπτικό μικροσκόπιο για να εκτελέσει τη συνδυασμένη κυτταρομορφολογική και ανοσοφαινοτυπικές αξιολόγησης. CK-θετικά και EGFR-θετικά κύτταρα ταυτοποιήθηκαν με ανοσοϊστοχημεία (IHC) και τα σήματα ανιχνεύτηκαν με χρωμογόνου και φθορίζουσες ανίχνευση, αντίστοιχα [20] κύτταρα όγκου Επιθηλιακά ταυτοποιήθηκαν και απαριθμήθηκαν με βάση την κόκκινη χρώση τους για CK-θετικά κύτταρα και μπλε χρώση για EGFR-θετικά κύτταρα (Σχήμα 1).

γραμμή Α) T1975 κυττάρου όγκου. χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος για έκφραση EGFR Β) έλεγχο στην οποία οι πλάκες επωάζονται με αραιωτικό αντισώματος, χωρίς συμπεριλήφθηκε το πρωτογενές αντίσωμα. (C, D) Έκφραση των διαφορετικών δεικτών σε ασθενείς με μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα μέσω του συνδυασμού των χρωματισμένων CK + κύτταρα (κόκκινο) με EGFR (μπλε). EGFR-ειδικό ανοσοφθορισμό (IF) των κυκλοφορούντων καρκινικών κυττάρων (ΚΜΑ) προσδιορίστηκε με Alexa 355.

Η

Ειδική χρώση μπορεί εύκολα να διακριθεί λόγω της διαφορικής ενδοκυτταρική κατανομή των εξεταζόμενων μορίων και ο συνδυασμός της άμεσης και έμμεση, αν, προκειμένου να αξιολογήσει CK + /EGFR +.

Αποτελέσματα

ανίχνευση και συσχέτιση με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά

ΚΜΑ

ΚΜΑ εντοπίστηκαν στο περιφερικό αίμα του 51,8% των ασθενών κατά την έναρξη (CTC1) (29 από 56 ασθενείς) Είναι ενδιαφέρον, παρατηρήσαμε ότι το ποσοστό ανίχνευσης των CTCs σε αυτούς τους ασθενείς ήταν σημαντικά χαμηλότερο, ένα μήνα μετά την επέμβαση (CTC2) (18 ασθενείς, 32,1%) p = 0,034, απέδωσε από το Wilcoxon signed-rank δοκιμή. Ο μέσος αριθμός ΚΜΑ ήταν 3,16 ανά 10 ml (διάμεσος 1? Εύρος 0-84) προεγχειρητικά και μειώθηκε σε 0,66 (διάμεση τιμή 0? Εύρος 0-3) μετά την επέμβαση (S1 Πίνακας) (p = 0.051). Δυναμικές αλλαγές σε αριθμό ΚΜΑ προσδιορίστηκαν επίσης την παρατήρηση ότι οι περισσότεροι ασθενείς με ΚΜΑ κατά την έναρξη παρουσίασε μείωση του αριθμού ΚΜΑ (25 από 29) μετά από χειρουργική επέμβαση. Από την άλλη πλευρά, μόνο 11 ασθενείς παρουσίασαν αύξηση.

Η συσχέτιση μεταξύ της ΚΜΑ παρουσία και τα χαρακτηριστικά των ασθενών συνοψίζονται στον Πίνακα 2.

Η

Στην μονοπαραγοντική ανάλυση μόνο ο τύπος της εκτομής έδειξε σημαντική συσχέτιση με την παρουσία CTC μετά τη χειρουργική επέμβαση (P = 0,034). 4/4 ασθενείς υποβλήθηκαν σε πνευμονεκτομή εκτομή αλλάξει από CTC1 + για να CTC2-, ενώ 7 από 25 που είχαν έναν άλλο τύπο εκτομή άλλαξε σε CTC2-. CTC μετράνε στη δεύτερη ανίχνευση συσχετίστηκε με μέγιστη SUV της ΡΕΤ scan (β = 0,05 95%? 95% CI 0,001 έως 0,106, p = 0,046). Στην πολυπαραγοντική ανάλυση δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της παρουσίας CTC ή τον αριθμό και κάθε κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικό αναλύεται.

Χαρακτηρισμός του EGFR σε ΚΜΑ

Οι ΚΜΑ αναλύθηκαν επίσης για τον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) έκφρασης, EGFR έκφραση βρέθηκε σε 26 ασθενείς στη βασική γραμμή και σε 7 ασθενείς ένα μήνα αργότερα. Για CTC θετικών κρουσμάτων ποσοστό έκφραση EGFR ήταν 89,7% πριν και 39% μετά την επέμβαση. Δεν υπήρχε σημαντική συσχέτιση μεταξύ της ΚΜΑ EGFR + κατάσταση και τα χαρακτηριστικά κλινικο-παθολογικές.

προγνωστική σημασία της

ανίχνευσης ΚΜΑ

Κατά τη διάρκεια της παρακολούθησης 16 ασθενείς παρουσίασαν ενδείξεις υποτροπής του καρκίνου (28,6%). Ο διάμεσος χρόνος υποτροπής ήταν 8 μηνών, που κυμαίνονται μεταξύ 2 και 17 μήνες μετά την επέμβαση. Μοτίβο της επανάληψης ήταν: μακρινή 7, τοποπεριοχική 4 και τόσο 5. Για το σύνολο της κοόρτης 1 έτος ποσοστό DFS ήταν 76,6%. Σύνδεσης μεταξύ επανάληψη και πιο σημαντικό προγνωστικοί παράγοντες αναλύθηκαν (Πίνακας 3). Μόνο η παρουσία CTC μετά την επέμβαση ήταν σημαντικά σχετίζεται με πρώιμη υποτροπή, το 50% των ασθενών με ανιχνεύσιμα ΚΜΑ μετά τη χειρουργική επέμβαση (CTC2 +) ανέπτυξε μια υποτροπή σε σύγκριση με 18,4% για τους αρνητικούς ασθενείς CTC2 (p = 0,018). Όσον αφορά κομβικά επέκταση, Ν1-Ν2 θετικούς ασθενείς παρουσίασαν υψηλότερο ποσοστό υποτροπής από N0 patientes Παρ’ότι η διαφορά δεν ήταν σημαντική (p = 0.161).

Η

Λαμβάνοντας υπόψη μόνο τις θετικές ασθενείς ΚΜΑ, της έκφρασης EGFR σε ΚΜΑ Νόμιζα ‘t δείχνουν μια σημαντική συσχέτιση με υποτροπή του όγκου (Πίνακας 4) Στη δεύτερη ανίχνευση 28,6% του EGFR + CTC2 ασθενείς + παρουσίασε υποτροπή σε σύγκριση με το 63,4% του EGFR-CTC2 + ασθενείς, αλλά η διαφορά δεν ήταν siginificant (p = 0,335) (Πίνακας 4 )

EGFR1 = έκφρασης EGFR σε ΚΜΑ πριν από την επέμβαση. EGFR2 έκφραση = EGFR σε CTCs μετά την επέμβαση.

Η

Εκτός από τη CTC παρουσία μετά την επέμβαση (CTC2) σχετίστηκε με μικρότερη DFS, ένα έτος DFS ποσοστό του 51% σε σύγκριση με 87,7% για το CTC ομάδα αρνητικών μετά την επέμβαση (log rank test p = 0,008) (Εικόνα 2). Παρά το γεγονός ότι ο μέσος αριθμός των CTC μετά την επέμβαση ήταν μεγαλύτερη για τους ασθενείς με υποτροπή, η διαφορά δεν ήταν σημαντική (1 κύτταρο ανά 10 ml vs 0,5 ανά 10 ml, p = 0,13).

Kaplan-Meier καμπύλες της ελεύθερης νόσου επιβίωση σύμφωνα με την κατάσταση CTC πριν (Α) και ένα μήνα μετά την επέμβαση (Β). CTC1: παρουσία CTC πριν από την επέμβαση. CTC2:.. Παρουσία CTC μετά τη χειρουργική επέμβαση

Η

Η ανίχνευση της ΚΜΑ μετά το χειρουργείο συσχετίστηκε σημαντικά με βραχύτερη DFS σε ασθενείς που υποβάλλονται σε ριζική εκτομή για μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα

Προγνωστικοί παράγοντες για την επιβίωση ελεύθερη νόσου εντοπίστηκαν από την μονοπαραγοντική ανάλυση παλινδρόμησης αναλογικών κινδύνων κατά Cox (Πίνακας 5). Παράγοντες που σχετίζονται με το DFS που είχε ap ≤ 0,1 ήταν CTC παρουσία μετά το χειρουργείο (CTC2) (p = 0,014) και Ν κατάστασης (p = 0.07)

Η

Η Cox ανάλυση παλινδρόμησης αναλογικού κινδύνου πολυμεταβλητή προς τα εμπρός κατά βήματα, αποκάλυψε ότι η CTC παρουσία μετά την επέμβαση (HR, 5,75? 95% CI 1,50 έως 21,95? p = 0,01) και Ν κατάστασης (HR, 3,38? 95% CI 1.4 έως 10.9? p = 0,043) ήταν ανεξάρτητος προγνωστικός παράγοντας για την DFS (Πίνακας 6) .

Η

Συζήτηση

Η κλινική αξία της ανίχνευσης CTCs στο αίμα των ασθενών, γίνεται ολοένα και πιο σημαντική, καθώς η έρευνα του καρκίνου βιοδείκτη [14]. Ο κύριος στόχος της ανίχνευσης CTC σε πρώιμα στάδια NSCLC είναι να προσδιοριστούν οι ασθενείς με υψηλό κίνδυνο υποτροπής μετά από χειρουργική επέμβαση, προκειμένου να υιοθετήσουν την καλύτερη στρατηγική για τη θεραπεία και την παρακολούθηση.

Σε αυτή την προοπτική μελέτη βρήκαμε ότι η παρουσία CTC μετά από χειρουργική επέμβαση σχετίζεται με πρώιμη υποτροπή και μικρότερη επιβίωσης ελεύθερης νόσου σε ασθενείς με χειρουργική θεραπεία του NSCLC

στην ανάλυσή μας, στην οποία εντάχθηκαν 56 ασθενείς που είχαν υποβληθεί σε ριζική χειρουργική επέμβαση για μη προθεραπευμένο ΜΜΚΠ, ποσοστό ανίχνευσης ήταν σημαντικά χαμηλότερο μήνα μετά την εγχείρηση (32,14% έναντι 51,79% πριν από την επέμβαση, p = 0,034).

υπάρχουν μόνο λίγες μελέτες που αξιολογούν την προγνωστική σημασία της ανίχνευσης ΚΜΑ σε εκτομή NSCLC και ακόμα λιγότερο που εκτελούν μια δεύτερη ανίχνευσης μετά χειρουργική επέμβαση [10-13]. Σε μια μελέτη από Hofman et al. [10] συμπεριλαμβανομένων των I-IV στάδια χειρουργήσιμη ασθενείς, το ποσοστό ανίχνευσης είναι παρόμοια με τα δικά μας (49%). Εκτελούν μόνο μία ανίχνευση presurgery ΚΜΑ που απασχολούν μια τεχνική που βασίζεται σε απομόνωση από το μέγεθος (τεχνική ISET), και βρήκαν ότι μια καταμέτρηση CTC των 50 κυττάρων ή περισσότερων συσχετίζεται με χειρότερη συνολικά και επιβίωσης χωρίς νόσο. Σε μια άλλη μελέτη μικρής κλίμακας από Rolle et al. [11] 30 ασθενείς με NSCLC χειρουργήσιμη εξετάστηκαν χρησιμοποιώντας την τεχνική MAINTRAC, με βάση δοκιμασία κυτταρομετρίας. ΚΜΑ προσδιορίστηκαν 2 εβδομάδες και 5 μήνες μετά τη χειρουργική επέμβαση. Η καταμέτρηση ΚΜΑ συγκρίθηκε με την πρόγνωση και ασθενείς με συνεχώς αυξανόμενο το μεσαίο CTC-καταμέτρηση μετεγχειρητικά έδειξαν να είναι σε υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής.

Μόνο δύο προοπτικές μελέτες [12,13] χρησιμοποιώντας CellSearch συστήματος για την ανίχνευση CTCs, έχουν αναφερθεί μέχρι στιγμής η κλινική σημασία της ανίχνευσης ΚΜΑ στο περιφερικό αίμα πριν και μετά την επέμβαση. Ωστόσο, και οι δύο απέτυχαν να αποδείξουν οποιαδήποτε διαφορά, τόσο στην επιβίωση ή την επανάληψη. Και οι δύο αναλύθηκαν CTCs παρουσία στο αίμα αμέσως μετά την επέμβαση. Sawabata’s ομάδα [13] παρατήρησαν ότι ΚΜΑ εξαφανίστηκαν δέκα ημέρες μετά επιχειρήσεις. Στην πραγματικότητα, είναι καλά γνωστό ότι κατά τη διάρκεια χειρουργικής επέμβασης μπορεί να ρίξει στη ροή του αίματος ένας μεγάλος αριθμός των ΚΜΑ, αλλά δεν έχει αποδειχθεί ότι αυτά τα κύτταρα που εμπλέκονται στην ανάπτυξη των τυχόν μελλοντικών μεταστάσεων. Ένας αριθμός από αυτούς είναι αποπτωτικά και πολλά από αυτά θα πρέπει να εξαλειφθούν από το ανοσοποιητικό σύστημα [14]. Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο θεωρούμε ότι για μια πραγματική εκτίμηση της παρουσίας CTC μετά τη χειρουργική επέμβαση πρέπει να γίνεται η δεύτερη ανίχνευση τουλάχιστον 3 εβδομάδες μετά την επέμβαση

Πράγματι βρήκαμε μια σημαντική μείωση στο ποσοστό ανίχνευσης ΚΜΑ ένα μήνα μετά την επέμβαση.: ΚΜΑ δεν ανιχνεύθηκαν στο περιφερικό αίμα σχεδόν το 70% των ασθενών στο δεύτερο ανίχνευσης, και 25 από τους 29 ασθενείς με ΚΜΑ παρουσία κατά την έναρξη έδειξε μια μείωση του αριθμού CTC. Το εύρημα αυτό μπορεί να είναι ένας από τους λόγους που εξηγεί γιατί η χειρουργική επέμβαση παραμένει η καλύτερη θεραπευτική επιλογή σε πρώιμα στάδια.

Η παρουσία της ΚΜΑ ένα μήνα μετά τη ριζική εκτομή μπορεί να υποδεικνύει την παρουσία μιας άλλης πηγής της ΚΜΑ δεν αφαιρεθεί με χειρουργική επέμβαση, όπως αυτές ανιχνεύσιμο με συμβατικές μεθόδους.

σύμφωνα με αυτό, σε ασθενείς της μελέτης μας με ανιχνεύσιμα κέντρα θεραπείας χολέρας στο περιφερικό αίμα, ένα μήνα μετά την επέμβαση παρουσίασε μια χειρότερη πρόγνωση. Παρουσία της ΚΜΑ μετά την επέμβαση (CTC2) συσχετίστηκε με υποτροπή και DFS, έτσι ώστε CTC2 θετικούς ασθενείς παρουσίασαν υψηλότερο κίνδυνο υποτροπής (p = 0,018) και μικρότερη DFS. Η DFS επιτόκιο ενός έτους ήταν 51% σε CTC2 θετικούς ασθενείς σε σύγκριση με 87% για τους αρνητικούς ασθενείς CTC2 (log rank test p = 0,008). επίπεδο CTC ήταν υψηλότερη σε ασθενείς με υποτροπή, αλλά η διαφορά δεν ήταν siginificant (μέσος αριθμός 1 κύτταρο ανά 10 ml για ασθενείς με υποτροπή έναντι 0,5 ανά 10 ml για τους ασθενείς που δεν ανέπτυξαν μια υποτροπή, p = 0.13) .Η απλή παρουσία του τουλάχιστον ένα ΚΜΑ μετά τη χειρουργική επέμβαση (CTC2 +) ήταν σημαντικά σχετίζεται με την πρόγνωση των ασθενών σε χημικές αναλύσεις μας. Τα αποτελέσματά μας αντικατοπτρίζει το γεγονός ότι η παρουσία του μετά τη χειρουργική επέμβαση ΚΜΑ (HR, 5,75? 95% CI 1,50 έως 21,95? p = 0.01) και κομβικά κατάσταση (HR, 3,38? 95% CI 1.4 – 10.9? p = 0,043) είναι καλές ανεξάρτητο προγνωστικό παράγοντες για την DFS στην πολυπαραγοντική ανάλυση.

ΚΜΑ μετράνε στην μετεγχειρητική δείγματα έδειξαν μια σύνδεση με το μέγιστο SUV της ΡΕΤ scan (p = 0,046). Αυτή είναι η πρώτη φορά που αυτή η ένωση έχει αναλυθεί. Max Suv αξία των ΡΕΤ scan έχει συσχετιστεί με χειρότερη πρόγνωση και θα μπορούσε να σχετίζεται με υψηλότερο κίνδυνο μετεγχειρητικών CTCs παρουσία.

Εκτός από την ανίχνευση, ΚΜΑ χαρακτηρισμός θα μπορούσε να είναι σημαντικό να αξιολογηθεί πρόγνωση και τον τύπο της επικουρικής θεραπείας ή να καθορίσει την καλύτερη επιλογή θεραπείας για υποτροπή της νόσου. έκφραση EGFR ανιχνεύθηκε σε 89,7% και 38,9% των ΚΜΑ που απομονώνονται από δείγματα αίματος που λήφθηκαν πριν και μετά την επέμβαση, αντίστοιχα. Όσον αφορά την προγνωστική siginificance της έκφρασης EGFR βρήκαμε ότι το 28,6% των ασθενών με EGFR + CTC2 + παρουσίασαν υποτροπή σε σύγκριση με 63,6% για το EGFR-CTC2 +, αλλά η διαφορά δεν ήταν σημαντική. Σε ΚΜΑ μελέτη μας ανίχνευσης μετά την επέμβαση σχετίστηκε με χειρότερη πρόγνωση, αλλά EGFR χαρακτηρισμός δεν ήταν. Πιθανώς μια μελέτη μεγάλης κλίμακας μπορεί να προσδιοριστεί η επίδραση της έκφρασης EGFR σε αυτούς τους ασθενείς πρόγνωση.

Από την άλλη πλευρά, αξίζει να τονιστεί ότι οι τρέχουσες μεθοδολογίες μας επιτρέπουν να ανιχνεύσει μόνο το υποπληθυσμό ΚΜΑ θετικά για επιθηλιακών δεικτών, αλλά δεν υποπληθυσμών θετικά για έκφραση των δεικτών μεσεγχυματικών και με ένα ημι μεσεγχυματικά ή μεσεγχυματικά φαινότυπο. Οι φαινότυποι έχουν συσχετιστεί με την κακή πρόγνωση σε διαφορετικό τύπο όγκων [21] και ως εκ τούτου θα πρέπει να αναλυθεί σε μελλοντικές μελέτες προκειμένου να επιτευχθεί μια καλύτερη κατανόηση του ρόλου των προγνωστικών CTCs στον καρκίνο του πνεύμονα.

Για να μας γνώση, η μελέτη αυτή είναι η πρώτη μεγάλου όγκου δεδομένων που να επικυρώσει ΚΜΑ ως προγνωστικός δείκτης εκτέλεση ανίχνευσης μετά την επέμβαση και να αξιολογούν όχι μόνο τον κίνδυνο πρόωρης επανάληψης, αλλά και για να καθορίσει ΚΜΑ ως προγνωστικοί δείκτες με τον χαρακτηρισμό τους.

Εν κατακλείδι , τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι η ΚΜΑ μπορεί να ανιχνευθεί στο αίμα των ασθενών που υποβάλλονται σε χειρουργική επέμβαση για ριζική NSCLC. ανίχνευση CTC μετά την επέμβαση θα μπορούσε να είναι ένας σημαντικός προγνωστικός δείκτης που συμβάλλουν στον κίνδυνο διαστρωμάτωση με τον εντοπισμό ασθενών με υψηλότερο κίνδυνο πρόωρης επανάληψης. Περαιτέρω μελέτες δικαιολογείται να επικυρώσει τα αποτελέσματα αυτά.

Υποστήριξη Πληροφορίες

Πίνακα S1. ποσοστό ανάκτησης κέντρα θεραπείας χολέρας σε ασθενείς με καρκίνο του πνεύμονα

doi:. 10.1371 /journal.pone.0148659.s001

(DOCX)

S1 κειμένου. . Ανίχνευση και χαρακτηρισμός των CTCs απομονωθεί από ανοσομαγνητικά θετική επιλογή

doi: 10.1371 /journal.pone.0148659.s002

(DOCX)

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε τους ασθενείς για τους τη συμμετοχή στη μελέτη.