Αφηρημένο

Το ανθρώπινο μιτοχονδριακό ΑΤΡ-εξαρτώμενη λειτουργίες της πρωτεάσης Lon στη ρύθμιση του μεταβολισμού και τον έλεγχο της ποιότητας των πρωτεϊνών και μιτοχονδριακού DNA (mtDNA ). Ωστόσο, ο ρόλος του Lon στον καρκίνο δεν είναι καλά κατανοητός. Ως εκ τούτου, αυτή η μελέτη έγινε για να διερευνηθεί η σημασία του Lon σε τραχήλου καρκινικά κύτταρα από ασθενείς και σε καθιερωμένες κυτταρικές σειρές. ανάλυση μικροσυστοιχιών από 30 καρκίνο και 10 φυσιολογικούς ιστούς του τραχήλου της μήτρας αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημεία για επίπεδα πρωτεϊνών Lon. Η έκφραση του Lon εξετάστηκε επίσης με ανοσοκηλίδωση 16 φρέσκο ​​τραχήλου καρκινικούς ιστούς και τους αντίστοιχους μη καρκινικών ιστών του τραχήλου της μήτρας τους. Σε όλες τις περιπτώσεις, η έκφραση Lon ήταν σημαντικά αυξημένη σε καρκινώματα του τραχήλου της μήτρας, σε σύγκριση με φυσιολογικούς ιστούς. Augmented έκφραση Lon σε μικροσυστοιχίες ιστών δεν διέφεραν μεταξύ των βαθμών ηλικία, όγκου-κόμβο-μετάσταση, ή μετάσταση στους λεμφαδένες. Να χτυπήσει κάτω Lon σε HeLa κύτταρα καρκίνου του τραχήλου από lentivrial μεταγωγής ως αποτέλεσμα τη σημαντική μείωση τόσο του mRNA και τα επίπεδα της πρωτεΐνης. Τέτοια προς τα κάτω ρύθμιση της έκφρασης Lon μπλοκαριστεί σημαντικά τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HeLa. Επιπλέον, να χτυπήσει κάτω Lon οδήγησε σε μειωμένη κυτταρική βιοενεργητική όπως προσδιορίζεται με μέτρηση αερόβια αναπνοή και γλυκόλυση χρησιμοποιώντας το Seahorse XF24 αναλυτής εξωκυτταρικό ροή. Μαζί, αυτά τα δεδομένα αποδεικνύουν ότι Lon παίζει έναν πιθανό ρόλο στην ογκογένεση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, και μπορεί να είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη και στόχος στη θεραπεία του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Lon? ανοσοϊστοχημεία? Καρκίνος του τραχήλου της μήτρας; τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων? κυτταρική βιοενεργητική.

Παράθεση: Nie Χ, Λι Μ, Lu Β, Zhang Υ, Lan L, Chen L, et al. (2013) κάτω ρύθμιση υπερεκφράζεται Ανθρωπίνων Lon σε καρκίνο του τραχήλου Καταστέλλει κυτταρικού πολλαπλασιασμού και Βιοενεργητική. PLoS ONE 8 (11): e81084. doi: 10.1371 /journal.pone.0081084

Επιμέλεια: Ruby John Άντο, Rajiv Gandhi Κέντρο Βιοτεχνολογίας, Ινδία

Ελήφθη: 15 Ιουλ 2013? Αποδεκτές: 8 Οκτώβρη του 2013? Δημοσιεύθηκε: 19, Νοεμβρίου, 2013

Copyright: © 2013 Nie et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Η έρευνα ερευνητικό έργο χρηματοδοτήθηκε από το Ίδρυμα Φυσικών Επιστημών της Κίνας (αριθμός επιχορήγηση 31.070.710), Εθνικό πρόγραμμα βασικής έρευνας της Κίνας (αριθμός επιχορήγηση 2013CB531702), η Zhejiang επαρχιακή κορυφή κλειδί πειθαρχία της εργαστηριακής ιατρικής, το δεύτερο κύμα της επαρχιακής προγράμματος Zhejiang για την καλλιέργεια της υψηλής σε επίπεδο εδάφους καινοτόμες ταλέντα της υγείας, και το κλειδί της επιστημονικής και τεχνολογικής ομάδα καινοτομία κλινική εργαστηριακή διάγνωση της επαρχίας Zhejiang (604.091.155). Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

ο καρκίνος του τραχήλου είναι η τρίτη πιο συχνή κακοήθεια στις γυναίκες σε όλο τον κόσμο, με περισσότερες από 500.000 νέες περιπτώσεις διαγιγνώσκονται κάθε χρόνο. Ανθρώπινο ιό του θηλώματος (HPV) είναι η πιο συχνή παράγοντα κινδύνου για την ανάπτυξη σχεδόν όλων των περιπτώσεων καρκίνου του τραχήλου [1,2]. Στα πρώιμα στάδια, ο καρκίνος του τραχήλου της μήτρας είναι δυνητικά ιάσιμη μέσω ενός συνδυασμού χειρουργική επέμβαση, ακτινοθεραπεία ή χημειοθεραπεία. Το ποσοστό επιβίωσης 5 ετών υπερβαίνει το 90%. Η χρήση ρουτίνας του Παπανικολάου τεστ παπ και HPV έχει βελτιωθεί σημαντικά την έκβαση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας στις ανεπτυγμένες χώρες [3]. Δυστυχώς, οι ασθενείς σε χώρες με χαμηλότερο εισόδημα είναι συχνά διαγιγνώσκεται σε προχωρημένο στάδιο, λόγω της έλλειψης επαρκούς προσυμπτωματικού ελέγχου, την έγκαιρη διάγνωση και θεραπευτική θεραπείες [4]. Παρά το γεγονός ότι οι περισσότερες ερευνητικές προσπάθειες μοριακής βασίζεται στη σύνδεση μεταξύ των διαφόρων τύπων HPV υψηλού κινδύνου και του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, η ταυτοποίηση νέων μοριακών δεικτών και μηχανισμών που συμβάλλουν στη βελτίωση της διάγνωσης και χημειοθεραπευτικά διαχείριση αυτής της νόσου θα είναι ουσιαστική.

Lon είναι μια εξελικτικά συντηρημένη πρωτεάση εξαρτώμενη από ΑΤΡ παρόν σε βακτήρια και μιτοχόνδρια των θηλαστικών και υπεροξειδιοσώματα [5-8]. Στη μιτοχονδριακή μήτρα, Lon δεν λειτουργεί μόνο στον έλεγχο της ποιότητας πρωτεΐνη με την εξάλειψη μη φυσιολογικών πρωτεϊνών, αλλά επίσης στη ρύθμιση της πρωτεΐνης με την επιλεκτική αποικοδόμησης κλειδί περιορισμού του ρυθμού πρωτεΐνες [9-13]. Lon ρυθμίζεται προς τα πάνω κάτω από διάφορες συνθήκες στρες, όπως η συσσώρευση του ξετυλίγεται πρωτεΐνες στο ενδοπλασματικό δίκτυο, υποξία και άλλες συνθήκες στρες [10,14,15]. Πειράματα σε καλλιεργημένα κύτταρα και ζωικά μοντέλα δείχνουν ότι η αυξημένη έκφραση του Lon ενεργοποιείται από υποξία ή ER στρες, και μπορεί δυνητικώς να επηρεάσει την πρωτεολυτική κύκλο εργασιών ή /και συναρμολόγησης σύμπλοκα αναπνευστικής αλυσίδας όπως το κυτόχρωμα c οξειδάση [14]. Στην αταξία του Friedreich, μια σπάνια κληρονομική νευροεκφυλιστική ασθένεια, μια προοδευτική μείωση των μιτοχονδριακών πρωτεϊνών Fe-S συνοδεύεται από συνδεόμενη αύξηση των επιπέδων πρωτεΐνης Lon και Lon μεσολάβηση πρωτεόλυση [15]. Επιπλέον, Lon είναι μια πρωτεΐνη που προσδένει mtDNA που συσχετίζει κατά προτίμηση με την περιοχή ελέγχου του γονιδιώματος όπου ξεκινούν αντιγραφή και μεταγραφή [16]. Lon είναι παρόν ως συστατικό πρωτεΐνη του μιτοχονδριακού νουκλεοειδή, και έχει ενοχοποιηθεί για τη διατήρηση και την έκφραση του μιτοχονδριακού DNA (mtDNA) [13,16,17].

Με βάση την ιδέα ότι Lon ρυθμίζεται αυξητικά υπό συνθήκες στρες για την ανακούφιση του μεταβολισμού και proteotoxic στρες στα καρκινικά κύτταρα, εξετάσαμε την έκφραση Lon σε ιστούς ανθρώπινου τραχηλικού καρκινώματος και φυσιολογικό τραχηλικό ιστούς χρησιμοποιώντας ανοσοϊστοχημεία και ανοσοκηλίδωση και βρήκε μια θετική συσχέτιση μεταξύ Lon υπερέκφραση και καρκίνο του τραχήλου. Για την αντιμετώπιση του μηχανισμού και βιολογικές λειτουργίες του Lon στην τραχηλική ογκογένεση του καρκίνου, εμείς τα κάτω ρυθμισμένα επίπεδα πρωτείνης Lon χρησιμοποιώντας RNA μικρή φουρκέτα (shRNA) μετάγονται σε κύτταρα HeLa, τα οποία είναι ένα κοινώς χρησιμοποιούνται τραχήλου κυτταρική γραμμή καρκινώματος. Έχουμε αποδείξει ότι χτυπήσει κάτω Lon σε HeLa κύτταρα καρκίνου του τραχήλου μειωμένη πολλαπλασιασμό των κυττάρων, μιτοχονδριακή αναπνοή και αερόβια γλυκόλυση. Τα ευρήματά μας υποδηλώνουν ότι Lon υποστηρίζει τραχήλου της μήτρας ογκογένεση του καρκίνου και μπορεί να είναι ένα μυθιστόρημα βιοδεικτών και θεραπευτικός στόχος για τον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας.

Υλικά και Μέθοδοι

ανάλυση

2.1 Ο καρκίνος του τραχήλου μικροσυστοιχίες ιστού για Lon με ανοσοϊστοχημεία

μήτρας μικροσυστοιχίες ιστό καρκίνου του τραχήλου της μήτρας αγοράστηκαν από Biomax (αριθμός καταλόγου CR602). Αυτή η μικροσυστοιχία περιείχε τραχήλου φυσιολογικούς ιστούς (n = 10) και καρκινικούς ιστούς σε διάφορα στάδια (n = 30). Η ανοσοϊστοχημεία εκτελέστηκε χρησιμοποιώντας το ακόλουθο πρωτόκολλο. Εν συντομία, τα μικροσυστοιχίες ιστού επωάστηκαν στους 60 ° C σε θάλαμο για 2 ώρες, αποπαραφινώθηκαν με ξυλόλιο, επανυδατώθηκαν και μέσω μιας σειράς αιθανόλης με διαφορετικές συγκεντρώσεις. Τα πλακίδια έβρασαν σε 10 mM νάτριο ρυθμιστικό διάλυμα κιτρικού (ρΗ 6.0) για 15 λεπτά για την ανάκτηση του αντιγόνου, και στη συνέχεια σβήστηκε με εμβάπτιση σε υπεροξείδιο του υδρογόνου 3% σε απεσταγμένο νερό για 20 λεπτά. Μετά από αποκλεισμό της μη ειδικής σύνδεσης με 3% αλβουμίνη ορού προβάτου για 20 λεπτά, οι πλάκες επωάστηκαν με ένα αντι-Lon αντίσωμα (Πεκίνο Βιοσύνθεση Biotechnology, Κίνα) (αραίωση 1: 100 σε 1% BSA σε PBS) όλη τη νύχτα στους 4 ° C . Οι πλάκες στη συνέχεια ξεπλύθηκαν τρεις φορές σε PBS και επωάστηκαν για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου με αντίσωμα αντι-κουνελιού βιοτινυλιωμένο πρόβατα σε μια αραίωση 1: 100 σε 1% BSA σε PBS. Το δευτερεύον αντίσωμα στη συνέχεια αναρροφήθηκε και τα πλακίδια πλύθηκαν τρεις φορές σε PBS που ακολουθείται από επώαση με συζευγμένη με υπεροξειδάση χρόνου αβιδίνη. Οι πλάκες στη συνέχεια κατεργάζεται με 3’3-διαμινοβενζιδίνη τετρα-υδροχλωρίδιο (DAB), αντίθετα με αιματοξυλίνη, και τελικά τοποθετείται με ουδέτερο μπαλάτα. Οι αρνητικοί μάρτυρες χωρίς πρωτογενή επώαση αντισώματος διεξήχθησαν επίσης.

Τμήματα ιστού παρατηρήθηκαν κάτω από ένα μικροσκόπιο Olympus (Olympus Corporation, Japan) και οι εικόνες ελήφθησαν στα 200 × μεγέθυνση με την ίδια ένταση φωτός και του χρόνου έκθεσης. Όλες οι εικόνες στη συνέχεια μετατρέπονται σε 8-bit κλίμακας του γκρι. Το Lon ένταση χρώσης του τραχήλου της μήτρας ιστών ήταν ημι-ποσοτικά σε σχέση με την ανάλυση της ολοκληρωμένης τιμή οπτικής πυκνότητας (IOD) για κάθε εικόνα, η οποία μετρήθηκε με την Plus λογισμικό ανάλυσης εικόνας Image-Pro (Media Cybernetics, USA).

2.2 Η συλλογή των δειγμάτων τραχηλικού ιστού

Η μελέτη εγκρίθηκε από την Επιτροπή Δεοντολογίας της First Affiliated Νοσοκομείο Wenzhou Ιατρικό Πανεπιστήμιο, Wenzhou, και γραπτή συγκατάθεση λήφθηκε από κάθε ασθενή. Ανθρώπινα τραχήλου της μήτρας δείγματα συλλέχθηκαν στο Τμήμα Μαιευτικής και Γυναικολογίας κατά τη διάρκεια της χειρουργικής επέμβασης σε ασθενείς με καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, οι οποίοι υποβλήθηκαν σε πλήρη χειρουργική εκτομή για την ασθένεια στο First Affiliated Νοσοκομείο Wenzhou Ιατρικό Πανεπιστήμιο (Wenzhou, Κίνα) μεταξύ Αυγούστου 2012 και Μαρτίου 2013. Οι ασθενείς επιλέχθηκαν με βάση την παθολογική διάγνωση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Δεν υπήρξε καμία ένδειξη οποιωνδήποτε άλλων κακοηθειών και καμία ιστορία της προεγχειρητικής αντικαρκινικής θεραπείας. Μετά από κάθε χειρουργική αφαίρεση, το δείγμα ιστού αμέσως καταψύχθηκαν ταχέως σε υγρό άζωτο και αποθηκεύτηκαν στους -80 ° C μέχρι την περαιτέρω ανάλυση.

2.3 Κυτταρική καλλιέργεια

Η κυτταρική γραμμή HeLa αγοράστηκε από την Αμερική Type Culture Collection (Rockville, MD). Τα κύτταρα καλλιεργήθηκαν σε τροποποιημένο μέσο Dulbecco Eagle (ϋΜΕΜ) (Sigma) συμπληρωμένο με 10% ορό εμβρύου βοός (FBS) (Sigma) και αντιβιοτικά (100 U /ml πενικιλλίνη και στρεπτομυκίνη) στους 37 ° C σε υγροποιημένη ατμόσφαιρα 5% CO

2.

2.4 Lon knockdown από λεντοϊού shRNA trasduction

κύτταρα HeLa απλώθηκαν 16 ώρες πριν από την επιμόλυνση σε μια πλάκα 6 φρεατίων σε πυκνότητα 2 × 10

5 κύτταρα /φρεάτιο. Τα κύτταρα μολύνθηκαν με LONP1-shRNA βραδέος ιού σωματιδίων (ΜΟΙ 5) (Santa Cruz, sc-97290-V) ή έλεγχο shRNA (Santa Cruz, sc-108 080) σε μέσο καλλιέργειας που περιέχει polybrene σε τελική συγκέντρωση 5 μg /ml. Το μέσο στη συνέχεια αναρροφήθηκε και αντικαταστάθηκε με φρέσκο ​​μέσο μετά από ολονύκτια επώαση. Εβδομήντα δύο ώρες αργότερα, τα κύτταρα στη συνέχεια σπείρονται σε πλάκες 60 mm, με μέσο που περιέχει πουρομυκίνη στην τελική συγκέντρωση 3 μg /ml. Φρέσκο ​​μέσο με πουρομυκίνη αντικαταστάθηκε καθημερινά για την επιλογή των μετατραπέντων κυττάρων. Αρκετοί κλώνοι ενός κυττάρου επιλεκτικά μεταφέρθηκαν χρησιμοποιώντας αποστειρωμένες δίσκους κλωνοποίησης σε φρεάτια μιας πλάκας 24 φρεατίων και να επεκταθούν. Οι κλώνοι LONP1-shRNA που δείχνει την πιο αποτελεσματική knockdown σε σύγκριση με τον έλεγχο shRNA κλώνοι ταυτοποιήθηκαν με ανάλυση ανοσοστύπωσης και χρησιμοποιήθηκαν για περαιτέρω ανάλυση

2.5 Ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο (RT-PCR)

Ολικό RNA εκχυλίζεται χρησιμοποιώντας ένα RNeasy Mini Kit (Qiagen) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το RNA ποσοτικοποιήθηκε χρησιμοποιώντας έναν αναγνώστη nanodrop και 2 μg του RNA μεταγράφηκε αντίστροφα σε cDNA χρησιμοποιώντας το cDNA υψηλής χωρητικότητας ανάστροφης μεταγραφής kit (Applied Biosystems) με τυχαία εναύσματα. Το cDNA αραιώθηκε και 200 ​​ng cDNA χρησιμοποιήθηκε ως μήτρα ανά αντίδραση. Ο πραγματικός χρόνος PCR (RT-PCR) οι αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με δοκιμασίες έκφρασης TaqMan Gene (Hs00998404_m1 LONP1, Hs02800695_m1 HPRT1, Applied Biosystems) χρησιμοποιώντας τις ακόλουθες συνθήκες: μετουσίωση στους 95 ° C για 10 λεπτά ακολουθούμενη από 40 κύκλους μετουσίωσης στους 95 ° C για 15 δευτερόλεπτα και ανόπτηση και επέκταση στους 60 ° C για 1 λεπτό. Η σχετική

LONP1

επίπεδα έκφρασης του mRNA κανονικοποιήθηκαν ενάντια στο γονίδιο οικοκυρική φωσφοριβοσυλτρανσφεράση της υποξανθίνης-1 (HPRT1) χρησιμοποιώντας τη μέθοδο συγκριτικής ΔΔCt. ΔΔCT υπολογίστηκε με την εξίσωση [Ct1 (LONP1) -Ct1 (HPRT1)] – [Ct2 (LONP1) -Ct2 (HPRT1)], Ct1 και Ct2 είναι οι τιμές Ct στην ομάδα LONP1-shRNA και την ομάδα ελέγχου shRNA αντίστοιχα, και η σχετική φορές μεταβολής γονιδίου υπολογίστηκε από την εξίσωση 2

-ΔΔCt.

2.6 ανίχνευση ανοσοκηλίδας του Lon πρωτεΐνης

Τα κατεψυγμένα δείγματα ιστού και τα κύτταρα λύθηκαν με την παρουσία ενός κοκτέιλ αναστολέα πρωτεάσης και φυγοκεντρείται σε 12.000 χ g για 20 λεπτά στους 4 ° C. Το υπερκείμενο κλάσμα συλλέχθηκε και η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας την μέθοδο δικιγχονινικού οξέος (BCA). Ίσες ποσότητες εκχυλίσματος πρωτεΐνης (20 μg ανά φρεάτιο) διαχωρίστηκαν με ηλεκτροφόρηση σε πήκτωμα ακρυλαμιδίου πολυ SDS (SDS-PAGE). Οι διαχωρισμένες πρωτεΐνες μεταφέρθηκαν πάνω σε μεμβράνη 0,2 μm νιτροκυτταρίνη και αποκλείστηκαν σε 3% άπαχο γάλα σε PBS. Το στύπωμα επωάστηκε με αντι-ανθρώπινο Lon (1: 300) σε 4 ° C όλη τη νύκτα ακολουθούμενο από δευτερεύον αντίσωμα αντι-κουνελιού συζευγμένο με υπεροξειδάση αρμορακίας κατσίκας (1: 5000, Santa Cruz). Αντίσωμα έναντι β-ακτίνης χρησιμοποιήθηκε ως έλεγχος φόρτωσης για το πείραμα. Η μεμβράνη στη συνέχεια επωάστηκε με υπόστρωμα χημειοφωταύγειας (Denville) για 5 λεπτά και εκτέθηκαν σε φιλμ ακτίνων-Χ και αναπτύχθηκαν σε σκοτεινό δωμάτιο. Τα σήματα ανιχνεύονται και προσδιορίζονται ποσοτικά με πυκνομετρία χρησιμοποιώντας λογισμικό Image-J (National Institutes of Health, USA).

2.7 Ο πολλαπλασιασμός των κυττάρων

δοκιμασία

κύτταρα knockdown ελέγχου και Lon σπάρθηκαν σε 6 φρεατίων πλάκας ιστοκαλλιέργειας σε πυκνότητα 5 χ 10

4 κύτταρα ανά φρεάτιο και επωάστηκαν όλη τη νύκτα. Μετά θρυψινοποίηση, τα κύτταρα επαναιωρήθηκαν σε έναν ίσο όγκο του μέσου καλλιέργειας και trypan blue (0.05% διάλυμα). Ο αριθμός των ζώντων κυττάρων σε φρεάτια εις τριπλούν που εξαίρεσαν κυανούν του τρυπανίου μετρήθηκε επί 6 ημέρες για να ληφθεί η καμπύλη κυτταρικής ανάπτυξης.

2.8 Seahorse XF-24 μεταβολική ανάλυση ροής

ρυθμός κατανάλωσης οξυγόνου (OCR) και εξωκυτταρικό ρυθμό οξίνισης (ECAR) μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας ένα Seahorse XF24 εξωκυττάριο ροή αναλυτή (Seahorse Bioscience). Εικοσιτέσσερις ώρες πριν από το πείραμα, σταθερή κύτταρα LONP1-shRNA HeLa (ομάδα Lon) και τα κύτταρα ελέγχου-shRNA HeLa (ομάδα CTR) καλλιεργήθηκαν επί ιππόκαμπος XF-24 πλάκες σε πυκνότητα 5 χ 10

4 κύτταρα ανά φρεάτιο. Την ημέρα της μεταβολικής ανάλυσης ροής, το μέσο καλλιέργειας αντικαταστάθηκε με 675 μΙ μη ρυθμισμένου DMEM (ϋΜΕΜ συμπληρωμένο με 25 mM γλυκόζη, 1 mM πυροσταφυλικό νάτριο, 31 mM NaCl, 2 mM Glutamax, ερυθρό φαινόλης, ρΗ 7,4) και επωάστηκε στους 37 ° C σε

2 επωαστή για 1 ώρα μη-CO. Όλα τα αντιδραστήρια ένεση ρυθμίστηκαν σε ρΗ 7,4. ρυθμοί Baseline μετρήθηκαν στους 37 ° C τέσσερις φορές πριν την ένεση διαδοχικά τα ακόλουθα μιτοχονδριακή αναστολείς-ολιγομυκίνη (10 μΜ), carbonycyanide π- (τριφθορομεθοξυ) φαινυλυδραζόνη (FCCP, 1.50 μΜ), και ροτενόνη (10 μΜ). Μετά την προσθήκη του κάθε αναστολέα, ελήφθησαν επίσης τέσσερις τιμές. OCR και ECAR ήταν υπολογίζονται αυτόματα από το λογισμικό Seahorse XF-24. Κάθε σημείο αντιπροσωπεύει μέσο όρο 7 διαφορετικά φρεάτια.

2.9 Στατιστική ανάλυση

Όλες οι στατιστικές αναλύσεις πραγματοποιήθηκαν με τη χρήση του λογισμικού SPSS.11. Μονόδρομη ανάλυση ΑΝΟνΑ εκτελέσθηκε για τις ανοσοϊστοχημικές αποτελέσματα και για τη σύγκριση των Lon και CTR ομάδων στα

in vitro

πειράματα. Οι ράβδοι σφάλματος για τα πειράματα αντιπροσωπεύουν την τυπική απόκλιση της μέσης τιμής (μέση τιμή ± S.D.) από τρία ξεχωριστά πειράματα εκτός αν ορίζεται διαφορετικά.

P

τιμές ≤ 0,05 θεωρήθηκαν ως στατιστικά σημαντικές.

Αποτελέσματα

3.1 LONP1 είναι πάνω από εκφράζεται σε ιστούς του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας

προσδιορισμός των επιπέδων της πρωτεΐνης Lon σε 30 καρκίνωμα του τραχήλου και 10 μη-νεοπλασματικές τραχηλικών δειγμάτων από υψηλής απόδοσης ανοσοϊστοχημική αναλύσεις. Αντιπροσωπευτικά τμήματα της έκφρασης Lon σε όλους τους ιστούς που φαίνεται στο Σχήμα 1. Εντούτοις, Lon εκφράστηκε σε σημαντικά υψηλότερα επίπεδα στα δείγματα του καρκίνου σε αντίθεση με την ασθενή αλλά ανιχνεύσιμη έκφραση σε φυσιολογικούς ιστούς με στατιστική σημαντικότητα (

P

& lt? 0,01) (Πίνακας 1). Η επαυξημένη έκφραση του Lon παρατηρήθηκε σε διάφορες ποιότητες του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας, χωρίς εμφανή διαφορά σε καλά, μέτρια και φτωχά διαφοροποιημένα ιστούς (Σχήμα 1 Β-Δ). Ομοίως, σε φρέσκο ​​τραχήλου καρκινικούς ιστούς, Lon βρέθηκε να είναι περισσότερο εντόνως εκφρασμένος σε σχέση με τους αντίστοιχους ιστούς μη-όγκου όπως δείχνεται με ανοσοκηλίδωση (Εικόνα 2 Α και Β). Εξετάσαμε επίσης το κατά πόσον Lon υπερέκφραση συσχετίστηκε με παράγοντες κινδύνου όπως η ηλικία και με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά, καθώς και το μέγεθος του όγκου, το στάδιο του όγκου, την τοπική εισβολή και μετάσταση στους λεμφαδένες. έκφραση Lon δεν συσχετίστηκε σημαντικά με την ηλικία, το βαθμό του όγκου, ΤΝΜ (όγκος-node-μετάσταση) βαθμούς, ή μετάσταση λεμφαδένα όπως συνοψίζεται στον Πίνακα 2. Στο σύνολό τους, Lon υπερεκφράζεται σε τραχηλικό καρκίνωμα.

(A) κανονικό ανθρώπινο τραχήλου της μήτρας ιστούς. (Β) του τραχήλου της μήτρας βαθμού του καρκίνου 1. (Γ) Ο καρκίνος του τραχήλου βαθμού 2. (D) του τραχήλου της μήτρας βαθμού καρκίνο 3. Bar κλίμακας: 50 μm.

Η Κατηγορία

υποθέσεις

Lon χρώση IOD (× 10

4)

α

P

-τιμή

*

κανονική cervix104.47 ± 2.070.004Cervical cancer307.19 ± 2.52Table 1. Lon έκφραση σε φυσιολογικούς ιστούς και του τραχήλου της μήτρας τραχήλου καρκινικούς ιστούς.

α Η χρώση Lon ολοκληρωμένη οπτική πυκνότητα (IOD) μετρήθηκε με την Εικόνα Pro Plus λογισμικό ανάλυσης. Τα δεδομένα ημι-ποσοτικά αναλύθηκαν και εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± S.D. *

P

≤ 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. CSV Λήψη CSV

(Α) Αντιπροσωπευτική ανοσοκηλίδα έκφρασης πρωτεΐνης Lon ανιχνεύθηκε σε αρκετές ανθρώπινο καρκίνο του τραχήλου της μήτρας (ακόμη και γραμμές) και της αντίστοιχης μη-όγκου (περιττές γραμμές) του τραχήλου της μήτρας ιστούς με ανάλυση κηλίδος Western. (Β) Ο καρκίνος του τραχήλου εκφράζει σημαντικά υψηλότερο επίπεδο Lon σε σύγκριση με μη-όγκου τραχηλικού ιστού,

P

& lt? 0.05. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± S.D. από τις 16 ομάδες του τραχήλου της μήτρας ιστών (Κανονική & amp? Cancer).

Η Κατηγορία

Υποκατηγορία

υποθέσεις

Lon χρώση IOD (× 104)

α

Σύνολο

P-value

*

Ηλικία (έτη) & lt? 50.196,72 ± 2.47300.186≥50118.00 ± 2.52Tumor GradeGrade 1107,00 ± 3.16300.522Grade 2107,93 ± 2.55Grade 3106,65 ± 1.74Invasion της tumorT1176 0,81 ± 2.82300.347T2137.70 ± 2.06Lymph κόμβο metastasisN0287.18 ± 2.59300.900N127.41 ± 1.80Table 2. Σχέση μεταξύ της έκφρασης Lon και κλινικοπαθολογικών χαρακτηριστικά των καρκίνων του τραχήλου.

α Η χρώση Lon ολοκληρωμένη οπτική πυκνότητα (IOD) μετρήθηκε με το Pro Plus λογισμικό ανάλυσης εικόνας. Τα δεδομένα ημι-ποσοτικά αναλύθηκαν και εκφράστηκαν ως μέση τιμή ± S.D. *

P

≤ 0,05 θεωρήθηκε στατιστικά σημαντική. CSV Λήψη CSV

3.2 ρύθμισης Down του Lon σε HeLa κύτταρα καρκίνου του τραχήλου

Για να προσδιοριστεί η σημασία της Lon στην επιβίωση του τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα, πήραμε πλεονέκτημα της τεχνικής shRNA. Για να αξιολογηθεί η εξειδίκευση του shRNA στο

LONP1

γονίδιο και η έκταση της Lon μειορύθμιση εφαρμόζονται σε κύτταρα HeLa, RT-PCR και ανάλυση ανοσοκηλιδώσεως διεξήχθησαν. RT-PCR επιβεβαίωσε ότι το LONP1 shRNA μειώνεται συγκεκριμένα το

LONP1

επίπεδο του mRNA κατά 60% στις 10 ημέρες μετά την επιμόλυνση (

P

& lt? 0,001? Σχήμα 3 Α). Ανάλυση ανοσοκηλιδώσεως έδειξε μία σημαντική μείωση στα ~ 100 επίπεδα πρωτεΐνης kDa Lon σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (CTR

, P

& lt? 0,001? Σχήμα 3 Β και C). Η πιο αποδοτικά μειωτικά κυτταρικό κλώνο του LONP1-shRNA επιλέχθηκε για περαιτέρω έρευνα.

(Α) Εκπρόσωπος RT-PCR ανάλυση των

LONP1

επίπεδο mRNA σε κύτταρα HeLa επιμολυσμένα με έλεγχο ή LONP1 shRNA. (Β) Εκπρόσωπος ανοσοαποτύπωμα που δείχνει τα επίπεδα της πρωτεΐνης Lon εκχυλίσματα από κύτταρα HeLa επιμολυσμένα με έλεγχο ή LONP1 shRNA. (C) Πυκνότητας χρησιμοποιήθηκε για την ποσοτικοποίηση των σχετικών επιπέδων πρωτεΐνης Lon κανονικοποιείται στη β-ακτίνης παρουσιάζεται στο (Β)? ***

P

& lt? 0.001. (Δ) Η ανάπτυξη των κυττάρων του ελέγχου και LONP1 shRNA μεταγωγή κύτταρα HeLa,

P

& lt? 0.05. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± S.D. από τρία ξεχωριστά πειράματα.

Η

3.3 κάτω ρύθμιση του Lon μείωση του πολλαπλασιασμού και σχηματισμό αποικιών HeLa κύτταρα καρκίνου του τραχήλου

Ενισχυμένη κυτταρική ανάπτυξη είναι ένα από τα πιο σημαντικά χαρακτηριστικά της ανάπτυξης του όγκου. Είμαστε δίπλα μελέτησαν την επίδραση του να χτυπήσει κάτω Lon στον πολλαπλασιασμό των κυττάρων HeLa

in vitro

. Η δοκιμασία πολλαπλασιασμού των κυττάρων έδειξαν ότι ο ρυθμός ανάπτυξης των κυττάρων στην ομάδα Lon shRNA ήταν σημαντικά χαμηλότερη από ότι στην ομάδα CTR (

P

& lt? 0,05? Σχήμα 3 D). Η μικροσκοπική ανάλυση έδειξε ότι το μέγεθος του κυτταρικού αποικία παρατηρήθηκε να είναι σχετικά μικρότερο στην ομάδα Lon σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου (δεν παρουσιάζονται τα δεδομένα).

3.4 κάτω ρύθμιση της έκφρασης Lon μειώνει το μεταβολισμό της ενέργειας από HeLa του τραχήλου της μήτρας τα καρκινικά κύτταρα

Προχωρήσαμε να προσδιοριστεί η επίδραση του Lon knockdown για την κυτταρική ενεργητική μετρώντας ποσοστά κατανάλωση οξυγόνου (OCR) και εξωκυτταρικά ποσοστά οξίνισης (ECAR), που είναι δείκτες της μιτοχονδριακής αναπνοής και της παραγωγής γαλακτικού οξέος μέσω αερόβια γλυκόλυση σε κύτταρα αντίστοιχα. Basal OCR (γραμμή αναφοράς μείον ολιγομυκίνη), η οποία είναι ένα μέτρο της οξειδωτικής φωσφορυλίωσης (OXPHOS), βρέθηκε να είναι σημαντικά χαμηλότερη στην ομάδα Lon σε σύγκριση με εκείνη της ομάδας ελέγχου (

P

& lt? 0,001? Εικόνα 4 B), αντανακλώντας χαμηλότερη εξάρτηση από OXPHOS για την παραγωγή ενέργειας στα κύτταρα Lon-shRNA. Μια ουσιαστική μπλοκ στη γλυκόλυση παρατηρήθηκε επίσης στην ομάδα Lon, όπως φαίνεται από μία σημαντική μείωση στην ECAR σχέση με την ομάδα CTR (σχήμα 4 D, την αρχική τιμή). Η προσθήκη της ολιγομυκίνης, η οποία αναστέλλει την F

0 ΑΤΡ σύμπλοκο συνθάσης και τη ροή ηλεκτρονίων, μείωσε δραματικά τον OCR και στις δύο ομάδες σε παρόμοια έκταση (Σχήμα 4 Α, ολιγομυκίνης). Μία αύξηση στην ECAR σε απόκριση προς ολιγομυκίνη βρέθηκε να συσχετίζεται με τη μείωση της OCR (

P

& lt? 0,05? Σχήμα 4 D, ολιγομυκίνης), υποδεικνύοντας αυξημένη παραγωγή γαλακτικού οξέος μέσω γλυκόλυσης. ένεση FCCP αποσυνδεθεί μιτοχονδριακή αναπνοή από σύνθεση ΑΤΡ και δραματικά αύξησε το OCR στις δύο κυτταρικές σειρές, δίνοντας μια εκτίμηση της ικανότητας αποθεματικού αναπνευστική των μιτοχονδρίων (σχήμα 4 Α, FCCP). Τέλος, η προσθήκη του συμπλόκου Ι αναστολέα ροτενόνη οδήγησε σε δραστική μείωση παρομοίως σε OCR στις δύο κυτταρικές σειρές, και το απομένον OCR θεωρήθηκε η μη μιτοχονδριακή κυτταρική κατανάλωση οξυγόνου (Εικόνα 4 Α, ροτενόνη). Lon shRNA knockdown είχε ως αποτέλεσμα μια αξιοσημείωτη μείωση της συνολικής μιτοχονδριακή αναπνευστική ικανότητα σε σύγκριση με τα κύτταρα ελέγχου (

P

& lt? 0,001? Σχήμα 4 C). Λαμβανόμενα μαζί, αυτά τα αποτελέσματα καταδεικνύουν ότι η ρύθμιση προς τα κάτω της έκφρασης Lon σε κύτταρα HeLa αναστέλλει τον κυτταρικό μεταβολισμό της ενέργειας.

(Α-Ο) ιππόκαμπος Bioscience XF24 εξωκυτταρικό ροής αναλυτή χρησιμοποιήθηκε για τη μέτρηση OCR (pMoles /min), ενδεικτικό της OXPHOS σε κύτταρα HeLa επιμολυσμένα με έλεγχο ή LONP1 shRNA. (Α) Μετά τη θέσπιση βασικής γραμμής, ολιγομυκίνης (10 μΜ), FCCP (1,50 μΜ), και ροτενόνη (10 μΜ) προστέθηκαν διαδοχικά. (Β) Η βασική OCR υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη διαφορά μεταξύ του μέσου όρου των χρονικών σημείων σε βασική γραμμή (αριθμοί 1 έως 4) και σε ολιγομυκίνη θεραπεία (αριθμοί 5 έως 8) (αρχική τιμή μείον ολιγομυκίνη OCR). (C) Μέγιστη μιτοχονδριακή περιοχή αναπνευστική ικανότητα κάτω από την καμπύλη (AUC) για δύο ομάδες είχε υπολογίσει με βάση τη διαφορά μεταξύ των AUC OCR (pmoles) τα ποσά των χρονικών σημείων στη θεραπεία FCCP (αριθμοί 9-12) και στη θεραπεία ροτενόνη (αριθμοί 13 έως 16) (FCCP μείον ροτενόν AUC OCR). (D) προφίλ του ECAR (MPH /min) στον έλεγχο και κύτταρα knockdown Lon μετρήθηκε στα ίδια πειράματα όπως περιγράφεται στο (Α). ***

P

& lt? 0.001. Τα δεδομένα αντιπροσωπεύουν τη μέση τιμή ± S.D. από τρία ξεχωριστά πειράματα.

Η

Συζήτηση

HPV λοίμωξη είναι η κύρια αιτία του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Η πιο διαδεδομένη βιοδείκτη για τη διαχείριση του τραχήλου της μήτρας προ-καρκίνου είναι ο έλεγχος για τον HPV DNA [18]. Υψηλή HPV τύπου κινδύνου ειδική ογκοπρωτεΐνες Ε6 και Ε7 ήταν πιστεύεται ότι είναι οι πιο σημαντικοί παράγοντες στο μετασχηματισμό των κυττάρων και την καρκινογένεση [19,20]. Άλλες λειτουργικές βιοδείκτες διερευνηθεί σε καρκίνο του τραχήλου περιλαμβάνουν δείκτες κυτοκερατίνης πλακωδών διαφοροποίησης (CK), δείκτες κυτταρικού κύκλου όπως ρ21, ρ27, MCM5, κυκλίνη Α, κυκλίνη Ε και κυκλίνη D, και άλλα μόρια όπως τελομεράσης, ινβολουκρίνη, και survivin. Samarzija διαπιστώθηκε πρόσφατα ότι Hedgehog (Hh) μονοπάτι σηματοδότησης ενεργοποιείται σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας που προέρχονται από κύτταρα με τη χρήση συνδέτη Shh και αναστολείς οδού Hh, υποδεικνύοντας αναστολή αυτής της οδού μπορεί να είναι μια θεραπευτική επιλογή για την καταπολέμηση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας [21].

Προηγούμενες μελέτες έχουν δείξει ότι οι αλλαγές στην έκφραση μιτοχονδριακή πρωτεΐνη Lon συνδέεται με μια ποικιλία ασθενειών του ανθρώπου, συμπεριλαμβανομένης της οικογενούς αμυοτροφική πλευρική σκλήρυνση [22], καρκίνους [23-25], καθώς και τη γήρανση [26], και αταξία του Friedreich [15]. Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν έναν κρίσιμο ρόλο για την μιτοχονδριακή πρωτεάσης Lon σε φυσιολογικές κυτταρικές λειτουργίες. Ωστόσο, ερωτήματα σχετικά με το πρότυπο έκφρασης και του ρόλου των Lon στην επιβίωση των κυττάρων του καρκίνου δεν είναι ακόμη πλήρως κατανοητή. Σε αυτή τη μελέτη διαλεύκανση το σημαντικό ρόλο των Lon στον ανθρώπινο καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Είναι εντυπωσιακό να διαπιστώσει ότι Lon πρωτεΐνη υπερεκφράζεται σε όλα τα στάδια του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας από microarrays και τα δείγματα ασθενών σε σύγκριση με τον έλεγχο αυτών.

Lon είναι μια πρωτεΐνη στρες είναι παρόμοια με τη θέρμανση παράγοντες σοκ τα οποία ρυθμίζεται αυξητικά υπό συνθήκες στρες [27]. Σε γενικές γραμμές, τα καρκινικά κύτταρα είναι υπό μεταβολικές και proteotoxic στρες όπου υπάρχει ανάγκη αντισταθμιστικών μηχανισμού για την ελάφρυνση αυτών καταπονήσεις να διατηρήσει το ογκογονικότητα και κυτταρική βιωσιμότητα. Τα μιτοχόνδρια διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο κατά τη διάρκεια της διάδοσης του καρκίνου με την παροχή ενέργειας, και να αποφύγουν την απόπτωση. Lon είναι ένα από τα σημαντικότερα μιτοχονδριακής πρωτεάσες που αναγνωρίζουν και υποβαθμίζουν ξεδιπλωμένη, κακώς αναδιπλωμένο και ανώμαλων πρωτεϊνών στα μιτοχόνδρια. Η υπερέκφραση του μιτοχονδριακού Lon παρουσιάζονται εδώ επαληθεύεται ακράδαντα ότι είναι ένας από τους βασικούς παράγοντες του τραχήλου της μήτρας καρκινογένεση. Ως συνέπεια της περιορισμένης διαθεσιμότητας των νωπών τραχήλου καρκινικών ιστών που χρησιμοποιούνται σε αυτή τη μελέτη, δεν είχαμε ικανότητα να προσδιοριστεί η συσχέτιση των επιπέδων της πρωτεΐνης του Lon με σταδιοποίηση του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας. Η μελλοντική εργασία βασίζεται σε διευρυμένη δείγματα θα καθορίσει κατά πόσον τα επίπεδα μεταγραφής Lon, καθώς και πρωτεΐνες που σχετίζονται με κλινικοπαθολογοανατομικές χαρακτηριστικά του καρκίνου του τραχήλου της μήτρας.

μιτοχονδριακού Lon πρωτεάση διακρίνεται από πολλαπλές λειτουργίες του ως πρωτεΐνη σύνδεσης mtDNA, ένα συνοδό πρωτεΐνη παρόμοια κατά τη συναρμολόγηση των μιτοχονδριακών συμπλοκών εσωτερικής μεμβράνης και την επιλεκτική αποικοδόμηση ανώμαλων πρωτεϊνών [14,28]. Μελέτες σε ζύμη έδειξαν ότι καταστρέφουν Lon εμφανίζουν αναπνευστική ανεπάρκεια λόγω της συσσώρευσης των μιτοχονδριακών πρωτεϊνών και δεν είναι σε θέση να αναπτύσσονται σε μη ζυμώσιμων πηγών άνθρακα [6,29]. Σε αμφότερες τις ζύμες και θηλαστικά κύτταρα, το knockdown του Lon οδηγεί στη συσσώρευση των ηλεκτρονίων πυκνά εγκλείσματα τα οποία υποτίθεται ότι είναι μη φυσιολογικές πρωτεΐνες εντός μιτοχόνδρια [6,25,30]. Η κατάρριψη Lon χρησιμοποιώντας μικρά παρεμβαλλόμενα RNA (siRNAs) προκάλεσε μειωμένη ανάπτυξη των κυττάρων του όγκου και ενισχύει την ευαισθησία των κυττάρων για τη σισπλατίνη και την υπεριώδη ακτινοβολία στον καρκίνο του μαστού κυτταρική γραμμή που λαμβάνεται MCF-7 [31]. Παρομοίως, τα κάτω ρύθμιση Lon πρωτεάσης σε WI-38 VA-13 ινοβλάστες ανθρώπινου πνεύμονα με αντινοηματικά μορφολινο εξασθενημένη μιτοχονδριακή δομή και λειτουργία και οδήγησε σε απόπτωση [32]. Επιπλέον, μια πρόσφατη μελέτη ανέφερε ότι Obtusilactone Α και (-) – σησαμίνης επαγόμενη απόπτωση σε ανθρώπινα καρκινικά κύτταρα πνεύμονα μέσω ενεργοποίησης σημείων ελέγχου βλάβης του DNA και την αναστολή της μιτοχονδριακής Lon πρωτεάσης [24]. Πιο πρόσφατη εργασία δείχνει ότι η λεντοϊού μεσολάβηση χτύπημα κάτω από Lon οδηγεί στο θάνατο των κυττάρων Β-λεμφοειδών [25]. Τα ευρήματα αυτά μαζί υποδηλώνουν την εμπλοκή του Lon στην ογκογένεση.

Είναι γνωστό ότι δραστικά είδη οξυγόνου (ROS) παράγονται κυρίως στην μιτοχονδριακή αλυσίδα μεταφοράς ηλεκτρονίων κατά τη διάρκεια των θηλαστικών OXPHOS συμβάλλουν στην ογκογένεση μέσω του ελέγχου του κυτταρικού πολλαπλασιασμού, φαινότυποι μετασχηματισμός, και επιβίωση [33]. Είναι ενδιαφέρον ότι, η υπερέκφραση του Lon σε αρκετές καρκινικές κυτταρικές γραμμές εκτός από τα κύτταρα HeLa δείχθηκε πρόσφατα ότι επάγει την παραγωγή των ROS και περαιτέρω ενεργοποιούν ενεργοποιείται από μιτογόνο κινάσης πρωτεΐνης (ΜΑΡΚ) και Ras-εξωκυτταρικό σήμα ρυθμιζόμενη κινάση (Ras-ΕΚΚ) σηματοδότησης, οι οποίες είναι που εμπλέκονται στην παροχή πλεονεκτήματα επιβίωσης στα καρκινικά κύτταρα, αντίδραση στο στρες, και την προσαρμογή στο μικροπεριβάλλον του όγκου [34]. Για να διερευνηθεί ο ρόλος του Lon στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας, τα κύτταρα HeLa υπέστησαν μεταγωγή με φακοϊό φέρει ένα shRNA για τη συγκεκριμένη knockdown του Lon. Τα κάτω ρύθμιση της ενδογενούς Lon εξασθένισε την ικανότητα πολλαπλασιασμού των κυττάρων HeLa σε καλλιέργεια, και οδήγησε σε μια μείωση της συνολικής κυτταρικό μεταβολισμό ενέργειας. Θεωρούμε ότι αυτό το φαινόμενο στην Lon ανεπάρκεια HeLa αποτελέσματα κύτταρα από σχετική ανεπάρκεια της λειτουργίας Lon. Μειωμένη δραστικότητα συνοδού του Lon χειροτερεύει την συναρμολόγηση και /ή η λειτουργία του αναπνευστικού συμπλοκών και έτσι θα μπορούσε να αναστείλει την μιτοχονδριακή παραγωγή ROS, το οποίο είναι ζωτικής σημασίας για την επιβίωση και τον πολλαπλασιασμό των καρκινικών κυττάρων. Η αναστολή της ανάπτυξης σε κύτταρα HeLa και χαμηλότερο επίπεδο της βασικής OCR και OCRs μετά την προσθήκη των αναστολέων της αναπνευστικής συμπλοκών »μετά Lon σίγηση είναι σε καλή συμφωνία με την εξήγηση αυτή [35]. Επιπλέον, η αναστολή της ανάπτυξης θα μπορούσε να αποδοθεί εν μέρει στην απώλεια του ελέγχου της ποιότητας πρωτεΐνης, η οποία με αποτέλεσμα την δηλητηριώδη συσσώρευση κακώς-αναδιπλωμένου, έχουν συναρμολογηθεί και /ή οξειδωτικά κατεστραμμένων πρωτεϊνών [36]. Ο μηχανισμός αυτού του τμήματος θα πρέπει να μελετηθεί σε περαιτέρω ανάλυση.

Συμπέρασμα

Προς τα πάνω ρύθμιση Lon πρωτεάσης στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας είναι ένας από τους μηχανισμούς προσαρμογής για τη βιωσιμότητα των κυττάρων. Down ρύθμιση ή αναστολή Lon σε τραχήλου καρκινικά κύτταρα σταμάτησαν πολλαπλασιασμού καρκινικών κυττάρων μεταβάλλοντας την βιοενεργειακό μεταβολισμό και ως εκ τούτου στόχευση Lon μπορεί να είναι ένας από τους δυνητικούς μεθόδους στη θεραπεία του καρκίνου. Περαιτέρω μελέτες απαιτούνται για να διευκρινίσουν τα μονοπάτια σηματοδότησης με την οποία Lon προωθεί την γένεσιν όγκων στον καρκίνο του τραχήλου της μήτρας. Στο σύνολό τους, Lon θα μπορούσε να είναι ένα χρήσιμο βιοδείκτη σε καρκίνο του τραχήλου της μήτρας και ένας πιθανός στόχος για την ανάπτυξη νέων φαρμάκων για αντικαρκινική θεραπεία.

Ευχαριστίες

Ευχαριστούμε Dr. Ο.Κ. Suzuki, ο Δρ V. Sundararajan και Jae Lee για τις χρήσιμες συζητήσεις και επανεξέταση αυτού του χειρογράφου.