Αφηρημένο

Ιστορικό

μετάσταση συμβαίνει σε μια σειρά από διακριτά βήματα που αφορούν την εισβολή, την αγγειογένεση, lymphovascular χώρο διείσδυσης και δημιουργία δευτερευόντων όγκων. Κακοήθη πλευριτική συλλογή (MPE), ένα είδος μετάσταση του όγκου, είναι συνήθως κακό προγνωστικό σημάδι για τους ασθενείς με πνευμονική αδενοκαρκίνωμα, αν υποκείμενος μηχανισμός του έχει λάβει λιγότερη προσοχή από ό, τι άλλα είδη μεταστάσεις έχουν. Ο στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να επιβεβαιώσει εάν καρκινικά βλαστικά κύτταρα (ΚΕΠ) σε MPE συμβάλλουν στην «μεταστατικού καταρράκτη» μέσω της επιθηλιακής -. Μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT), anoikis, και την προσαρμογή στο μικροπεριβάλλον

Μέθοδοι

πνευμονικό ιστό και το αντίστοιχο κελί μπλοκ MPE δείγματα από 20 ασθενείς με πρωτοπαθή αδενοκαρκίνωμα αναλύθηκαν με ανοσοϊστοχημική χρώση με CSC-εκπρόσωπος δείκτες (CD133, Nanog, και OCT-4) και ΕΜΤ-συνδέονται δείκτες (Ε-καδερίνης και βιμεντίνης). Συσχετίσεις μεταξύ αυτών των μεταβλητών και κλινικο-παθολογικές παραμέτρους αναλύθηκαν. Πρωτογενείς καλλιέργειες από οκτώ περιπτώσεις MPE ερευνήθηκαν για τον χαρακτηρισμό των ιδιοτήτων CSC, συμπεριλαμβανομένων έκφρασης δείκτη, ο σχηματισμός σφαίρα, και τη διαφοροποίηση.

Αποτελέσματα

Εκφράσεις της CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες για 20 περιπτώσεις MPE κυττάρων μπλοκ ήταν αρκετά διαφορετικές και οι μεταβλητές που κυμαίνονται από 15% έως 90%. Ισχυρότερη έκφραση της CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες και τις μεταβολές του EMT που σχετίζονται με δείκτες βρέθηκαν στις επεμβατικές μέτωπα και του μέγιστου επιτρεπόμενου σφάλματος σε σύγκριση με την έκφραση σε πρωτοπαθή πνευμονική ιστούς όγκων. Η έκφραση των ΥΧΕ-4 σε μέγιστα επιτρεπόμενα σφάλματα και σημαντικά που συνδέονται με μακρινή μετάσταση και το στάδιο, καθώς και αντιστρόφως ανάλογη με την επιβίωση των ασθενών. Πρωτογενείς καλλιέργειες επιβεβαίωσε τις ιδιότητες CSC στην MPE. Πέντε από τις οκτώ περιπτώσεις MPE απέδωσαν κατάλληλες ομάδες κυττάρων, η οποία έδειξε επίσης μεταβλητή εκφράσεις των δεικτών CSC εκτός από την σφαίρα σχηματισμό και την ικανότητα για τη διαφοροποίηση και τη μετάσταση.

Συμπέρασμα

Αυτή η πιλοτική μελέτη προσφέρει μια καλύτερη κατανόηση της μεταστατικής καταρράκτη. Η δημιουργία ενός μοντέλου MPE θα παράσχει περαιτέρω κατανόηση του ρόλου των ΚΕΠ στη μετάσταση και μπορεί να εξηγήσει τα υψηλά θεραπευτικά ποσοστά αποτυχίας για τους ασθενείς με MPE

Παράθεση:. Chen SF, Λιν YS, Jao ΝΔ, Chang YC, Λιου CL, Lin YJ, et al. (2013) Πνευμονική αδενοκαρκίνωμα σε κακοήθη υπεζωκοτική συλλογή του Καρκίνου εμπλουτίζει ιδιότητες βλαστοκυττάρων κατά τη διάρκεια Μεταστατικό Cascade. PLoS ONE 8 (5): e54659. doi: 10.1371 /journal.pone.0054659

Επιμέλεια: Masaru Katoh, Εθνικό Κέντρο Καρκίνου, Ιαπωνία

Ελήφθη: 12 Ιούνη, 2012? Αποδεκτές: 17 Δεκ 2012? Δημοσιεύθηκε: May 1, 2013

Copyright: © 2013 Chen et al. Αυτό είναι ένα άρθρο ανοικτής πρόσβασης διανέμεται υπό τους όρους της άδειας χρήσης Creative Commons Attribution, το οποίο επιτρέπει απεριόριστη χρήση, τη διανομή και την αναπαραγωγή σε οποιοδήποτε μέσο, ​​με την προϋπόθεση το αρχικό συγγραφέα και την πηγή πιστώνονται

Χρηματοδότηση:. Αυτή η μελέτη εν μέρει υποστηρίζεται από το Εθνικό Επιστημονικό Συμβούλιο, Δημοκρατία της Κίνας, Grant Nos. NSC100-2320-B-016-009 και από την Tri-Service Γενικό Νοσοκομείο, Grant Νο TSGH-C101-076. Οι χρηματοδότες δεν είχε κανένα ρόλο στο σχεδιασμό της μελέτης, τη συλλογή και ανάλυση των δεδομένων, η απόφαση για τη δημοσίευση, ή την προετοιμασία του χειρογράφου

Αντικρουόμενα συμφέροντα:.. Οι συγγραφείς έχουν δηλώσει ότι δεν υπάρχουν ανταγωνιστικά συμφέροντα

Εισαγωγή

μετάσταση, η εξάπλωση των κακοηθών κυττάρων από έναν πρωτοπαθή όγκο σε απομακρυσμένα όργανα, είναι η κύρια αιτία της αποτυχίας της θεραπείας και του θανάτου σε ασθενείς με καρκίνο [1]. Συνήθως περιλαμβάνει μία σειρά από διακριτά βήματα και απαιτεί τη μεταφορά των κακοήθων κυττάρων μέσω του αίματος ή /και των λεμφικών αγγείων. Εκτός από το αίμα και λεμφικών αγγείων, υγρά του σώματος είναι επίσης ένα δυναμικό μέσο μεταφοράς για τη μετάσταση του καρκίνου [2]. Συμμετοχή του ορώδες μεμβράνης από την πρωτοπαθή πνευμονική αδενοκαρκίνωμα προκαλώντας αρχική κακοήθη πλευριτική συλλογή (MPE) συνήθως υποδηλώνει ένα προχωρημένο στάδιο του καρκίνου. Σύμφωνα με τις πρόσφατες AJCC κατευθυντήριες γραμμές [3], MPE είναι μεταστατικός, μπορεί να προκαλέσει σημαντική δυσφορία, και αντανακλά μια φτωχή πρόγνωση για τον ασθενή. Συλλογές μπορεί να προσφέρει μια μοναδική in situ περιβάλλον για τη δημιουργία ενός «προ-μεταστατικούς θέση», και μελετώντας αυτό το περιβάλλον μπορεί να μας βοηθήσει να κατανοήσουμε πώς τα καρκινικά κύτταρα με τη χρήση βλαστικών κυττάρων που μοιάζουν με ακίνητα σε συλλογές συμβάλλουν στην εξέλιξη από άτομο σε εμπλουτισμένο συστάδες κυττάρων σε προχωρημένο μετάστασης του πνεύμονα καρκίνο [4].

Με τη μείωση του κυττάρου-κυττάρου ή κυττάρου-μήτρας, τα καρκινικά κύτταρα εισάγετε τις ορώδες κοιλότητες, όπου αποσπώνται από τη μητρική του όγκου και να γίνει «άστεγοι». Αυτό προκαλεί ένα φαινόμενο που ονομάζεται «anoikis «[5]. Τα επιπλέοντα κακοήθη κύτταρα σε κατάσταση anoikis σε συλλογές σκέφτηκε να υποκύψει σε απόπτωση και να εξαφανιστούν. Ωστόσο, στην πραγματικότητα, το αντίθετο συμβαίνει, επειδή αυτά τα κύτταρα είναι μοναδικά ικανά να πολλαπλασιάζονται προοδευτικά παρά την προφανώς δυσμενή μικροπεριβάλλον. Αυτό θέτει τα ερωτήματα: «Πώς μπορούν αυτά τα καρκινικά κύτταρα να επιβιώσουν και να πολλαπλασιαστούν για να ξεπεραστεί η απειλή της anoikis;» και «Ποιος μηχανισμός επιτρέπει σε αυτά τα κύτταρα να αποκτήσουν σήματα επιβίωσης και έτσι επιβιώνουν και πολλαπλασιάζονται σε έναν πληθυσμό που επιπλέει όγκου σε συλλογές που δεν έχουν την κανονική στερεό -φάση σκαλωσιές; »

Η παρουσία του καρκίνου βλαστικών κυττάρων (ΚΕΠ), κυρίως σε συμπαγείς όγκους, έχει προταθεί πρόσφατα. Τα ΚΕΠ που ονομάζεται επίσης καρκίνο κύτταρα έναρξης, λόγω της ικανότητάς τους για αυτο-ανανέωση, σε πολλαπλές διαφοροποίησης, και τα υψηλότερα επίπεδα της κακοήθειας [6] – [9]. Μελέτες έχουν δείξει ότι τα ΚΕΠ είναι ανθεκτικά στην θεραπεία και φαίνεται να είναι υπεύθυνη για επανεμφάνιση του όγκου και τη μετάσταση [6], [10], [11]. Αύξηση στοιχεία δείχνουν ότι το επιθηλιακό – μεσεγχυματικά μετάβασης (EMT) συμμετέχει στην εξέλιξη του καρκίνου και είναι στενά συνδεδεμένο με την «βλαστική ικανότητα» των καρκινικών κυττάρων [12], [13]. MPE μπορεί να χρησιμεύσει ως μια δεξαμενή για τα καρκινικά κύτταρα στην υπεζωκοτική κοιλότητα, όπου μπορούν να προχωρήσουν μέσα από την EMT, να γίνει επεμβατική και πάλι, και να θεσπίσει περαιτέρω μεταστάσεις [14]. Υπάρχει επίσης ένα αυξανόμενο σώμα της στοιχεία που δείχνουν μια σχέση μεταξύ της EMT, η εμφάνιση των ΚΕΠ, και η αντίσταση των ναρκωτικών [15]. MPE φαίνεται να είναι ένα ιδανικό και μοναδικό μοντέλο για τη μελέτη της σχέσης μεταξύ της EMT και τις ιδιότητες CSC.

Αρκετές μελέτες έχουν δείξει ότι η καταστολή της anoikis και η EMT συνδέονται [16], [17]. Ωστόσο, υπήρξαν λίγες αναφορές για την ύπαρξη των ΚΕΠ σε συλλογές. Οι περισσότερες μελέτες του καρκίνου διασποράς έχουν επικεντρωθεί σχετικά με τους μηχανισμούς που διέπουν μεταστάσεις μέσω του λεμφικού ή αιματογενής διαδρομές. Λιγότερο είναι κατανοητό για τους συσχετισμούς μεταξύ της ύπαρξης και των ιδιοτήτων των ΚΕΠ, η EMT, καταστολή anoikis, και το μικροπεριβάλλον του όγκου σε MPE. Ο στόχος της παρούσας μελέτης ήταν να επιβεβαιώσει τον πιθανό ρόλο των ΚΕΠ σε συλλογές και να εξερευνήσετε το μηχανισμό που εμπλέκεται στην εξάπλωση των όγκων και τη σχέση μεταξύ της έκφρασης της EMT που σχετίζονται με τους δείκτες και τα αποτελέσματα των ασθενών. Δημιουργία ενός μοντέλου MPE μπορεί να παρέχει μια καλύτερη κατανόηση του ρόλου των ΚΕΠ στη μετάσταση και τα υψηλά θεραπευτικά ποσοστά αποτυχίας σε ασθενείς με MPE.

Αποτελέσματα

επιβεβαίωση και ταυτοποίηση του αδενοκαρκινώματος του πνεύμονα και υπεζωκοτικές συλλογές

οι ιστοί από πρωτοπαθή πνευμονική αδενοκαρκίνωμα και των αντίστοιχων MPE μπλοκ των κυττάρων από 20 ασθενείς επιλέχθηκαν ως ομάδες μελέτης. Τα εν λόγω ζεύγη ομάδες μελέτης υποβλήθηκαν σε ιστοπαθολογική και κυτταρολογική ταυτοποίηση. Η ανοσοϊστοχημική έκφραση της CK-7 και TTF-1 /εξετάσθηκε CEA. CK-7 και TTF-1 μπορεί να ανιχνευθεί ανοσοϊστοχημικά στις περισσότερες πνευμονική αδενοκαρκινώματα [18]. CEA είναι χρήσιμη για την επιβεβαίωση της παρουσίας ενός αδενοκαρκινώματος και θεωρείται μια καλύτερη εναλλακτική λύση για τη διαφοροποίηση μεταξύ επεμβατική κακοήθεις και μη κακοήθεις συλλογές [19]. Η έκφραση του CK-7 ανιχνεύθηκε τόσο πρωτογενείς όγκους πνεύμονα και φωλιές των κυττάρων σε MPE μπλοκ κυττάρων. Διπλή χρώση για TTF-1 /CEA έδειξε ότι TTF-1, της οποίας η πυρηνική χρώση εμφανίστηκε ως ένα καφέ χρώμα, και CEA, των οποίων η κυτταροπλασματική χρώση εμφανίστηκε ως ένα κόκκινο χρώμα, χρωματισμένο ομοιόμορφα σε πρωτογενείς όγκους του πνεύμονα, ενώ CEA-θετικών κυττάρων βάφονται ισχυρότερη από TTF-1-θετικά κύτταρα σε όγκους κυττάρων MPE έκαναν (Σχήμα 1Α).

(Α) Ανοσοϊστοχημική ταυτοποίηση κυττάρων αδενοκαρκινώματος έδειξαν θετικά αποτελέσματα της CK-7 (βέλη) σε αμφότερα πρωτογενή πνευμονική όγκου (μεγέθυνση, 200 × ) και φωλιές κύτταρο σε κύτταρο μπλοκ του MPE σε χαμηλότερες και υψηλότερες μεγεθύνσεις (a, b) (Μεγέθυνση, 40 × και 400 ×)? Διπλή χρώση του TTF-1 /CEA αποκάλυψε ότι TTF-1 (καφέ χρώμα, βέλος κεφαλές) και CEA (κόκκινο χρώμα, βέλη) ήταν ομοιόμορφα θετικοί-βάφονται σε πρωτοπαθή πνευμονική όγκου (γ) (Μεγέθυνση, 200 Χ), ενώ CEA τα (+) κύτταρα (βέλη) χρωματίστηκαν ισχυρότερες από εκείνες του TTF-1 (+) κυττάρων (κεφαλές βέλους) στο μπλοκ κελί του MPE σε χαμηλότερες και υψηλότερες μεγεθύνσεις (δ). (Μεγέθυνση, 40 × και 400 ×). (Β) Διπλό-χρώση της E-cadherin /βιμεντίνη έδειξε ότι μειώθηκε E-cadherin (καφέ χρώμα, βέλη) και την αύξηση της βιμεντίνης (κόκκινο χρώμα, αιχμές βελών) εκφράσεις βρέθηκαν στις επεμβατικές μέτωπα της πρωτοπαθούς πνευμονικής όγκου και στο μπλοκ των κυττάρων του MPE. (Μεγέθυνση, 200 ×) (C).

Η

Εκφράσεις του EMT που σχετίζονται με δείκτες σε πρωτογενείς όγκους και υπεζωκοτικές συλλογές

Μια ανοσοϊστοχημική μελέτη χρησιμοποιώντας το EMT που σχετίζονται με δείκτες E-cadherin και βιμεντίνη, έδειξε μια ποικιλία μοντέλων έκφρασης στα 20 ζεύγη δειγμάτων ιστού πρωτογενούς όγκου και MPE μπλοκ των κυττάρων. Τα επίπεδα έκφρασης που σχετίζονται με τη θέση τόσο στα πρωτοπαθή πνευμονική αδενοκαρκινώματα και τα μπλοκ MPE κυττάρων. Μια υψηλότερη έκφραση του βιμεντίνη και μια χαμηλότερη έκφραση της Ε-καδερίνης βρέθηκαν στις επεμβατικές φωλιές των κυττάρων και MPE ό, τι στο κέντρο των πρωτογενών όγκων, που δείχνει ότι μεταβολές των δεικτών EMT συνδέθηκαν με τις τοπικές εισβολή και κακοήθεις συμμετοχή στην υπεζωκοτική κοιλότητα (Εικόνα 1Β).

Χαρακτηρισμός και διανομή των CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες που σχετίζονται με το μικροπεριβάλλον

οι περισσότεροι από τους MPE δείγματα έδειξαν μεταβλητή ανοσολογική αντίδραση σε CD133, Nanog, και OCT-4, και συνδυασμοί χρώση προκάλεσε διαφορετικές εντάσεις και τις διανομές. Ένας σχετικά αδύναμη έκφραση Οκτώβριος-4, Nanog, και CD133 ήταν πάντα βρίσκονται στο κέντρο των πρωτογενών πνευμονικών όγκων. Ισχυρότερη επίπεδα έκφρασης ΥΧΕ-4, Nanog, και CD133 ανιχνεύθηκαν στο μεταναστευτικό μέτωπο, που βρίσκεται στη διεπαφή μεταξύ των κυττάρων του όγκου φωλιές και στρωματικών ιστών σε πρωτοπαθή πνευμονική αδενοκαρκινώματα, και στα εξωτερικά περιθώρια των κυττάρων του όγκου φωλιές στην κυψέλη MPE μπλοκ (Εικόνα 2Α). Ανεξάρτητα από την ένταση που εκφράζεται σε κάθε περίπτωση, όλες από τις 20 περιπτώσεις του MPE ήταν περισσότερο ή λιγότερο ανοσοαντιδραστικά για ένα ή δύο ή όλων των τρίκυκλων CSC-εκπρόσωπος δείκτες. Με άλλα λόγια, δεν υπήρχε μία περίπτωση MPE αρνητικό για όλους τριών CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες. Επειδή Οκτώβριος-4 είχε θεωρηθεί ως το πιο σημαντικό CSC-αντιπροσωπευτικό δείκτη, το ποσοστό που σχετίζονται με Οκτώβριο-4 έκφραση παρούσα σε 20 περιπτώσεις μπλοκ των κυττάρων MPE ήταν αρκετά διαφορετικές κυμαίνονται από 10% έως 90%. Λόγω εντός του όγκου ετερογένεια, τρία διαφορετικά μοτίβα συνδυασμό θετικών Οκτώβριος-4 σε συνδυασμό με την θετική ή αρνητική Nanog και εκφράσεις CD133 εντοπίστηκαν στην μέγιστων επιτρεπόμενων ορίων (Σχήμα 2Β). Τέσσερις ομάδες κατατάχθηκαν μεταξύ των οποίων τρεις σημαντικές θετικές Οκτώβριος-4 ομάδες και μία ομάδα αρνητικού Οκτώβριος-4. Τρεις από 20 περιπτώσεις ήταν θετικές MPE για τις τρεις δείκτες στην ομάδα Α (3/20, 15%). Πέντε από 20 περιπτώσεις MPE ήταν θετικά για Οκτώβριος-4 και CD133, αλλά ήταν αρνητικά για Nanog στην ομάδα Β (5/20, 25%). Δέκα από 20 περιπτώσεις MPE ήταν θετικά για Οκτώβριος-4, αλλά αρνητικό για Nanog και CD133 στην ομάδα Γ (10/20, 50%). Οι δύο υπόλοιπες περιπτώσεις που ταξινομείται στην ομάδα 4 ήταν αρνητικά για Οκτώβριος-4 και Nanog, αλλά θετική για CD133 (2/20, 10%). Τα αρχικά δεδομένα και στατιστική ανάλυση των 20 περιπτώσεων MPE παρουσιάστηκαν στον Πίνακα S1, Πίνακες 1 και 2.

(Α) Ανοσοϊστοχημική αποτελέσματα έδειξαν ανοσοδραστικότητα τριών CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες (Οκτώβριος-4, Nanog, και CD133 ) στο κέντρο του πρωτογενούς όγκου (α, β & amp? γ) (Μεγέθυνση, 200 ×). Ισχυρότερη ανοσοαντιδραστικότητα φαίνεται στις επεμβατικές μέτωπα (δ, ε & amp? F) (μεγέθυνση, 200 ×) και πολλές συστάδες καρκινικών κυττάρων (βέλη) στην MPE σε χαμηλότερες και υψηλότερες μεγεθύνσεις (g, h & amp? Θ). (Μεγέθυνση, 40 × και 400 ×). (Β) Ανοσοκυτοχημική χαρακτηρισμό των καρκινικών κυττάρων clusters σε MPE έδειξε τρεις μεγάλες ομάδες συνδυασμό (θετική Οκτώβριος-4, σε συνδυασμό με την θετική ή αρνητική Nanog και εκφράσεις CD133) εντοπίστηκαν: Ομάδα Α, θετική και για τους τρεις CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες (α, β & amp? c)? Ομάδα Β, θετικό για Οκτώβριος-4 και CD133, αλλά αρνητικό για Nanog (δ, ε & amp? F)? Ομάδα Γ, θετικό για Οκτώβριος-4, αλλά αρνητικό για Nanog και CD133 (g, h & amp? I) σε χαμηλότερες και υψηλότερες μεγεθύνσεις. (Μεγέθυνση, 40 × και 400 ×).

Η

Η

Συσχέτιση των immunoexpression της CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες με κλινικο-παθολογικών παραμέτρων

Συγκριτική ανάλυση μεταξύ CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες που χρησιμοποιούν το σύστημα υπολογισμού βαθμολογίας ανοσολογική αντίδραση και κλινικο-παθολογικών παραμέτρων κατέδειξε ότι υπήρχε στατιστική σημαντικότητα μεταξύ της έκφρασης των ΥΧΕ-4 και μακρινή μετάσταση (

σ

= 0,0121). Υπήρξε επίσης μια στατιστική σημαντικότητα μεταξύ της έκφρασης των ΥΧΕ-4 και το στάδιο (

σ

& lt? 0,0001). Ωστόσο, δεν υπήρχε στατιστική σημαντικότητα μεταξύ της έκφρασης ΥΧΕ-4 και άλλες κλινικο-παθολογική παραμέτρους. Δεν στατιστική σημαντικότητα βρέθηκε μεταξύ της έκφρασης του Nanog και CD133 και όλες τις παραμέτρους κλινικο-παθολογικές. Μετά την προσαρμογή του κλινικο-παθολογικών παραμέτρων, ΟΚΤ-4 επίσης βρέθηκε συσχετίζεται θετικά με την αύξηση της αναλογία πιθανοτήτων που σχετίζονται με την μετάσταση (Πίνακες 3, 4 και 5). Χρησιμοποιώντας το ποσοστό των ΥΧΕ-4 ως προγνωστικός παράγοντας της μετάστασης, η μέτρηση ήταν αρκετά ευαίσθητη με υψηλή ειδικότητα (Σχήμα 3). Περαιτέρω ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδειξε ότι immunoexpressions ΥΧΕ-4 συσχετίζεται θετικά με Κί67 (

r

= 0,470,

σ

= 0,036), παρ ‘όλα αυτά δεν υπήρχαν συσχετίσεις των Nanog και CD133 με Κί67 ( Σχήμα 4). Οι εκφράσεις των ΥΧΕ-4 ήταν επίσης στατιστικά και αντιστρόφως ανάλογη με την επιβίωση των ασθενών μετά από μια 60-μηνών παρακολούθηση χρησιμοποιώντας την ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier (Σχήμα 5).

Δέκτης καμπύλης (ROC) χρησιμοποιώντας το ποσοστό των ΥΧΕ-4 ως προγνωστικός δείκτης της μετάστασης έδειξε μια σχετικά υψηλή ευαισθησία (66,7%) και την απόλυτη εξειδίκευση (100%). Η περιοχή κάτω από την καμπύλη ROC ήταν 83,8%.

Η

Συγκριτική ανάλυση με τη χρήση γραμμικής παλινδρόμησης δοκιμή της CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες (Nanog, ΟΚΤ-4, και CD133) με Κί67 έδειξε ότι μόνο Οκτώβριος-4 βρέθηκε θετικά συσχετίζεται με Κί67. Ωστόσο, δεν υπήρχαν συσχετίσεις ανάμεσα σε αυτές τις εκφράσεις του Nanog και CD133 και Ki67.

Η

Η ανάλυση επιβίωσης Kaplan-Meier μετά από ένα 60-μηνών παρακολούθηση έδειξε ότι ο εκτιμώμενος κίνδυνος εκδήλωσης της ενδιαφέροντος που υπάρχουν σε OCT-4 θετική ομάδα ήταν 256% υψηλότερη από ό, τι σε OCT-4 αρνητική ομάδα (αναλογία κινδύνου = 3,56, 95% CI = 1.06~11.95).

Απλή αναζήτηση

διαφορετική παρουσίαση με χαρακτηρισμό εμπλουτισμένου συστάδες κυττάρων από MPE χρησιμοποιώντας τόσο μη κολλώδης και τα συμβατικά συστήματα καλλιέργειας

Οκτώ περιπτώσεις MPE προοπτικά συλλέγονται για την κύρια καλλιέργεια και κλινικο-παθολογικών στοιχεία τους φαίνονται στον πίνακα 6. το κύριο κουλτούρα κύτταρα από MPE χρήση μη κολλώδης σύστημα καλλιέργειας που περιγράφονται στην προηγούμενη έκθεσή μας [20] εμφανίζεται τρισδιάστατο (3-D) συστάδες με ένα σταφύλι-όπως μορφολογία (σχήμα S1). Η διάρκεια διπλασιασμού χρόνου της κυτταρικής καλλιέργειας, και η μορφολογία παρατηρήθηκαν διέφερε σημαντικά μεταξύ των δειγμάτων. Ωστόσο, πρωτογενή καλλιέργεια με συμβατικές σύστημα καλλιέργειας χρησιμοποιώντας ελεύθερο ορού μέσο συμπληρωμένο με αυξανόμενες δόσεις του bFGF και EGF αποκαλύπτεται μια σταδιακή μορφολογική αλλαγή. Τα καλλιεργημένα καρκινικά κύτταρα αρχικά προσκολλώνται στην πλάκα, τότε διαχωριστεί και αποσπάται από την πλάκα, και τελικά μετατρέπονται σε μικρά, κινητά, συστάδες σφαιροειδές (σφαιροειδή) που εμφανίζει ένα 3-D ή /και σταφύλι-όπως μορφολογία (Σχήμα 6Α).

(Α) μικροφωτογραφίες φάσης-αντίθεσης κύρια καλλιέργεια του MPE από ασθενείς με πρωτοπαθή πνευμονική αδενοκαρκίνωμα χρησιμοποιώντας ελεύθερο ορού μέσο συμπληρωμένο με αυξανόμενες δόσεις του bFGF και EGF παρουσίασαν σταδιακή μορφολογική αλλοίωση των κυττάρων αδενοκαρκινώματος από την τήρηση της πλάκας μετατρέπεται σε μικρή κινητή ομίλων και τελικά να γίνει στις μορφές σφαιροειδές. (Από αριστερά προς τα δεξιά του πίνακα, μεγέθυνση, 200 ×). επαγωγή (Β) Διαφοροποίηση των δύο αντιπροσωπευτικές περιπτώσεις έδειξε ένα ανεστραμμένο, μορφολογική αλλοίωση μετατρέποντας το σφαιροειδές στην MPE σε ένα πρωτότυπο αδενικό αρχιτεκτονική με αυλού κανάλια. (C) Ένα RT-PCR ανάλυση του σφαιροειδή σε τρεις αντιπροσωπευτικές περιπτώσεις (Case Νο 8, 3 και 7) της MPE έδειξε την έκφραση των ΥΧΕ-4, και Nanog και γονίδια CD133 ήταν μεταβλητά ρυθμίζεται αυξητικά στις περιπτώσεις αντιπροσωπευτικές εκεί σε ασθενείς με MPE. (Δ) αντίστοιχα ποσοτικά δεδομένα κατέδειξαν τις συγκρίσεις μεταξύ της έκφρασης των ΥΧΕ-4, και Nanog και CD133. (Ε) ανάλυση ανοσοφθορισμού της CSC-εκπρόσωπο των δεικτών σφαιροειδή αποδειχθεί θετική εκφράσεις Οκτώβριος-4, Nanog, και CD133, όπως υποδεικνύεται από τα βέλη (μεγέθυνση, 200 ×).

Η

Χαρακτηρισμός των σφαιριδίων για ακίνητα CSC, συμπεριλαμβανομένων σχηματισμό σφαίρα, και η διαφοροποίηση στην MPE πρωτογενείς καλλιέργειες κυττάρων

Τα δείγματα από πέντε από τα οκτώ (62,5%) MPE ασθενείς που χρησιμοποιούν μη κολλώδης σύστημα καλλιέργειας απέδωσε το εμπλουτισμένο σχηματισμό σφαίρα μετά από καλλιέργεια για 7 ημέρες (Πίνακας 7) . Εμείς στη συνέχεια επανακαλλιεργηθεί αυτά τα σφαιρίδια σε συμβατικά πιάτα κόλλα πολιτισμού για την επαγωγή διαφοροποίησης. Τα σφαιροειδή αποτελούνται από υποθετικών ΚΕΠ εμφάνισαν την ικανότητα διαφοροποίησης αναστροφή της παραπάνω διαδικασίας μετατρέποντας τις συστάδες κυττάρων 3-D σε δύο διαστάσεων κατασκευές με αδενικό μορφολογία (Σχήμα 6Β). Ανάλυση ανοσοφθορισμού με μορφολογική ταυτοποίηση των CSC-εκπρόσωπο των δεικτών σφαιροειδή κατέδειξε την παρουσία του την εκδήλωση Οκτώβριος-4, Nanog, και CD133 και περαιτέρω ανάλυση RT-PCR έδειξε ότι οι μεταβλητές αυξητική ρύθμιση των ΥΧΕ-4, και Nanog και CD133 γονιδιακής έκφρασης σε τρεις αντιπροσωπευτικές περιπτώσεις. Τρεις διαφορετικές μορφές έκφρασης παρατηρήθηκαν για Οκτώβριος-4, Nanog, και CD133 (Σχήματα 6C, D και E). Επτά από τις οκτώ (87,5%) συστάδες κυττάρων κύρια καλλιέργεια του MPE είναι θετικό για τους CSC-αντιπροσωπευτικά δείκτες, και μόνο ένας (12,5%) ήταν αρνητικό και για τις τρεις CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες. Ισχυρότερη εκφράσεις Οκτώβριος-4 βρέθηκαν ποσοτικά από εκείνες του Nanog και CD133 και στις τρεις αντιπροσωπευτικές περιπτώσεις. Αυτά τα δεδομένα συμφωνούν με εκείνα που λαμβάνονται από τα μπλοκ των κυττάρων.

Η

Συζήτηση

μετάσταση εμφανίζεται συνήθως σε μια σειρά από διακριτά βήματα που μπορούν να μοντελοποιηθεί σε ένα μεταστατικό καταρράκτη [21]. Ωστόσο, ο μηχανισμός που υπογραμμίζει την εμπλοκή του όγκου στο μεταστατικό καταρράκτη, με αποτέλεσμα την κακοήθη συλλογή σε ορώδες κοιλότητες, έχει λάβει λίγη προσοχή και επομένως προσέλκυσε έρευνα μας ενδιαφέρει. Σε αυτή τη μελέτη, επιβεβαίωσε τις χαρακτηριστικές ανοσοϊστοχημική και ανοσοκυτταροχημική παρουσιάσεις κάθε συνδεδεμένο ομάδα δειγμάτων από τον ίδιο ασθενή, που δείχνει τις μεταβλητές εντάσεις και κατανομές των CK-7 και TTF 1-/έκφραση CEA σε ιστούς αδενοκαρκίνωμα πρωτογενή πνεύμονα και φωλιές καρκίνος των κυττάρων σε κυττάρων τετράγωνα από την συλλογή. Μερικά από τα δείγματα ήταν έντονα ανοσοαντιδραστική για τον προσδιορισμό δεικτών και κάποια παρουσιάζονται ακανόνιστες ανοσολογική αντίδραση. Αυτό μπορεί να σημαίνει εντός του όγκου ετερογένεια και μπορεί να εξηγήσει την πιθανή θεραπευτική αντίσταση, καθώς και την ικανότητα για την έγκαιρη εισβολή και μετάσταση στην υπεζωκοτική κοιλότητα. Μετά άρχισαν τα πρώτα γεγονότα της EMT, συμπεριλαμβανομένης της απώλειας πρόσφυσης και το αγκυροβόλιο, η αύξηση της κινητικότητας και τη μορφολογική μεταμόρφωση, τα καρκινικά κύτταρα του πνεύμονα πρωτοβάθμια εισέλθει στην υπεζωκοτική κοιλότητα, οδηγώντας σε MPE [22]. Η μελέτη μας απέδειξε επίσης ποιοτικές διαφορές στα επίπεδα έκφρασης του ΕΜΤ-συνδέονται δεικτών μεταξύ των κύριων χώρων και των μεταστατικών βλαβών. Η ανοσοαντιδραστικότητα των αντιπροσωπευτικών ΕΜΤ-σχετίζεται δείκτες, Ε-καδερίνης και βιμεντίνης, κυμάνθηκε μεταξύ των πρωτογενών ιστών όγκου πνεύμονα και των καρκινικών κυττάρων φωλιές στις διαχύσεις, υποδεικνύοντας την παρουσία του φαινομένου EMT στην πρωτογενή όγκων του πνεύμονα και μέγιστα επιτρεπόμενα σφάλματα κατά τη διάρκεια της εξέλιξης του όγκου. Επιπλέον, η έκφραση της βιμεντίνης έτεινε να είναι ισχυρότερη και η έκφραση της Ε-καδερίνης ασθενέστερη στο μεταναστευτικό μέτωπο, η διασύνδεση μεταξύ των ιστών του όγκου και στρωματικά, από ό, τι στο κέντρο του όγκου σωστή.

Κατά τη διάρκεια της εισβολής, και αμέσως μετά τα κύτταρα όγκου χάνουν την επαφή με τη βασική μεμβράνη, συναντούν έναν άλλο φραγμό για μετάσταση, anoikis [5], [23]. Τα αποκολλημένα καρκινικά κύτταρα, μεμονωμένα ή σε μικρές συστάδες, είναι μοναδικά σε θέση να πολλαπλασιάζονται και αυξάνονται, παρά την προφανώς δυσμενή locale τους [24]. Οι συλλογές προσφέρουν μια προ-μεταστατικούς κόγχη, η οποία λειτουργεί ως μια δυναμική δεξαμενή που μπορεί να παρέχει το καρκινικό ιστό μέσω αυτοκρινούς ή /και παρακρινείς αλληλεπιδράσεις με αυξητικούς παράγοντες. Τέτοιοι παράγοντες ανάπτυξης περιλαμβάνουν αγγειακού ενδοθηλιακού αυξητικού παράγοντα, βασικού αυξητικού παράγοντα ινοβλαστών, και παράγοντα μετασχηματισμού β ανάπτυξης και άλλα ερεθίσματα, όπως χημειοκίνες και κυτοκίνες (ιντερλευκίνες), που παράγεται κυρίως από κυτταρικά συστατικά, συμπεριλαμβανομένων των μεσοθηλιακών κυττάρων, ορισμένες στρωματικά κύτταρα, και φλεγμονώδη κύτταρα [ ,,,0],25] – [28]. Καθώς οι συλλογές συσσωρεύονται, το μικροπεριβάλλον φαίνεται ζωτικής σημασίας για να επιτρέπει στα καρκινικά κύτταρα να αλληλεπιδρά επαρκώς με το περιβάλλον τους, μέσω της διάχυσης και όχι μέσα από την ανατομική αρχιτεκτονική της ροής του αίματος [29]. Όταν τα καρκινικά κύτταρα να εμπλακούν σε τέτοια διακριτή μικροεπικράτειες, σύντομα ενορχηστρώσει τα γύρω στρωματικά κύτταρα και να αλλάξει φαινοτύπων τους για να διευκολύνουν την εξέλιξη του καρκίνου. Ως εκ τούτου, το μικροπεριβάλλον των συλλογών μπορεί να επιταχύνει την επιθετική δυναμικό του όγκου δυναμικά προκαλώντας τις ιδιότητες των ΚΕΠ

in situ

. Οι παράγοντες ή κυτοκίνες στη συλλογή που εμπλέκονται στην σηματοδότηση ή αλληλεπιδρούν με τα κύτταρα του όγκου και πώς θα διασχίσουν-συζήτηση με τον άλλον για να για να προκαλέσει το δυναμικό των ΚΕΠ στην MPE είναι άξια περαιτέρω έρευνα.

Αν και ο «σπόρος και το έδαφος υπόθεση» έχει από καιρό αμφισβητήθηκε, εξηγεί πώς συλλογές παρέχουν ένα μοναδικό μικροπεριβάλλον που μπορεί να θεωρηθεί ως το γόνιμο «έδαφος», σε υγρή κατάσταση, περιμένοντας να «σπείρεται» με καρκινικά κύτταρα [30 ], [31]. Όπως φαίνεται στο δικό μας και άλλες μελέτες, συλλογές είναι μοναδικά μικροπεριβάλλοντα που όχι μόνο κρατούν τα καρκινικά κύτταρα ζωντανά, αλλά και την περαιτέρω εισβολή τους και να προωθήσουν την ανάπτυξή τους. Η ταχεία ανάπτυξη των καρκινικών κυττάρων και τη μετάσταση που συμβαίνουν σε συλλογές μπορεί να αποδοθεί στην παρουσία μίας μικρής υποπληθυσμό καρκινικών κυττάρων, το ΚΕΠ, που εμφανίζουν πολλές ιδιότητες ΕΜΤ [31], [32]. Αύξηση στοιχεία δείχνουν ότι υπάρχει μια σύνδεση μεταξύ ΚΕΠ και της EMT. Αν ναι, ορισμένα ογκογονίδια πρέπει να συμμετέχουν στη βλαστική ικανότητα των καρκινικών κυττάρων με επεμβατική ικανότητα και τη δυνατότητά τους να αυτο-ανανέωση [12], [13], [33]. Η ικανότητα να επιβιώσουν και να πολλαπλασιαστούν απαιτεί μια κατάλληλη θέση, όπως μια συλλογή, η οποία είναι ζωτικής σημασίας για τη διάδοση των καρκινικών κυττάρων να εδραιωθούν και να εξαπλωθεί ως μετάσταση. Για τις γνώσεις μας, μόνο λίγες μελέτες έχουν αναφέρει την ύπαρξη των ΚΕΠ σε συλλογές. Δεν υπάρχει ακόμα μια συγκεκριμένη και απλή δείκτης για τις ιδιότητες των ΚΕΠ σε συλλογές. Τα δεδομένα μας δείχνουν καθαρά ότι τα ποσοστά της ανοσοδραστικότητας για τα τρία CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες (CD133, Nanog, και OCT-4) ποικίλη, με ένα σχετικά υψηλό ποσοστό των ΥΧΕ-4 ανοσολογική αντίδραση. Αυτά τα τρία CSC που σχετίζονται με δείκτες επιλέχθηκαν λόγω των αντιπροσωπευτικών τη μαρτυρία τους. Επιφανειακή CD133, επίσης γνωστή ως προμινίνη-1, είναι ένα κυτταρικής επιφάνειας διαμεμβρανική γλυκοπρωτεΐνη που έχει χρησιμοποιηθεί στην αναγνώριση υποθετικών ΚΕΠ σε αρκετές κακοήθεις όγκους, επειδή έχουν δείξει αυξημένη ογκογόνο δυναμικό σε μεταμόσχευση μελέτες

in vitro

και

in vivo

[34] – [36], καθώς και μια σύνδεση με κακή πρόγνωση και απομακρυσμένων μεταστάσεων [37], [38]. Ωστόσο, η ακριβής λειτουργία του CD133 δεν έχει ακόμη καθοριστεί και χρειάζεται διευκρίνιση. Οκτώβριος-4 και Nanog είναι και οι δύο παράγοντες μεταγραφής απαραίτητη για τη φυσιολογική ανάπτυξη πολυδύναμων κυττάρων. Nanog είναι κυρίως υπεύθυνη για τη διαφοροποίηση κατά τη διάρκεια της εμβρυογένεσης [39], ενώ Οκτώβριος-4 μπορεί να έχει μακροπρόθεσμες επιδράσεις τόσο για τον πολλαπλασιασμό και τη διαφοροποίηση [40] ιστού. ΥΧΕ-4 είναι ιδιαίτερα εκφράζεται σε εμβρυϊκά βλαστικά κύτταρα και τα βλαστικά κύτταρα, και έχει ανιχνευθεί σε συγκεκριμένους τύπους όγκων των όρχεων γεννητικών κυττάρων [40], [41]. Οκτώβριος-4 είναι επίσης κατά προτίμηση εκφράζεται σε αδιαφοροποίητη ανθρώπινη ΟΚΕ, παγκρεατικά νησίδια, και διάχυτου τύπου γαστρικών καρκίνων [42]. Ως εκ τούτου, έχει προταθεί ότι οι ΥΧΕ-4 συμβάλλει στη διατήρηση ιδιότητες των βλαστικών κυττάρων. Ωστόσο, αρκετές πρόσφατες εκθέσεις έχουν δείξει ότι όσο το 25% των καρκινικών κυττάρων εντός ορισμένων όγκων έχουν τις ιδιότητες του ΚΕΠ [43]. Με βάση τα δεδομένα μας, έχουμε εκτιμάται ότι οι τιμές της ανοσοδραστικότητας για τα τρία αυτά CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες (CD133, Nanog, και OCT-4) κυμαίνεται από 15% έως 90%, και παραλλαγές μέσα και οι συνδυασμοί της έκφρασης τους ήταν Σημειώνεται επίσης. Τα ποσοστά αυτά υπερβαίνουν τη μέση εμφάνιση ΚΕΠ (25%) εντός ορισμένων όγκων, ιδιαίτερα συμπαγών όγκων. Τα αποτελέσματά μας δείχνουν ότι πολλές από ικανοποιητική υποθετικό ΚΕΠ μπορούν να απομονωθούν από μέγιστα επιτρεπόμενα σφάλματα και με αποτελεσματικές μεθόδους. Ως εκ τούτου, μέγιστα επιτρεπόμενα σφάλματα μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως ένα καλύτερο μοντέλο μελέτης για την έρευνα των βλαστοκυττάρων από τα δείγματα ιστού από ορισμένους καρκίνους. Η μεταβλητή έκφραση της CSC-ειδικοί δείκτες θα μπορούσαν επίσης να διαμορφώνονται από διαφορετικά μικροπεριβάλλοντα, και το ισχυρότερο ανοσολογικά ανιχνεύσιμη έκφραση αυτών των τριών CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες βρέθηκε στις επεμβατικές μέτωπα, όπως παρατηρήθηκε για EMT-συνδέονται δείκτες. Η μελέτη μας χρησιμοποιώντας ανάλυση γραμμικής παλινδρόμησης έδειξε ότι μόνο η έκφραση των ΥΧΕ-4 συσχετίζεται θετικά με Κί67 (

r

= 0,470,

σ

= 0.036), ένας εξαιρετικός δείκτης για τον προσδιορισμό του κλάσματος ανάπτυξης ενός δεδομένου κυτταρικού πληθυσμού και συχνά σε συσχέτιση με την προγνωστική αξία για την επιβίωση και όγκου υποτροπή (Σχήμα 5) [44], [45]. Επιπλέον, η έκφραση των ΥΧΕ-4 επίσης σημαντικά που συνδέονται με μακρινή μετάσταση (

σ

= 0,0121) και το στάδιο (

σ

& lt? 0,0001). Η ανάλυση Kaplan-Meier κατέδειξε την έκφραση των ΥΧΕ-4 συσχετίστηκε αντίστροφα με την επιβίωση σε ασθενείς με MPE μετά από μια μακροχρόνια παρακολούθηση.

Από την άποψη των τριών αυτών CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες, ΚΕΠ που εκφράζεται οκτ 4 αντί για CD133 ή Nanog φαίνεται να παίζουν καθοριστικό ρόλο στη συμπεριφορά τους στην μέγιστων επιτρεπόμενων ορίων. Συγκριτικές αναλύσεις αποκάλυψαν επίσης διαφορές στην ανοσολογική αντίδραση για αυτές τις τρεις CSC-αντιπροσωπευτική δείκτες μεταξύ πρωτοβάθμιας πνευμονικών όγκων και τις φωλιές των καρκινικών κυττάρων από τα κυτταρικά μπλοκ σε συλλογές. Μια λογική εξήγηση είναι ότι τα ΚΕΠ και στα δύο πρωτογενή πνευμονικών όγκων και συλλογές μπορεί να είναι αδρανής ή τη στάση του για ένα χρονικό διάστημα πριν γίνουν προχωρημένο ή μεταστατικό επεμβατική. Πράγματι, η έκφραση των ιδιοτήτων των βλαστικών κυττάρων μεταβάλλεται με το μικροπεριβάλλον (η «θέση βλαστικών κυττάρων»), στο οποίο συνέβησαν [46], [47]. Μέχρι τώρα, η σχέση μεταξύ ΚΕΠ και μετάσταση έχει βασιστεί σε μια εικαζόμενη σχέση, γιατί δεν φαίνεται να αποτελεί σύμπτωση το γεγονός ότι σχετικά λιγότερα κύτταρα μετάσταση σχηματίζουν αντιστοιχεί στην εξίσου λιγότερες ΚΕΠ. Αυτά τα κύτταρα έχουν το δυναμικό να σχηματίσουν μια πλήρη άνθηση δευτερογενή όγκο, με ιστολογική αρχιτεκτονική και ετερογένεια παρόμοιες με εκείνες του πρωτογενούς όγκου [48]. Πρωτοπαθή πνευμονική όγκοι είναι κατά κύριο λόγο αποτελείται από σταθερές ΚΕΠ, τα οποία συνήθως παραμένουν σε κατάσταση λήθαργου ή αδράνειας. Ωστόσο, όταν ο όγκος εξαπλώνεται στην υπεζωκοτική κοιλότητα σε μια κατάλληλη θέση για την παραγωγή MPE, οι πιο ανοσοδραστικό ή λειτουργούν «αποδημητικά ΚΕΠ» ή «μεταστατικό ΚΕΠ», παρουσιάζοντας είτε ως μικρές ομάδες ή ως αποσπαστούν μεγαλύτερες ομάδες των κυττάρων στις επεμβατικές μέτωπα, όχι μόνο επιβιώνουν αλλά και αυτο-πολλαπλασιάζονται σε κάποιο βαθμό. Θα μπορούσε τότε να εισβάλουν τα παρακείμενους ιστούς και τα σκάφη, και να προετοιμαστούν για να μεταναστεύσουν στα περιφερικά όργανα, όπου θα αναπτυχθεί ως μια άλλη μετάσταση [32], [49], με αποτέλεσμα μια πιο προηγμένη και ανεξέλεγκτη καρκινική κατάσταση Εικόνα S2).

Εκτός από την επίδραση του ενδοογκική ετερογένεια του όγκου ορθής και τα σύνθετα συστατικά των χυμικών και κυτταρικών παραγόντων στην MPE, ορισμένες άλλες δυσκολίες και τους περιορισμούς που αντιμετωπίζουν κατά την απομόνωση τα καρκινικά κύτταρα από το μέγιστο επιτρεπόμενο σφάλμα. Ωστόσο, απομονώσαμε με επιτυχία σφαιροειδή όγκου /clusters χρήση τόσο συμβατικών και μη κολλώδης συστήματα καλλιέργειας. Αυτά τα 3D μπάλα-όπως δομές που εξάγονται από τους ασθενείς ελήφθησαν με κάποια δυσκολία, αλλά ήταν καλά διατηρημένα σε πρωτογενή καλλιέργεια, όπως έχει αναφερθεί σε άλλες μελέτες [50], [51]. Περαιτέρω αναλύσεις ανοσοφθορισμού απέδειξαν ότι αυτά τα σφαιροειδή /συμπλέγματα εκφράζονται τις ιδιότητες των ΚΕΠ, που χρωματίζονται θετικά για τα τρία CSC-εκπρόσωπος δείκτες (Σχήμα 6Ε), παρόμοια με τα αποτελέσματα για τις συστάδες κυττάρων. Δείγματα από πέντε από τα οκτώ (62,5%) ασθενείς με MPE απέδωσε εμπλουτισμένο σχηματισμό σφαίρα μετά από καλλιέργεια σε μια μη κολλώδης σύστημα καλλιέργειας (Εικόνες S1 και 6Α). Ωστόσο, δεν σφαίρες θα μπορούσαν να παραχθούν από τα δείγματα από τρεις ασθενείς, πιθανώς αντανακλώντας ατομικές διαφορές και την πολύπλοκη παρεμβολή των μικροπεριβάλλοντα του διαχύσεις, εκτός από τον ασθενή ειδικούς παράγοντες, όπως η γενετική κατάσταση του EGFR, η οποία μπορεί να επηρεάσει την επιλογή του χημειοθεραπευτικές αγωγές.

Εν κατακλείδι, η παρούσα μελέτη υποστηρίζει την προοπτική μας για το μεταστατικό καταρράκτη. Η πλατφόρμα της πλευριτική συλλογή μπορεί να παρέχει μια προ-μεταστατικούς θέση για πρωτοπαθή πνευμονική όγκους πριν από κακοήθη συμμετοχή τους. Τα μέγιστα επιτρεπόμενα σφάλματα που γεμίζουν με καρκινικά κύτταρα που έχουν τις ιδιότητες των ΚΕΠ μετά τις αλληλεπιδράσεις τους με το μικροπεριβάλλον. Για τις γνώσεις μας, έχουμε για πρώτη φορά καθιέρωσε ένα μοντέλο του μέγιστου επιτρεπόμενου σφάλματος, από το οποίο μπορεί να παρέχει μια εικόνα για τους ρόλους των ΚΕΠ σε μετάσταση και σε υψηλές θεραπευτικές ποσοστά αποτυχίας. Αυτό μπορεί επίσης να προσφέρει μια νέα κατεύθυνση για την προκλινική ανάπτυξη της ορθολογικής θεραπευτικής.

Υλικά και Μέθοδοι

Κλινικά δείγματα συλλογής

δείγματα ιστών από 56 ασθενείς με πνευμονική αδενοκαρκίνωμα με MPE συλλέχθηκαν και να ανακτηθεί από τα αρχεία του Τμήματος Παθολογίας, Γενικό Νοσοκομείο Tri-Service, Ταϊπέι, Ταϊβάν από το 2004 έως το 2009. 17 περιπτώσεις είχαν χαθεί κατά την παρακολούθηση ή είχαν ανεπαρκή κλινικο-παθολογικών δεδομένων για ανάλυση και επομένως εξαιρούνται. Μεταξύ των 39 μπλοκ παραφίνης με MPE, υπήρξαν 20 περιπτώσεις σε ζευγάρια που περιέχει επαρκή υγρά παρασκευασμένα για την ικανοποιητική επιχρίσματα και μπλοκ των κυττάρων που είχαν επιλεγεί να είναι το κύριο υλικό της μελέτης. Περιπτώσεις υπεζωκότα βιοψία δείγματα δεν είχαν συμπεριληφθεί όταν η υπεζωκότα κυτταρολογία ήταν μη διαγνωστική για ένα ύποπτο MPE.