Αφηρημένο

Οι βιολογικοί ρόλοι των υποδοχέων οιστρογόνων 1 (

ERS1

), υποδοχέα οιστρογόνου 2 (

ERS2

) και της αρωματάσης (

CYP19A1

) γονιδίων στην ανάπτυξη του μη-μικροκυτταρικού καρκίνου του πνεύμονα (NSCLC) είναι ασαφής, όπως είναι η χρήση του έκφρασή τους ως προγνωστικός παράγοντας. Ο σκοπός αυτής της μελέτης ήταν να διερευνηθεί η προγνωστική αξία των υποδοχέων οιστρογόνου και mRNA έκφραση αρωματάσης, μαζί με αρωματάσης συγκέντρωση πρωτεΐνης, σε εκτομή ασθενείς NSCLC. δείγματα ιστού όγκου πνεύμονα και μη-όγκου αναλύθηκαν για την έκφραση του mRNA του

ERS1

,

ERS2

και

CYP19A1

με RT-PCR. Αρωματάσης συγκέντρωση μετρήθηκε με ELISA. συμπεριλήφθηκαν συνολικά 96 ασθενείς.

ERS1

έκφραση ήταν σημαντικά υψηλότερη στην μη καρκινικό ιστό σε σύγκριση με δείγματα όγκων. Δύο κατηγορίες γονιδιακής έκφρασης δημιουργήθηκαν για κάθε γονίδιο (και πρωτεΐνη): υψηλή και χαμηλή.

ERS1 υψηλής

κατηγορία έδειξαν αυξημένη συνολική επιβίωση (OS) σε σύγκριση με την κατηγορία χαμηλής έκφρασης. Αρωματάσης συγκέντρωση πρωτεΐνης ήταν σημαντικά υψηλότερη σε δείγματα όγκων. Υψηλότερες

ERS1

έκφραση σε ιστούς όγκων που σχετίζονται με την μεγαλύτερη συνολική επιβίωση. Η ανάλυση των συνδυασμών γονιδιακής έκφρασης παρέχει ενδείξεις για μεγαλύτερο χρονικό διάστημα OS, όταν και τα δύο

ERS1

και

ERS2

εκφράζονται σε μεγάλο βαθμό.

ESR1

, μόνο του ή σε συνδυασμό με

ERS2

ή

CYP19A

1, είναι ο πιο καθοριστικός προγνωστικός παράγοντας εντός των αναλυθούν 3 γονίδια. Φαίνεται ότι

ERS1

μπορεί να διαδραματίσει ρόλο στην NSCLC πρόγνωση, μόνα τους ή σε συνδυασμό με άλλα γονίδια, όπως

ERS2

ή

Cyp19a1

.

ERS2

σε συνδυασμό με τη συγκέντρωση της αρωματάσης θα μπορούσε να έχει μια παρόμοια λειτουργία

Παράθεση:. Αρέστη U, Carrera S, Iruarrizaga E, Fuente Ν, MARRODAN Ι, de Lobera AR, et al. (2014) υποδοχέα οιστρογόνων 1 Gene Expression και ο συνδυασμός του με υποδοχέα οιστρογόνων 2 ή αρωματάσης Έκφραση Προβλέπει επιβίωσης σε μη-μικροκυτταρικό καρκίνο του πνεύμονα. PLoS ONE 9 (10): e109659. doi: 10.1371 /journal.pone.0109659

Επιμέλεια: Harriet Wikman, Ιατρικό Κέντρο του Πανεπιστημίου του Αμβούργου-Eppendorf, Γερμανία

Ελήφθη: 8 του Απριλίου του 2014? Αποδεκτές: 2 Σεπτεμβρίου του 2014? Δημοσιεύθηκε: 13 Οκτωβρίου 2014

Copyright: © 2014 Αρέστη et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Δεδομένα Διαθεσιμότητα:. Η συγγραφείς επιβεβαιώνουν ότι, για τις εγκεκριμένες λόγους, ορισμένοι περιορισμοί πρόσβασης ισχύει για τα στοιχεία στα οποία βασίστηκαν τα συμπεράσματα. Δημόσια απόθεση του συνόλου δεδομένων θα παραβίαζε ηθική συμμόρφωση, καθώς το σύνολο δεδομένων περιέχει τον προσδιορισμό των ανθρωπίνων πληροφορίες. Ένα σύνολο δεδομένων αποχαρακτηριστούν είναι διαθέσιμο κατόπιν αιτήματος και οι αιτήσεις μπορούν να σταλούν στην López-Vivanco σε [email protected]

Χρηματοδότηση:. Η μελέτη αυτή υποστηρίζεται από μια επιχορήγηση (proyect BIO07 /CA /012 ) από τη βασκική Broadcasting Corporation (EITB? www.eitb.com) Καρκίνος του Μαραθώνα. Χρηματοδότηση στα δικαστικά έξοδα Ανοικτή Πρόσβαση δημοσίευση για αυτό το άρθρο παρέχεται από το Instituto de Salud Carlos III του ισπανικού Υπουργείου Οικονομίας και Ανταγωνιστικότητας (επιχορήγηση: RD06 /0020/0067, ISCIII). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

Λαμβάνοντας στατιστικά στοιχεία από τις ΗΠΑ ως παράδειγμα της εξέλιξης του καρκίνου του πνεύμονα στις ανεπτυγμένες χώρες, είναι σαφές ότι η πρόληψη και η θεραπεία αυτού του συγκεκριμένου τύπου καρκίνου θα πρέπει να βελτιωθεί. Οι προβλέψεις για το 2014 είναι 159.260 θανάτους που οφείλονται σε καρκίνο του πνεύμονα (27,2% του συνόλου των θανάτων από καρκίνο), ενώ αυτός ο καρκίνος προκαλεί περισσότερους θανάτους από ό, τι το άθροισμα των τριών επόμενο πιο κοινούς καρκίνους (του παχέος εντέρου, του μαστού και του προστάτη) [1]. Επιπλέον, η εξέλιξη του καρκίνου του πνεύμονα ποσοστά πενταετούς επιβίωσης, εκτιμάται ότι θα είναι περίπου 12%, 13% και 16% κατά τις περιόδους 1975-1977, 1987-1989 και 2001-2007 αντίστοιχα [2], ήταν σαφώς μη ικανοποιητική.

τα οιστρογόνα εμπλέκονται στην ανάπτυξη διαφόρων τύπων καρκίνου: του μαστού, του ενδομητρίου, των ωοθηκών, του θυρεοειδούς, των πνευμόνων και [3] – [8]. Στον πνεύμονα, τα οιστρογόνα επάγουν τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων μέσω της ενεργοποίησης ορισμένων γονιδίων αυξητικού παράγοντα όπως ο επιδερμικός αυξητικός παράγοντας και παρόμοιο με ινσουλίνη παράγοντα ανάπτυξης, μεσολαβητές της μιτογένεσης στους όγκους του πνεύμονα [9]. Ασκούν λειτουργία τους μέσω δύο διαφορετικών ειδικών υποδοχέων οιστρογόνων, οιστρογόνου υποδοχέα α (ΕΡα) και υποδοχείς οιστρογόνων β (ΕΚβ), μέλη της υπεροικογένειας των πυρηνικών υποδοχέων παραγόντων μεταγραφής [10], και μέσω δύο διαφορετικών οδών, γονιδιωματική και μη γονιδιωματική, με τις ίδιες βιολογικές επιδράσεις: πολλαπλασιασμό, την ανάπτυξη, την απόπτωση, τη διαφοροποίηση και την αγγειογένεση.

ERS1

και

ERS2

γονίδια εκφράζονται στα περισσότερα από τα πιο κοινούς καρκίνους, του πνεύμονα, του μαστού, του πεπτικού και ενδοκρινικές, αλλά ο ρόλος τους μπορεί να ποικίλει πολύ ανάλογα με τον τύπο του όγκου [10] – [ ,,,0],16].

η παραγωγή των δύο πιο άφθονα και σημαντικά οιστρογόνα (οιστραδιόλη και οιστρόνη) καταλύεται από το κυτόχρωμα Ρ450 19A1 (αρωματάσης), το προϊόν του

CYP19A1

γονίδιο, που είναι ενεργός στον πνεύμονα ιστούς. Επιπλέον, υπάρχει ένας βρόχος ανάδρασης, επειδή τα οιστρογόνα επάγουν την ενεργοποίηση του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα που οδηγεί σε αύξηση της αρωματάσης έκφραση και δραστηριότητα [17], με τη σειρά του, την ενίσχυση της παραγωγής οιστρογόνων. Προφανώς, αυτά τα γεγονότα δείχνουν ότι αρωματάσης παίζει έναν ιδιαίτερο ρόλο στην ανάπτυξη του καρκίνου, και έχει διατυπωθεί η υπόθεση ότι η αυξημένη έκφραση του υποδεικνύει μια χειρότερη πρόγνωση [18].

Το έργο αυτό προσπαθήστε να επιβεβαιώσουν (ή να απορρίψει) εάν οποιοδήποτε από αυτά τα γονίδια εκφράσεις είναι χρήσιμη ως προγνωστικό εργαλείο και να αποσαφηνίσει τη διαφωνία μεταξύ παλαιότερες μελέτες βασίζονται κυρίως στην ανοσοϊστοχημεία (IHC) μεθόδους [6], [12], [19], και πιο πρόσφατα αυτά που έχουν χρησιμοποιηθεί σε πραγματικό χρόνο τεχνική PCR για τον προσδιορισμό του γονιδίου έκφραση [20], [21]. Με αυτή την έννοια διαφορετικά επίπεδα έκφρασης ομάδες θα συσταθούν και που σχετίζονται με την επιβίωση.

Υλικά και Μέθοδοι

Δήλωση 1.-Ηθική

Αυτή η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας για κλινική Έρευνα της Cruces Πανεπιστημιακό Νοσοκομείο (CEIC /Hospital de Cruces) και πραγματοποιήθηκε σύμφωνα με τη δήλωση του Ελσίνκι. Γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή μετά την πλήρη εξήγηση του σκοπού και της φύσης όλων των διαδικασιών που χρησιμοποιούνται.

2.-Οι ασθενείς

Μεταξύ 110 στρατολόγησαν ασθενείς, μόνο 96 ασθενείς πληρούσαν τα κριτήρια επιλογής. Που πρέπει να περιλαμβάνονται οι ασθενείς θα πρέπει να διαγνωστεί με NSCLC και υποβλήθηκε σε χειρουργική εκτομή? ασθενείς που λαμβάνουν εισαγωγική χημειοθεραπεία και ασθενείς των οποίων πρωτογενούς όγκου δεν βρισκόταν στον πνεύμονα αποκλείστηκαν. Τα κλινικά χαρακτηριστικά τους περιγράφονται στον Πίνακα 1. Για κάθε συμμετέχοντα, όγκο και τα δείγματα φρέσκο ​​μη καρκινικό ιστό παρασκευάστηκαν με anatomopathologist. Τα δείγματα ελήφθησαν μέσω μακρο ανατομή και μη καρκινικό ιστό αντιστοιχούσαν σε παρακείμενο φυσιολογικούς ιστούς των πνευμόνων.

Η

3.-Τεχνικές

3.1-REAL TIME RT-PCR.

Ολικό RNA από όγκου και μη όγκου ιστός εκχυλίστηκε με RNeasy Mini Kit Plus (Qiagen). One-βήμα σε πραγματικό χρόνο RT-PCR διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας Platinum Ποσοτική RT-PCR Thermoscript System One-Step και 7900HT Fast Real-Time PCR System (και τα δύο από την Life Technologies). υποδοχείς οιστρογόνων και της αρωματάσης δοκιμασίες έκφρασης, καθώς και RPLPO (ενδογενής έλεγχος) αγοράστηκαν από την Life Technologies:

ERS1

/Hs00174860_m1,

ERS2

/Hs00230957_m1,

CYP19A1

/Hs00903411_m1 και RPLPO /NM_053275.3. Κάθε δοκιμασία ενισχύει μια σειρά από διαφορετικές μεταγραφές. Λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με το μήκος μεταγραφήματος, αντίστοιχο μήκος πρωτεΐνη, ανιχνευτής εξονίου-εξονίου όριο, η ενίσχυση και η λειτουργικότητα αμπλικόνιο πρωτεΐνη περιλαμβάνεται στο S1 File.

Ολικό RNA προστέθηκε για να ληφθεί μια συγκέντρωση των 100 μg /μl σε ένα τελικό όγκο 10 μΙ αντίδρασης. Ένα πρότυπο προφίλ χρόνου /θερμοκρασίας χρησιμοποιήθηκε. Ένας θετικός μάρτυρας συμπεριλήφθηκε σε κάθε πλάκα: δείγματα RNA που εκχυλίζεται από κύτταρα MCF-7 (ΗΤΒ22), που αγοράστηκε (Νοέμβριος 2009) από την ATCC. ΗΤΒ22 επιλέχθηκε ως αναφορά (βαθμονομητής) δείγμα για συγκριτικούς κβαντισμού (με τη μέθοδο Delta Delta Cq). γονιδιακή έκφραση αναφέρεται ως τιμές RQ λαμβάνονται από τη συγκριτική ποσοτικοποίηση, όπου RQ = τυποποιημένη Σχετική Ποσότητα = 2

-.. (ΔΔ Cq)

3.2-ELISA

Ένζυμο-συνδεδεμένη ανοσορροφητική δοκιμασία κιτ για τα ανθρώπινα αρωματάσης (ARO) (USCN Life Science Inc.) χρησιμοποιήθηκαν για την ανίχνευση της αρωματάσης πρωτεΐνη. Η πρωτεΐνη εκχυλίστηκε από δείγματα όγκου και μη όγκου, ακολουθώντας αυτό το πρωτόκολλο του κιτ. Για τη διαδικασία αυτή, οι ιστοί ήταν διαθέσιμα από 85 ασθενείς. Η συγκέντρωση πρωτεΐνης μετρήθηκε σε έναν πολικό αστέρι Microplate Reader (BMG Labtech) χρησιμοποιώντας τη μέθοδο δικιγχονινικού πρωτεΐνη οξύ. Τα δεδομένα αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το

Τέσσερις Παράμετρος Logistic Fit

, που αναπτύχθηκε από MyAssays, Λύσεις λογισμικού ανάλυσης.

4-Στατιστική ανάλυση

Για την στατιστική ανάλυση, SPSS /V.17, Graphpad επιλέχθηκαν -Prism /v.3 και MedCalc /12.7.5 πακέτα λογισμικού. Εν συντομία, αυτά χρησιμοποιήθηκαν για τον υπολογισμό περιγραφικά στατιστικά, καθώς και για επιδόσεις: Kolmogorov-Smirnov τεστ για την ομαλότητα, μη-παραμετρικές δοκιμασίες (Mann-Whitney, Kruskal Wallis) κατά τη σύγκριση διαμέσους, συσχέτιση, η επιβίωση και η ανάλυση παλινδρόμησης Cox. Όλες οι δοκιμασίες ήταν δύο όψεων και το επίπεδο σημαντικότητας ήταν 0,05. Για την ανάλυση επιβίωσης, καμπύλες Kaplan-Meier κατασκευάστηκαν και η σημασία εκτιμήθηκε χρησιμοποιώντας τη δοκιμή Log Rank (Mantel-Cox). Για να εκτιμηθεί η επίδραση των μεταβλητών στη συνολική επιβίωση, πραγματοποιήθηκε ανάλυση παλινδρόμησης Cox. Πρώτον, κατά ζεύγη συγκρίσεις έγιναν και οποιεσδήποτε μεταβλητές με μια σημασία λιγότερο από 0,2 διατηρήθηκαν σε μία δεύτερη γενική ανάλυση. Στη συνέχεια, είχαν εξαλειφθεί, ένα-ένα, αν η σημασία υπερέβη το όριο του 0,05. Η ανάλυση επαναλήφθηκε μετά την απομάκρυνση του κάθε μεταβλητή. Η συνολική επιβίωση (OS) ήταν υπολογίζεται από την ημερομηνία της επέμβασης /εκτομή από την ημερομηνία της τελευταίας παρακολούθησης ή θάνατο, σε μήνες.

Αποτελέσματα

1

ERS1

Η πρώτη σύγκριση, μεταξύ των μη-όγκου και του ιστού του όγκου

ERS1

επίπεδα αποκτήσει p & lt? 0,0001, θεωρείται εξαιρετικά σημαντική. Τα στατιστικά στοιχεία των αποτελεσμάτων σύγκρισης RQ παρουσιάζονται στον Πίνακα 2. Όπως μπορεί να φανεί,

ERS1

γονιδιακή έκφραση ήταν σημαντικά χαμηλότερη σε όγκο από ό, τι μη καρκινικούς ιστούς.

Η

Για την ανάλυση της σχέσης μεταξύ επιβίωσης και

ERS1

γονιδιακής έκφρασης, τα δείγματα χωρίστηκαν σε δύο ομάδες, ανάλογα με τα επίπεδα έκφρασης διάμεσο (Low για χαμηλότερες τιμές από διάμεση, υψηλή για υψηλότερες τιμές από ό, τι οι μέσες τιμές καμπύλες επιβίωσης Kaplan-Meier υπολογίστηκαν και για τα δύο , αποκαλύπτοντας σημαντικές διαφορές εντός των δειγμάτων όγκου?. Σύνδεση Rank = 0,050, σχήμα 1α Για τους ιστούς όγκων, η διάμεση επιβίωση ήταν 28,0 μήνες στην κάτω

ERS1

ομάδα έκφρασης, και 34,0 μήνες στο υψηλότερο

ERS1

ομάδα έκφραση (Πίνακας 3)? μια δοκιμασία Mann-Whitney έδειξε ότι αυτό είναι μια σημαντική διαφορά, p = 0,042, δείχνοντας μια σχέση ανάμεσα στην υψηλότερη

ERS1

γονιδιακής έκφρασης σε ιστό του όγκου και πλέον η επιβίωση των ασθενών .

Το δείγμα ασθενούς χωρίζεται σε Low και High (χαμηλότερη και υψηλότερη έκφραση από την μέση). Πίνακες: α.)

ERS1

και

ERS2

, β)

CYP19A1

και ARO, και γ)

ERS1 + ERS2

και CYP19A1 + ARO

η

για να επιβεβαιώσετε ή να αποκλείσει, με βάση τα αποτελέσματα επιβίωσης αν γονιδιακής έκφρασης μεταβλήθηκε σε δείγματα όγκων, η ίδια ανάλυση έγινε για τα δείγματα μη-όγκου από τους ίδιους τους ασθενείς, και δεν υπάρχουν σημαντικές διαφορές στην επιβίωση δεν βρέθηκε μεταξύ αυτών των υποομάδων? Σύνδεση Rank = 0,524? . P = 0,815

ERS1

έκφραση σε δείγματα όγκων ήταν η μόνη μεταβλητή, εντός των τριών γονιδίων και την πρωτεΐνη, η οποία ήταν σημαντική κατά την ανάπτυξη ενός μοντέλου παλινδρόμησης Cox: Το συνολικό επίπεδο σημαντικότητας ήταν 0.031 για το μοντέλο, ρ = 0,027 για την

ERS1

επίπεδο mRNA όγκου με ένα Exp (Β) 0,002. Ρ-τιμή για τα δείγματα μη καρκινικό ιστό ήταν 0.529, δεν είναι σημαντική, γι ‘αυτό δεν είχε συμπεριληφθεί στο μοντέλο. Καθώς ο λόγος του όγκου /μη όγκου, που πέρασαν πρώτο γύρο, ρ = 0.105, αλλά στη συνέχεια δεν φαίνεται να είναι σημαντική. Απλά ιστολογία (συμπεριλαμβανομένων απλώς αδενοκαρκινώματα και πλακώδη-κυττάρων καρκινώματα) ήταν επίσης σημαντικά με το ap = 0,007 και ένα Exp (Β) 0.462.

2

ERS2

Η

ERS2

γονιδιακή έκφραση συγκρίθηκε με τις /τους ιστούς του όγκου μη όγκου και σε αυτή την περίπτωση δεν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές (Mann-Whitney test, p = 0.364). Μπορεί να φανεί στον Πίνακα 2, τα αποτελέσματα γονιδιακής έκφρασης ήταν πολύ παρόμοια και στις δύο τύπους ιστών. Αναλύοντας επιβίωση ως συνάρτηση του επιπέδου έκφρασης του γονιδίου ERS2 όπως προηγουμένως (Σχήμα 1α), δεν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές μεταξύ χαμηλών και υψηλών υποομάδες έκφραση του όγκου (ρ = 0,253) ή μη-όγκου (ρ = 0,078) δείγματα. Ήταν μια αξιοσημείωτη τάση προς την καλύτερη επιβίωση σε ασθενείς με χαμηλότερα επίπεδα ERS2 σε δείγματα τους μη καρκινικό ιστό, γεγονός που υποδηλώνει μια πιθανή χαμηλότερη έκφραση /πλέον συνεταιρίζεσθαι επιβίωσης.

Κρατώντας αυτά τα δεδομένα στο μυαλό, τη σημασία των διαφορών στο OS εκτιμήθηκε επίσης με ένα Mann-Whitney test. Όπως μπορεί να φανεί στον Πίνακα 3, το μοτίβο σε δείγματα όγκων ήταν αντίθετη αυτής σε δείγματα μη-όγκου: η διάμεση τιμή ποσοστά OS στην ομάδα χαμηλής /όγκου ήταν σημαντικά χαμηλότερα από αυτά της υψηλής /ομάδα όγκου, αν και αυτές οι διαφορές δεν ήταν σημαντικές (ρ = 0.11). Σε αντίθεση, οι μέσες τιμές ήταν σημαντικά υψηλότερη στην ομάδα της χαμηλής /μη-όγκου από την ομάδα υψηλού /μη-όγκου, 33,1 έναντι 25,9 μήνες, αντίστοιχα, και αυτή η διαφορά ήταν σημαντική (p = 0,024).

Συνδυασμός όγκου και μη όγκου και χαμηλής και υψηλής τάξεις, οι τέσσερις κατηγορίες δημιουργηθεί. Οι διαφορές στο OS ανάμεσα σε αυτές τις κατηγορίες ήταν σημαντικές (Kruskal Wallis p = 0,017? Log Rank = 0,021), με το χαμηλότερο ποσοστό επιβίωσης στην κατηγορία χαμηλού όγκου + υψηλό μη-όγκου, δηλαδή, οι ασθενείς με

ERS2

/χαμηλή έκφραση σε ιστό όγκου και

ERS2

/υψηλή έκφραση σε μη καρκινικό ιστό (μέση τιμή = 16,6 μήνες), και το υψηλότερο ποσοστό επιβίωσης σε υψηλή όγκου + χαμηλές μη-όγκου, δηλαδή, εκείνα με

ERS2

/υψηλή έκφραση σε καρκινικό ιστό και

ERS2

/χαμηλή έκφραση σε μη καρκινικό ιστό (διάμεση τιμή = 36,9 μήνες).

Κανένα

ERS2

σχετικές μεταβλητές ήταν περιλαμβάνονται στο μοντέλο Cox επειδή αρχικές Cox μονοπαραγοντική δοκιμές τους υπερβαίνει το 0,2 κατώφλι: ρ. = 0,278, ρ = 0,990 και ρ = 0,691 για ιστούς όγκων, μη καρκινικούς ιστούς και αναλογία όγκου /μη όγκου αντίστοιχα

3-

CYP19A1

/αρωματάσης

Όπως αναφέρεται στον πίνακα 2, της αρωματάσης μετρήθηκε τόσο σε mRNA και τα επίπεδα της πρωτεΐνης (ng /ml). Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ του όγκου και των δειγμάτων μη-όγκου κατά τη μέτρηση mRNA, ρ = 0,32. Αντιθέτως, συγκρίνοντας τα επίπεδα της πρωτεΐνης η διαφορά βρέθηκε να είναι πολύ σημαντική, ρ & lt? 0.001. Να αναλύσει οποιαδήποτε σχέση μεταξύ των επιμέρους επιπέδων έκφρασης του mRNA και της πρωτεΐνης συγκεντρώσεις ένα τεστ συσχέτισης έγινε, αλλά δεν ελήφθησαν σημαντικά αποτελέσματα (Spearman, p = 0,133).

Για την ανάλυση επιβίωσης, και πάλι, το συνολικό δείγμα ασθενών χωρίστηκε σε χαμηλή και υψηλή (χαμηλότερες και υψηλότερες από διάμεσος) ομάδες έκφραση /συγκέντρωσης. δοκιμές Kaplan-Meier δεν εντοπίζονται τυχόν σημαντικές διαφορές, είτε για την έκφραση των γονιδίων, τα δείγματα όγκων p = 0,154 (Σχήμα 1β), τα δείγματα μη-όγκου log-rank p = 0.578, ή συγκέντρωση πρωτεΐνης, τα δείγματα όγκων p = 0,266 (Σχήμα 1β) και μη καρκινικά δείγματα log-rank p = 0,532

Αν και στην ανάλυση επιβίωσης δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές, Πίνακας 3 δείχνει ότι το πρότυπο της γονιδιακής έκφρασης και η συγκέντρωση της πρωτεΐνης ήταν αρκετά παρόμοια:. ομάδες χαμηλού έκφραση έτειναν να έχουν μεγαλύτερης διάρκειας επιβίωση, ενώ οι ομάδες υψηλή έκφραση έτειναν να έχουν μικρότερη επιβίωση. Υποδιαίρεση της συνολικού δείγματος σε πρώιμο στάδιο NSCLC (Ι-ΙΙ) και όψιμου σταδίου (III-IV) NSCLC, υπήρχε μια σημαντική διαφορά στα ποσοστά επιβίωσης εντός περιπτώσεις πρώιμου σταδίου μεταξύ χαμηλών (διάμεσος = 31,4 μήνες) και υψηλή (διάμεσος = 25,0 μήνες) ομάδες γονιδιακή έκφραση αρωματάσης: Σύνδεση Rank = 0,07? Mann-Whitney ρ = 0,016. Δεν υπήρχε καμία τέτοια διαφορά όταν δείγματα ιστών μη-όγκου σε σύγκριση, ή την εξέταση της αρωματάσης συγκέντρωση πρωτεΐνης.

Όπως συνέβη με το

ERS2

, κανένας από

CYP19A1

ή αρωματάσης πρωτεΐνη σχετικές μεταβλητών που περιλαμβάνονται στο τελικό μοντέλο παλινδρόμησης Cox, αν και ένας από αυτούς πέρασαν την αρχική ανάλυση (p & lt? 0.200):

CYP19A1

καρκινικούς ιστούς p = 0.966,

CYP19A1

μη καρκινικών ιστών p = 0.810,

CYP19A

1 όγκου /μη αναλογία όγκου p = 0,727, αρωματάσης όγκου ιστών p = 0.240, αρωματάσης μη καρκινικών ιστών p = 0,692 και αρωματάσης αναλογία όγκου /μη όγκου p = 0,038.

4-συνδυασμένη έκφραση γονιδίων-επιβίωσης ανάλυση

Πρόσφατα, έχει αποδειχθεί [22] ότι οι συνδυασμοί των διαφορετικών αποτελεσμάτων της γονιδιακής έκφρασης μπορεί να καθορίσει λεπτομερώς τη γενική κατάσταση στον NSCLC. Όπως έχει ήδη μια δεδομένη μεταβλητή διαιρείται σε χαμηλή και υψηλή ομάδες, και στη συνέχεια, εάν δύο μεταβλητές συνδυάζονται, τέσσερις υποομάδες μπορούν να ορισθούν? για

ERS1

και

ERS2

, οι υποομάδες είναι μικρής

ERS1

+ μικρής

ERS2

, μικρής

ERS1

+ υψηλής

ERS2

, υψηλής

ERS1

+ μικρής

ERS2

και High

ERS1

+ υψηλής

ERS2

. Κατά τη σύγκριση των δειγμάτων, βλέπε Πίνακα 4, αυτά με την υψηλότερη έκφραση των δύο γονιδίων ήταν αυτοί με την υψηλότερη OS. Η διαφορά μεταξύ της μικρής

ERS1

+ μικρής

ERS2

και High

ERS1

+ Υψηλής

ERS2

ομάδων ήταν σημαντική, Mann-Whitney test p = 0,025, ωστόσο, μια δοκιμή Kaplan-Meier OS δεν ήταν, p = 0,057 (Σχήμα 1γ). Διάμεσοι για υποομάδες μικρής

ERS1

+ Υψηλής

ERS2

και Υψηλής

ERS1

+ Χαμηλή

ERS2

(26,63 και 28,80 μήνες αντίστοιχα) ήταν κοντά με εκείνες για τις χαμηλές

ERS1

+ μικρής

ERS2

ομάδα? αν και οι συγκρίσεις των τεσσάρων κατηγοριών δεν εντοπίζονται τυχόν σημαντικές διαφορές, το μοτίβο που λαμβάνεται τείνει να δείξει ότι η υψηλή έκφραση των δύο γονιδίων που σχετίζεται με καλύτερη επιβίωση.

Η

Στη συνέχεια,

CYP19A1

έκφραση και συγκέντρωση πρωτεΐνης αρωματάσης θεωρήθηκαν. Δεν υπήρχαν σημαντικές διαφορές μεταξύ των Χαμηλή

CYP19A1

+ Low-αρωματάσης πρωτεΐνη και υψηλής

-CYP19A1

+ High αρωματάσης ομάδες πρωτεϊνών (Πίνακας 4). Στην περίπτωση αυτή, οι υψηλότερες συγκεντρώσεις έκφρασης και έτειναν να συνδέεται με βραχύτερη επιβίωση, αν και δεν είναι σημαντική, ρ = 0.088 (σχήμα 1γ).

Τέλος, τα επίπεδα έκφρασης των γονιδίων υποδοχέα οιστρογόνου σε συνδυασμό με την έκφραση του γονιδίου της αρωματάσης και πρωτεΐνη Οι συγκεντρώσεις, και διάμεση ποσοστά OS αξιολογήθηκαν (Πίνακας 5). Και πάλι, τέσσερις κατηγορίες κρίθηκαν στην ανάλυση. Η ισχυρότερη συσχέτιση βρέθηκε για

ERS1

σε συνδυασμό με

έκφραση CYP19A1

γονιδίων: τα υψηλότερα ποσοστά OS αποτελέσματα για κατηγορίες υψηλού

-ERS1

+ Χαμηλή

-CYP19A1

και High

-ERS1

+ High

CYP19A1

(και τα δύο από αυτά περιέχει το

ERS1-

υψηλής ομάδα έκφρασης), ενώ για την κατηγορία Χαμηλής

ERS1

-high-

CYP19A1

ήταν σημαντικά χαμηλότερη. Αυτές οι διαφορές ήταν σημαντικές (Kaplan-Meier Log Rank = 0,0001? Kruskal-Wallis p = 0,011).

Η

Για να ποσοτικοποιηθεί η έκταση στην οποία η επιβίωση ήταν χαμηλότερη στην Χαμηλή

-ERS1

+ Υψηλή

-CYP19A1

κατηγορία, οι άλλες τρεις κατηγορίες συγχωνεύθηκαν σε ένα ενιαίο σύνολο και παλινδρόμησης Cox εκτελέστηκε. Τα αποτελέσματα ήταν πολύ σημαντικά: p = 0.000007? Exp (Β) = 4.041. Σε αυτό το μικρής

ER

S1 + Υψηλής

CYP19A

1 κατηγορία, η πιθανότητα ενός ασθενούς επιβίωσης ήταν τέσσερις φορές μικρότερη από ό, τι για τους υπόλοιπους ασθενείς (ενοποιήθηκαν σε ένα σετ). Από την άλλη πλευρά, θεωρώντας αρωματάσης συγκέντρωση πρωτεΐνης αντί της γονιδιακής έκφρασης, οι διαφορές δεν ήταν πλέον σημαντικό.

Για την

ERS2

/

CYP19A1

σύγκριση τεσσάρων κατηγορία, δεν βρέθηκαν σημαντικές διαφορές (βλέπε πίνακα 5). Η χαμηλότερη επιβίωση αντιστοιχεί στην κατηγορία Χαμηλής

ERS2

+ High

-CYP19A1

μακριά από τις υπόλοιπες κατηγορίες. Στην πραγματικότητα, την επανάληψη της δοκιμής Kaplan-Meier για Χαμηλή

-ERS2

+ High

-CYP19A1

και άλλες κατηγορίες χωριστά, οι τρεις κατά ζεύγη συγκρίσεις έκανε απόδοση σημαντικές διαφορές (Χαμηλή

-ERS2

+ Χαμηλή

-CYP19A

εναντίον Χαμηλή

-ERS2

+ High

-CYP19A1

p = 0,031? υψηλής

-ERS2

+ Χαμηλή

-CYP19A1

εναντίον Χαμηλή

-ERS2

+ High

-CYP19A1

p = 0,045? και High

-ERS2

+ High

-CYP19A1

εναντίον Χαμηλή

-ERS2

+ High

-CYP19A1

p = 0,035). Όπως συνέβη και για το

ERS1

, η σύγκριση των κατηγοριών Χαμηλή

-ERS2

+ Χαμηλή

-CYP19A1

, High

-ERS2

+ Χαμηλή

-CYP19A1

και High

-ERS2

+ High

-CYP19A1

ενοποιήθηκαν σε ένα ενιαίο σύνολο, με την κατηγορία χαμηλής

-ERS2

+ High

-CYP19A1

, χρησιμοποιώντας Cox παλινδρόμησης για την ποσοτικοποίηση των διαφορών επιβίωση, έδωσε ένα πολύ σημαντικό αποτέλεσμα: p = 0,009, Exp (B) = 2.307

Θεωρώντας συγκέντρωση πρωτεΐνης, σε αντικατάσταση του

έκφραση CYP19A1

γονιδίου. , η κατηγορία με το χαμηλότερο ποσοστό επιβίωσης ήταν και πάλι Χαμηλή

-ERS2

+ High-αρωματάσης, αλλά τα ποσοστά ήταν δραματικά υψηλότερο για High

-ERS2

+ Low-αρωματάσης και σημαντικά χαμηλότερη για τις κατηγορίες Χαμηλή

-ERS2

+ Low-αρωματάσης και High

-ERS2

+ High-αρωματάσης. Οι διαφορές μεταξύ των τεσσάρων κατηγοριών δεν ήταν σημαντικές με δοκιμασία του Kaplan-Meier του (p = 0,093), αλλά ήταν με το τεστ Kruskal-Wallis (p = 0.049).

Το

ERS1

+ αρωματάσης και

ERS2

+ αρωματάσης συνδυασμούς μοιράζονται ένα ενδιαφέρον χαρακτηριστικό: Υψηλής

ERS1 /2

+ Low-αρωματάσης είναι οι υποκατηγορίες με μεγαλύτερη επιβίωση και στις δύο περιπτώσεις. Μια Cox παλινδρόμησης της Υψηλής

ERS1

+ Low-αρωματάσης κατά τα άλλα τρία

ERS1

+ αρωματάσης συνδυασμοί δεν ήταν σημαντική p = 0,114, Exp (B) = 1.89. Υψηλής

ERS2

+ Low-αρωματάσης δίνει το ίδιο αποτέλεσμα p = 0,061 Exp (B) = 2.12.

Συζήτηση

Αν και σε πραγματικό χρόνο RT-PCR έχει χρησιμοποιηθεί στο παρελθόν για τον προσδιορισμό οιστρογονικούς υποδοχείς έκφραση σε δείγματα όγκου πνεύμονος, αυτές οι μελέτες έχουν περιοριστεί λόγω του μικρού μεγέθους του δείγματος που χρησιμοποιείται [23] ή επειδή περιορίστηκαν σε κυτταρικές καλλιέργειες [9], [24]. Περαιτέρω, IHC ήταν η μέθοδος που χρησιμοποιείται συνηθέστερα για την ανίχνευση της παρουσίας πρωτεϊνών και παραλλαγές Ετα και Ετβ σε συγκέντρωση τους. Έρευνα σε αρωματάσης ακολούθησε παρόμοια τάση [11], [18], [25].

Μέχρι σήμερα, έχουν υπάρξει σημαντικές διαφορές στα αποτελέσματα IHC αναφερθεί (ακόμα και με τη χρήση ίδιου αντισώματος, την τεχνική και το είδος του ιστού) : τα ποσοστά ανίχνευσης να κυμαίνεται από 0 έως 80% για ΕΚα, από 30 έως 100% για την ΕΚβ και 60 έως 100% για αρωματάσης. Gomez-Fernandez et al. [26], Raso et al. [27] και Miki et al. [28] συζήτησε το πρόβλημα, δημιουργώντας μια πηγή των διαφορών αυτών: τα διαφορετικά αντισώματα που δρουν εναντίον διαφορετικών επιτόπων. Brueckl et al. [21] και Atmaca et al. [20], που δημοσιεύθηκε τους

ERS1

αποτελέσματα έκφρασης ανάλογα με τη μέθοδο RT-PCR και ανθρώπινα δείγματα (συμπεριλαμβανομένων μεγαλύτερη συλλογή των ασθενών), προσθέτοντας μια νέα πηγή διαφορά, την πολλαπλότητα των παραλλαγών ματίσματος ESR1 mRNA.

Το

ERS1

γονίδιο εκφράζεται σε ποσοστό 100% των δειγμάτων όγκου και μη όγκου. Εντός των δείγματα όγκου υπήρξε σημαντική μοτίβο στην επιβίωση: τα άτομα με υψηλότερο

ERS1

έκφραση γονιδίου είχε πλέον την επιβίωση και αυτό έρχεται σε αντίθεση με προηγούμενες μελέτες. Για παράδειγμα, στο Fasco et al. [23] δεν βρέθηκε συσχέτιση, ίσως λόγω του μικρού ομάδα ασθενών, ενώ Olivo-Marston et al. [29] ανέφεραν μια αντίστροφη συσχέτιση μεταξύ ER-α θετική έκφραση και την επιβίωση σε δείγματα ορού και σε μία από τις δύο ομάδες των ιστών που μελετήθηκαν. Τα διαφορετικά αποτελέσματα μπορεί να εξηγηθεί εν μέρει από την προσέγγιση προς ανάλυση: πήραν την πρώτη τριτημόριο ως αρνητική έκφραση και τα άλλα δύο ως θετικές. Προηγούμενες μελέτες είχαν την τάση να χρησιμοποιούν μεθόδους IHC και τα αποτελέσματα ήταν πολύ μικτά, που κυμαίνονται από μηδέν πρωτεΐνες ανιχνεύθηκαν με την παρουσία ΥΟ-α σχετίζεται με φτωχότερη επιβίωση, μόνη ή σε συνδυασμό με τον υποδοχέα του επιδερμικού αυξητικού παράγοντα [6], [12] , [19], [22], [30], [31]. Άλλοι λόγοι για τις διαφορές αυτές, εκτός από το προαναφερθέν πρόβλημα αντισώματος και εναλλακτικό μάτισμα, είναι τα αποτελέσματα της μετα-μεταφραστική ρύθμιση για την ανίχνευση [9], [26], [28], [32].

μας

ERS1

αποτελέσματα έκφρασης που σχετίζονται με την επιβίωση είναι σε συμφωνία με Brueckl et al. [21] και Atmaca et al. [20]. Στην πραγματικότητα χρησιμοποίησαν μια προσέγγιση ανάλυσης παρόμοιο με αυτό που έχουν χρησιμοποιηθεί εδώ, η μέθοδος Δέλτα Cq, χρησιμοποιώντας τη μέση για να χωρίσει τους ασθενείς με χαμηλή και υψηλή έκφραση υποομάδες.

Όσον αφορά

ERS2

γονιδιακής έκφρασης , οι ασθενείς με υψηλές και χαμηλές

ERS

2 έκφραση σε καρκινικά και μη καρκινικά ιστού αντίστοιχα τείνουν να έχουν υψηλότερα ποσοστά επιβίωσης? και εκείνοι με το αντίθετο προφίλ έκφρασης (Χαμηλή

ERS2

στον όγκο /υψηλό

ERS2

σε μη καρκινικό ιστό) έχουν τη φτωχότερη πρόγνωση. Μερικοί συγγραφείς δεν βρήκε καμία σχέση μεταξύ της έκφρασης πρωτεΐνης ER-β και την επιβίωση [22], [23], [33], ενώ άλλοι, σε συμφωνία με τα αποτελέσματα μας, παρατηρήθηκε ότι η παρουσία του ER-β πρωτεΐνη σχετίζεται με καλύτερη πρόγνωση. Όταν ακόμη και σε Cox πολυπαραγοντικό μοντέλο παλινδρόμησης

ERS2

έκφραση σε όγκο, μη-όγκου και αναλογία του δεν αποφέρει σημαντικά αποτελέσματα. Σχετικά με

CYP19A1

έκφρασης, ομάδες έκφρασης ασθενείς πρώιμο στάδιο (χαμηλό /υψηλό) αποτελέσματα επιβίωσης είναι σε αντιστοιχία με εκείνα των Mah et al. [18], αν και τα αποτελέσματα τους βασίστηκαν σε μεθόδους IHC για την ανίχνευση της πρωτεΐνης Όπως με το

ERS2

, κανένας από

CYP19A1

ή αρωματάσης μεταβλητές που περιλαμβάνονται στο Cox πολυμεταβλητή mocel.

λαμβάνοντας συνδυασμούς έκφραση μυαλό γονιδίων /πρωτεϊνών, Υψηλού

ERS1

/Υψηλού

ERS2

προβλέπει σαφώς υψηλότερο λειτουργικό σύστημα και θα μπορούσε να χρησιμοποιηθεί ως προγνωστικός παράγοντας. Προηγούμενες αναφορές που χρησιμοποιούνται αυτήν την προσέγγιση βασίστηκαν σε μεθόδους IHC και λαμβάνονται σημαντικές συγκρίσεις με το συνδυασμό των μεταβλητών που περιγράφουν την παρουσία πρωτεϊνών ER-β και αρωματάσης [22], [34], [35].

Το πιο ισχυρό συνδυασμός γονίδιο βρέθηκε να είναι μικρής

ERS1

+ Υψηλής

CYP19A1

εκφράσεις και αυτό σχετίζεται με μικρότερη επιβίωση. Αφού ανέλυσε τις τέσσερις υποομάδες που αφορούν

ERS1 /CYP19A1

, φαίνεται ότι μικρής

ERS1

είναι πιο καθοριστική για την επιβίωση από Υψηλής

CYP19A1

γονιδιακής έκφρασης, δεδομένου ότι το μειονέκτημα επιβίωσης δεν βρέθηκε όταν η υψηλή

έκφραση CYP19A1

γονίδιο συνδυάζεται με την υψηλή

ERS1

έκφραση, αλλά το ποσοστό OS για τα χαμηλά

ERS1

+ /χαμηλή

CYP19A1

σημεία έκφρασης στο συμπέρασμα ότι είναι η ακριβής συνδυασμός που οδηγεί σε μικρότερη OS. Η διαφορά στον τρόπο διεξαγωγής ανάμεσα στην έκφραση του

CYP19A1

και η παρουσία της αντίστοιχης πρωτεΐνης (Πίνακας 5) μας οδηγεί στο συμπέρασμα ότι κάτι αντισταθμίζει την αύξηση του λειτουργικού συστήματος στην κατηγορία Χαμηλής

ERS1

+ υψηλή

-CYP19A1

, και η μείωση των υψηλής

ERS1

/υψηλού

CYP19A1

/υψηλό. Αυτό μπορεί να είναι συρραφή, μετα-μεταφραστική τροποποίηση ή άλλο, ακόμη μη βιολογικό μηχανισμό, αν και θα μπορούσε επίσης να οφείλεται στο σχετικά μικρό μέγεθος του δείγματος.

Για να αποκτήσετε μια συγκρίσιμη προγνωστικός δείκτης OS βασίζεται στο

ERS2

, ο συνδυασμός μικρής

ERS2

+ Υψηλής

CYP19A1

που απαιτούνται για να τεθούν έναντι των τριών άλλων πιθανών συνδυασμών (Πίνακας 5) ομαδοποιούνται σε ένα ενιαίο σύνολο. Η αναλογία κινδύνου από παλινδρόμησης Cox για τους ασθενείς με μικρής

ERS2

+ Υψηλής

CYP19A1

έκφρασης σε σχέση με τις άλλες τρεις κατηγορίες είναι 2.307, ενώ το ίδιο τεστ για μικρής

ERS1

+ Υψηλής

CYP19A1

έκφραση απέδωσε αναλογία κινδύνου των 4.041, υπογραμμίζοντας τη σχετική ισχύ των

ERS1

επίπεδα ως προγνωστικός δείκτης. Από την άλλη πλευρά, στην περίπτωση του

ERS2

/αρωματάσης πρωτεΐνη, οι σημαντικές διαφορές στην επιβίωση ήταν αξιοσημείωτη, ένα μοτίβο που δεν παρατηρήθηκε με το

ERS1

. Όπως και με τις

ERS1

/CYP19A1 συνδυασμούς, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι οι μικρής

ERS2

είναι πιο σημαντικό από ό, τι Υψηλού

CYP19A1

γονιδιακή έκφραση όταν εξετάζουν τη διαφορά στην επιβίωση μεταξύ τα τέσσερα υποσύνολα. Περαιτέρω, η πιθανή ύπαρξη κάποιου είδους ρύθμιση πρέπει να θεωρηθεί ότι οφείλεται σε διακυμάνσεις των επιτοκίων για τις κατηγορίες μικρής

ERS2

+ μικρής

CYP19A1

, Υψηλού

ERS2

+ μικρής

CYP19A1

και Υψηλής

ERS2

+ Υψηλής

CYP19A1

και οι διαφορές στη συμπεριφορά των

ERS1

και

ERS2

προφίλ όταν συνδυάζεται με την έκφραση ή το προϊόν του

CYP19A1

γονίδιο.

Εν κατακλείδι

ERS1

, μόνο του ή σε συνδυασμό με

ERS2

ή

CYP19A1

, είναι ο πιο καθοριστικός προγνωστικός παράγοντας εντός των αναλύθηκε 3 γονίδια, λαμβάνοντας υπόψη την απορρύθμιση της σε ιστούς όγκων, τη σχέση της με την επιβίωση, και ότι η αναλογία κινδύνου όταν συνδυάζεται με άλλες μεταβλητές είναι μεγαλύτερη από αυτή για το

ERS2

. Η προέλευση της απορρύθμισης, η οποία φαίνεται να προκαλεί υποέκφραση

ERS1

RNA δεν έχει ακόμη διευκρινιστεί. Η περίπτωση του

ERS2

είναι εντελώς διαφορετική, δεδομένου ότι το σχέδιο επιβίωσης του ασθενούς αλλάζει σημαντικά όταν εξετάζεται η έκφραση σε μη-όγκου ή ιστό του όγκου. Και πάλι, πιστεύουμε ότι υπάρχει κάποια ακόμη άγνωστος παράγοντας διατάραξη αυτή τη διαδικασία. Απαιτείται περαιτέρω έρευνα για να εντοπίσει αυτούς τους παράγοντες και το επίπεδο στο οποίο δρουν.

Υποστήριξη Πληροφορίες

αρχείου S1.

Λεπτομερείς πληροφορίες σχετικά με ERS1,

ERS2

και γονίδια CYP19A1 μεταγραφή μήκους, που σχετίζονται μήκους πρωτεΐνη, ανιχνευτής εξόνιο-εξόνιο όριο, η ενίσχυση αμπλικόνιο και τη λειτουργικότητα της πρωτεΐνης. Πίνακας S1a.

CYP19A1

μεταγραφές γονιδίου και της πρωτεΐνης πληροφορίες, προσαρμοσμένες από την ιστοσελίδα Life Technologies, για Δοκιμασία ID Hs00903411_m1. Πίνακας S1b.

CYP19A1

μεταγραφές γονιδίου και της πρωτεΐνης πληροφορίες, προσαρμοσμένες από ENSEMB, για Δοκιμασία ID Hs00903411_m1. Πίνακας S2a.

ERS1

μεταγραφές γονιδίου και της πρωτεΐνης πληροφορίες, προσαρμοσμένες από την ιστοσελίδα Life Technologies, για Δοκιμασία ID Hs00174860_m1. Πίνακας S2B.

ERS1

μεταγραφές γονιδίου και της πρωτεΐνης πληροφορίες, προσαρμοσμένες από ENSEMB, για Δοκιμασία ID Hs00174860_m1. Πίνακας S3a.

ERS2

μεταγραφές γονιδίου και της πρωτεΐνης πληροφορίες, προσαρμοσμένες από την ιστοσελίδα Life Technologies, για Δοκιμασία ID Hs00230957_m1. Πίνακας S3b. .

ERS2

μεταγραφές γονιδίου και της πρωτεΐνης πληροφορίες, προσαρμοσμένες από ENSEMB, για προσδιορισμό ταυτότητας Hs00230957_m1

doi: 10.1371 /journal.pone.0109659.s001

(DOC)