Abstract

Ιστορικό

Βάσει των προκλινικών ευρήματά μας, έχουμε την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας του εντός του όγκου έγχυση δενδριτικών κυττάρων (DC) μετάγονται με έναν αδενοϊικό φορέα που εκφράζει το δευτερεύον λεμφοειδή χημειοκίνη (CCL21) γονίδιο (Ad-CCL21-DC) σε μια μελέτη φάσης Ι σε προχωρημένο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC). Ενώ αυτή η προσέγγιση δείχνει ανοσολογική ενίσχυση, η παρασκευή αυτόλογων DC για CCL21 γενετική τροποποίηση είναι δυσκίνητη, δαπανηρή και χρονοβόρα. Είμαστε αξιολόγηση ενός μη-DC προσέγγιση με βάση το οποίο χρησιμοποιεί θόλο νανοσωματιδίων για ενδοογκική παράδοση CCL21 να μεσολαβήσει αντικαρκινική δράση στον καρκίνο του πνεύμονα.

Κύρια Ευρήματα

Εδώ περιγράφουμε ότι η πλατφόρμα θόλο nanocapsule για κοκάίνης- παράδοση CCL21 αντικαρκινική δράση με αναστολή της ανάπτυξης καρκίνου του πνεύμονα. Vault nanocapsule συσκευασμένα CCL21 (CCL21-θόλους) έδειξε λειτουργική δραστηριότητα σε δοκιμασίες χημειοτακτική δραστηριότητα και αντιγονοπαρουσιαστικά. Η ανασυνδυασμένη θόλους επηρέασε χημειοτακτική μετανάστευση των Τ κυττάρων και αυτή η επίδραση ήταν κυρίως CCL21 εξαρτώμενη ως CCL21 εξουδετέρωση κατήργησε την διαμεσολαβούμενη CCL21 ενίσχυση στην χημειοταξία. Εντός του όγκου χορήγηση CCL21-θησαυροφυλάκια σε ποντίκια που φέρουν τον καρκίνο του πνεύμονα ενισχύεται λευκοκυττάρων διηθήσεις (CXCR3

+ T, CCR7

+ T, ΙΡΝγ

+ Τ λεμφοκύτταρα, DEC205

+ DC), ανέστειλε πνεύμονα ανάπτυξη του όγκου του καρκίνου και μείωσε τις συχνότητες του ανοσοκατασταλτικά κύτταρα [προερχόμενα μυελοειδή κατασταλτικά κύτταρα (MDSC), ρυθμιστικά κύτταρα Τ (Treg), IL-10 κύτταρα Τ]. CCL21-θησαυροφυλάκια που προκαλείται από συστημικές αντιδράσεις κατά του όγκου με αύξηση του σπλήνα λυτική δραστηριότητα των Τ κυττάρων εναντίον γονικών καρκινικών κυττάρων.

Σημασία

Αυτή η μελέτη δείχνει ότι η nanocapsule θησαυροφυλάκιο μπορεί να παραδώσει αποτελεσματικά CCL21 να διατηρήσουν αντικαρκινική δράση και αναστέλλουν πνεύμονα την ανάπτυξη του καρκίνου. Η nanocapsule θόλος μπορεί να χρησιμεύσει ως μια προσέγγιση «από το ράφι» για να παραδώσει αντικαρκινική κυτοκίνες για τη θεραπεία ένα ευρύ φάσμα των κακοηθειών

Παράθεση:. Kar Ηνωμένο Βασίλειο, Srivastava ΜΚ, Andersson Α, Baratelli F, Huang Μ, Kickhoefer VA , et al. (2011) Μυθιστόρημα CCL21-Vault nanocapsule ενδονεοπλασματική Παράδοση Αναστέλλει πνεύμονα ανάπτυξης του καρκίνου. PLoS ONE 6 (5): e18758. doi: 10.1371 /journal.pone.0018758

Επιμέλεια: Siyaram Pandey, Πανεπιστήμιο του Windsor, Καναδάς

Ελήφθη: 21 Δεκεμβρίου 2010? Αποδεκτές: 9 του Μαρτίου 2011? Δημοσιεύθηκε: 3 Μαΐου, 2011

Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης, χωρίς όλα τα πνευματικά δικαιώματα, και δεν μπορεί να αναπαραχθεί ελεύθερα, διανεμηθεί, να μεταδοθεί, τροποποιηθεί, χτισμένο πάνω, ή ειδάλλως να χρησιμοποιηθεί από οποιονδήποτε για οποιονδήποτε νόμιμο λόγο. Το έργο γίνεται διαθέσιμα υπό την Creative Commons CC0 αφοσίωση δημόσιο τομέα

Χρηματοδότηση:. Η εργασία αυτή υποστηρίχθηκε από το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια Discovery Grant (προς LHR και VAK) ένα Jonnson Comprehensive Cancer Center υποτροφία για να UKK) και από Εθνικά Ινστιτούτα Υγείας επιχορηγήσεις (RO1 CA95686 και RO1 CA126944), το Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνιας στο Λος Άντζελες πνεύμονα Πρόγραμμα Καρκίνου, Τμήμα Υποθέσεων Βετεράνων Ιατρικής Έρευνας ταμεία και καπνός ασθενειών που σχετίζονται Πρόγραμμα Πρόγραμμα Βραβείο του Πανεπιστημίου της Καλιφόρνια (15RT-0207). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του πνεύμονα είναι η κύρια αιτία θανάτου από καρκίνο στις Ηνωμένες Πολιτείες και σε όλο τον κόσμο [1]. Μέχρι σήμερα με τις υπάρχουσες μορφές θεραπείας, η συνολική μακροχρόνια επιβίωση είναι μόνο 15%. Έτσι, οι νέες θεραπευτικές στρατηγικές απαιτούνται. Είμαστε αξιολόγηση ενός μυθιστορήματος nanocapsule θόλο ως απόδειξη της έννοιας για την παράδοση του ανοσοποιητικού ενισχυτικά κυτοκινών για ένα «από το αντιδραστήριο ράφι» για τη θεραπεία του ανοσοποιητικού βάση για τον καρκίνο του πνεύμονα.

Vaults είναι κυτταροπλασματικές πανταχού παρόντα σωματίδια ριβονουκλεοπρωτεϊνικού περιγράφηκε για πρώτη φορά στο 1986 [2]. Native θησαυροφυλάκια είναι 12,9 ± 1 MDa σφαίρες ωοειδές με διαστάσεις περίπου 40 nm σε πλάτος και 70 nm σε μήκος [3], [4], που υπάρχει σχεδόν σε όλα τα-ευκαρυωτικούς οργανισμούς με 10

4 και 10

7 σωματίδια ανά κύτταρο [5]. Παρά την κυτταρική αφθονία τους, η λειτουργία θόλο παραμένει άπιαστο αν και έχουν συνδεθεί με πολλές κυτταρικές διεργασίες, συμπεριλαμβανομένης της έμφυτη ανοσολογική αντίδραση, η αντίσταση σε πολλά φάρμακα σε καρκινικά κύτταρα, μονοπάτια πολύπλευρη σηματοδότησης, και ενδοκυτταρική μεταφορά [6].

Ως φυσικά που συμβαίνουν nanocapsule, το σωματίδιο θησαυροφυλάκιο μπορεί να είναι μια ιδανική δομή για να κατασκευάσει ως θεραπευτικό σύστημα για την ένωση ενθυλάκωση, την προστασία, και την παράδοση. Vaults είναι εξαιρετικά σταθερές δομές

in vitro

, και μια σειρά από μελέτες δείχνουν ότι τα σωματίδια είναι μη ανοσογόνα [7]. Vaults μπορούν να κατασκευαστούν και να εκφράζεται χρησιμοποιώντας σύστημα έκφρασης βακιλλοϊού και ετερόλογες πρωτεΐνες μπορεί να ενθυλακώνονται εντός των εν λόγω ανασυνδυασμένων σωματιδίων χρησιμοποιώντας ένα πεδίο πρωτεΐνης στόχευσης ονομάζεται INT για θόλος αλληλεπίδραση. Αρκετές ετερόλογες πρωτεΐνες έχουν συγκολληθεί με τον τομέα ΙΝΤ (π.χ. φθορίζουσες και ενζυματικές πρωτεΐνες) και αυτές οι πρωτεΐνες σύντηξης όταν συσκευάζεται στα ανασυνδυασμένα θόλους, διατηρούν μητρική χαρακτηριστικά τους, και έτσι προσδίδουν νέες ιδιότητες θόλος [8], [9].

CCL21 έχει ταυτοποιηθεί ως ένα λεμφοειδές χημειοκίνη που κυρίως και εκφράζεται ιδιοσυστατικά από τα υψηλά ενδοθηλιακά φλεβίδια σε λεμφαδένες και πλάκες του Peyer, λεμφαγγείων και στρωματικά κύτταρα στη σπλήνα και στο προσάρτημα [10]. CCL21 δεσμεύεται με τον υποδοχέα χημειοκινών CCR7 και αποτελεί χημειοελκτικό για τα ώριμα δενδριτικά κύτταρα (DC), αφελής και μνήμης Τ κύτταρα [11], [12]. Αυτό χημειοκίνης, μαζί με CCL19, απαιτείται για την κανονική λεμφοειδή οργάνωση ιστού που είναι τελικά απαραίτητη για την αποτελεσματική αλληλεπίδραση των κυττάρων Τ-DC. Φυσικοί φονείς (ΝΚ) και φυσικά φονικά Τ (ΝΚΤ) αντικαρκινική δράστες επίσης εκφράζουν υποδοχέα CCR7 και χημειο προσελκύονται από CCL21. Η χρήση των χημειοκινών για την προσέλκυση DC, των λεμφοκυττάρων, ΝΚ και ΝΚΤ τελεστές σε όγκους μπορεί να χρησιμεύσει ως μια αποτελεσματική στρατηγική κατά του όγκου. Με βάση αυτή την έννοια, έχουμε δείξει παλαιότερα ότι η ενδοογκική χορήγηση ανασυνδυασμένης CCL21 μειώνει το φορτίο του όγκου σε μοντέλα ποντικών με καρκίνο του πνεύμονα [13]. Η αντικαρκινική δράση που προκαλείται από ανασυνδυασμένο CCL21 ωστόσο απαιτούνται υψηλές και συχνές δόσεις επειδή οι πρωτεΐνες χορηγούνται εντός του όγκου δεν διατηρούνται τοπικά για παρατεταμένες περιόδους. Αν και οι μελέτες αυτές οριοθετείται το ρόλο του CCL21 ως αποτελεσματικό παράγοντα κατά του όγκου, η συχνή υψηλής δόσης χορήγηση εντός του όγκου είναι κλινικά περιορίζοντας με το δυναμικό των περιττών συστημικής τοξικότητας. Με βάση τους περιορισμούς αυτής της προσέγγισης, εξετάσαμε τη χρήση του DC για ενδοογκική παράδοση CCL21 [14], [15]. Σε προκλινικές μελέτες αποδείξαμε ότι ενδοογκική χορήγηση γονιδιακών CCL21 τροποποιημένων DC οδήγησε στην εξάλειψη του όγκου σε μοντέλα ποντικών με καρκίνο του πνεύμονα. Μετά την αρχική μας περιγραφή των αντικαρκινικών δραστηριοτήτων του CCL21, αρκετές ομάδες έχουν αναφέρει ότι CCL21 έχει ισχυρές ιδιότητες κατά των όγκων σε μία ποικιλία συστημάτων μοντέλου [16], [17], [18], [19], [20]. Σε όλα τα μοντέλα, CCL21 αποδειχθεί ισχυρή υποχώρηση των όγκων, η οποία φαίνεται να εξαρτάται από ξενιστή κυττάρων Τ ανοσία.

Με βάση την εκτεταμένη προ-κλινική αξιολόγηση, ξεκινήσαμε μια NCI χρηματοδοτείται κλινική δοκιμή πριν από ένα χρόνο την αξιολόγηση της εντός του όγκου έγχυση DC μεταγωγή με φορέα αδενοϊού που εκφράζουν το γονίδιο CCL21 (Ad-CCL21-DC) σε μία δοκιμή φάσης Ι σε προχωρημένο μη μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα (NSCLC) [21]. Ενώ κλινικές μελέτες μας χρησιμοποιώντας εντός του όγκου χορήγηση γονιδίου CCL21 τροποποιημένων DC δείχνει βελτίωση του ανοσοποιητικού, η προετοιμασία του CCL21 εκφράζοντας αυτόλογων DC είναι περίπλοκη, δαπανηρή και χρονοβόρα. Ένα αποτελεσματικό αντιδραστήριο off-the-shelf θα διευκόλυνε την αξιολόγηση αυτής της θεραπείας χημειοκινών που βασίζεται. Προς επίτευξη αυτού του στόχου, εμείς αξιολογούμε μια μη-DC προσέγγιση με βάση το οποίο χρησιμοποιεί θόλο νανοσωματιδίων για ενδοογκική παράδοση CCL21 με σκοπό την έναρξη των όγκων ανοσολογικές αποκρίσεις στον καρκίνο του πνεύμονα. Αναμένουμε ότι η χρήση νανοσωματιδίων θησαυροφυλάκιο θα παρακάμψει αυτόλογη προετοιμασία DC, την ελαχιστοποίηση παρτίδα σε παρτίδα μεταβλητότητα και επιτρέπουν τη συγκρισιμότητα και την τυποποίηση. Επιπλέον, τα νανοσωματίδια θόλος κατασκευάζεται για να απελευθερώσει CCL21 μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη θεραπεία ένα ευρύ φάσμα κακοηθειών.

Σε αυτή τη μελέτη αξιολόγησε την επίδραση της χορήγησης θόλος nanocapsule του CCL21 επί της ανάπτυξης Lewis Lung (3LL) όγκους

in vivo

. Τα ευρήματά μας δείχνουν ότι μια ενιαία εντός του όγκου χορήγηση νανοκαψουλών CCL21-θόλο στρατολογεί αντικαρκινική τελεστές, προκαλεί ισχυρή αντικαρκινική δράση και αναστέλλει την ανάπτυξη του όγκου.

Υλικά και Μέθοδοι

Η ανασυνδυασμένη θησαυροφυλάκια

Η CCL21 cDNA συντήχθηκε σε πλαίσιο προς είτε INT ή mCherry-INT [22]. Ποντικού CCL21 ενισχύθηκε με PCR με τους εκκινητές: CCL21- εμπρός GCGCGGATCCCCATGGCTCAGATGATG και CCL21- αντίστροφη GCGCAGATCTTCCTCTTGAGGGCTGTGTCTG. Για το σχηματισμό mCCL21-mCherry-INT σε pFastBac, καθαρισμένο προϊόν CCL21 PCR υποβλήθηκε σε πέψη με BamH1 και Bgl Ι και προσδέθηκε με BamH1 φωσφατάση αγωγή mCherry-INT pFastBac. Ανθρώπινα CCL21 ενισχύθηκε με PCR με τους εκκινητές: CCL-21 F-SpeI CCCCACTAGTC CAGTTCTCAGTCACTGGCTCTG, CCL-21-NheI CCCCGCTAGCTGGCCCTTTAGGGGTCTGTG, INT με NheI CCCCGCTAGCTGCACACAACACTGGCAGGA, INT με XhoI GGGGCTCGAGTTAGCCTTGACTGTAATGGA να σχηματίσει hCCL21-INT. Η ανασυνδυασμένη (R) βακουλοϊοί παράχθηκαν όπως περιγράφεται [7]. Κύτταρα Sf9 μολύνθηκαν με mCCL21-mCherry-INT, hCCL21-INT ή CP-MVP κωδικοποιεί ραβδοϊών σε πολλαπλότητα μόλυνσης (ΜΟΙ) 0.01 για 65 ώρες. Τα μολυσμένα κύτταρα παρασκευάστηκαν όπως περιγράφεται [7]. Τα προϊόντα της λύσης που περιέχουν CP-MVP θόλος αναμίχθηκαν με προϊόντα λύσης που περιέχουν mCCL21-mCherry-INT ή hCCL21-INT και επωάστηκαν σε πάγο για 30 λεπτά για να επιτρέψει στις πρωτεΐνες σύντηξης INT για τη συσκευασία μέσα από θόλους. Vault καθαρίστηκαν όπως περιγράφεται [8], επαναιωρήθηκε σε στείρο PBS και η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε με δοκιμασία BCA (Bio-Rad, CA). ακεραιότητα δείγμα αναλύθηκε με αρνητική χρώση μικροσκοπία ηλεκτρονίων ή Coomassie χρώση SDS-PAGE ακολουθούμενη από ανάλυση Western blot. CCL21-INT πρωτεΐνης στο θόλο ποσοτικοποιήθηκε με πυκνομετρική ανάλυση των κηλίδων Western έναντι της καθαρής πρωτεΐνης ανασυνδυασμένης INT ως πρότυπο.

Αντισώματα

Πρωτογενή αντισώματα για τις αναλύσεις κηλιδώσεως Western κουνελιού αντι-MVP αντίσωμα (1 /1000 αραίωση) [23] ή αντίσωμα κουνελιού αντι-VPARP (1/500 αραίωση) [24] και αντι-κουνελιού HRP-αντισώματος κατσίκας δευτερογενή (1:2000 αραίωση) (Amersham). Η CCL21 και CXCR3 (220803) mAb ήταν από την R Η μέση τιμή ± SEM, * ρ & lt? 0,05 μεταξύ mCCL21-θόλο και ομάδα ελέγχου, n = 10 ποντίκια /ομάδα

Η

5 × 10

3 καρκινικά κύτταρα 3LL-GFP εγχύθηκε στο αριστερό πνεύμονα. μέσω διαθωρακική διαδρομή. Μία εβδομάδα μετά τις ενέσεις του όγκου, τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε αγωγή με αραιωτικό (NS), θόλοι ελέγχου (2 μg) ή mCCL21-θόλους (2 μg) μέσω οδού διαθωρακική στο αριστερό πνεύμονα. Ημέρα εμφύτευση 28 δοκάρια του όγκου, οι πνεύμονες συλλέχθηκαν για την ανάλυση της επιβάρυνσης του όγκου και λευκοκυττάρων διηθήσεις. Α Η &? Ε χρώση τομών πνεύμονα όγκου από αραιωτικό ή τον έλεγχο θόλους έδειξαν αυξημένη μάζες όγκου (μάζα όγκου που απεικονίζεται με το βέλος επάνω πίνακα και διεισδύει κάτω δεξί πάνελ), σε σύγκριση με μειωμένη μάζα του όγκου στην ομάδα αγωγής CCL21-θόλο. B. φορτίο του όγκου υπολογίστηκε με συνολικό ποσοστό των κυττάρων που εκφράζουν GFP όγκου και ΕρΟΑΜ συνολικά πνεύμονα πέψης. Αφελής πνεύμονα χρησιμοποιήθηκε ως μάρτυρας για να ρυθμίσετε την πύλη. επεξεργασία CCL21-θόλο μειωμένη ανάπτυξη του όγκου. Γ CCL21-θησαυροφυλάκια επαυξημένης CD4, CD8, CXCR3

+ CD3

+ T, CCR7

+ CD3

+ T και DEC205

+ DC διεισδύει και είχαν μειωμένη συχνότητα των MDSC και Tregs. D-E. Τα ποντίκια έλαβαν CCL21-θόλος είχε αυξηθεί όγκου διηθήσεις με υψηλή ΙΡΝγ αλλά μειωμένη IL-10 που εκφράζουν Τ κυττάρων σε σύγκριση με τους μάρτυρες. ΣΤ θεραπεία CCL21-θόλο ενίσχυσε την κυτταρολυτική δραστηριότητα των καθαρισμένων σπληνικών Τ κυττάρων εναντίον των γονέων 3LL όγκους

in vitro

(E:T των 20:01 και 40:1). γραμμές δεδομένων, μέση τιμή ± SEM, * ρ & lt? 0,05 μεταξύ CCL21-θησαυροφυλάκια και ομάδες θόλο ελέγχου, n = 10 ποντίκια /ομάδα

Η

CCL21-θησαυροφυλάκια αυξήσει διηθούν όγκο Τ κύτταρα με αυξημένη ΙΡΝγ αλλά μειωμένη IL. -10 και αυξάνουν συστημική δραστικότητα κυτταρολυτικό κύτταρο Τ

Tumor Τ λεμφοκυτταρική διηθήσεις από ποντικούς που υπέστησαν αγωγή mCCL21-θόλος είχε αυξηθεί ενδοκυτταροπλασματική ΙΡΝγ και μειωμένη IL-10 (Εικ. 4D-Ε). Εντός του όγκου mCCL21-θόλους που προκαλείται από συστημική αντικαρκινική ανοσολογική δραστηριότητα:. Σπληνικά Τ κύτταρα από ποντίκια που έλαβαν mCCL21-θησαυροφυλάκιο είχε αυξηθεί λυτική δράση εναντίον γονικών καρκινικών κυττάρων

in vitro

(Σχ. 4F)

Συζήτηση

Έχουμε δείξει στο παρελθόν ότι εντός του όγκου ανασυνδυασμένου CCL21 ή CCL21 γονίδιο τροποποιημένο DC προκαλέσει μια εξαρτώμενη από Τ-λεμφοκυττάρων μείωση του όγκου σε μοντέλα ποντικών με καρκίνο του πνεύμονα [13], [14], [15], [28], [29]. Βασισμένο σε εκτενή προκλινικά μοντέλα, έχουμε μεταφράσει εντός του όγκου προσέγγιση DC-AdCCL21 μας για τη θεραπεία του προχωρημένου καρκίνου του πνεύμονα σταδίου σε μια κλινική δοκιμή Φάσης Ι. Αν και τα πρώτα αποτελέσματα αυτής της δοκιμής δείχνουν βελτίωση του ανοσοποιητικού, είμαστε αξιολόγηση των μηχανισμών διανομής CCL21 που θα καταστήσει περιττή την ανάγκη να απομονωθούν και να αυτόλογη πολιτισμό DC. Για το σκοπό αυτό θα αξιολογηθεί νανοκάψουλες CCL21-θόλο ως «από το ράφι» θεραπευτική πλατφόρμα για την καταπολέμηση της ανάπτυξης του όγκου

in vivo

χρησιμοποιώντας το καλά χαρακτηρισμένο μοντέλο καρκίνου 3LL. Η λογική μας για χορήγηση εντός του όγκου νανοκαψουλών CCL21-θόλος είναι να προωθήσει την πρόσληψη των λεμφοκυττάρων Τ και DC στο μικροπεριβάλλον του όγκου για μια ισχυρή αντικαρκινική δραστικότητα.

Ως φυσικώς ενυπάρχουσα, μη ανοσογόνα, με βάση την πρωτεΐνη νανοκλίμακας κάψουλα, το σωματίδιο θόλος έχει τη δυνατότητα να χρησιμεύσει ως ένα εύκαμπτο θεραπευτικό μέσο παράδοσης. Κατασκευασμένο στο σύστημα βακουλοϊού, το σωματίδιο αυτοσυγκροτείται από ένα μόνο εκφρασμένη πρωτεΐνη η οποία μπορεί να τροποποιηθεί ώστε να επιτρέψει τη στόχευση κυττάρων, ειδική ενδοκύτωσης και διείσδυση ενδόσωμα [7], [8], [9], [30]. Οι πρωτεΐνες και τα πεπτίδια συντηγμένα σε μια περιοχή στόχευσης θόλο συσκευασμένο σε σωματίδιο, προστατευμένο από το εξωτερικό περιβάλλον και απελευθερώνεται αργά. Αυτή είναι η πρώτη μελέτη για να περιγράψει ότι νανοκάψουλες θόλος μπορούν να κατασκευαστούν για τη συσκευασία και να διατηρούν βιολογικά ενεργό CCL21. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι, αν και άδειο θόλους και rCCL21 είναι κάθε χημειοτακτικά, συσκευασία του χημειοκινών σε θησαυροφυλάκιο συνεργικά ενισχυμένο μετανάστευση Τ κυττάρων, γεγονός που υποδηλώνει ότι η παρατεταμένη απελευθέρωση του CCL21 από το σωματίδιο θόλο μπορεί να δημιουργήσει μια απότομη χημειοτακτικών κλίση. Εξουδετερωτικά αντισώματα προς CCL21 κατήργησε τη χημειοτακτική δραστικότητα του CCL21-θόλο αποδεικνύοντας ότι η χημειοτακτική δραστηριότητα ήταν κυρίως CCL21 εξαρτώμενη. Με βάση τα αποτελέσματα της χημειοτακτικής πειραμάτων, αξιολογήσαμε την επίδραση του CCL21-θόλους στη δραστικότητα DC APC. CCL21-θησαυροφυλάκια επαυξημένης δραστηριότητα DC APC και εξουδετέρωση των CCL21 κατήργησε αυτή τη δραστηριότητα. Σε σύγκριση με rCCL21, CCL21-θησαυροφυλάκια διεγείρεται δραστηριότητα DC APC σε υψηλότερα επίπεδα στο ένα δέκατο της συγκέντρωσης του rCCL21, γεγονός που υποδηλώνει μια μεγαλύτερη συγγένεια DC για την nanocapsule CCL21-θόλο.

Με βάση μας

in vitro

ευρήματα, CCL21-θησαυροφυλάκια αξιολογήθηκαν σε ένα θεραπευτικό μοντέλο καρκίνου του πνεύμονα

in vivo

. Τα αποτελέσματα μας δείχνουν ότι ο σχεδιασμός θόλος είναι αποτελεσματική στην αναστολή της ανάπτυξης των καθιερωμένων όγκων. Μία μόνο ένεση εντός του όγκου CCL21-θόλους οδήγησε σε σημαντική αναστολή στην ανάπτυξη του όγκου σε σύγκριση με τους μάρτυρες. Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι το σκεύασμα CCL21-θόλο είναι εξίσου αποτελεσματική σε σύγκριση με τις συχνές υψηλές δόσεις rCCL21 [13]. Σε αμφότερα τα μοντέλα υποδόρια και ορθοτοπική όγκου πνεύμονα η θεραπεία CCL21-θόλου χορηγήθηκε εντός του όγκου. Σε μελλοντικές μελέτες κατά την αξιολόγηση της αποτελεσματικότητας των ειδικών διαδρομών nanocaspsules θόλο εμβολιασμού αντιγόνο όγκου στις προστατευτικές και θεραπευτικές ρυθμίσεις που περιλαμβάνουν

iv

ή

ip

διαδρομές παράδοσης, αλλαγές στο πλάσμα /επίπεδο των τρανσαμινασών του ορού θα είναι ποσοτικά για θόλο συνέπειες για τη λειτουργία του ήπατος. Παρά το γεγονός ότι στη δοκιμασία της μετανάστευσης, οι θόλοι έλεγχος κατέδειξε χημειοτακτική δραστηριότητα, θόλους ελέγχου δεν επηρέασε την ανάπτυξη του όγκου σε σύγκριση με την ομάδα αραιωτικά θεραπεία. Αυτό υποδηλώνει ότι CCL21 είναι το κρίσιμο συστατικό στην nanocapsule θόλο για την επαγωγή της αντικαρκινική δράση. Σε μελλοντική εργασία που θα προβάλει τόσο τα προ-αποπτωτικών και αντι-αποπτωτικών πρωτεϊνών στους όγκους για να καθορίσει τις αλλαγές στην ανταπόκριση στη θεραπεία nanocapsule CCL21-θησαυροφυλάκιο για να εξερευνήσετε μηχανιστικά τα αποπτωτικά προγράμματα που προκαλείται από αυτή τη θεραπεία.

In vivo

, ανθρώπινη CCL21 περιέχει θόλους ήταν εξίσου αποτελεσματικό με το μυϊκό CCL21-θόλου στη μείωση της ανάπτυξης του όγκου 3LL (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Σε σύγκριση με τους μάρτυρες, θεραπεία CCL21-θησαυροφυλάκιο οδήγησε σε εκτεταμένες Τ όγκου και DC λευκοκυττάρων διηθήσεις.