Αφηρημένο

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (PDAC) έχει κακή πρόγνωση και είναι που συνδέονται με υψηλά επίπεδα ψυχολογικής δυσφορίας. Έχουμε δείξει ότι β-αδρενεργικών υποδοχέων (β-ΑΕ), οι οποίοι ενεργοποιούνται από νευροδιαβιβαστές στρες, να ρυθμίσουν τα κύτταρα PDAC μέσω κυκλικού ΑΜΡ (cAMP) -εξαρτώμενη σηματοδότηση in vitro, ότι το κοινωνικό άγχος προάγει PDAC εξέλιξης σε ξενομοσχεύματα ποντικών και ότι γ-αμινοβουτυρικό οξύ (GABA) αναστέλλει αυτές τις αποκρίσεις in vitro και in vivo. Η στοχευμένη αναστολή του στρες που προκαλείται από ρυθμιστικές οδοί μπορούν να καταργήσουν τη δυνητικά αρνητικές επιπτώσεις ψυχολογικού στρες στην κλινική έκβαση. τρέχοντα δεδομένα μας δείχνουν ότι η χρόνια έκθεση των PDAC κυτταρικών γραμμών Panc-1 (ενεργοποίηση σημειακές μεταλλάξεις σε Κ-ras) και BXPC-3 (χωρίς μεταλλάξεις στο K-ras) in vitro με την επινεφρίνη νευροδιαβιβαστή στρες στη συγκέντρωση (15 ηΜ) προηγουμένως μετράται στον ορό των ποντικών που εκτίθενται στον κοινωνικό άγχος σημαντικά αυξημένο πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση. Αυτές οι αποκρίσεις ανεστάλησαν σε ένα εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο από celecoxib. Οι επιδράσεις της celecoxib μόνο και σε συνδυασμό με γ-αμινοβουτυρικό οξύ (GABA) στην εξέλιξη της υποδόρια ξενομοσχεύματα ποντικού από την κυτταρική γραμμή (BXPC-3) πιο δεκτικά σε επινεφρίνη στη συνέχεια διερευνήθηκαν με την παρουσία και απουσία του κοινωνικού άγχους. παράγοντες Καρκίνος-διέγερσης (VEGF & amp? προσταγλανδίνης Ε

2 [PGE

2]) και τα επίπεδα της cAMP μετρήθηκαν με ανοσοδοκιμές στο αίμα και ιστό ξενομοσχεύματος. Η φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών σηματοδότησης ERK, CREB, Src, και ΑΚΤ αξιολογήθηκε με δοκιμασίες ELISA και κηλίδωση Western. Η έκφραση της COX-2, 5-λιποξυγενάσης, και ρ-5-LOX προσδιορίστηκαν με ημι-ποσοτική κηλίδωση Western. Celecoxib και μόνο ανέστειλε σημαντικά την εξέλιξη ξενομόσχευμα και μειωμένη συστηματική και του όγκου του VEGF, PGE2, και cAMP καθώς και φωσφορυλιωμένων πρωτεϊνών σηματοδότησης στο άγχος που εκτίθενται και χωρίς άγχος ποντίκια. Αυτές οι αποκρίσεις ήταν σημαντικά ενισχυμένη με την ταυτόχρονη αγωγή με GABA. Το celecoxib επαγόμενη μειορύθμιση της πρωτεΐνης COX-2 και Ρ-5-LOX ενισχύθηκε επίσης σημαντικά από GABA υπό τις δύο πειραματικές συνθήκες. Τα ευρήματά μας προσδιορίσει την στοχευμένη αναστολή του στρες που προκαλείται από μονοπάτια ως μια πολλά υποσχόμενη περιοχή για πιο αποτελεσματική παρέμβαση του καρκίνου σε καρκίνο του παγκρέατος

Παράθεση:. Al-Wadei ΧΑΝ, Al-Wadei MH, Ullah MF, Schuller HM (2012) celecoxib και GABA συνεργατικά πρόληψη της προόδου καρκίνο του παγκρέατος in vitro και in μοντέλα ξενομοσχεύματος χωρίς άγχος και στρες-εξέθεσαν ποντίκια. PLoS ONE 7 (8): e43376. doi: 10.1371 /journal.pone.0043376

Επιμέλεια: Wael El-Rifai, Vanderbilt University Medical Center, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12 Μαρ 2012? Αποδεκτές: 23 Ιούλη του 2012? Δημοσιεύθηκε: 16 Αύγ 2012

Copyright: © Al-Wadei et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτό το έργο υποστηρίχθηκε οικονομικά από επιχορηγήσεις RC1CA144640 και RO1CA042829 με το Εθνικό Ινστιτούτο Καρκίνου. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

εισαγωγή

ο καρκίνος είναι υπεύθυνη για περίπου το 13% των θανάτων παγκοσμίως και εξακολουθεί να είναι η δεύτερη κύρια αιτία θανάτου στις Ηνωμένες Πολιτείες, που αντιπροσωπεύουν σχεδόν το ένα στα τέσσερα θανάτους [1]. Στατιστικά, ο καρκίνος του παγκρέατος είναι η τέταρτη κύρια αιτία του καρκίνου που σχετίζονται με θανάτους στις ανεπτυγμένες χώρες και έχει ένα ποσοστό επιβίωσης 5 ετών κάτω από 5% [2], [3]. Είναι μία από τις πιο θανατηφόρες νεοπλασματικές ασθένειες, όπως είναι συνήθως ασυμπτωματική μέχρι να φτάσει σε προχωρημένο στάδιο, όταν αποτελεσματικές θεραπείες είναι άχρηστες. Κατά τη στιγμή της διάγνωσης, οι περισσότεροι καρκίνοι του παγκρέατος είναι συνεπώς ακατάλληλο για χρήση και έχουν κάνει μετάσταση σε απομακρυσμένα όργανα. Επιπλέον, αυτή η κακοήθεια είναι γενικά δεν ανταποκρίνονται σε συμβατικά ραδιο-και χημειοθεραπεία, με αποτέλεσμα ένα ποσοστό θνησιμότητας σχεδόν 100% μέσα σε 6 μήνες από τη διάγνωση [3]. Μυθιστόρημα στρατηγικές για τη βελτίωση των παγκρεατικών παρέμβαση του καρκίνου, συνεπώς, χρειάζεται επειγόντως

Το ψυχολογικό στρες, όπως ένας πιθανός ρυθμιστής της εξέλιξης του καρκίνου έχει πρόσφατα αναδειχθεί ως ένα σημαντικό νέο τομέα της έρευνας για τον καρκίνο [4] -. [6]. Έχει έτσι δειχθεί ότι η ανάπτυξη και η εξέλιξη των πλέον κοινούς ανθρώπινους καρκίνους, συμπεριλαμβανομένου του αδενοκαρκινώματος του στομάχου [7], του παχέος εντέρου [8], του προστάτη [9], μαστικό αδένα [10], [11], ωοθήκη [12] , του πνεύμονα [13], [14] και το πάγκρεας [15], [16], διεγείρονται σημαντικά από βητα-αδρενεργικού υποδοχέα (β-AR) σηματοδότησης ξεκίνησε από το άγχος νευροδιαβιβαστών νοραδρεναλίνη και αδρεναλίνη. Έχει επίσης δειχθεί ότι ο υποδοχέας του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα (EGFR) οδός ενεργοποιείται σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα με βήτα-αδρενεργικούς, ΡΚΑ εξαρτώμενη διενεργοποίησης του EGFR [17]. Επιπροσθέτως, β-ΑΕ ρυθμίζουν την παραγωγή του αραχιδονικού οξέος (ΑΑ) σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα [15], με αποτέλεσμα τον σχηματισμό του καρκίνου διέγερσης μεταβολιτών ΑΑ. Πρόσφατες έρευνες σε παγκρεατικά ξενομοσχεύματα καρκίνου από κυτταρικές σειρές BxPC-3 και Panc-1 σε ποντικούς που εκτίθενται σε κοινωνικό στρες έχουν αποκαλύψει περαιτέρω σημαντική στρες που προκαλείται από διέγερση της ανάπτυξης των ξενομοσχευμάτων που συνδέονται με την ενεργοποίηση πολλαπλών πρωτεϊνών σηματοδότησης, συμπεριλαμβανομένου του ΕΚΚ, CREB, Src, και ΑΚΤ [18], οι περισσότερες από τις οποίες υπερεκφράζονται σε παγκρεατικού καρκίνου [19] – [21]. Τα ευρήματα αυτά υποδηλώνουν ότι το ψυχολογικό στρες μπορεί να μειώσει την αποτελεσματικότητα των στρατηγικών παρέμβασης του καρκίνου. Η στοχευμένη αναστολή των καταρρακτών σηματοδότησης στρες που προκαλείται μπορεί επομένως να ανακουφίσει τις αρνητικές επιπτώσεις του στρες στην κλινική έκβαση και επίσης να μειώσει σημαντικά τη συχνότητα εμφάνισης του καρκίνου του παγκρέατος αναπτύσσεται σε άτομα που βρίσκονται σε κίνδυνο λόγω της προϋπάρχοντα σακχαρώδη διαβήτη, παγκρεατίτιδα, ή χρόνιο κάπνισμα [22].

ο εκλεκτικός κυκλοοξυγενάσης 2 (COX-2) μπλοκ αναστολέα celecoxib ο σχηματισμός του Cox-2-διαμεσολαβούμενη, καρκίνος διέγερσης μεταβολιτών ΑΑ και έχει επιδείξει ελπιδοφόρα προκλινικές και κλινικές αντικαρκινική δραστικότητα σε μία ποικιλία ανθρώπινων όγκων, συμπεριλαμβανομένων των παγκρεατικών καρκίνος [23] – [25]. Celecoxib αναστέλλει εκλεκτικά την COX-2, η οποία με τη σειρά της ρυθμίζει πολλαπλές οδούς σε παγκρεατικού καρκίνου [26]. Ισχυρές ενδείξεις υποδεικνύουν ότι επιπροσθέτως της COX-2 παίζει επίσης σημαντικό ρόλο στην ανάπτυξη και πρόοδο πολλών μη-παγκρεατικών όγκων [27]. COX-2 εκφράζεται έντονα σε έναν αριθμό ανθρώπινων καρκίνων και καρκινικές κυτταρικές σειρές, συμπεριλαμβανομένων κόλον [28], γαστρικό [29], πλακώδες καρκίνωμα της κεφαλής και του τραχήλου [30], του τραχήλου της μήτρας [31], μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα [ ,,,0],32], του μαστού [33], του προστάτη [34], και τον καρκίνο του παγκρέατος [35]. Από την άλλη πλευρά, γ-αμινοβουτυρικό οξύ (GABA) ενεργεί ως αναστολέας φυσιολογική του β-αδρενεργικού καταρράκτη, μια επίδραση μετάγονται ενδοκυτταρικά σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα από το Οα

i-συζευγμένο υποδοχέα σερπαντίνας GABA-B που μειώνει το σχηματισμό κυκλικού ΑΜΡ (cAMP), αναστέλλοντας την ενεργοποίηση αδενυλικής κυκλάσης [18], [36].

στην παρούσα μελέτη, ερευνήσαμε τις επιπτώσεις της χρόνιας έκθεσης στην επινεφρίνη νευροδιαβιβαστή του στρες σε συγκέντρωση (15 nM ) μετρήθηκαν προηγουμένως από εμάς στον ορό των ποντικών που απειλούνται με κοινωνικό άγχος [18] στον πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση των PDAC κυτταρικές σειρές Panc-1 και BXPC-3 in vitro και να διερευνηθούν δυναμικό ανασταλτικές επιδράσεις της celecoxib σε αυτές τις απαντήσεις. Στη συνέχεια χρησιμοποιήσαμε μια καθιερωμένη μέθοδο για την πειραματική επαγωγή της χρόνιας κοινωνικό άγχος, την κυρίαρχη μορφή του ψυχολογικού στρες σε ανθρώπους [37], σε ποντικούς που φέρουν ξενομοσχεύματα από την κυτταρική γραμμή (BXPC-3) το οποίο ήταν πιο δεκτικά σε επινεφρίνη in vitro, να διερευνήσει τα δυνητικά ανασταλτικά αποτελέσματα του celecoxib και GABA μόνο και σε συνδυασμό επί της προόδου ξενομοσχεύματος σε χωρίς άγχος και τα ζώα στρες-εκτεθειμένο. Celecoxib αποδεικνύεται και μόνο ισχυρές επιδράσεις του καρκίνου αναστολής και υπό τις δύο αυτές πειραματικές συνθήκες, ενώ η συνδυασμένη θεραπεία με GABA βελτιωθεί σημαντικά όλα τα προληπτικά αποτελέσματα της έρευνας. Αυτή η μελέτη έχει συνέπειες για την εξέλιξη του καρκίνου και την πρόληψη σε πληθυσμούς που βρίσκονται σε μακροχρόνια ψυχολογική δυσφορία λόγω κοινωνικο-οικονομικές και προσωπικές προκλήσεις, οι οποίες οξυνθεί περαιτέρω, όταν ένα άτομο έχει διαγνωστεί με μια απειλητική για τη ζωή ασθένεια, όπως ο καρκίνος του παγκρέατος.

υλικά και Μέθοδοι

Πολιτισμός κυτταρικών σειρών καρκίνου

Τα επικυρωμένα (Radil, Columbia, MO), ανθρώπινου παγκρεατικού καρκίνου κυτταρικές σειρές BXPC-3 (witout μεταλλάξεις ras) και Panc-1 (εκφράζει την ενεργοποίηση σημειακές μεταλλάξεις σε Κ-ras) αγοράστηκε αρχικά από την American Type Culture Collection (Rockville, MD) αναπτύχθηκαν σε RPMI-1640 με 10% ορό εμβρύου μόσχου χωρίς αντιβιοτικά.

In vitro έρευνες

Α) Προσδιορισμός του πολλαπλασιασμού των κυττάρων με τη δοκιμασία ΜΤΤ.

Η χρωματομετρική δοκιμασία 3- (4, 5-dimethyle θειαζολ-2-υλ) -2, 5-διφαινυλ τετραζόλιο (ΜΤΤ) (Sigma) χρησιμοποιήθηκε ως περιγράφηκε προηγουμένως [38] για την αξιολόγηση της διεγερτικές επιδράσεις της χρόνιας έκθεσης επινεφρίνη και το δυναμικό ανασταλτικές επιδράσεις της celecoxib σε αυτήν την απόκριση σε Panc-1 και BXPC-3 κύτταρα in vitro ανάπτυξη. Εν συντομία, Panc-1 και BxPC-3 κύτταρα σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων (50,000 κύτταρα ανά φρεάτιο). Τα κύτταρα στη συνέχεια προκατεργάστηκαν με 15 ηΜ επινεφρίνη για 7 ημέρες (μέσο που περιέχει επινεφρίνη αντικαταστάθηκε κάθε 24 ώρες) ή από καλλιέργεια επί 7 ημέρες χωρίς επινεφρίνη. Celecoxib (1 ηΜ έως 100 μΜ) στη συνέχεια προστέθηκε στα κύτταρα και από τις δύο ομάδες θεραπείας. Μετά από μια περίοδο επώασης 72 ωρών, όλα τα κύτταρα συλλέχθηκαν.

Β) Αξιολόγηση της κυτταρικής μετανάστευσης από χρωματομετρική δοκιμασία.

δοκιμασίες κυτταρικής μετανάστευσης πραγματοποιήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως [36], με τη χρήση 6-φρεατίων πλάκες με ένθετα φίλτρο που παρέχεται από το κιτ δοκιμασίας χρωματομετρική κυτταρικής μετανάστευσης (Cell Biolabs, San Diego, CA, USA). Panc-1 και BxPC-3 κύτταρα προκατεργάστηκαν με 15 ηΜ επινεφρίνη για 7 ημέρες (μέσο που περιέχει επινεφρίνη αντικαταστάθηκε κάθε 24 ώρες) σε φιάλες καλλιέργειας ιστού ή καλλιεργημένα χωρίς επινεφρίνη για 7 ημέρες. Κύτταρα και από τις δύο ομάδες θεραπείας ήταν τότε σπάρθηκε στα ένθετα και υποβλήθηκε σε επεξεργασία με celecoxib (1 ηΜ έως 100 μΜ) για 24 ώρες. Η μεταναστευτική ικανότητα των κυττάρων στη συνέχεια αξιολογήθηκε ακολουθώντας τις οδηγίες του προμηθευτή.

C) Στατιστική αξιολόγηση των δεδομένων in vitro.

Δεδομένα (n = 5) στη στήλη γραφήματα (Εικ. 1) από το τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων και δοκιμασίες κυτταρικής μετανάστευσης παρουσία και απουσία της χρόνιας θεραπείας επινεφρίνης αξιολογήθηκαν με μονόδρομη ανάλυση της διακύμανσης ακολουθούμενη από τεστ πολλαπλής σύγκρισης του Dunn. Δεδομένων (n = 5) από τα πειράματα δόσης-απόκρισης (Εικ. 2) με celecoxib προσαρμόστηκαν σε σιγμοειδείς καμπύλες δόσης-απόκρισης και ΕΚ

50 τιμές για celecoxib υπολογίστηκαν με ανάλυση μη γραμμικής παλινδρόμησης χρησιμοποιώντας λογισμικό Prism GraphPad.

προσδιορισμούς ΜΤΤ (Α) σε Panc-1 (με ενεργοποίηση σημειακών μεταλλάξεων στο Κ-ras) και κυττάρων BXPC-3 (χωρίς μεταλλάξεις ras) in vitro. Η έκθεση για 7 ημέρες για να επινεφρίνης (15 ηΜ) σημαντικά (

ρ

& lt? 0.001) αύξησε τον αριθμό των βιώσιμων κυττάρων στις δύο κυτταρικές σειρές. Το celecoxib αναστολέας Cox-2 (1 μΜ) απέκλεισε τελείως αυτή την απόκριση να επινεφρίνης (

ρ

& lt? 0.001), ενώ επιπροσθέτως η μείωση (

ρ

& lt? 0,001) τον αριθμό των βιώσιμων κυττάρων σε κύτταρα δεν προ-αγωγή με επινεφρίνη. Οι επιδράσεις των πανομοιότυπων θεραπειών για τη μετανάστευση των κυττάρων που φαίνεται στο Σχ. Β στις δύο κυτταρικές σειρές μετανάστευση ήταν σημαντικά πιο διεγείρεται από χρόνια επινεφρίνη από τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων. Celecoxib σημαντικά (

σ

& lt? 0.001) μειώνεται επινεφρίνη προκαλείται από τη μετανάστευση, αλλά δεν αποκλείουν πλήρως αυτή την απάντηση. BCPC-3 κύτταρα ήταν ελαφρώς περισσότερο αποκρίνεται σε επινεφρίνη και στις δύο δοκιμασίες, αλλά οι διαφορές ανάμεσα στις δύο κυτταρικές σειρές δεν ήταν σημαντικές. Οι στήλες είναι μέσες τιμές και τυπικές αποκλίσεις των 5 δείγματα ανά ομάδα θεραπείας.

Η

δόσης απόκρισης-καμπύλες για celecoxib σε Panc-1 και κύτταρα BXPC-3 in vitro με την παρουσία και απουσία του προεπεξεργασίας για 7 ημέρες με επινεφρίνη (15 ηΜ). Τα σχήματα Α και Β δείχνουν αποκρίσεις πολλαπλασιασμού των κυττάρων σε προσδιορισμούς ΜΤΤ ενώ τα Σχήματα C και D δείχνουν αποκρίσεις κυτταρική μετανάστευση. Ενώ και οι δύο κυτταρικές αποκρίσεις ήταν παρόμοια μεταξύ των δύο κυτταρικές σειρές, ΕΚ

50 τιμές για celecoxib στα σχήματα. B, C και D ήταν σημαντικά (

ρ

& lt? 0.001) χαμηλότερο στα κύτταρα προκατεργάζονται για 7 ημέρες με επινεφρίνη. Τα σημεία δεδομένων είναι μέσες τιμές και οι τυπικές αποκλίσεις (η = 5). ΕΚ

50 αξίες και καμπύλης καθορίστηκαν με ανάλυση μη γραμμικής παλινδρόμησης για σιγμοειδή δόση-απαντήσεις.

Η

In Vivo Έρευνες

Ένα πείραμα σε ζώα).

Έξι-εβδομάδων αρσενικών αθυμικών γυμνών ποντικών αγοράστηκαν από την Harlan Sprague Dawley. Το ερευνητικό πρωτόκολλο ζώων εγκρίθηκε από το Πανεπιστήμιο του Τενεσί Θεσμικών φροντίδα των ζώων και την Επιτροπή Χρήσης. Οι ποντικοί εγκλιματίστηκαν για 1 εβδομάδα και διατηρήθηκε στο εργαστήριο εγκατάσταση ζώων μας σύμφωνα με τις κατευθυντήριες γραμμές της Αμερικανικής Ένωσης Εργαστηριακών Φροντίδας Ζώων υπό πρότυπες εργαστηριακές συνθήκες στις οποίες οι ελεγχόμενες θερμοκρασία, υγρασία, και το φως, και είχαν ελεύθερη πρόσβαση σε αυτόκαυστο Purina Rodent Chow τροφίμων και αυτόκαυστο νερό. Μετά την 1-εβδομάδα εγκλιματισμού, τα αυτιά των ποντικών με ετικέτα για να διευκολύνει την παρακολούθηση του κάθε ζώου, η οποία στη συνέχεια τοποθετήθηκαν τυχαία σε έξι ομάδες θεραπείας (

n

= 20), με 5 ποντίκια ανά κλωβό. Πριν ενοφθαλμισμό των νεοπλασματικών κυττάρων, τα ποντίκια στις τρεις ομάδες ψυχολογικής στρες εκτέθηκαν σε κοινωνικό άγχος για 4 εβδομάδες σύμφωνα με τη δημοσιευμένη διαδικασία [37] με την αλλαγή της σύνθεσης της ομάδας του κάθε κλουβί δύο φορές την εβδομάδα. BXPC-3 κύτταρα που είχαν φθάσει το 75% συρροή σε καλλιέργεια στη συνέχεια υποδορίως εμβολιάσθηκαν στην περιοχή πλευρό (3 χ 10

6 σε 0,2 ml PBS, βιωσιμότητας & gt? 95%) των ζώων από κάθε μία από αυτές τις ομάδες. Το κοινωνικό άγχος συνεχίστηκε σε αυτές τις τρεις ομάδες για άλλες 30 ημέρες. Τρεις άλλες ομάδες ποντικών που δεν είχαν εκτεθεί σε κοινωνικό άγχος εμβολιάσθηκαν επίσης με ταυτόσημους αριθμούς των καρκινικών κυττάρων του παγκρέατος BXPC-3. Μία ομάδα από την κάθε κοινωνικό άγχος και πληθυσμών μη-κοινωνικό άγχος υποβλήθηκε σε επεξεργασία με ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις σελεκοξίμπη (Celebrex, Pfizer? 25 mg /kg σ.β., 5 ημέρες /εβδομάδα για 30 ημέρες). Επιπλέον, μία ομάδα κάθε από τους πληθυσμούς στρες κοινωνικό στρες και μη κοινωνικής έγινε ταυτόχρονα σε επεξεργασία με αρχική ενδοπεριτοναϊκές ενέσεις celecoxib (25 mg /kg σωματικού βάρους, 5 ημέρες /εβδομάδα για 30 ημέρες) και στη συνέχεια GABA (Sigma? 10 mg /kg σωματικού βάρους , 5 ημέρες /εβδομάδα για 30 ημέρες) αμέσως μετά στην αντίθετη πλευρά του ποντικιού. Όλα τα ζώα παρατηρήθηκαν για 30 ημέρες μετά τον εμβολιασμό με καρκινικά κύτταρα. Τα μεγέθη των όγκων αξιολογήθηκαν εβδομαδιαίως με ψηφιακή δαγκάνα, και δύο κάθετες διαμέτρους (μήκος και πλάτος) κάθε ξενομοσχεύματος μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας τον ακόλουθο τύπο: όγκος όγκου = (μήκος /2) χ (πλάτος

2). Το βάρος των ζώων παρακολουθήθηκε όλο το πείραμα να παρακολουθεί γενική κατάσταση της υγείας τους και για GABA και θεραπεία celecoxib επιδράσεις. Στο τέλος της περιόδου παρατήρησης των 30 ημερών, τα ζώα υποβλήθηκαν σε ευθανασία με CO

2 εισπνοή. Συλλέχθηκαν δείγματα αίματος για τον προσδιορισμό των νευροδιαβιβαστών, αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα (VEGF), και προσταγλανδίνη Ε

2 (PGE

2) στον ορό και του cAMP στο κυτταρικό κλάσμα του αίματος. Οι όγκοι αποκόπηκαν, καταψύχθηκαν σε υγρό άζωτο, και στη συνέχεια αποθηκεύεται στους -80 ° C για περαιτέρω αναλύσεις.

Β) Ανοσοδοκιμασίες για την ποσοτική ανάλυση του δεύτερου αγγελιοφόρου cAMP, VEGF, PGE2, και φωσφορυλιωμένων πρωτεϊνών σηματοδότησης .

VEGF και PGE

2 σε δείγματα ορού και ιστών του όγκου και cAMP στο κυτταρικό κλάσμα δείγματα αίματος και καρκινικών ιστών αναλύθηκαν με ανοσοδοκιμασίες όπως συνιστάται από τον κατασκευαστή (Enzo Βιοεπιστημών International). Εν συντομία, το κιτ για μέτρηση του cAMP χρησιμοποιεί ένα πολύκλωνο αντίσωμα να συνδεθεί με ανταγωνιστικό τρόπο τη cAMP στα πρότυπα και τα δείγματα. Το κιτ για μέτρηση του VEGF χρησιμοποιεί μονοκλωνικό αντίσωμα σε ανθρώπινο VEGF ακινητοποιημένο σε μια πλάκα μικροτιτλοδότησης να δεσμεύει τον VEGF στα πρότυπα ή δείγματα. Η PGE

2 κιτ χρησιμοποιεί ένα μονοκλωνικό αντίσωμα για την PGE

2 να δεσμεύουν με ανταγωνιστικό τρόπο την PGE

2 στα δείγματα και πρότυπα. Οι απορροφήσεις διαβάστηκαν με συσκευή ανάγνωσης ELISA στα 405 nm για cAMP, 450 nm για PGE

2, και στα 450 nm για VEGF (

n

= 5 ανά ομάδα θεραπείας). Ανίχνευση και ποσοτικοποίηση των επιπέδων του ρ-ERK-1/2 σε θρεονίνη 202 και της τυροσίνης 204, ρ-CREB στη σερίνη στο 133, και ρ-Akt στο υπόλειμμα σερίνης 473 (Invitrogen)? και ενεργότητα κινάσης της ανασυνδυασμένης καταλυτικής περιοχής της π-Src (MBL International) διεξήχθησαν από δείγματα ιστού όγκου (

n

= 5 ανά ομάδα θεραπείας) ομογενοποιούνται σε ρυθμιστικό RIPA και αναστολείς πρωτεάσης όπως συστήνεται από τους κατασκευαστές. Η απορρόφηση αναγνώστηκε με μια συσκευή ανάγνωσης ELISA στα 450 nm. Τα επίπεδα ορού και ο όγκος του στρες νευροδιαβιβαστών νοραδρεναλίνη και η αδρεναλίνη, καθώς και GABA προσδιορίστηκαν με αναλύσεις ELISA όπως περιγράφηκε προηγουμένως [14], [18] για την παρακολούθηση της επιτυχούς επαγωγής ψυχολογικού στρες (τα δεδομένα δεν παρουσιάζονται).

C) Ημι-ποσοτική ανάλυση της COX-2, 5-λιποοξυγενάση (5-LOX) και ρ-5-LOX, και μη-ποσοτική απεικόνιση των πρωτεϊνών σηματοδότησης με κηλίδωση Western.

Τρεις ανεξάρτητες στυπώματα Western διεξήχθησαν για κάθε αντίσωμα για την ημι-ποσοτική εκτίμηση της έκφρασης πρωτεΐνης με πυκνομετρία των ΑΑ-ένζυμα που μεταβολίζουν COX-2 και ρ-5-LOX, χρησιμοποιώντας ΝΙΗ Image J λογισμικού. Επιπλέον, η πρωτεΐνη έκφραση των μορίων σηματοδότησης ποσοτικοποιείται με Δοκιμασίες ELISA παραπάνω έγιναν ορατές με μη-ποσοτική Western blots. Εν συντομία, ιστοί όγκου εν συντομία ομογενοποιήθηκε σε RIPA ρυθμιστικό διάλυμα λύσης (Thermo Scientific), PMSF, Na

3νο

4, και 1 mg /ml απροτινίνη, λευπεπτίνη, και πεπστατίνη. Μετά από μετουσίωση με θερμότητα στους 100 ° C για 5 λεπτά, ίσες ποσότητες πρωτεΐνης υποβλήθηκαν σε ηλεκτροφόρηση χρησιμοποιώντας 12% γέλες Novex SDS-πολυακρυλαμιδίου (Invitrogen) και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες νιτροκυτταρίνης? Western blots ήταν τότε εκτελείται χρησιμοποιώντας επώαση όλη τη νύκτα στους 4 ° C με τα ακόλουθα πρωτογενή αντισώματα: συνολικός ERK1 /2, π-ERK1 /2, π-CREB, ΑΚΤ ρ-ΑΚΤ, Src, ρ-Src, COX-2, 5- LOX, και ρ-5-LOX (Cell Signaling). Σύνολο CREB και ακτίνης αγοράστηκαν από την Millipore. Δευτερεύοντα αντισώματα επωάστηκαν για 1 ώρα σε θερμοκρασία δωματίου. Οι ζώνες οπτικοποιήθηκαν με ECL (Pierce, Thermo Scientific).

D) Στατιστική ανάλυση των δεδομένων in vivo.

Η στατιστική ανάλυση πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας το λογισμικό GraphPad Instat (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA). Για να δοκιμαστεί εάν η απόκλιση μεταξύ των διαμέσους στήλη των όγκων του όγκου σε έξι ομάδες θεραπείας (

n

= 20) ήταν σημαντικά μεγαλύτερη από την αναμενόμενη από την τύχη, μη παραμετρικό Kruskal-Wallis ΑΝΟνΑ για δεδομένα από κάθε ένα από τις 4 εβδομάδες μετά την ένεση των κυττάρων του όγκου. Οι διαφορές μεταξύ των επιλεγμένων ζευγών ομάδων θεραπείας επιπροσθέτως αξιολογήθηκαν από την μη παραμετρική δοκιμή Mann-Whitney. Η στατιστική σημασία των διαφορών μεταξύ των ομάδων για τα επίπεδα του cAMP (

n =

5), PGE

2 (

n =

5), και VEGF (

n =

5) στο αίμα και τους ιστούς ξενομοσχεύματος και για ρ-ERK, ρ-CREB, ρ-Src, και ρ-ΑΚΤ στον ιστό του όγκου (

n

= 5 ανά ομάδα θεραπείας) αξιολογήθηκε με την μη παραμετρική Mann -Whitney δοκιμή. Η στατιστική σημασία των διαφορών μεταξύ των τεσσάρων πυκνομετρική αναγνώσεις ανά ζώνη πρωτεΐνης από τρία ανεξάρτητα Western blots για την ημι-ποσοτική εκτίμηση της COX-2 και Ρ-5-LOX που παρασκευάζονται από τρία τυχαία επιλεγμένα ξενομοσχεύματα ανά ομάδα θεραπείας (

n =

12) εκτιμήθηκε από το μη-παραμετρικό τεστ Mann-Whitney.

Αποτελέσματα

η χρόνια έκθεση σε επινεφρίνη Αυξήσεις και της celecoxib αναστέλλει τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση

η χρόνια έκθεση των Panc -1 και BxPC-3 κύτταρα με επινεφρίνη σημαντικά (

σ

& lt? 0.0001) αυξήθηκαν τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση, με BXPC-3 κύτταρα είναι να ανταποκρίνεται περισσότερο στις επινεφρίνη και στις δύο δοκιμασίες (Εικ. 1). Κατεργασία των κυττάρων με celecoxib (1 μΜ) εξάλειψε εντελώς αυτές τις αποκρίσεις σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (

ρ

& lt? 0.001) (Εικ. 1). Celecoxib (1 μΜ) επίσης σημαντικά (

ρ

& lt? 0.001) ανέστειλε τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση σε unpretraeted κύτταρα από αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Σχ. 1). Όπως φαίνεται στις καμπύλες δόσης-απόκρισης (Σχ. 2), σελεκοξίμπη ανέστειλε τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και μετανάστευση στις δύο κυτταρικές σειρές με την παρουσία και απουσία της χρόνιας επινεφρίνης pre0treatment εξαρτώμενο από τη συγκέντρωση τρόπο. Οι αριθμοί των βιώσιμων και μετανάστευσαν κυττάρων σε επινεφρίνη προεπεξεργασία κύτταρα από αμφότερες τις κυτταρικές σειρές ήταν σημαντικά (

ρ

& lt? 0.001) μεγαλύτερη από ό, τι unpretreated κύτταρα σε όλες τις συγκεντρώσεις celecoxib που δοκιμάστηκαν, που απεικονίζει την ισχυρή διεγερτικά αποτελέσματα της επινεφρίνης PDAC (Εικ . 2). Ταυτόχρονα, ΕΚ

50 τιμές για σελεκοξίμπη ήταν σημαντικά (

ρ

& lt? 0.001) χαμηλότερο σε επινεφρίνη προεπεξεργασία κύτταρα από αμφότερες τις κυτταρικές γραμμές από ότι στα unpretreated κύτταρα (Εικ. 2), γεγονός που υποδηλώνει ισχυρή εξάρτηση επινεφρίνης που προκαλείται από τη μετανάστευση στην COX-2 με τη μεσολάβηση των μεταβολιτών του αραχιδονικού οξέος.

Διαμόρφωση των ξενομοσχεύματος Τόμοι από Σελεκοξίμπη και GABA στο άγχος που εκτίθενται και ατονικά ποντίκια

η στατιστική ανάλυση των δεδομένων από τις έξι ομάδες θεραπείας με μη παραμετρικές ANOVA έδωσε διαφοροποιήσεις μεταξύ στήλη σημαίνει σημαντικά (

ρ

& lt? 0,0001) μεγαλύτερη από το αναμενόμενο κατά τύχη σε κάθε μία από τις παρατηρούμενες 4 εβδομάδες. Όπως αναφέρθηκε προηγουμένως [18], η εξέλιξη της αύξησης ξενομοσχεύματος από την παγκρεατική καρκινική κυτταρική γραμμή BxPC-3 ήταν σημαντικά (εβδομάδα 1:

ρ

& lt? 0,006? Εβδομάδας 2-4:

p

& lt? 0,0001 με δοκιμή Mann-Whitney) προωθείται από ψυχολογικό στρες καθ ‘όλη τη διάρκεια της περιόδου παρατήρησης 4 εβδομάδων (Σχήμα 3).. Μεταχείριση των ζώων unstressed με celecoxib μόνο του σημαντικά (

σ

& lt? 0.0001) μείωσε τα μεγέθη ξενομοσχευμάτων σε όλα τα χρονικά διαστήματα που μετράται. Επιπλέον, celecoxib μόνο μείωσε ξενομόσχευμα μεγέθη στο άγχος εξέθεσαν ποντίκια κάτω από τα επίπεδα των μη επεξεργασμένων, χωρίς άγχος ζώα (

σ

& lt? 0.001 σε κάθε ένα από τα 4 που παρατηρείται εβδομάδες). Θεραπεία της unstressed ποντίκια με celecoxib σε συνδυασμό με το GABA ενισχυθεί περαιτέρω η ανάπτυξη ανασταλτικές επιδράσεις της celecoxib (Εβδομάδα 1:

σ

& lt? 0,0376? Εβδομάδες 2-4:

σ

& lt? 0.0001) . Ομοίως, συν-θεραπεία με GABA αύξησε επίσης τα καρκινικά αναστολής επιπτώσεις της celecoxib στην ομάδα στρες εκτεθεί (

σ

& lt? 0,0001 σε εβδομάδες 1-4).

Τα ζώα είχαν εκτεθεί σε κοινωνικό άγχος (SS) ή δεν είχαν εκτεθεί σε στρες (NS) παρουσία και απουσία του celecoxib (C) ή celecoxib και GABA (γ + ζ) θεραπεία. Ο όγκος ξενομόσχευμα αυξήθηκε σημαντικά (

σ

& lt? 0,0001) από κοινωνικό άγχος. Η απάντηση αυτή ανεστάλη σημαντικά με τη θεραπεία με celecoxib μόνο (

σ

& lt? 0.001) ή με celecoxib και GABA (

σ

& lt? 0,0001). Συνολικά, οι διαφορές στους όγκους των όγκων ήταν στατιστικά σημαντική (

σ

& lt? 0.001) μεταξύ επεξεργασμένων και μη επεξεργασμένων ομάδες. Οι φωτογραφίες δείχνουν αντιπροσωπευτικά παραδείγματα των ξενομοσχευμάτων για κάθε ομάδα θεραπείας.

Η

Διαμόρφωση του cAMP και PGE2 επίπεδα στον ορό και όγκου ιστών από Σελεκοξίμπη και GABA στο άγχος που εκτίθενται και ατονικά ποντίκια

Beta- αδρενεργικοί αγωνιστές ενεργοποιούν την παραγωγή του ΑΑ σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα, οδηγώντας στην COX-2 με τη μεσολάβηση σχηματισμός της PGE2 [15]. Οι β-αδρενεργικοί υποδοχείς [39], καθώς και τους υποδοχείς PGE2 [40] συνδέεται με την διεγερτική πρωτεΐνη G Οαδ που αυξάνει τα επίπεδα της cAMP μέσω ενεργοποίησης αδενυλυλο κυκλάσης. Ως εκ τούτου, μετράται cAMP στο κυτταρικό κλάσμα του αίματος και του όγκου των ιστών και PGE2 σε ιστούς και στον ορό του όγκου με δοκιμασίες ELISA. Τα στοιχεία μας δείχνουν ότι οι συστημικές επίπεδα του cAMP σε δείγματα αίματος και ιστών του όγκου ήταν σημαντικά (

σ

& lt? 0.001) αυξήθηκε (2,8-φορές στο αίμα και 2,5 φορές σε ιστούς όγκων) στα ποντίκια που εκτέθηκαν σε στρες . Αυτή η αντίδραση στο στρες στα κύτταρα του αίματος και των όγκων ήταν σημαντικά (

σ

& lt? 0.001) μειώνονται κατά τη θεραπεία με celecoxib μόνο, μια επίδραση ενισχύεται περαιτέρω (

σ

& lt? 0.001) από το συνδυασμό με το GABA (Σχ. 4Α). Τα παρατηρούμενα επίπεδα της PGE2 στους ιστούς του ορού και του όγκου ακολούθησε παρόμοια πορεία, με σημαντική (

σ

& lt? 0.0001) αυξάνει στα ζώα άγχος που εκτίθενται, απαντήσεις σημαντικά (

σ

& lt? 0.001 ) μειώθηκε κατά celecoxib μόνο και μειώθηκε περαιτέρω από το συνδυασμό celecoxib /GABA (Εικ. 4Β). Συνδυασμένη θεραπεία celecoxib /GABA επιπλέον σημαντικά (

σ

& lt? 0.001). Μειωμένη συστηματική και του όγκου των επιπέδων του cAMP και PGE2 σε μη τεταμένη ποντίκια (Εικ. 4Α, 4Β)

cAMP αξιολογήθηκε στο κυτταρικό κλάσμα του αίματος και σε ξενομοσχεύματος ιστούς (Α) και τα επίπεδα της PGE

2 σε ιστούς ξενομοσχεύματος ορό και (Β). Το κοινωνικό άγχος αύξησε τα επίπεδα και των δύο παραγόντων σημαντικά (

σ

& lt? 0.001), οι απαντήσεις σημαντικά (

σ

& lt? 0.001) μειώθηκε κατά celecoxib. Σε συνδυασμό celecoxib /GABA σημαντικά (

σ

& lt? 0.001) ενίσχυσε τα ανασταλτικά αποτελέσματα της celecoxib (

σ

& lt? 0.001) σε συστηματική και του όγκου των επιπέδων του cAMP και PGE2 στο άγχος και κοινωνικό άγχος εκτιθέμενα ποντίκια. Στήλες είναι μέσες τιμές και SD από 5 τυχαία επιλεγμένα δείγματα ανά ομάδα θεραπείας.

Η

Ελάττωση της φωσφορυλιωμένη Σηματοδοσίας Πρωτεΐνες σε ιστούς όγκων από Σελεκοξίμπη και GABA στο άγχος που εκτίθενται και ατονικά ποντίκια

έχει προηγουμένως δειχθεί ότι β-αδρενεργικοί σηματοδότηση φωσφορυλιώνει πολλαπλών πρωτεϊνών σηματοδότησης σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος in vitro, συμπεριλαμβανομένων CREB, ΕΚΚ, Akt, και Src [17], [38] και ότι οι φωσφορυλιωμένες μορφές αυτών των πρωτεϊνών είναι επίσης επάγεται σε καρκίνο του παγκρέατος ξενομοσχεύματα ποντικών στρες εκτεθειμένων [18]. Ως εκ τούτου, οπτικοποιείται την έκφραση των φωσφορυλιωμένων και μη φωσφορυλιωμένη μορφές αυτών των πρωτεϊνών σε ιστούς όγκων με κηλίδωση Western και προσδιορίζεται ποσοτικά αλλαγές στα επίπεδα φωσφορυλίωσης τους με δοκιμασίες ELISA. Το άγχος που προκαλείται από (

ρ

& lt? 0.0001) φωσφορυλίωση του καθενός από αυτές τις πρωτεΐνες σηματοδότησης ερευνήθηκε ήταν σημαντικά (

ρ

& lt? 0,0001) ανάγεται με κατεργασία με celcoxib μόνο, ένα αποτέλεσμα σημαντικά (

ρ

& lt? 0,0001) αυξήθηκε από την πρόσθετη θεραπεία με GABA (σχήμα 5 Α-Δ).. Επιπλέον, σε συνδυασμό με θεραπεία celecoxib και GABA σημαντικά (

ρ

& lt? 0,0001). Μείωσε την έκφραση των φωσφορυλιωμένες μορφές όλων των πρωτεϊνών διερευνήθηκαν σηματοδότησης σε ποντικούς που δεν εκτίθενται σε στρες (Εικ. 5 Α-D)

κηλίδες Western (Α και Β) που απεικονίζει την επαγωγή της ρ-ERK, ρ-CREB, ρ-ΑΚΤ και ρ-Src από κοινωνικό άγχος και η αναστολή αυτών των αποκρίσεων από μόνη celcoxib ή celecoxib + GABA. Ποσοτική αξιολόγηση αυτών των αλλαγών σε επίπεδο πρωτεΐνης προσδιορίστηκαν στις δοκιμασίες ELISA δείχνονται στο Σχήμα C και D. Επαγωγή όλων διερευνήθηκαν φωσφορυλιωμένων πρωτεϊνών από τον κοινωνικό στρες (SS) ήταν σημαντική (

ρ

& lt? 0.001). Η αναστολή αυτών των αποκρίσεων από μόνος celcoxib ή του συνδυασμού του celecoxib + GABA ήταν σημαντικές (

ρ

& lt? 0.001) για όλες τις φωσφορυλιωμένες πρωτεΐνες. Στήλες στα γραφήματα (C και D) είναι μέσες τιμές και SD του ποσοτικού ανοσοδοκιμασίες ELISA από πέντε τυχαία επιλεγμένα ξενομοσχεύματα ανά ομάδα θεραπείας.

Η

Διαφοροποίηση των COX-2 και 5-LOX στην Tumor ιστό με celecoxib και GABA στο άγχος που εκτίθενται και ατονικά ποντίκια

το ένζυμο COX-2 καταλύει το σχηματισμό των προσταγλανδινών όπως η PGE2 από ΑΑ, ενώ 5-LOX μεσολαβεί στην μεταβολική μετατροπή του ΑΑ σε λευκοτριενίων [41]. Και τα δύο ένζυμα είναι συχνά υπερεκφράζεται σε καρκίνο του παγκρέατος [42], και η φωσφορυλίωση της 5-LOX στην Ser-271 προωθείται από ΑΑ, μια διαδικασία που καταλύεται από διάφορες κινάσες, συμπεριλαμβανομένων των ΡΚΑ [43]. Ως εκ τούτου, ερευνήθηκε τα επίπεδα έκφρασης της COX-2, 5-LOX, και ρ-5-LOX με ημιποσοτική ανάλυση Western στις έξι ομάδες θεραπείας του πειράματος μας. Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι το άγχος σημαντικά (

ρ

& lt? 0,0001) που προκαλείται από την έκφραση της COX-2 και Ρ-5-LOX (2,7 φορές και 2,9 φορές, αντίστοιχα? Σχ. 6Α, 6Β). Celecoxib μόνος σημαντικά (

ρ

& lt? 0,001) μείωσε την επαγόμενη από στρες αυξητική ρύθμιση του COX-2, ένα αποτέλεσμα σημαντικά (

ρ

& lt? 0.001) ενισχύεται με την προστιθέμενη θεραπεία με GABA (Εικ . 6Α, 6Β). Επιπλέον, η συνδυασμένη θεραπεία με τη celecoxib και GABA σημαντικά (

ρ

& lt? 0,0001) ρυθμίζεται προς τα κάτω την έκφραση της COX-2 (0,4 φορές) και ρ-5-LOX (0,5 φορές) σε ποντίκια που δεν εκτέθηκαν σε στρες .

κηλίδας Western (Α) είναι αντιπροσωπευτικά τριών ανεξάρτητων κηλίδων παρασκευάζονται από τρία τυχαίως επιλεγμένα ξενομοσχεύματα ανά ομάδα θεραπείας. Ημι-ποσοτική πυκνομετρία των λωρίδων από τρεις ανεξάρτητους κηλίδες Western έδειξαν σημαντική (

σ

& lt? 0.0001) αυξάνει την έκφραση της πρωτεΐνης από το κοινωνικό άγχος. Οι απαντήσεις αυτές με τη σειρά τους είχαν μειωθεί σημαντικά με επεξεργασία celecoxib ως μονοθεραπεία (

σ

& lt? 0.001) ή με celecoxib και GABA (

σ

& lt? 0,0001). Στήλες στο γράφημα (Β) είναι μέσες τιμές και SD από τέσσερα πυκνομετρική αναγνώσεις ανά ζώνη προσαρμόζεται για ακτίνη σε ανεξάρτητες κηλίδες παρασκευάζονται από τρία τυχαίως επιλεγμένα ξενομοσχεύματα ανά ομάδα θεραπείας.

Η

Modulation του VEGF Επίπεδα στον Ορό και όγκου ιστών από Celecoxib και GABA σε Stress-εκτεθειμένα ποντίκια και ατονικά

VEGF είναι ο πιο ισχυρός και ειδικός αγγειογόνο αυξητικό παράγοντα [44]. Το κοινωνικό άγχος σημαντικά (

ρ

& lt? 0.001) αυξημένα επίπεδα VEGF και στον ορό (1,8 φορές) και ξενομοσχεύματα (1,7 φορές) ποντικών που φέρουν ξενομοσχεύματα από την κυτταρική γραμμή BxPC-3. Celecoxib ως μονοθεραπεία σημαντικά (

σ

& lt? 0.001) μείωσε τις δύο απαντήσεις, ενώ ο συνδυασμός της θεραπείας με celecoxib /GABA μπλοκάρει εντελώς το άγχος που προκαλείται από την επαγωγή του VEGF στον ορό και ιστό του όγκου (Εικ. 7). Επιπλέον, η celecoxib συν GABA σημαντικά (

σ

& lt? 0.001) μειώνεται κάτω από τα επίπεδα του VEGF βάση (

σ

& lt? 0.001). Σε μη τεταμένη ποντίκια (Εικ. 7)

το κοινωνικό άγχος σημαντικά (

ρ

& lt? 0.001) αυξημένα επίπεδα VEGF και στον ορό και ξενομοσχεύματα, μια απόκριση μειώνεται σημαντικά με σελεκοξίμπη (C,

ρ

& lt? 0.001), ενώ celecoxib και GABA ( C + G) θεραπεία μπλοκάρει πλήρως την επαγόμενη από στρες επαγωγή του VEGF σε ιστούς και στον ορό του όγκου. Επιπλέον, το celecoxib συν GABA μειωθεί σημαντικά VEGF κάτω από τα βασικά επίπεδα σε ποντίκια που δεν είχαν εκτεθεί σε στρες (

σ

& lt? 0.001). Στήλες είναι μέσες τιμές και SD πέντε τυχαία επιλεγμένα δείγματα ανά ομάδα θεραπείας.

Η

Συζήτηση

Τα στοιχεία μας δημιουργούνται in vitro και σε μοντέλα ξενομοσχεύματος ποντικού δείχνουν, για πρώτη φορά, ότι χρόνια έκθεση σε επινεφρίνης από ψυχολογικό στρες διεγείρουν σημαντικά την εξέλιξη της PDAC μέσω μηχανισμών κυρίως λόγω μεταβολίτες COX-2 εξαρτώμενη αραχιδονικό οξύ. Επιπλέον, μας vitro προσδιορισμό τόσο της, τον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη μετανάστευση ως μηχανισμοί που εμπλέκονται στην στρες που προκαλείται από την εξέλιξη PDAC. Συλλογικά, τα ευρήματά μας υποδεικνύουν ότι οι εκλεκτικοί COX-2 αναστολέα celecoxib μπορεί να έχει ισχυρή ανασταλτική επιδράσεις στο στρες που προκαλείται από την εξέλιξη του PDAC και ότι η συνδυασμένη θεραπεία αυτού του παράγοντα με τον ανασταλτικό νευροδιαβιβαστή GABA μπορεί να βελτιώσει σημαντικά κλινικά αποτελέσματα απουσία και παρουσία της ψυχολογικής στρες.