Αφηρημένο

όγκων υποξία επάγει επιθηλιακά-μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT), η οποία προκαλεί την εισβολή και μετάσταση, και συνδέεται με τον καρκίνο βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ). Είτε EMT δημιουργεί ΚΕΠ

de novo

, ενισχύει τη μετανάστευση των υφιστάμενων ΚΕΠ ή και τα δύο είναι ασαφής. Εξετάσαμε ιστό αδενοκαρκινώματος παγκρεατικού πόρου (PDA), μαζί με καρκινώματα του μαστού, του πνεύμονα, του νεφρού, του προστάτη και των ωοθηκών των ασθενών. Για

in vitro

μελέτες, πέντε καθιερωμένες κυτταρικές γραμμές PDA ταξινομούνται ως λιγότερο (CSC

χαμηλή) και άκρως επιθετική CSC-όπως κύτταρα (CSC

υψηλή) εξετάστηκαν από μονά και διπλά μικροσκοπία ανοσοφθορισμού, πληγή -, transwell-, και μικροσκοπίας time-lapse. HIF-1α και Slug, καθώς και HIF-2α και CD133 συν-εκφράζεται που δείχνουν προς μια υποθετική συνύπαρξη της υποξίας, ΕΜΤ και ΚΕΠ

in vivo

. CSC

υψηλής κύτταρα παρουσίασαν υψηλή βασική έκφραση της μεσεγχυματικών βιμεντίνης πρωτεΐνη, αλλά χαμηλή ή μηδενική έκφραση της επιθηλιακής δείκτη E-cadherin, με το αντίθετο αποτέλεσμα σε CSC

χαμηλή κύτταρα. Η υποξία προκάλεσε αλλοίωση της μορφολογίας των κυττάρων από επιθηλιακά σε ένα φαινότυπο μεσεγχυματικά, η οποία ήταν πιο έντονη σε CSC

υψηλής κύτταρα. Ταυτοχρόνως, η έκφραση Ε-καδερίνης μειώθηκε και η έκφραση του βιμεντίνης, Slug, Twist2 και Zeb1 ενισχυθεί. Ενώ υποξία προκάλεσε μετανάστευση σε όλες τις κυτταρικές σειρές, ταχύτητα καθώς και το ποσοστό των αποδημητικών, πολωμένο και ψευδοπόδια σχηματισμού κυττάρων ήταν σημαντικά υψηλότερη σε CSC

υψηλής κύτταρα. Αυτά τα δεδομένα δείχνουν ότι η υποξία προκαλούμενη EMT συμβαίνει σε πολλές άλλες οντότητες όγκου PDA και. Ωστόσο αν και υποξία-επαγόμενη σηματοδότηση EMT εμφανίζεται σε όλους τους πληθυσμούς κυττάρου όγκου, μόνο το στέλεχος που μοιάζει με κύτταρα αποκτούν υψηλά μεταναστευτικών δυναμικό και έτσι μπορεί να είναι υπεύθυνη για την εισβολή και τη μετάσταση

Παράθεση:. Salnikov AV, Liu L, M Platen , Gladkich J, Σαλνίκοβα O, Ryschich Ε, et al. (2012) η υποξία επάγει EMT στο χαμηλό και εξαιρετικά επιθετική του παγκρέατος Tumor Cells, αλλά μόνο τα κύτταρα με καρκινικά βλαστικά χαρακτηριστικά των κυττάρων Αποκτήστε Έντονος μεταναστευτικών δυναμικό. PLoS ONE 7 (9): e46391. doi: 10.1371 /journal.pone.0046391

Επιμέλεια: Fazlul H. Sarkar, Wayne State University School of Medicine, Ηνωμένες Πολιτείες της Αμερικής

Ελήφθη: 12 Ιούν, 2012? Αποδεκτές: 29 Αυγούστου του 2012? Δημοσιεύθηκε: 26 Σεπτεμβρίου, 2012

Copyright: © Salnikov et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη υποστηρίχθηκε από επιχορηγήσεις από το γερμανικό Καρκίνο Βοήθειας (Deutsche Krebshilfe 109362), Γερμανικά Κοινότητα Έρευνας (DFG HE 3186 /11-1) και γερμανο-ισραηλινό Ίδρυμα για την Επιστημονική Έρευνα και την Ανάπτυξη (GIF 1058 – 7,11 /2008). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

παγκρεατικού πόρου αδενοκαρκίνωμα (PDA) είναι μια επιθετική κακοήθεια που χαρακτηρίζεται από μια εκτεταμένη τοπική εισβολή, πρώιμη συστηματική διάδοση και την ένδειξη αντίστασης σε χημειοθεραπεία και η ακτινοθεραπεία [1]. Επιπλέον, τα περισσότερα PDA έχουν έντονη υποξική όγκο μικροπεριβάλλον [2]. Tumor υποξία συμβαίνει όταν η κατανάλωση του οξυγόνου υπερβαίνει την παράδοσή του από το αγγειακό σύστημα [3]. Αυτό οδηγεί σε επαγωγή παραγόντων μεταγραφής υποξία, π.χ. HIF-1α και HIF-2α, οι οποίες ρυθμίζουν την υποξική απόκριση με επαγωγή των γονιδίων στόχων, όπως ο VEGF [4]. Η πίεση του οξυγόνου σε συμπαγείς όγκους είναι γενικά χαμηλότερη απ ‘ότι στις γύρω μη-κακοήθεις ιστούς, και έχουν όγκοι εμφανίζουν εκτεταμένη υποξία έχει αποδειχθεί ότι είναι πιο επιθετικοί από αντίστοιχες όγκους που είναι καλύτερα οξυγονωμένο [5], [6], [7]. Αυτό περιλαμβάνει τον καρκίνο του παγκρέατος όπου η υψηλή έκφραση του δείκτη υποξία HIF-1α σε ιστό ασθενούς έχει αποδειχθεί ότι είναι ένα προγνωστικό δείκτη κακής κλινικής έκβασης [8]. Σε πειραματικές μελέτες, υποξία προβλέπει επιθετική ανάπτυξη και τον σχηματισμό αυθόρμητη μετάσταση σε παγκρεατικά ξενομοσχεύματα καρκίνου [9]. Κατά συνέπεια, υποτροπή των όγκων παρουσιάζουν υψηλότερη υποξικό κλάσμα σε σχέση με τις πρωτογενείς όγκους [10], [11], γεγονός που υποδηλώνει ένα ρόλο της υποξίας στον εμπλουτισμό των καρκινικών κυττάρων με τα χαρακτηριστικά των βλαστικών κυττάρων (CSC).

Ο μικρός πληθυσμός CSC είναι προτείνεται να διαθέτουν δυναμικό αυτο-ανανέωσης και την ικανότητα να διαφοροποιούνται και δημιουργώντας έτσι το ετερογενή πληθυσμό κυττάρων του όγκου καταγωγής [12], [13], [14]. Αυτά τα ευρήματα έχουν επίσης αποδειχθεί για τον καρκίνο του παγκρέατος [15], [16]. Επιπλέον CSC προτείνονται να μεσολαβούν ανεξέλεγκτης ανάπτυξης, αντοχής στη θεραπεία, εισβολή και μετάσταση [17]. Ωστόσο, αν η ΚΕΠ είναι πραγματικά τα μόνα κύτταρα με

de facto

ογκογόνο δυναμικό παραμένει αμφιλεγόμενη [18], [19], [20], [21]. Πρόσφατες εκθέσεις δείχνουν ότι η εμφάνιση των ΚΕΠ συμβαίνει εν μέρει ως αποτέλεσμα της επιθηλιακής-μεσεγχυματικής μετάβασης (EMT) [21]. Ως εκ τούτου, τίθεται το ερώτημα αν EMT επηρεάζει τον πληθυσμό CSC μόνο ή και οι πιο διαφοροποιημένη πρόγονοι

EMT είναι μια εξελικτικά συντηρημένη διαδικασία ανάπτυξης κατά τη διάρκεια του ότι τα κύτταρα χάνουν τα επιθηλιακά χαρακτηριστικά και να αποκτήσουν τις ιδιότητες των μεσεγχυματικών [22]. Αυτό συνοδεύεται από την διάλυση του κυττάρου-κυττάρου διασταυρώσεις και απώλεια apico βασεοπλευρική πολικότητας, με αποτέλεσμα τον σχηματισμό των μεταναστευτικών μεσεγχυματικών κυττάρων με επεμβατικές ιδιότητες [21]. Ως εκ τούτου, EMT εμπλέκεται στην πρόοδο του όγκου και τη μετάσταση [23]. ΕΜΤ-επαγωγείς, όπως αυξητικός παράγοντας μεταμόρφωσης-β (ΤΟΡ-β) ή υποξία, αλλαγές σκανδάλη στη γονιδιακή έκφραση από περίπλοκες μονοπάτια σηματοδότησης. Ένας βασικός μηχανισμός που εμπλέκονται στην εξέλιξη του ΕΜΤ είναι προς τα πάνω ρύθμιση του δείκτη μεσεγχυματικών βιμεντίνης και προς τα κάτω ρύθμιση της επιθηλιακής δείκτη Ε-καδερίνης – το κύριο μόριο προσκόλλησης διαμεμβρανικό υπεύθυνη για κυττάρου-προς-κύτταρο αλληλεπιδράσεων και οργάνωση ιστού σε επιθηλιακά κύτταρα [24]. E-cadherin είναι μεταγραφικά καταστέλλεται από πρωτεΐνες Twist, σαλιγκάρι, γυμνοσάλιαγκας και Zeb. Μειωμένη έκφραση Ε-καδερίνης προκαλεί διάσπαση adherens διασταύρωση, και μαζί με άλλα γεγονότα σηματοδότησης προωθεί εύρωστη αλλαγές γονιδιακή έκφραση [21]. Η απώλεια της πολικότητας και του κέρδους των κινητικών χαρακτηριστικών των μεσεγχυματικών κυττάρων κατά την εμβρυϊκή ανάπτυξη ώθησε συγκρίσεις με μεταστατικό καρκίνο κύτταρα κατά τη διάρκεια κακοήθη εξέλιξη [25]. Αξίζει να σημειωθεί ότι, τα πρόσφατα στοιχεία δείχνουν ότι EMT πράγματι εμπλέκεται στην παραγωγή κυττάρων με ιδιότητες των βλαστικών κυττάρων, όπως φαίνεται στον καρκίνο του μαστού [25], [26], παχέος εντέρου [27] και το πάγκρεας [28], [29].

Σύμφωνα με την υπόθεση CSC αποκλειστικά ο πληθυσμός CSC είναι υπεύθυνος για την έγκαιρη συστηματική διάδοση και τον σχηματισμό μεταστάσεων. Αυτό σημαίνει ότι η υποξία που προκαλείται από EMT, είτε αφορά μόνο ΚΕΠ ή ενεργοποιεί περισσότερο διαφοροποιημένα προγονικά κύτταρα σε βλαστικά κύτταρα που μοιάζουν ή και τα δύο μαζί. Δεδομένου ότι το ζήτημα αυτό δεν έχει εξεταστεί μέχρι στιγμής, έχουμε ασχοληθεί με το θέμα. Με την εστίαση να καρκίνο του παγκρέατος βρήκαμε συν-έκφραση υποξία, ΕΜΤ και δείκτες CSC στον ιστό του ασθενούς που προέρχεται. Με τη χρήση των καθιερωμένων κυτταρικών σειρών με υψηλή ή χαμηλή βλαστικά κύτταρα χαρακτηριστικά (CSC

υψηλή ή CSC

χαμηλή) που προκαλείται από την υποξία από ένα μίγμα αερίου χαμηλού οξυγόνου. Αυτό οδήγησε σε αλλαγές στην κυτταρική μορφολογία με αποτέλεσμα μια πιο ινοβλαστοειδή-φαινότυπο και EMT σχετίζονται έκφραση πρωτεΐνης σε δύο πληθυσμούς καρκινικών κυττάρων. Ωστόσο, οι πιο επιθετική κύτταρα είχαν υψηλότερη βασική ΕΜΤ-υπογραφή και αυτό συνδέθηκε με ταχύτερη και υψηλότερη υποξία μεσολάβηση επαγωγή των μεταναστευτικών δραστηριότητας. Τα ευρήματά μας μπορεί να έχει επιπτώσεις για διάφορες οντότητες του όγκου, από τη στιγμή που βρήκε την έκφρασή της υποξίας CA δείκτη ΙΧ και του δείκτη EMT Twist2 όχι μόνο σε PDA, αλλά και σε καρκινικό ιστό ασθενών που προέρχονται από μαστού, του νεφρού, του προστάτη, των πνευμόνων και των ωοθηκών.

Υλικά και Μέθοδοι

όγκου κυτταρικές γραμμές

BxPc-3, Capan-2, ΜΙΑ-PaCa2, AsPC-1 και Capan-1 κυτταρικές γραμμές PDA ελήφθησαν από την Αμερικανική Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) και επικυρώνονται σε όλη την καλλιέργεια με την τυπική μορφολογία. Mycoplasma αρνητικές καλλιέργειες εξασφαλίζεται με εβδομαδιαίες εξετάσεις. Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε ϋΜΕΜ (ΡΑΑ, Pasching, Αυστρία) συμπληρωμένο με θερμο-απενεργοποιημένο FCS 10% (Sigma-Aldrich, St. Louis, ΜΟ, USA) και 25 mmol /L HEPES (ΡΑΑ, Pasching, Αυστρία).

δείγματα Δήλωση Ηθικής + όγκου ιστού

ιστό του όγκου των ασθενών που προέρχονται από παγκρέατος, του μαστού, του νεφρού, του πνεύμονα, του προστάτη και του καρκίνου των ωοθηκών ελήφθη υπό την έγκριση της επιτροπής δεοντολογίας του Πανεπιστημίου της Χαϊδελβέργης. Ο ιστός αναλύθηκε ανώνυμα και προέρχεται από ένα 30-year-old τράπεζα ιστών. Ως εκ τούτου, ένα έντυπο συγκατάθεσης ασθενούς δεν ισχύει. Διαγνώσεις ιδρύθηκαν με συμβατικά κλινικά και ιστολογικά κριτήρια, σύμφωνα με τον Παγκόσμιο Οργανισμό Υγείας (ΠΟΥ). Όλα κλινικές έρευνες έχουν διεξαχθεί σύμφωνα με τις αρχές που διατυπώνονται στη Διακήρυξη του Ελσίνκι.

In vitro μοντέλο υποξία

Για την επαγωγή της υποξίας συρροή κυττάρων 80% τέθηκαν σε θάλαμο υποξίας (αυτο- έκανε), στην οποία διαβιβάσθηκε με αέριο μίγμα 1% O

2, 5% CO

2, 94% Ν

2 (Grandpair, Heidelberg, Germany) για περίπου 4 λεπτά. Τα κύτταρα επωάστηκαν στο υποξικό περιβάλλον για 24, 48 ή 72 ώρες στους 37 ° C. Ο θάλαμος ξαναγεμίζει με το αέριο μίγμα μετά από 24 ώρες για να εξασφαλιστεί σταθερή συγκεντρώσεις αερίων.

Ανοσοϊστοχημεία και ανοσοκυτταροχημεία

Η ανοσοϊστοχημεία επί 6 μm κατεψυγμένες ή εγκλεισμένο σε παραφίνη τομές ιστών εκτελέστηκε όπως περιγράφηκε προηγουμένως [30 ]. Τα αντισώματα που χρησιμοποιήθηκαν για ανοσοϊστοχημεία ήταν πολυκλωνικό κουνελιού αντι-ανθρώπινο CA IX (Santa Cruz Biotechnology) και mAbs ποντικού αντι-ανθρώπου Twist2 και βιμεντίνης (Abcam, Cambridge, UK). Για διπλό χρώσεις immunocytofluorescence mAb ποντικού που κατευθύνεται προς HIF-1α (R &? D Systems, Abingdon, UK), HIF-2α (Novus Biologicals, Cambridge, Ηνωμένο Βασίλειο), και πολύκλωνα αντισώματα κουνελιού κατά της ανθρώπινης Slug, CD133 (Abcam, Cambridge, Ηνωμένο Βασίλειο), Ε-καδερίνης (Cell Signaling, Danvers, ΜΑ, USA) και Zeb1 (Santa Cruz Biotechnology, Heidelberg, Germany). Δευτερεύοντα αντισώματα κατσίκας αντι-ποντικού IgG συζευγμένο με Alexa 488 ή κατσίκας αντι-κουνελιού IgG Alexa 594 (Invitrogen, Karlsruhe, Germany).

πληγών επούλωσης δοκιμασία

Tumor κύτταρα (6 × 10

5) σπάρθηκαν σε πλάκες 6-φρεατίων και αναπτύχθηκαν προς συρροή επί μία νύκτα. Είκοσι τέσσερις ώρες μετά την επώαση κάτω από υποξικές ή ορθοξικές συνθήκες μια γραμμή ήταν γδαρμένο εντός του συρρέουσα στιβάδα κυττάρων χρησιμοποιώντας το λεπτό άκρο του ενός άκρου πιπέτας 10 μΙ (χρόνος 0). Εικόνες που μεταναστεύουν κύτταρα ελήφθησαν διαδοχικά κατά το κλείσιμο των τραυματιών περιοχής.

Time-lapse μικροσκοπία βίντεο

BxPc-3 ή κυττάρων (5 × 10

5) εκτέθηκαν σε 1 AsPC- υποξία ή νορμοξία για 48 ώρες αναμίχθηκαν με ένα διάλυμα κολλαγόνου τύπου Ι. Ένας θάλαμος μικροσκόπιο POCmini (LACON GbR, Ulm, Γερμανία) πληρώθηκε με καρκινικά κύτταρα σε διάλυμα κολλαγόνου και η πηκτή πολυμερίζεται στους 37 ° C σε CO

2 εκκολαπτήριο για 1,5 ώρες. Ο θάλαμος POCmini με τον πολυμερισμένο τρισδιάστατη (3D) πήγματος κολλαγόνου στη συνέχεια τοποθετήθηκε σε μια πλάκα θέρμανσης (36,6 ° C, LACON, Ulm, Γερμανία) κάτω από το μικροσκόπιο (Leitz, Wetzlar, Germany). Κύτταρα σε 3D τζελ κολλαγόνου επικεντρώθηκαν κάτω των 50 ετών

x

μεγέθυνση. Οι εικόνες καταγράφηκαν χρησιμοποιώντας ένα ψηφιακό βιντεοκάμερα Kappa (DX2, Kappa GmbH, Gleichen, Germany) και λήφθηκαν κατά συνέπεια με ένα διάστημα 15 λεπτών κατά τη διάρκεια μιας περιόδου 24 ωρών. εικόνες διαδοχική TIFF μεταφέρθηκαν σε μορφή AVI βίντεο χρησιμοποιώντας το λογισμικό Animation Shop. Οι αναλύσεις των κινήσεων των κυττάρων έγιναν με CapImage 8,4 λογισμικό (Δρ Zeintl Βιοϊατρικής Μηχανικής, Χαϊδελβέργη, Γερμανία). Η μετανάστευση των μεμονωμένων κυττάρων αναλύθηκε κάτω από 2:01 ζουμ χρησιμοποιώντας ένα «πλαίσιο για να πλαισιώσει» μέθοδο. Ποσοστό μεταναστευτικά κύτταρα, το είδος της κίνησης και της ταχύτητας αξιολογήθηκαν.

Transwell δοκιμασία μετανάστευσης

Για να αναλύσουμε επεμβατική δυναμικό των κυττάρων χρησιμοποιήσαμε ένα πρότυπο δοκιμασία φρεατίων περιγράφεται αλλού. Χρησιμοποιήθηκαν Transwell πολυκαρβονικό φίλτρο (μέγεθος πόρων 8 μm) (Corning Inc, Lowell, ΜΑ). Η υποξία προ-αγωγή (48 ώρες) ή κύτταρα ελέγχου επεξεργασμένα νορμοξία σπάρθηκαν σε μια συγκέντρωση 10

5 κύτταρα ανά πλάκες cm

2 από 24 φρεατίων. Στη συνέχεια τα κύτταρα εκτέθηκαν σε υποξία (Migration μετράται κάτω από υποξία) ή νορμοξία (Migration μετρούμενη υπό υποξία) για επιπλέον 48 ώρες και ο αριθμός των κυττάρων transmigrated μετρήθηκε. Το ποσοστό των κυττάρων που transmigrated κανονικοποιήθηκε στο ποσοστό των ζωτικότητα των κυττάρων αξιολογείται με μία ανίχνευση ΜΤΤ στο τελικό σημείο του πειράματος.

Στατιστική ανάλυση

Ποσοτικά δεδομένα παρουσιάζονται ως μέσος όρος ± SD. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το

t

δοκιμασία του Student για στατιστική σημαντικότητα.

P

& lt?. 0.05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική

Αποτελέσματα

Η έκφραση της υποξία, EMT- και CSC-δείκτες στον παγκρεατικό ιστό καρκίνου

Για να μελέτη συν-έκφραση υποξία και ΕΜΤ-δείκτες πραγματοποιήσαμε διπλή χρώση ανοσοφθορισμού των δειγμάτων κατεψυγμένου ιστού που λαμβάνονται από ασθενή του πόρου αδενοκαρκίνωμα του παγκρέατος. Σε HIF-1α θετικών περιοχών Ε-καδερίνης ήταν ρυθμισμένα προς τα κάτω και Slug πάνω ρυθμισμένα αποκαλυπτική όγκο που προκαλείται από υποξία EMT (Εικ. 1Α). Σε ορισμένες περιοχές του όγκου, τα κύτταρα είτε με βιμεντίνης ή έκφραση Ε-καδερίνης παρατηρήθηκαν σε στενή γειτνίαση (Εικ. 1Β). Αυτό δείχνει ότι τα περιβάλλοντα στρωματικά κύτταρα είναι θετικά για βιμεντίνη και αρνητικές για το E-cadherin. Πιο ενδιαφέρον είναι, υποξικές περιοχές θετικό για το δείκτη υποξία HIF-2α έδειξε συν-χρώση με CD133, υποδηλώνοντας ότι η υποξία του όγκου συσχετίζεται με έκφραση των δεικτών CSC (Εικ. 1 C). Αυτά τα δεδομένα επιβεβαιώνουν ότι η υποξία με γνώμονα EMT συμβαίνει σε ιστό όγκου των ασθενών με καρκίνο του παγκρέατος και CSC-θετικά κύτταρα όγκου είναι παρόντα σε μικροπεριβάλλοντα υποξίας των όγκων.

(Α) Διπλή χρώσεις ανοσοφθορισμού δείγματα όγκων από ασθενείς με καρκίνο του παγκρέατος . Πυρηνική έκφραση του HIF-1α (πράσινο, βέλος) και η έκφραση της μεμβράνης της Ε-καδερίνης (κόκκινο, βέλος) ή Slug (κόκκινο, βέλος) δείχνεται. Κίτρινο χρώμα σε συγχωνευθείσα εικόνες υποδεικνύει συν-έκφραση της Ε-καδερίνης ή Slug σε HIF-1α-θετικά κύτταρα. (Β) έκφραση μεμβράνης του Ε-καδερίνης (κόκκινο), κυτταροπλασματική έκφραση του βιμεντίνης (πράσινο) μαζί με ϋΑΡΙ-κηλίδωση των πυρήνων (μπλε). Λευκά τετράγωνα υποδεικνύουν βιμεντίνης-θετικά κύτταρα στο εσωτερικό της μάζας του όγκου που είναι αρνητικές για το E-cadherin ή

αντίστροφα

. Bar: 100 μm. Διπλασιαζόμενες μεγεθύνσεις των περιοχών που περιβάλλεται από λευκά τετράγωνα που φαίνεται στα αριστερά. (Γ) Η πυρηνική έκφραση του HIF-2α και έκφραση μεμβράνης του CD133 εμφανίζεται ως ενιαίο χρώση και ως συγχωνευμένη χρώση στην οποία το κίτρινο χρώμα υποδηλώνει διπλό θετικότητα.

Η

Η υποξία επάγει σηματοδότηση HIF-1α και μορφολογικά μεταβολές in vitro

για πιο λεπτομερή αξιολόγηση της υποξίας που προκαλείται από EMT και την επιρροή για να διαφοροποιημένη και CSC-όπως καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος που χρησιμοποιήσαμε πέντε ιδρύθηκε ανθρώπινες κυτταρικές σειρές του PDA. Σύμφωνα με το βαθμό διαφοροποίησης του πρωτογενούς όγκου, μεταλλάξεις στο K-ras ή ρ53, αποικία και σφαιροειδή σχηματίζουν ικανότητα, δραστηριότητα ΑΙ_ϋΗ, ογκογονικότητα σε ποντικούς και έκφραση της Ε-καδερίνης και βιμεντίνης ταξινομήσαμε αυτές κυτταρικές γραμμές, όπως CSC

υψηλή ή CSC

χαμηλή (Πίνακας 1). Η υποξία προκλήθηκε με επώαση των κυττάρων σε ένα αέριο μίγμα από 1% O

2, 5% CO

2 και 94% Ν

2. Αυτό οδήγησε σε γρήγορη up-ρύθμιση του HIF-

Η

1α και του γονιδίου-στόχου VEGF της μέσα σε 2 ώρες και στα δύο, CSC

χαμηλή και CSC

υψηλής κύτταρα όπως εξετάστηκε με ανάλυση κηλίδος Western. Σε αντίθεση, τα κύτταρα καλλιεργούνται κάτω από συνθήκες ορθοξικές έκανε δεν ρυθμίζουν αυτές τις πρωτεΐνες (σχ. 2Α, τα στοιχεία δεν φαίνονται). CSC

χαμηλή κύτταρα είχαν μια κορυφή έκφρασης μεταξύ 6 και 12 ωρών, η οποία υποχώρησε σταδιακά την πάροδο του χρόνου, αλλά ήταν ακόμη ορατά σε 72 ώρες. Σε αντίθεση, CSC

υψηλής κύτταρα είχαν μια προηγούμενη κορυφή μεταξύ 4 και 6 ώρες, η οποία μειώθηκε σε πολύ χαμηλά επίπεδα ήδη στις 24 ώρες και δεν ήταν ανιχνεύσιμη στις 72 ώρες και στις δύο κυτταρικές σειρές. Σε αντίθεση, η έκφραση VEGF ήταν σταθερά ενισχυμένη κατά τη διάρκεια μιας περιόδου 72 ωρών. Σύμφωνα με την παρατηρούμενη υποξία που σχετίζονται με σηματοδότηση τον αριθμό των κυττάρων με ινοβλαστοειδή φαινότυπο αυξήθηκε μέσα σε 72 ώρες 20 έως 28% σε CSC

χαμηλή κύτταρα και 28-33% σε CSC

υψηλής κύτταρα (Εικ . 2C). Επαγωγή του ποσοστού του σχήματος ατράκτου κύτταρα ήταν ακόμη πιο έντονη και υψηλότερη σε CSC

υψηλής κύτταρα κατά του ΤΟΡ-β, μια γνωστή-επαγωγέας της ΕΜΤ, το οποίο χρησιμοποιήθηκε ως θετικός έλεγχος. Παρόμοιες μορφολογικές μεταβολές κατά την έκθεση σε υποξία παρατηρήθηκαν σε Capan-1, Capan-2 και AsPC-1 καρκινικών κυττάρων (Σχήμα S1). Αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι το

in vitro

επαγωγή υποξία επάγει EMT και στις δύο κυτταρικών πληθυσμών -. Πιο διαφοροποιημένη και CSC-όπως καρκινικά κύτταρα του παγκρέατος, αλλά το αποτέλεσμα είναι ταχύτερη και ισχυρότερη σε CSC

υψηλής κύτταρα

(Α) Για την επαγωγή υποξία

in vitro

, BxPc-3 και μΙΑ-PaCa2 κύτταρα επωάστηκαν σε αεροστεγή θάλαμο στην ατμόσφαιρα 1% O

2, 5% CO

2 και 94% Ν

2 για τις χρονικές περιόδους που αναφέρονται. Οι έλεγχοι επωάστηκαν υπό συνθήκες ορθοξικές για 48 h (n). Οι πρωτεΐνες συλλέχθηκαν και η έκφραση του HIF-1α και VEGF εξετάσθηκαν με ανάλυση κηλίδος Western. Εκχυλίσματα πρωτεΐνης από κύτταρα που έχουν καλλιεργηθεί υπό συνθήκες ορθοξικές (Ν: 16% O

2, 5% CO

2, 79% Ν

2) χρησίμευσαν ως έλεγχος για την επαγωγή της υποξίας (H). Χρώση των μεμβρανών κηλίδας Western με β-ακτίνης χρησίμευσε ως έλεγχος για ίσους όρους. (B, C) μορφολογικές αλλαγές στα κύτταρα που εκτίθενται σε υποξία, νορμοξία, ή ΤΟΡ-β (5 ng /ml) αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα ελαφρύ μικροσκόπιο 72 ώρες μετά την επώαση /θεραπεία κάτω από 100

x

μεγέθυνση (ένθετα, 200

x

). Το ποσοστό των ινοβλαστοειδή ατρακτοειδή κύτταρα μετρήθηκε στις 24, 48 και 72 ώρες.

Η

υποξία up-ρυθμίζει EMT που σχετίζονται με την έκφραση της πρωτεΐνης

Για την περαιτέρω αξιολόγηση του κυττάρου-τύπου ειδική επιδράσεις της υποξίας που προκαλείται EMT εξετάσαμε την έκφραση των πρωτεϊνών που εμπλέκονται στην EMT στις δύο CSC

χαμηλή κυτταρικές σειρές BxPc-3 και Capan-2 και οι τρεις CSC

υψηλή κυτταρικές σειρές ΜΙΑ-PaCa2, AsPC-1 και Capan-1. Μετά από έκθεση σε νορμοξία ή υποξία για 48 ώρες εμείς επισημασμένα των κυττάρων με ειδικά αντισώματα και αναλύθηκε ο φθορισμός με διπλό μικροσκοπία ανοσοφθορισμού. Ενώ και οι δύο CSC

χαμηλές κυτταρικές γραμμές είχαν ισχυρή βασική έκφραση Ε-καδερίνης αλλά χαμηλή έκφραση του βιμεντίνης, όπως αναμενόταν, υποξία επάγει ρύθμιση προς τα κάτω της Ε-καδερίνης και προς τα πάνω ρύθμιση του βιμεντίνης (Εικ. 3). Αυτό συνδέεται με ρύθμιση προς τα άνω των EMT-δείκτες Twist2, Slug και Zeb1. Σε αντίθεση, CSC

υψηλής κύτταρα εμφάνισαν καμία (MIA-PaCa2) ή ένα πολύ χαμηλή βασική έκφραση (AsPC-1, Capan-1) Ε-καδερίνης αλλά υψηλότερη βασική έκφραση της βιμεντίνης σε σύγκριση με CSC

χαμηλή κύτταρα. Κατά την έκθεση σε υποξία μια έκφραση της πρωτεΐνης τυπικό-EMT-όπως συνέβη παρόμοιο όπως παρατηρήθηκε στην CSC

χαμηλή κύτταρα. δεδομένα ανοσοφθορισμού επιβεβαιώθηκαν με ανάλυση κηλίδας Western (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αυτά τα στοιχεία δείχνουν ότι και οι δύο, CSC

χαμηλή και CSC

υψηλής κύτταρα παρουσιάζουν το τυπικό υποξία που προκαλείται από γονιδιακή έκφραση EMT που σχετίζονται αλλά βασική έκφραση της πρωτεΐνης EMT που σχετίζονται με κάτω ορθοξικές συνθήκες είναι υψηλότερη σε CSC

υψηλής κύτταρα.

BxPc-3 και Capan-2 CSC

χαμηλή και MIA-PaCa2, AsPC-1 και Capan-1 CSC

υψηλής κύτταρα εκτέθηκαν σε φυσιολογική οξυγόνωση ή υποξία για 48 ώρες. Η έκφραση του ΕΜΤ-σχετιζόμενες πρωτεΐνες ανιχνεύτηκε με διπλό ανοσοφθορισμού χρώση ακολουθούμενη από φωτογράφηση των κυττάρων κάτω από 400

x

μεγέθυνση. Το μέγεθος των εικόνων που λαμβάνονται περαιτέρω τριπλασιάστηκε στο Photoshop. E-cadherin (κόκκινο), Twist 2 (πράσινο), Slug (κόκκινο), βιμεντίνη (πράσινο), ZEB1 (κόκκινο). Πυρήνες χρωματίζονται με DAPI (μπλε). Οι μεταβολές στα επίπεδα των πρωτεϊνών που σχετίζονται με ΕΜΤ εμφανίζονται κάτω από τις φωτογραφίες. Δεν έκφραση ανιχνεύσιμη (-)., Ασθενή έκφραση (+), διάμεση έκφραση (++), ισχυρή έκφραση (+++)

Η

Η υποξία διεγείρει μεταναστευτικές ιδιότητες του παγκρέατος ΚΕΠ

Για να διερευνηθεί υποξία προκαλούμενη διαφορές, αναλύσαμε μετανάστευση καρκινικών κυττάρων σε τρεις διαφορετικές δοκιμασίες μετανάστευσης. Πρώτον, χρησιμοποιήσαμε ένα πρότυπο

in vitro

τραυματισμό δοκιμασίας. BxPc-3, Capan-2, ΜΙΑ-PaCa2, AsPC-1 ή Capan-1 κύτταρα εκτέθηκαν σε υποξία ή νορμοξία για 24 ώρες που ακολουθείται από το ξύσιμο του στρώματος σε συρροή κυττάρου και περαιτέρω επώαση στους ορθοξικές συνθήκες. Οι εικόνες των κυττάρων που μεταναστεύουν στην ίδια περιοχή που φαίνεται 12 και 24 ώρες μετά το ξύσιμο. Σε όλες τις κυτταρικές σειρές βρήκαμε ότι οι τραυματίες περιοχή έκλεισε γρηγορότερα από τα κύτταρα που είχαν εκτεθεί σε υποξία σύγκριση με τα κύτταρα που εκτίθενται σε φυσιολογική οξυγόνωση. Ωστόσο, δεν θα μπορούσαμε να εντοπίζονται τυχόν σημαντικές διαφορές στη μετανάστευση των κυττάρων μεταξύ CSC

υψηλή και CSC

χαμηλή κυτταρικές σειρές σε αυτό το μη-ποσοτικής ανάλυσης (δεδομένα δεν παρουσιάζονται). Αντιπροσωπευτικά δεδομένα για Capan-1 που παρουσιάζεται (Σχ. 4Α). Ως εκ τούτου χρησιμοποιήσαμε έναν προσδιορισμό πιο ευαίσθητη μετανάστευση πραγματοποιείται σε 3D εξωκυτταρική μήτρα. Η μετανάστευση των μεμονωμένων κυττάρων τεκμηριώνεται από time-lapse μικροσκοπία βίντεο. Σύμφωνα με τα δεδομένα που λαμβάνονται από Πληγή επούλωσης δοκιμασία βρήκαμε ότι 48 ώρες την έκθεση της CSC

υψηλής AsPC-1 ή CSC

χαμηλή BxPc-3 κύτταρα να προκαλείται από υποξία ταχύτερη μετακίνηση και ένα υψηλότερο ποσοστό του πολωμένου, μεταναστεύουν και ψευδοπόδια -forming κύτταρα από νορμοξία σε αμφότερες τις κυτταρικές σειρές (Σχ. 4Β). Παρόμοια με την πρώην αποτελέσματά μας CSC

υψηλής κύτταρα μετανάστευσαν ταχύτερα από ό, τι CSC

χαμηλή κύτταρα. Η μέση ταχύτητα του AsPC-1 CSC

υψηλής κύτταρα που εκτέθηκαν σε υποξία ήταν 7,8 μm /h σε αντίθεση με 5.1 μm /h της CSC

κύτταρα χαμηλή BxPc-3. Επίσης, το ποσοστό των βασικών μεταναστευτικά κύτταρα καθώς και κύτταρα που σχηματίζουν ψευδοπόδια ή που παρουσιάζει ένα πολωμένο φαινότυπο ήταν υψηλότερη στην CSC

υψηλή σε σύγκριση με CSC

χαμηλή κύτταρα. Αυτά τα δεδομένα επιβεβαιώθηκαν σε μια πρότυπη δοκιμασία transwell. CSC

υψηλής MIA-PaCa2, AsPC-1, Capan-1 και CSC

χαμηλής κύτταρα BxPc-3 και Capan-2 προ-επωάστηκαν υπό συνθήκες υποξίας για 48 ώρες σε κανονικό μέσο κυτταρικής καλλιέργειας που περιέχει 10% FCS. Μετανάστευση προς μια διαβάθμιση 1%, 10% και 20% FCS κάτω από νορμοξία μετρήθηκε με αξιολόγηση του αριθμού των κυττάρων transmigrated εντός 48 h (Σχ. 4C). Βρήκαμε ότι η προ-επώαση των κυττάρων κάτω από συνθήκες υποξίας αύξησε το ποσοστό των κυττάρων που transmigrated σε όλες τις κυτταρικές γραμμές. Οι πιο εμφανείς επιδράσεις λήφθηκαν με κύτταρα κινούνται προς μια διαβάθμιση 1% FCS. Σε μια βαθμίδωση 10% FCS βασικής μετανάστευσης των υψηλών κυττάρων CSC

ήταν ήδη στο υψηλότερο επίπεδο, όπως φαίνεται από το θετικό μάρτυρα με 20% FCS. Έτσι, η υποξία δεν θα μπορούσε να προκαλέσει περαιτέρω βασική μετανάστευση MIA-PaCa2 και τα κύτταρα Capan-1 προς μια βαθμίδωση 10% FCS. Αρκετά παρόμοια αποτελέσματα ελήφθησαν όταν η μετανάστευση της υποξίας προ-επεξεργασμένα κύτταρα αναλύθηκε κάτω από υποξικές συνθήκες (Εικ. 4D). Τα αποτελέσματα αυτά δείχνουν ότι παρόλο που η υποξία επάγει τη μετανάστευση στην πιο διαφοροποιημένη και CSC-όπως κύτταρα, βασική και υποξία που προκαλείται από τα μεταναστευτικά δυναμικό είναι υψηλότερο σε CSC

υψηλής κύτταρα. Ως εκ τούτου, υποξία προκαλούμενη ΕΜΤ επάγει υψηλά μεταναστευτικών δυναμικό κυρίως σε CSC-όπως κύτταρα, τα οποία μπορεί να είναι υπεύθυνη για την εισβολή και τη μετάσταση.

(Α) κύτταρα Capan-1 επωάστηκαν υπό υποξικές (H) ή ορθοξικές (Ν) συνθήκες για 24 ώρες που ακολουθείται από το ξύσιμο του στρώματος σε συρροή κυττάρων. Η μετανάστευση των κυττάρων εντός της τραυματισμένης περιοχής παρακολουθήθηκε κατά την διάρκεια 24 h και είναι φωτογραφίες φαίνονται στις 0, 12 και 24 ώρες μετά το ξύσιμο. Bar: 100 μm. (Β) BxPc-3 (CSC

χαμηλή) ή AsPC-1 (CSC

υψηλή) κύτταρα που εκτίθενται σε υποξία (H) ή νορμοξία (Ν) για 48 ώρες εντάχθηκαν σε μια τρισδιάστατη (3D) κολλαγόνο γέλη και κινητική δραστηριότητα αναλύθηκε σε ένα θάλαμο POCmini με μικροσκοπία κάτω από 50

x

μεγέθυνση όπως περιγράφεται στο Υλικά & amp? Μέθοδοι. Αξιολογήθηκαν τέσσερις τύπους κινητικής δραστηριότητες κυττάρων: ενεργός σχηματισμός ψευδοπόδια (1), πόλωση όπως προκύπτει από την επιμήκυνση των κυττάρων και τη διπολική διαμόρφωση σχήματος (2), ενεργό μετανάστευση σε περισσότερα από δύο διαμέτρους κύτταρο απόσταση (βέλος, 3) απουσία μιας ανιχνεύσιμης κυτταρικής πόλωση και μετακίνηση (4). Αντιπροσωπευτικά εικόνες εμφανίζονται και χρονικά σημεία της ανάλυσης έδειξαν. (C) BxPc-3, Capan-2, ΜΙΑ-PaCa2, AsPC-1 και Capan-1 κύτταρα προεπωάστηκαν υπό υποξικές (H) ή ορθοξικές συνθήκες (Ν). Transmigration αναλύθηκε μετά επιπλέον 48 ώρες επώασης υπό ορθοξικές ή υποξικό (D) συνθήκες χρησιμοποιώντας μία πρότυπη δοκιμασία Transwell. Η μετανάστευση των κυττάρων προς μέσου με 1% ή 10% FCS στον κατώτερο θάλαμο αξιολογήθηκε. Μετανάστευση προς μέσο με 20% FCS χρησίμευσαν ως θετικός μάρτυρας.

Η

Συν-έκφραση υποξία και EMT-δεικτών είναι κοινή σε πολλές οντότητες όγκου

Η υποξία που προκαλείται από EMT μελετήθηκε σε εγκλεισμένο σε παραφίνη δείγματα ιστού που λαμβάνονται από ασθενή του παγκρέατος, του μαστού, του νεφρού, του πνεύμονα, του προστάτη και του καρκίνου των ωοθηκών. Σε όλες αυτές τις ιστούς προσδιορίσαμε έκφραση της καρβονικής ανυδράσης IX (CA IX), μια πρωτεΐνη ρυθμίζεται προς τα πάνω από την υποξία [6], μαζί με την έκφραση του βιμεντίνης και της ΕΜΤ-συγγενή παράγοντα μεταγραφής Twist2 (Εικ. 5). Σε αντίθεση, η έκφραση του CA IX, βιμεντίνη και Twist2 απουσίαζε σε μη κακοήθη ιστό όπως επεξηγείται στο φυσιολογικό ιστό πνεύμονα που προέρχονται από τον ίδιο ασθενή από τον οποίο παρουσιάζονται οι χρώσεις του αντίστοιχου κακοήθους ιστού (Εικόνα S2). Αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι η υποξία καθοδηγείται ΕΜΤ είναι ένα κοινό χαρακτηριστικό πολλών φορέων του όγκου, η οποία μπορεί να ακολουθείται από αυξημένη μεταναστευτικών δυναμικό του πληθυσμού CSC.

Η έκφραση της καρβονικής ανυδράσης IX (CA IX), Twist2 και βιμεντίνης αναλύθηκε με την τακτική ανοσοϊστοχημεία σε ιστούς όγκων που προέρχονται από ασθενείς με παγκρεατική (n = 5), μαστού (η = 11), νεφρό (η = 10), του πνεύμονα (n = 9), ωοθηκών (η = 9) και του προστάτη (n = 9) του καρκίνου. Θετικά κύτταρα (κόκκινο) είναι το κόκκινο σε σκούρο-κόκκινο. Bar: 100 μm. Μια τριπλή μεγέθυνση (μεγαλύτερα λευκά τετράγωνα) από μια μικρή περιοχή με θετική χρώση κυττάρων (μικρότερα λευκά τετράγωνα) παρουσιάζεται μέσα σε κάθε εικόνα.

Η

Συζήτηση

Στην παρούσα μελέτη αξιολογήθηκε το ερώτημα αν η υποξία που προκαλείται από EMT επηρεάζει CSC-όπως κύτταρα μόνο ή και τα πιο διαφοροποιημένα κύτταρα του όγκου PDA. Σε ιστό όγκου του ασθενούς του PDA εντοπίσαμε συν-εντοπισμό του δείκτη υποξία HIF-1α και του Slug δείκτη EMT. ιστικές περιοχές του καρκίνου του παγκρέατος θετικό για το δείκτη υποξία HIF-2α ήταν ιδιαίτερα θετικό για το δείκτη CSC CD133.

In vitro

τόσο CSC

υψηλή και CSC

χαμηλή παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα ανταποκρίθηκαν στην υποξία αλλάζοντας τη μορφολογία των κυττάρων από επιθηλιακά σε μια πιο ινοβλαστοειδή ή μεσεγχυματικών φαινότυπο με υψηλότερο ποσοστό στην CSC

υψηλής κύτταρα. Μορφολογικές αλλαγές που προκαλούνται από υποξία συσχετίστηκαν με την έκφραση Ε-καντερίνης κάτω-ρυθμιζόμενη και up-ρύθμιση της έκφρασης της βιμεντίνης και EMT που σχετίζονται με παράγοντες μεταγραφής Slug, Twist2 και Zeb1 στην CSC

χαμηλή κύτταρα. CSC

υψηλής κύτταρα είχαν μια υπογραφή έκφρασης πρωτεΐνης μεσεγχυματικών κυττάρων σχεδόν κάτω από νορμοξικές συνθήκες, όπως φαίνεται από το χαμηλό ή απούσα επίπεδα Ε-καδερίνης μαζί με την υψηλή έκφραση βιμεντίνης, που οριακά μόνο αυξημένη από την υποξία. Αυτή η υψηλότερη βασική κατάσταση EMT της CSC

υψηλής κύτταρα μπορεί να είναι η αιτία για την παρατηρούμενη αύξηση της μεταναστευτικής ικανότητας σε ορθοξικές και συνθήκες υποξίας. Υποθέτουμε ότι παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα βλαστικά-όπως μπορεί να έχει ένα πλεονέκτημα επιβίωσης υπό δυσμενείς συνθήκες υποξίας, αφού ΕΜΤ έχει καταδειχθεί ότι συμβάλλει στην αντοχή φαρμάκου σε παγκρεατικού καρκίνου [34]. Σύμφωνα με αυτή την υπόθεση, MIA-PaCa2 και AsPC-1 με υψηλή βασική χαρακτηριστικά EMT έχει αποδειχθεί ότι είναι πολύ πιο ανθεκτικοί απέναντι Γεμσιταβίνη από BxPC 3-κυττάρων με χαμηλή βασική χαρακτηριστικά EMT [34], η οποία είναι επίσης σε συμφωνία με την CSC -όπως φαινότυπο της MIA-PaCa2 και AsPC-1.

Πρόσφατα στοιχεία ανοσοϊστοχημεία επιβεβαιώνουν τα αποτελέσματά μας από διπλή χρώση ανοσοφθορισμού του HIF-1α /Slug συν-έκφρασης, δεδομένου ότι το 87% των ανθρώπινων ιστών PDA από 36 που εξετάστηκαν ήταν βρέθηκαν να εκφράζουν σαλιγκάρι και 50% των ασθενών εμφανίζεται θετική έκφραση του Slug, ενώ Twist έδειξε καμία ή μόνο ασθενή έκφραση [35]. Ωστόσο, Twist έντονα επάγεται κατά υποξία σε MIA-PaCa2, AsPC-1 και τα κύτταρα Capan-1 όπως ανιχνεύθηκε με RT-PCR [35]. Αυτό ταιριάζει με τα ευρήματά μας έκφρασης Twist2 σε καθιερωμένες και πρωτογενή PDA κυττάρων, η οποία ήταν εντονότερη κατά την επαγωγή της υποξίας

in vitro

. Μια άλλη ενδιαφέρουσα έκθεση ενισχύει σημαντικά αυτά τα δεδομένα αφού η έκφραση Twist RNA βρέθηκε να είναι σημαντικά υψηλότερη σε επεμβατικές PDAs σε σύγκριση με συμφωνημένα μη-νεοπλασματικές και IPMN δειγμάτων [36].

Το ερώτημα είναι ποια μοριακών μηχανισμών που βρίσκονται πίσω από την ενισχυμένη EMT χαρακτηριστικά και τις μεταναστευτικές ικανότητες της CSC

υψηλής κύτταρα. Ειδικότερα, ΕΜΤ έχει περιγραφεί ότι εξαρτάται από ΝΡ-κΒ σηματοδότηση σε παγκρεατικά καρκινικά κύτταρα [37]. Από τη στιγμή που εντοπίστηκαν πρόσφατα ενισχυμένη δράση του NF-κΒ στο CSC

υψηλή σε σύγκριση με CSC

χαμηλή κύτταρα [32], NF-κΒ μπορεί να εμπλέκεται στη διαμεσολάβηση αυξημένες μεταναστευτικές ιδιότητες της CSC

υψηλής κύτταρα. Ένα άλλο πολύ γνωστό βασικός λόγος για την πολύ επεμβατική πρότυπο ανάπτυξης των π.χ. κύτταρα ΜΙΑ-PaCa2 φαίνεται να είναι ότι εισβολή εξαρτάται σαφώς από CXCR4 [16]. Από παγκρέατος ΚΕΠ εκφράζουν προτίμηση υποδοχέα CXCR4 και μεταστάσεις χρησιμοποιώντας τις άξονα CXCR4 /SDF-1 [16] Αυτό μπορεί να διευκολύνει την ενισχυμένη μεταναστευτικών δυναμικό. Επιπλέον, ρ53 προτείνεται να ρυθμίσει ΕΜΤ και ιδιότητες βλαστοκυττάρων και αυτό μπορεί να συνέβαλε στην παρατηρούμενη ενισχυμένη μεταναστευτικών δυναμικό της CSC

υψηλές κυτταρικές σειρές, δεδομένου ότι MIA-PaCa2, AsPC-1, Capan-1 και BxPc-3, αλλά δεν Capan-2 έχουν μεταλλαχθεί p53 [31]. Έτσι, η απώλεια της ρ53 συσχετίζεται με ένα miR-200c-εξαρτώμενη αύξηση στην έκφραση του ΕΜΤ, βλαστική ικανότητα σημειωτές και βαθμού υψηλής όγκου όπως περιγράφηκε πρόσφατα σε μία ομάδα από όγκους του μαστού [38]. Αρκετά Ομοίως, η αναστολή της ρ53 καταστέλλει Ε-καδερίνης με μεθυλίωση προαγωγού όπως δείχνεται στα κύτταρα των ωοθηκών των όγκων [39]. Η παρατήρηση αυτή είναι σε συμφωνία με την παρατηρούμενη χαμηλή έκφραση Ε-καδερίνης σε CSC

υψηλή κυτταρικές σειρές με μεταλλαγμένο p53.

Υποθέτουμε ότι η παρατηρούμενη ταχύτερη απόκριση των παγκρεατικών κυττάρων του όγκου στέλεχος που μοιάζει με υποξία με απορυθμίζεται EMT σηματοδότησης και υψηλότερες μεταναστευτικές δυναμικό μπορεί να είναι ακόμη πιο έντονη στο

in vivo

μικροπεριβάλλον του όγκου. Αυτό μπορεί να οφείλεται στο γεγονός ότι σε συμπαγείς όγκους επαναλαμβανόμενα επεισόδια της υποξίας που ακολουθείται από επανα-οξυγόνωσης είναι ένα κοινό φαινόμενο. Αυτή η λεγόμενη «διαλείπουσα υποξία» περιγράφεται να ρυθμίσει τα χαρακτηριστικά του στελέχους-όπως [40]. Η εμφάνιση της διαλείπουσας υποξικών επεισοδίων ποικίλλει σημαντικά σε ταχέως αναπτυσσόμενες κακοήθεις όγκους [41]. Σε φάσεις νορμοξίας όταν τα σήματα EMT-προκαλώντας αφαιρεθεί CSC

χαμηλή κύτταρα που έχουν προκληθεί σε EMT μπορεί να επανέλθει στο επιθηλιακό κατάσταση παρόμοια με υποβάλλονται σε μεσεγχυματικά επιθηλιακά μετάβασης (ΚΟΑ), όπως έχει αναφερθεί σε ορισμένα κύτταρα καρκινώματος [20 ], [42]. Πρόσθετες νέα δεδομένα παρέχουν πληροφορίες για το πώς δυναμικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των επιθηλιακών, αυτο-ανανέωση, και τα προγράμματα μεσεγχυματικών γονιδίων καθορίζουν την πλαστικότητα της CSC στην εναλλαγή μεταξύ επιθηλιακών και μεσεγχυματικών μελών [43]. Αυτά τα ευρήματα υποδεικνύουν ότι η CSC

χαμηλή κύτταρα μπορούν να διαφοροποιηθούν σε CSC-όπως τα κύτταρα μετά την επαγωγή της EMT από υποξία και αποδιαφοροποιούνται την απόσυρση της υποξίας.