Αφηρημένο

Σκοπός

Η ανάπτυξη της αντίστασης ενάντια αντικαρκινικών φαρμάκων υπήρξε ένα επίμονο κλινικό πρόβλημα για τη θεραπεία του τοπικά προχωρημένου σταδίου κακοήθειες στο καρκίνωμα πλακωδών κυττάρων της κεφαλής και του λαιμού του βλεννογόνου προέρχεται (HNSCC) . Πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι η η πολυμεράση σύνθεση translesion DNA (TLS) (Pol η? Γονίδιο hRad30a) μειώνει την αποτελεσματικότητα της γεμσιταβίνης /σισπλατίνης. Ο στόχος αυτής της μελέτης είναι να εξετάσει τη σχέση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης Pol η και την παρατηρούμενη αντίσταση εναντίον αυτών των χημειοθεραπευτικών παραγόντων σε HNSCC, η οποία είναι προς το παρόν άγνωστη.

Μέθοδοι

Εξήντα τέσσερις βλεννογόνου προέρχεται πλακωδών κυττάρων καρκινώματα της κεφαλής και του τραχήλου (HNSCC) από το 1989 και το 2007 στο City of Hope Εθνικό Ιατρικό Κέντρο (Duarte, CA) Έγινε αναδρομική ανάλυση. δείγματα Προεπεξεργασία ανοσοχρωματίστηκαν με αντίσωμα η αντι-Pol και η συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης Pol η και κλινικά αποτελέσματα αξιολογήθηκαν. Σαράντα εννέα περιπτώσεις αντιμετωπίζονται με λευκόχρυσο (n = 40) ή γεμσιταβίνη (n = 9), με βάση τη χημειοθεραπεία περαιτέρω εξετάσθηκαν για επίπεδο έκφρασης Pol η προς σύγκριση με την απόκριση του ασθενούς στη χημειοθεραπεία.

Αποτελέσματα

Η έκφραση του Pol η ανυψώθηκε σε 67% των δειγμάτων όγκων της κεφαλής και του τραχήλου. επίπεδο έκφρασης Pol η ήταν σημαντικά υψηλότερη σε βαθμό 1 σε βαθμό 2 όγκους (και έως μετρίως διαφοροποιημένων). Το συνολικό ποσοστό οφέλους (πλήρης ανταπόκριση + μερική ανταπόκριση) σε ασθενείς που έλαβαν θεραπεία με πλατίνα και γεμσιταμπίνη χημειοθεραπεία με βάση ήταν 79,5%, όπου το επίπεδο η χαμηλή Pol συσχετίστηκε με υψηλό ποσοστό πλήρους ανταπόκρισης (p = 0.03), αν και δεν σχετίζεται με τη συνολική επιβίωση. Επιπλέον, δεν παρατηρήθηκε σημαντική συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης Pol η με το φύλο, την ηλικία, τον καπνό /ιστορία αλκοόλ, το στάδιο του όγκου και τη μεταστατική κατάσταση.

Συμπεράσματα

Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι η έκφραση Pol η μπορεί να είναι ένας χρήσιμος δείκτης πρόβλεψης για την αποτελεσματικότητα της πλατίνας ή γεμσιταβίνης βασίζεται θεραπεία για HNSCC.

Παράθεση: Zhou W, Chen Υ-W, Liu Χ, Chu P, Loria S, Wang Υ, et al. (2013) Έκφραση του DNA Translesion Σύνθεση πολυμεράσης η σε Κεφαλής και Τραχήλου πλακωδών κυττάρων του καρκίνου Προβλέπει Αντοχή σε Γεμσιταβίνη και Cisplatin χημειοθεραπεία με βάση. PLoS ONE 8 (12): e83978. doi: 10.1371 /journal.pone.0083978

Επιμέλεια: Olivier Gires, Πανεπιστήμιο Ludwig-Maximilians, Γερμανία

Ελήφθη: 25 του Ιουνίου του 2013? Αποδεκτές: 11 Νοεμ, 2013? Δημοσιεύθηκε: 20 του Δεκεμβρίου 2013

Copyright: © 2013 Zhou et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Το έργο υποστηρίχθηκε από ΝΙΗ RO1 112.446 για την KMC. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

βλεννογόνου προέρχεται πλακώδες καρκίνωμα της κεφαλής και του λαιμού (HNSCC) αναφέρεται σε μια ομάδα από βιολογικά παρόμοιο καρκίνων προήλθε από την βλεννογόνου πλακώδους επιθηλίου της ανώτερης αναπνευστικής οδού, συμπεριλαμβανομένης της χείλος, τη στοματική κοιλότητα, ρινική κοιλότητα, παραρρινικών κόλπων, του φάρυγγα και του λάρυγγα. HNSCC είναι η έκτη πιο συχνά εμφανιζόμενες καρκίνου παγκοσμίως και αντιπροσωπεύει το 2% του συνόλου των θανάτου από καρκίνο κάθε χρόνο. Σύμφωνα με την Αμερικανική Αντικαρκινική Εταιρεία, 36.540 Αμερικανοί είχαν διαγνωστεί με καρκίνο κεφαλής και τραχήλου, το 2011 και το 7880 έχασαν τη ζωή τους από την ασθένεια [1,2]. Οι περισσότεροι ασθενείς παρουσιάζουν λεμφαδένα μεταστατικής νόσου κατά τη στιγμή της διάγνωσης, και το ποσοστό πενταετούς επιβίωσης αυτών των ασθενών είναι περίπου 35% [3]? η οποία δεν έχει βελτιωθεί κατά την τελευταία δεκαετία [4]. Με βάση την πλατίνα συνδυασμό αγωγή, όπως η σισπλατίνη /οξαλιπλατίνη συν 5-FU και ταξοτέρης, είναι η τρέχουσα πρώτης γραμμής εισαγωγική χημειοθεραπεία για τοπικά προχωρημένο HNSCC [22]. Ωστόσο, η κακή ή μερική απάντηση με βάση την πλατίνα χημειοθεραπεία HNSCC παραμένει ένα αίνιγμα για τους ογκολόγους. ενώσεις λευκόχρυσου σχηματίζουν ενδοκλωνικά DNA ή διασταυρώσεις μεταξύ των κλάδων που μπλοκάρουν σοβαρά τη σύνθεση του DNA και να οδηγήσει σε μεταλλάξεις και απόπτωση [5]. Αυτά που προκαλείται από πλατίνα προσαγωγές επισκευαστεί από νουκλεοτίδιο σύστημα επιδιόρθωσης εκτομής (NER) [6,7] σύστημα, η επισκευή ασυμφωνία (MMR), και την επισκευή ανασυνδυασμού (RR) [8]. Επιπλέον, η σύνθεση translesion DNA (TLS) πολυμεράσες έχουν επίσης δειχθεί ότι έχουν την ικανότητα να παρακάμψει σισπλατίνη που προκαλείται από ενώσεις προσθήκης ενδοκλωνικά [9,11,39,40]. Αυτό υποδηλώνει πως οι πολυμεράσες παράκαμψης παρέχει έναν εναλλακτικό μηχανισμό με τον χειρισμό ένωση λευκόχρυσου προσαγωγές επαγόμενη DNA και μπορεί να συμβάλλει στην παρατηρούμενη αντίσταση εναντίον αυτών των ενώσεων [9,11]. Μεταξύ των DNA πολυμεράσες TLS, DNA πολυμεράσης η (Pol η? Γονίδιο hRad30a? Προϊόν Pigmentosum ξηροδερμίας παραλλαγή γονιδίου) είναι η μόνη με καλά κατανοητό βιολογική λειτουργία, η οποία είναι η αναπαραγωγή απέναντι το cis-syn διμερή κυκλοβουτανίου πυριμιδίνης (CPDS) εκείνη που προκαλείται από την υπεριώδη ακτινοβολία [10]. Γενετικές ανωμαλίες στο γονίδιο που κωδικοποιεί αποτελέσματα Pol η εν Pigmentosum ξηροδερμίας παραλλαγής (XP-V) της νόσου, και οι ασθενείς XP-V είναι πολύ ευαίσθητα σε ακτινοβολία UV και επιρρεπή στην ανάπτυξη του καρκίνου του δέρματος [10]. Pol η έχει επίσης δειχθεί ότι έχουν την ικανότητα να παρακάμψει ένα ευρύ φάσμα βλαβών DNA, όπως 7,8-διϋδρο-8-οξογουανίνη [15], (+] – trans-αντι-βενζο [α] πυρένιο-Ν2- dG [16], ακετυλαμινοφθορένιο-προσαγωγή γουανίνη [17], Ο6-μεθυλγουανίνη [18], και θυμίνη γλυκόλη [41].

Επιπλέον, έχει αποδειχθεί ότι η Pol μπορούν να ρυθμίσουν την κυτταρική ευαισθησία σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες [11]. Τα κύτταρα με ανεπαρκές Pol η που προέρχονται από ασθενείς XP-V ήταν πιο ευαίσθητα σε β-D-αραβινοφουρανοζυλοκυτοσίνη (κυταραβίνη, araC), γεμσιταβίνη, και σισπλατίνη [12]. Cellular και βιοχημικές αναλύσεις πρότεινε ότι η υψηλότερη ευαισθησία των XP -V κύτταρα σε αυτούς τους παράγοντες οφείλεται στην έλλειψη δραστηριότητας Pol η διευκόλυνση της επανάληψης της αντιγραφής παύση DNA που προκαλείται από θεραπευτικούς παράγοντες [13,14]. η Pol παρακάμπτει το PT-GG ενδοκλωνικά διασταυρωμένες ενώσεις προσθήκης με μία σχετική υψηλότερη απόδοση και πιστότητα, καθώς σε σύγκριση με άλλα ένζυμα TLS [42-44]. Μελέτες έχουν δείξει επίσης ότι το επίπεδο έκφρασης του Ροΐ η συσχετίζεται αρνητικά με την ευαισθησία στην cisplatin του μη μικροκυτταρικού κυτταρικές σειρές καρκίνου του πνεύμονα (NSCLC) [19]. Επιπλέον, η έκφραση της πρωτεΐνης Pol η προτάθηκε να αποτελεί ανεξάρτητο προγνωστικό δείκτη για την ανταπόκριση στη θεραπεία και την επιβίωση των ασθενών με μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα στομάχου που λαμβάνουν θεραπεία με οξαλιπλατίνη χημειοθεραπεία με βάση [20].

Στην παρούσα μελέτη, εξετάσαμε τις συσχετίσεις μεταξύ των

in situ

έκφραση των πρωτεϊνών Pol η και γνωστό προγνωστικούς παράγοντες, συμπεριλαμβανομένων στάσης και της διαφοροποίησης των όγκων. Εξετάσαμε επίσης τις συσχετίσεις μεταξύ της έκφρασης των πρωτεϊνών Pol η και απάντηση σε πλατίνα ή γεμσιταβίνη βάση χημειοθεραπεία και την επιβίωση σε HNSCC.

Υλικά και Μέθοδοι

Τα χαρακτηριστικά των ασθενών

μπλοκ όγκου για εξήντα τεσσάρων ασθενών που έχουν διαγνωστεί με προέρχονται βλεννογόνου πλακωδών κυττάρων καρκινώματα της κεφαλής και του τραχήλου (HNSCC) από το 1989 και το 2007 η City of Hope Εθνικό Ιατρικό Κέντρο (Duarte, CA) Έγινε αναδρομική ανάλυση. τμήματα του όγκου που περιλαμβάνονται όγκους του ρινοφάρυγγα, παραρρινίων κόλπων, της στοματικής κοιλότητας, του στοματοφάρυγγα, του υποφάρυγγα και λάρυγγα. Η διάμεση ηλικία των ασθενών ήταν 59 έτη (εύρος 39-78 έτη) κατά τη στιγμή της διάγνωσης. Οκτώ ασθενείς αποκλείστηκαν για ανάλυση επιβίωσης λόγω της έλλειψης των μακροχρόνιων μελετών παρακολούθησης. Η μέση περίοδος παρακολούθησης ήταν 56 μήνες (εύρος, 4,3 έως 142 μήνες). Μεταξύ των 64 ασθενών, 51 ήταν πρωτογενές HNSCC και 13 ήταν επαναλαμβανόμενες ή δεύτερου πρωτοπαθούς όγκου. Τριάντα τέσσερις ασθενείς υποβλήθηκαν σε ριζική χειρουργική επέμβαση, 49 ασθενείς έλαβαν χημειοθεραπεία (40 ασθενείς έλαβαν neoadjuvant σισπλατίνη, taxotere και 5-FU, 4 ασθενείς έλαβαν επίσης γεμσιταβίνη, και το υπόλοιπο 5 από τους ασθενείς εκτός λειτουργίας υποτροπιάζοντα καρκίνο έλαβε παρηγορητική χημειοθεραπεία (gemcitabine και υδροξυουρία). οι λεπτομέρειες για τα χαρακτηριστικά κλινικής συνοψίζονται στον πίνακα 1.

Χαρακτηριστική

ν

η POLη χρώση

P

α

η

Η χαμηλή

(%)

υψηλής

(%)

Η Ηλικία (έτη) & lt? 593312362164≥603192922710.73GenderFemale175291271Male47163431660.34T stage

b

,

c

T

19333667T

210330770T

3217331467T

41763511650.56N κατάσταση

β

Ν-7229571N + 57193338670.32Histological differentiationWell8008100Moderate337212679Poor2314619390.01TobaccoNo187391161Yes46143032700.63EtOHNo4416362864Yes2052515750.34ChemotherapyNo164251275Yes48173730630.2Table 1. κλινικοπαθολογικών παραμέτρων και της έκφρασης Pol η σε 64 HNSCC.

πιθανότητα στατιστικά σημαντική διαφορά (P) αναλύθηκε με χ

2 δοκιμών για την ανεξαρτησία.

b Οι ασθενείς ταξινομήθηκαν σύμφωνα με την κοινή αμερικανική Επιτροπή για τον Καρκίνο (AJCC) /Διεθνής Ένωση κατά του Καρκίνου (UICC) ΠΟΥ ταξινόμησης του συστήματος και από την παρουσία ή την απουσία του λεμφαδένα μετάσταση (Ν κατάστασης).

C στάδιο Τ 7 ασθενείς »δεν θα μπορούσε να είναι determined.Data εκπροσωπείται ποσοστά περιπτώσεις με χαμηλή ή υψηλή έκφραση η Pol σε κάθε παράμετρο, και η αντιπροσωπεύει απόλυτος αριθμός περίπτωση κάθε παράμετρο. Πιθανότητα στατιστική διαφορά (Ρ) αναλύθηκε με χ

2 δοκιμών για την ανεξαρτησία. οι ασθενείς ταξινομήθηκαν ανάλογα με τη Μικτή Επιτροπή αμερικανική για τον Καρκίνο (AJCC) /Διεθνής Ένωση κατά του Καρκίνου (UICC) ΠΟΥ σύστημα ταξινόμησης και από την παρουσία ή την απουσία του λεμφαδένα μετάσταση (Ν κατάστασης). CSV Κατεβάστε CSV

πληροφορίες και δείγμα ιστού συλλογής όλους τους ασθενείς »εγκρίθηκαν από το IRB επιτροπή (πρωτόκολλο # 95917) στο City of Hope Εθνικό Ιατρικό Κέντρο και το Ινστιτούτο Beckman Research, CA. Πληροφορίες σχετικά με την κλινική έκβαση και την ανταπόκριση στη χημειοθεραπεία λήφθηκε από επανεξέταση γράφημα νοσοκομείο και ρεκόρ κλινικό πρωτόκολλο. Οι ασθενείς είχαν ανεβεί σύμφωνα με το σύστημα ταξινόμησης ΤΝΜ από την αμερικανική μεικτής επιτροπής για τον Καρκίνο (AJCC). Επιβίωσης ελεύθερης νόσου ορίστηκε ως ο χρόνος από την ημερομηνία επιβεβαιωμένη διάγνωση με τελευταία ημερομηνία επαφής και λογοκρίθηκε στο επαναλαμβανόμενο ημερομηνία. καρκίνωμα των πλακωδών κυττάρων βαθμολογήθηκε με τη χρήση πολυ-παραγοντικό σύστημα βαθμολόγησης ANNEROTH είναι: G1-καλά διαφοροποιημένο, G2-μετρίως διαφοροποιημένων, G3-κακώς διαφοροποιημένο, G4-αδιαφοροποίητο. Η κλινική ανταπόκριση στη χημειοθεραπεία αξιολογήθηκαν με μείωση του μεγέθους του όγκου και την κατάσταση λεμφαδένων του λαιμού για την υπολογιστική τομογραφία πριν και μετά τη χημειοθεραπεία, σύμφωνα με τα κριτήρια απόκρισης Αξιολόγηση σε συμπαγείς όγκους (κριτήρια RECIST) [21] ως εξής: πλήρης απόκριση (CR) = 100 % υποχώρησης της νόσου? μερική ανταπόκριση (PR), ≥30% μείωση στο άθροισμα του μακρύτερου διάμετρο των στόχων? προοδευτική disease≥ αύξηση 20%? και σταθερή νόσο (SD) = τα υπόλοιπα. Παθολογικά πλήρη απόκριση (PCR) ορίστηκε ως απουσία οποιασδήποτε μακροσκοπικές ή μικροσκοπικές ενδείξεις υπολειμματικού όγκου σε χειρουργικά ή δείγμα βιοψίας μετά τη χημειοθεραπεία. Δεδομένου ότι η PCR ήταν παρατηρήθηκε μόνο σε τέσσερις ασθενείς, ως εκ τούτου, μόνο η κλινική απόκριση χρησιμοποιήθηκε για στατιστική ανάλυση.

Δείγματα ιστών και αντίσωμα

δειγμάτων HNSCC (n = 64) και paracancer φυσιολογικού πλακώδους βλεννογόνου ιστούς πριν από τη χημειοθεραπεία ελήφθησαν από ασθενείς που υποβάλλονται σε λειτουργία για την εκτομή καρκίνωμα ή τομής /βιοψία δι ‘εκτομής με τη γραπτή συγκατάθεση των ασθενών από τον Ιανουάριο του 1989 έως τον Ιούνιο του 2007. Εννέα από τους εξήντα τέσσερις μετα-χημειο ιστούς όγκων συγκρίθηκαν επίσης. Η ιστολογική διαβάθμιση αξιολογήθηκε σύμφωνα με το 1987 της Διεθνούς Ένωσης κατά του Καρκίνου (UICC). Το αντίσωμα η αντι-Pol δημιουργήθηκε με ανοσοποίηση κουνελιών με υψηλής καθαρότητας Ν-τερματικό πεδίο της ανθρώπινης πρωτεΐνης Pol η (αμινοξύ 1 έως 513, βλέπε Σχήμα 1a). Το πολυκλωνικό αντίσωμα καθαρίστηκε με χρήση στήλης πρωτεΐνης G. Το αντίσωμα εξειδίκευση αξιολογήθηκε με κηλίδωση Western και δοκιμασία αποκλεισμού (Σχήμα 1β και 1γ).

Α) Το Ν-τερματικό θραύσμα του Ροΐ η (επισημαίνεται με γκρι χρώμα) που χρησιμοποιείται για την παραγωγή ενός αντισώματος η αντι-Pol. Β) Η αναπτυχθείσα αντίσωμα που χρησιμοποιείται για την ανίχνευση του Pol η στα προϊόντα λύσης που λαμβάνονται από κύτταρα GM637 ή XP30RO. Γ) Lane 1. Στοιχεία Pol η από το λύμα από ανθρώπινα κύτταρα HCT116. Lane 2. Αποκλεισμός με καθαρισμένη ανασυνδυασμένη πρωτεΐνη η ανθρώπινη Pol. Δ) 1-3, GM 637 κύτταρα ανιχνεύθηκαν με δευτερεύον αντίσωμα μόνο (D2 και D3). 4-6, τα κύτταρα GM637 ανιχνεύθηκαν με αντίσωμα αντι-Pol η (D5) ή αντίσωμα αντι-ΡΟΝΑ (D6). 7-9, XP30RO κύτταρα ανιχνεύθηκαν με αντίσωμα αντι-Pol η (D8) ή αντι-ΡΟΝΑ αντισώματος (D9).

Η

Western ανάλυση κηλίδος

κηλίδος Western διεξήχθη όπως περιγράφηκε προηγουμένως [1]. Εν συντομία, 20-μg του συνολικού κυτταρικού λύματος διαχωρίστηκε με 10% SDS-PAGE, πριν μεταφέρθηκαν σε μια μεμβράνη νιτροκυτταρίνης (Bio-Rad Laboratories, CA) και επωάστηκαν με ρυθμιστικό διάλυμα μπλοκαρίσματος (1% Ι-Block αντιδραστήριο και 0.1% Tween 20) που περιέχει Pol η πρωτογενές αντίσωμα όλη τη νύκτα στους 4 ° C. Η μεμβράνη πλύθηκε με PBS με 0,1% Tween 20 για 3-5 φορές πριν επωάστηκαν με φθορίζουσα σήμανση δευτερεύοντα αντισώματα για επιπλέον 60 λεπτά. Μετά διαδοχικές εκπλύσεις, τα σήματα επί των μεμβρανών σαρώθηκαν με μια οδύσσεια Infrared System Imaging (LI-COR Biosciences) ή ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας ένα σύστημα Fuji LAS-1000 απεικόνισης.

Η ανοσοϊστοχημεία

Ανθρώπινο GM637 άγριου τύπου και ανεπαρκή κύτταρα XP30RO του Pol η χρησιμοποιήθηκαν για την επικύρωση το αντίσωμα που αναπτύχθηκε στο εργαστήριο. Εν συντομία, τα πολλαπλασιαστικά κύτταρα μονιμοποιήθηκαν με 4% paraformahyde σε PBS που ακολουθείται από επώαση με ρυθμιστικό διάλυμα διαπερατότητας (0,5% σαπωνίνη, 0,1% BSA και 0,1% ΝαΝ3 σε PBS) σε θερμοκρασία δωματίου για 30 λεπτά πριν από την προσθήκη πρωτογενών αντισωμάτων στο ρυθμιστικό διαπερατότητας για επιπλέον 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Τα πρωτογενή αντισώματα απομακρύνθηκαν με έκπλυση των κυττάρων τρεις φορές με ρυθμιστικό διαπερατότητας πριν από την προσθήκη του DyLight 488 ή 549 DyLight συζευγμένα δευτερογενή αντισώματα (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.) για επιπλέον 1 ώρα. Τα κύτταρα εξετάστηκαν με τη χρήση ομοεστιακού μικροσκοπίου (Biorad).

Για την έκφραση του Pol η σε τμήματα ιστού ενσωματωμένα σε παραφίνη που λαμβάνονται από ασθενείς, ανοσοϊστοχημική χρώση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας 4-μm πάχους τομές που παρασκευάζονται από φορμαλίνη μπλοκ. Τομές ιστού αποπαραφινοποιήθηκαν σε ξυλόλιο ακολουθούμενο από 100% αιθανόλη. Τα δείγματα στη συνέχεια σβήστηκε σε υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% και σε προεπεξεργασία για την προώθηση της ανάκτησης αντιγόνου στον ατμό με διάλυμα EDTA. Μετά ανάκτηση αντιγόνου, τα πλακίδια επωάστηκαν σε Protein Block (DAKO, Carpinteria, CA) για 5 λεπτά ακολουθούμενη από επώαση με πρωτογενή αντισώματα η αντι-Pol επί 30 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου. Τα πλακίδια πλύθηκαν έπειτα σε ρυθμιστικό Dako και επώαση με ϋΑΚΟ Envision με δευτερογενές αντίσωμα αντι-κουνελιού Polymer (ϋΑΚΟ, Carpinteria, CA) για επιπλέον 30 λεπτά. Μετά πλύσεις σε ρυθμιστικό Dako, πλακίδια επωάστηκαν με το χρωμογόνο διαμινοβενζιδίνη τετραϋδροχλωρική (DAB, Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ), αντίθετα με αιματοξυλίνη, και τοποθετημένα.

Η χρώση του Ροΐ η αξιολογήθηκε με μέτρηση θετικών πυρηνική χρώση των κυττάρων. Σε γενικές γραμμές, η χρώση του Ροΐ η ήταν τραγανή, με ελάχιστη φόντο χρώση paratumor στρωματικών κυττάρων όπως φαίνεται στο Σχήμα 1. Ένα σύνολο 20 πεδία υψηλής ισχύος μετρήθηκαν για κάθε δείγματα, και το ποσοστό των θετικών πυρήνων των κυττάρων του όγκου μετρήθηκε για κάθε περίπτωση (μεγέθυνση × 400, μέγεθος πεδίου 0,18 χιλιοστών

2) σε περιοχές με πιο θετικό πυρήνες (hot spots). Πυρηνική ανοσοαντιδραστικότητα βαθμολογήθηκε με βάση την ένταση χρώσης και χρώση βαθμό, και βαθμολογήθηκε χρησιμοποιώντας ένα σύστημα βαθμολόγησης δύο βαθμίδων: χαμηλή έκφραση: πυρηνική χρώση σε & lt? Καρκινικών κυττάρων κατά 30%? και υψηλή έκφραση: πυρηνική χρώση σε & gt? 30% των κυττάρων του όγκου. Όλες οι περιπτώσεις βαθμολογήθηκαν τυφλά από τρεις παρατηρητές και παρουσίασαν μεταξύ των αξιολογητών (Συντελεστής ενδο-class Συσχέτιση, α του Cronbach = 0,82) αξιοπιστία.

Στατιστική Ανάλυση

Η σχέση μεταξύ της έκφρασης και κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά Pol η εξετάστηκε με ένα τεστ chi-square και ακριβή τεστ του Fisher. Μονοπαραγοντική ανάλυση επιβίωσης ελεύθερης νόσου έγινε με ανάλυση Kaplan-Meier (δοκιμασία log-rank). Η πολυπαραγοντική ανάλυση διεξήχθη με ανάλογο μοντέλο κινδύνου του Cox ρύθμισης για τα μεγάλα κλινικοπαθολογική παραμέτρους. Οι τιμές Ρ (διπλής όψης) μικρότερη από 0.05 θεωρήθηκαν ως στατιστικά σημαντική. Όλα τα δεδομένα αναλύθηκαν με τη χρήση του στατιστικού λογισμικού JMP, Version 9 (Cary, NC).

Αποτελέσματα

Επικύρωση

αντίσωμα αντι-Pol η

αντισώματος του αντι-Pol η αναπτύχθηκε από την ανοσοποίηση του κουνελιού με τον τομέα της πολυμεράσης Pol η υψηλής καθαρότητας ανθρώπινη εντός του Ν- τερματικό (1-513 αμινοξέα, Σχήμα 1α), οι λεπτομερείς διαδικασίες που περιγράφονται στα Υλικά και Μέθοδοι. Για να δοκιμαστεί η εξειδίκευση του αντισώματος που αναπτύχθηκε, χρησιμοποιήσαμε αυτό το αντίσωμα για την ανίχνευση της παρουσίας του Ροΐ η χρήση κυτταρολύματα από τα ανθρώπινα κύτταρα ινοβλαστών GM637 ή τα κύτταρα ινοβλαστών XP30RO που προέρχονται από ασθενείς XP-V. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1β, το αντίσωμα αναγνωρίζεται μια πρωτεΐνη ~ 80 kDa από τις κυτταρολύματα GM637 που ταιριάζει με το μοριακό βάρος του Pol η αλλά η ίδια πρωτεΐνη ζώνη δεν ανιχνεύθηκε στα κυτταρικά λύματα XP30RO. Για την προώθηση αυτού του αποτελέσματος, μία δοκιμασία ανταγωνισμού χρησιμοποιώντας ένα υψηλής καθαρότητας Ν-τερματικό θραύσμα του Ροΐ η να ανταγωνιστεί με την ενδογενή η κυτταρική Pol διεξήχθη επίσης. Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1γ, το αντίσωμα η αντι-Pol αναγνωρίζονται ειδικά δεσπόζουσα πρωτεϊνική ζώνη στα ~ 80 kDa, η οποία είναι συνεπής με το μοριακό βάρος του Pol η. Στην ανταγωνιστική ανίχνευση (Σχήμα 1γ, λωρίδα 2), αυτό αναγνωρίζεται πρωτεϊνική ζώνη εντελώς αποκλεισμένη από την καθαρισμένη ανθρώπινη η Pol, υποδεικνύοντας την ανέπτυξαν αντίσωμα η αντι-Pol έχει υψηλή εξειδίκευση για την αναγνώριση των ανθρώπινων Pol η. Για να επιβεβαιωθεί περαιτέρω η ειδικότητα αυτού του αντισώματος, πραγματοποιήσαμε μια μελέτη IHC χρησιμοποιώντας άγριου τύπου ανθρώπινη GM637 και κύτταρα ινοβλαστών XP30RO προέρχεται από έναν ασθενή XP-V. Όπως φαίνεται στην Εικόνα 1D 5, το αντι-Pol η αντίσωμα αναγνώρισε Pol η στους πυρήνες των κυττάρων GM637 αλλά όχι σε κύτταρα με ανεπαρκές XP30RO του Pol η (Σχήμα 1 D 8). Ως εσωτερικός έλεγχος, η πυρηνική πρωτεΐνη αντι- πολλαπλασιαζόμενων κυττάρων (PCNA) ήταν θετικά σήματα στις δύο κύτταρα (Σχήμα 1D. 6 και 9). Δεν ανιχνεύθηκαν σήματα όταν μόνο δευτερεύον αντίσωμα ήταν παρούσα (Σχήμα 1D 2-3). Αυτά τα αποτελέσματα επιβεβαίωσαν περαιτέρω την ειδικότητα του αντι-αντισώματος Pol η.

Η έκφραση του Pol η συσχετιζόταν θετικά με τη διαφοροποίηση στο HNSCC

Η σχέση μεταξύ κλινικοπαθολογοανατομικές παραμέτρων και της έκφρασης Pol η διερευνήθηκε και τα αποτελέσματα εισήχθησαν στον πίνακα 1. παρατηρήθηκε μία σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του Pol η ιστολογική και βαθμού HNSCC (ρ & lt? 0,01). Επιπλέον, τα ποσοστά του επιπέδου Pol η υψηλή έκφραση βρέθηκε να συσχετίζεται με την διαφοροποίηση των HNSCC από φτωχές, μετριάστηκε με καλά, καθώς τα ποσοστά του επιπέδου Pol η υψηλή έκφραση ήταν 39, 79, και 100%, αντίστοιχα. Άλλες παράμετροι κλινικοπαθολογοανατομικές συμπεριλαμβανομένης της ηλικίας των ασθενών κατά τη διάγνωση, το φύλο, το στάδιο Τ, Ν στάδιο και την ιστορία του καπνού /αλκοόλης αξιολογήθηκαν επίσης, αλλά δεν παρατηρήθηκε στατιστική σημαντικότητα.

Ανοσοβαφή Pol η σε φυσιολογικά πλακώδη επιθηλιακού ιστού και HNSCC

επίπεδο έκφρασης του Pol η σε HNSCC ιστό σε σύγκριση με το μη καρκινικό βλεννογόνου πλακώδες επιθήλιο (Εικόνα 2). Όπως φαίνεται, η Pol είναι παρούσα στα βασικά και παραβασικών στρώματα του φυσιολογικού πλακώδους επιθηλίου. Στο διάμεσο ιστό, μόνο ίχνη ποσότητα του Ροΐ η ανιχνεύθηκε στα στρωματικά κύτταρα. έκφραση ενός υψηλού Pol η παρατηρήθηκε στα βλαστικά κέντρα, το οποίο είναι σύμφωνο με προηγούμενες μελέτες και ο ρόλος της στη σωματική υπερμετάλλαξη στο βλαστικό κέντρο [45-47]. Σε σύγκριση με την κανονική πλακώδες επιθήλιο, παρατηρήθηκε ένα αυξημένο επίπεδο έκφρασης Pol η στα καρκινώματα πλακωδών κυττάρων της κεφαλής και του λαιμού όπως 43 64 καρκινώματα (67%) δείγματα έδειξαν θετικά λεκέ. Πλακώδες καρκίνωμα κυτταρική διαφοροποίηση είναι ένα χαρακτηριστικά πιο ευδιάκριτη η παρουσία ή απουσία της κερατινοποίησης. Κερατινώσεως λαμβάνει χώρα με τη μορφή της κερατίνης μαργαριτάρια και μαζεύεται προς το κέντρο του κυττάρου καρκινώματος φωλιές. Τα κύτταρα καρκινώματος στο κέντρο συχνά επιδεικνύουν μία αυξημένη φαινότυπο διαφοροποίησης από τις ακμές των φωλιών [55]. Αν και χρώση Pol η ήταν υψηλότερη σε καλά διαφοροποιημένο καρκίνωμα, καμία επιλεκτική εντόπιση του Ροΐ η στις φωλιές όγκου παρατηρήθηκε [23]. Το επίπεδο έκφρασης του Ροΐ η σε κύτταρα καρκινώματος που κάνει μετάσταση στους λεμφαδένες Εξετάστηκε επίσης και παρόμοιο επίπεδο έκφρασης παρατηρήθηκε ως σύγκριση με τις αντίστοιχες πρωτοταγείς θέσεις (Σχήμα 2). Μια άλλη ενδιαφέρουσα παρατήρηση ήταν ότι οι μιτωτικά καρκινικά κύτταρα παρουσίασαν χαμηλή έκφραση Pol η, η οποία ήταν σύμφωνη με το γεγονός ότι η Pol απαιτείται κυρίως κατά G1 /S φάσης [48-50].

Α) Πυρηνική χρώση Pol η στην κανονική πλακώδες επιθήλιο ως μάρτυρες. Β) Σύγκριση του επιπέδου χρώσης Pol η μεταξύ HNSCC και παρα-καρκίνου του φυσιολογικού πλακώδους επιθηλίου στην στοματική κοιλότητα. Ο-Ε) HNSCC πυρηνική έκφραση Pol η ταξινομήθηκε ως αρνητικό (C), χαμηλή (D) και υψηλή, σύμφωνα με τη συχνότητα και την ένταση των χρωματισμένων κυττάρων. F-G) Σύγκριση της χρώσης Pol η σε πρωτογενή καρκίνο σε μαλακή υπερώα (F) και μεταστατικά καρκινικά κύτταρα να λεμφαδένα (G). (Ανοσοϋπεροξειδάσης, αρχική μεγέθυνση: × 100 (ΑΒ), × 200 (CG)).

Η

Τροποποίηση του Pol η επίπεδα πρωτεΐνης σε απάντηση βασισμένη στο λευκόχρυσο-χημειοθεραπεία

Για να προσδιοριστεί εάν πλατίνα χημειοθεραπεία βασισμένη αλλοιωμένο επίπεδο έκφρασης Pol η, τα δείγματα από τους ίδιους ασθενείς HNSCC πριν και μετά την χημειοθεραπεία αναλύθηκαν και συγκρίθηκαν (n = 9, Εικόνα 3 και Πίνακας 2). Βρήκαμε 6/9 HNSCC (67%) είχαν παρόμοια ή αυξημένη έκφραση του Pol η μετά τη χημειοθεραπεία (συμπεριλαμβανομένων μία περίπτωση που ήταν σχεδόν αρνητική έκφραση Pol η πριν από τη χημειοθεραπεία) και 3/9 (33%) έχουν μειωμένη έκφραση Pol η μετά τη χημειοθεραπεία . Η επίδραση της χημειοθεραπείας αξιολογήθηκε τόσο από τη μείωση του μεγέθους του όγκου σε ακτινολογική εξέταση και ιστολογική εξέταση του αφαιρεθεί καρκίνωμα μετα ιστού θεραπεία. Το αποτέλεσμα της χημειοθεραπείας κατηγοριοποιήθηκε ως πλήρη ύφεση (CR), μερική ανταπόκριση (PD), σταθερή νόσο (SD) και της εξέλιξης της νόσου (PR). Τα δεδομένα έδειξαν ότι το 33% CR (2 περιπτώσεις), 50% PR (3 περιπτώσεις) και 17% PD /SD (1 περίπτωση) έδειξε παρόμοια up-ρυθμίζονται Pol η θέση έκφρασης χημειοθεραπεία, και 33% CR (1 περίπτωση), το 67% PR (2 περιπτώσεις) και 0% PD έδειξαν μειωμένη έκφραση Pol η. Ωστόσο, δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση μεταξύ της μεταβολής της έκφρασης Pol η σε απόκριση προς χημειοθεραπεία, κυρίως λόγω του μικρού μεγέθους του δείγματος.

Άνω γραμμή αντιπροσωπεύει την πυρηνική χρώση των Pol η σε HNSCC πριν από τη χημειοθεραπεία. Κάτω σειρά αντιπροσωπεύει χρώση Pol η σε ιστό που λαμβάνεται από τις ίδιες περιοχές του αρχικού όγκων μετά από τη χημειοθεραπεία. Περίπτωση 1) Pol επιπέδου χρώση η up-ρυθμίζεται μετά τη χημειοθεραπεία. Περίπτωση 2) ​​Πολ επιπέδου χρώση η κάτω-ρυθμίζονται μετά τη θεραπεία. Υπόθεση 3-4) Pol επιπέδου χρώση η παρέμειναν ίδια ένταση μετά τη θεραπεία (ανοσοϋπεροξειδάσης, αρχική μεγέθυνση x200).

Η CR

μια

Η (%)

PR

μια

Η ( %)

PD + SD

μια

η (%)

n

P

up-ρύθμιση του Πολ η2333501176down ρύθμιση του Πολ η133267003N /ΑΠίνακας 2. Ο κανονισμός του Pol η έκφραση της πρωτεΐνης επίπεδο μετά τη χημειοθεραπεία

ένα CR, πλήρης ανταπόκριση.? PR, μερική ανταπόκριση? SD, σταθερή νόσος? PD, εξέλιξης της νόσου. CSV Λήψη CSV

Κλινική σημασία του Pol η Level χρώσης σε HNSCC

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η έκφραση της βασικής Pol η πριν από τη θεραπεία μπορεί να επηρεάσει την έκβαση των ενώσεων πλατίνα χημειοθεραπεία με βάση [19,20]. Ως εκ τούτου, εξετάσθηκαν η συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης του Pol η πριν από την αγωγή και τα κλινικά αποτελέσματα συμπεριλαμβανομένης της απόκρισης σε χημειοθεραπεία και την επιβίωση των ασθενών. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 3, στις 12 ατόμων που πέτυχαν πλήρη ύφεση (CR), 8 άτομα (66%) είχαν αρνητική /χαμηλή έκφραση του Pol η, και μόνο 4 άτομα (33%) εμφάνισαν χρώση η υψηλή Pol. Στην Αντίθετα, στα 10 άτομα που απέτυχαν να ανταποκριθούν (PD + SD), 8 ήταν από την ομάδα υψηλού χρώση η Pol (80%), μόνο 2 άτομα είχαν χαμηλή χρώση Pol η (20%).

Η Θήκες

Pol η χαμηλή (%)

Pol η υψηλή (%)

P αξία

CR

μια

128 (66 ) 4 (33) PR278 (30) 19 (70) PD + SD102 (20) 8 (80) 0.03Table 3. σύνδεσης μεταξύ της έκφρασης της πρωτεΐνης Pol η και η κλινική ανταπόκριση στη χημειοθεραπεία.

ένα CR, πλήρης απόκριση ? PR, μερική ανταπόκριση? SD, σταθερή νόσος? PD, εξέλιξης της νόσου. Οι λεπτομέρειες εξηγούνται στο M & amp? Μ. CSV Λήψη CSV

Η σχέση μεταξύ της νόσου ειδικά επιβίωσης και το επίπεδο έκφρασης του Pol η αναλύθηκε περαιτέρω χρησιμοποιώντας ανάλυση Kaplan-Meier (δοκιμασία log-rank). Αν και υπάρχει μια τάση που δείχνει ότι οι ασθενείς με υψηλή έκφραση Pol η τείνουν να έχουν μικρότερη επιβίωση, ο συσχετισμός δεν ήταν σημαντική (Σχήμα 4). Η πολυπαραγοντική ανάλυση περαιτέρω πραγματοποιήθηκε με ανάλογη μοντέλο κινδύνου του Cox ρύθμισης για τα μεγάλα κλινικοπαθολογική παραμέτρους. Όπως φαίνεται στον Πίνακα 4, Τ στάδιο (Ρ = 0,03) ήταν η μόνη παράμετρος βρέθηκε να είναι ένας σημαντικός ανεξάρτητος προγνωστικός θανάτου από καρκινώματα. Δεν υπάρχουν άλλες μεταβλητές, συμπεριλαμβανομένων Pol χρώση η ηλικία, Ν κατάστασης, και ιστολογική διαφοροποίηση των όγκων που σχετίζονται με την επιβίωση, σύμφωνα με την πολυπαραγοντική ανάλυση. Η έλλειψη σύνδεσης μεταξύ της έκφρασης Pol η και την επιβίωση των ασθενών στη μελέτη μας, θα μπορούσε να οφείλεται στο μικρό μέγεθος του δείγματος που συλλέγονται κατά τη διάρκεια μιας πολύ μεγάλο χρονικό διάστημα. Υψηλή τοπική ποσοστό υποτροπής είναι ένας γνωστός παράγοντας εμποδίζει τη μακροπρόθεσμη επιβίωση χωρίς όγκο των ασθενών με HNSCC [2-4,22]. Στην ομάδα μας, υπήρχαν 23 από 64 ασθενείς πέθαναν από υποτροπή της νόσου, συμπεριλαμβανομένων 16 ασθενών με επίπεδο η υψηλή Pol και 7 ασθενείς με χαμηλό επίπεδο Pol η. Ωστόσο, δεν στατιστική σημαντικότητα διαπιστώθηκε μεταξύ της έκφρασης και του καρκίνου Pol η υποτροπή (p = 0.15, δεδομένα που δεν φαίνονται).

Η μπλε καμπύλη αντιστοιχεί σε ασθενείς με επίπεδο η υψηλή Pol και την κόκκινη καμπύλη σε ασθενείς με επίπεδο η χαμηλή Pol.

Η Παράμετροι

αναλογία κινδύνου

95% CI

μια

η

P

β

η Age2.710.85-10.220.09T stage3.472.17-6.980.03N status1.040-4.390. 23Histological differentiation2.980.72-14.80.12POL η staining0.90.20-3.920.86chemotherapy0.790.08-17.620.85Tobacco2.240.54-11.40.32EtOH1.420.61-3.390.26Table 4. Συμβολή των διαφόρων πιθανών προγνωστικών παραγόντων για την ελεύθερη νόσου επιβίωση σε ασθενείς με καρκίνο του στόματος (n = 58).

ένα CI, διάστημα εμπιστοσύνης.

b τιμή P ελήφθη με Cox μέθοδο της αναλογικής κινδύνους. Υπολογίζεται με δοκιμασία log-rank. CSV Λήψη CSV

Συζήτηση

Είναι γνωστό ότι με βάση την πλατίνα αντικαρκινικών παραγόντων αναστέλλει την ανάπτυξη των όγκων, κυρίως με τη διαμόρφωση προσαγωγές DNA [50]. Το υψηλό επίπεδο έκφρασης του Ροΐ η έχει συσχετιστεί με φτωχή κλινική έκβαση όταν οι παράγοντες με βάση την πλατίνα χρησιμοποιήθηκαν για την διαχείριση του καρκίνου του πνεύμονα μη-μικρού κυττάρου και μεταστατικό αδενοκαρκίνωμα στομάχου [19,20]. Σύμφωνα με το σχέδιο του Ανθρώπου πρωτεΐνη άτλαντα, Pol η εκφράζεται παντού σε πυρήνες ουσιαστικά περισσότερους ιστούς, εκτός από τα κύτταρα mesenchymal-, glial- και στρωματικά στο ενδοκρινικό ιστούς [28]. Επιπλέον, Pol η έχει παρατηρηθεί στα περισσότερα κύτταρα καρκινώματος, αν και έχουν διαφορετικά επίπεδα έκφρασης έχουν αναφερθεί [19,20,28,29]. Ως εκ τούτου, ο πιθανός αντίκτυπος των Pol η σχετικά με τη δραστηριότητα των φαρμάκων ή γεμσιταβίνης σε HNSCC με βάση την πλατίνα εξετάζεται στην παρούσα έκθεση.

Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε ότι η Pol εκφράζεται κυρίως στα εντόνως πολλαπλασιαστικά βασικά και παραβασικών στρώματα του φυσιολογικού βλεννογόνου πλακώδες επιθήλιο. Μια πολύ υψηλότερο επίπεδο έκφρασης της έκφρασης Pol η ανιχνεύθηκε στην πλειονότητα των HNSCC σε σύγκριση με τις κανονικές ομόλογό ιστούς. Επιπλέον, το επίπεδο έκφρασης ένα υψηλότερο Pol η σε καλά διαχωριζόμενες HNSCC ανιχνεύθηκε σε σύγκριση με ελάχιστα διαφοροποιημένο όνες (Σχήμα 2 και Πίνακας 1). Παρατηρήσαμε επίσης ότι υψηλό βασικό επίπεδο έκφρασης Pol η πριν από τη χημειοθεραπεία σημαντικά συσχετίζεται με το χαμηλό ποσοστό ανταπόκρισης στη χημειοθεραπεία. Σε προηγούμενες μελέτες, έχει δειχθεί ότι η Pol μειώνει τα κυτταροτοξικά αποτελέσματα τόσο της γεμσιταβίνης και σισπλατίνης με την επέκταση του DNA με gemcitabine στο 3 ‘άκρα [11] ή παρακάμπτοντας σισπλατίνη που προκαλείται από ενώσεις προσθήκης ενδοκλωνικά [13]. Στην ομάδα μας, μόνο 5 ασθενείς έλαβαν γεμσιταβίνη μόνο θεραπεία και 4 ασθενείς έλαβαν δύο θεραπείες σισπλατίνη και γεμσιταβίνη. Συνδυάσαμε αυτά τα 9 περιπτώσεις με 40 περιπτώσεις που έλαβαν θεραπεία με σισπλατίνη για ανάλυση. Οι ασθενείς με χαμηλή βασική έκφραση του Pol η είχαν υψηλότερο ποσοστό πλήρους ανταπόκρισης (8/18) από εκείνους που έχουν υψηλή έκφραση της βασικής Pol η (4/31) (p = 0,03) (Πίνακας 3). Τα δεδομένα μας υποστηρίζεται περαιτέρω ότι η δραστικότητα παράκαμψης του Ροΐ η επηρεάζει δραστικότητα /γεμσιταβίνη πλατίνας στη διαχείριση των HSCCC, και το επίπεδο έκφρασης του Ροΐ η μπορεί να είναι χρήσιμη για την πρόβλεψη της απόκρισης κλινική πριν από τη χημειοθεραπεία. Το συνολικό ποσοστό οφέλους (CR + PR) δεν ήταν σημαντικά διαφορετικό σε αυτές τις δύο ομάδες ασθενών (16/18 σε χαμηλή ομάδα Pol η και 23/31 σε υψηλή ομάδα Pol η) (τα δεδομένα δεν φαίνονται), τα οποία κυρίως ήταν λόγω των υψηλών ποσοστό μερικής ανταπόκρισης (18/31) στην ομάδα υψηλού Pol η. Αυτό θα μπορούσε να οφείλεται στην δράση των άλλων μηχανισμών επιδιόρθωσης του DNA που συμβάλλουν στην συνολική ευαισθησία σε χημειοθεραπευτικούς παράγοντες σε ιστούς όγκων [24-27]. Για παράδειγμα, οι πρωτεΐνες επισκευής πυρηνικών εκτομή του DNA και BRCA1 έχουν αναφερθεί να συμβάλει στην αντίσταση ενάντια παραγόντων με βάση την πλατίνα [35-38,51-54].

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι η σισπλατίνη θεραπεία αυξημένη έκφραση των γονιδίων επιδιόρθωσης του DNA και συνέβαλε στην παρατηρούμενη αντίσταση [30-34]. Ceppi et. al. ανέφεραν ότι τα επίπεδα του mRNA Pol η σε μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) κυτταρικές σειρές ήταν σημαντικά επάγεται από σισπλατίνη [19]. Μια προηγούμενη κυτταρική μελέτη έχει δείξει ότι η ρύθμιση προς τα κάτω του ζ DNA βλάβης παράκαμψης πολυμεράσης (Pol ζ) στα κύτταρα πλακώδους καρκινώματος κεφαλής και αυχένα ευαισθητοποιεί κύτταρα στη σισπλατίνη, και η αναστολή της γονιδιακής έκφρασης hRev3 προτάθηκε να είναι ένα δυνητικά κλινικά στρατηγική για την μείωση της αντίστασης ενάντια σισπλατίνη σε HNSCC [56]. Σε αυτή τη μελέτη, παρατηρήσαμε ότι το επίπεδο έκφρασης του επιπέδου η Pol αυξήθηκε σε 6 περιπτώσεις (6/9) από τους 9 ασθενείς που ήταν ανθεκτικοί σε πλατίνα ή γεμσιταβίνη χημειοθεραπεία με βάση, η οποία δεν έχει αναφερθεί προηγουμένως. Περαιτέρω μελέτες θα είναι αναγκαίο με ένα μεγαλύτερο μέγεθος δείγματος να συμπεράνει αν η μεταβολή της έκφρασης Pol η πριν και μετά τη χημειοθεραπεία θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός για ανάπτυξη αντοχής σε πλατίνα ή γεμσιταβίνη βασίζονται χημειοθεραπεία.

τρέχουσα μελέτη μας έδειξε ότι ένα υψηλό επίπεδο έκφρασης του Ροΐ η συσχετίζεται με μειωμένη ευαισθησία στην αγωγή πλατίνα /γεμσιταβίνη, υποδηλώνοντας ότι το επίπεδο έκφρασης του Ροΐ η μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστική δείκτη. τρέχοντα αποτελέσματα μας δείχνουν, επίσης, ότι δεν υπάρχει σημαντική συσχέτιση μεταξύ της έκφρασης Pol η και η ηλικία, το φύλο, μέγεθος πρωτογενούς όγκου, LN μεταστατική κατάσταση βάσει των εν λόγω αριθμό περιπτώσεων. Παρά το γεγονός ότι τα αποτελέσματά μας δεν κατάφερε να βρει τον σημαντική συσχέτιση μεταξύ του επιπέδου έκφρασης Pol η και την επιβίωση των ασθενών (OS και PFS), υπάρχει μια τάση που δείχνει ότι η έκφραση υψηλότερο Pol η συσχετίζεται με μικρότερη επιβίωση.